BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHẠM THỊ VIỆT HỒNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY CÁT SÂM THU HÁI TẠI BẮC GIANG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2015 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHẠM THỊ VIỆT HỒNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY CÁT SÂM THU HÁI TẠI BẮC GIANG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS. Nguyễn Quốc Huy Nơi thực hiện: Bộ môn Thực vật – Trường Đại học Dược Hà Nội HÀ NỘI – 2015 LỜI CẢM ƠN Trong quá trình thực hiện khóa luận, em đã nhận được rất nhiều sự giúp đỡ từ gia đình, thầy cô và bạn bè. Với lòng biết ơn sâu sắc, em xin cảm ơn TS. Nguyễn Quốc Huy đã luôn dạy dỗ, chỉ bảo, động viên em trong suốt quá trình thực hiện khóa luận tốt nghiệp. Em xin chân thành cảm ơn em Đỗ Quang Thái (sinh viên lớp M2K66) và DS. Nguyễn Thị Thùy Linh đã luôn sát cánh, động viên, giúp đỡ em những lúc gặp khó khăn trong quá trình hoàn thành khóa luận. Em xin gửi lời cảm ơn và bày tỏ lòng thương mến đến các thầy cô cùng các anh chị kỹ thuật viên Bộ môn Thực vật, Bộ môn Dược liệu đã tạo điều kiện giúp đỡ em trong hoàn thành khóa luận. Em cũng xin cảm ơn anh Vũ Văn Long công tác tại xã Nghĩa Phương - huyện Lục Nam - tỉnh Bắc Giang đã giúp em thu mẫu và truyền dạy cho em những kinh nghiệm quý giá từ dược liệu mà em đang nghiên cứu. Cuối cùng, em xin bày tỏ lòng biết ơn đến gia đình, bạn bè và những người luôn bên cạnh, động viên, giúp đỡ em trong học tập cũng như trong cuộc sống. Xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, ngày 14 tháng 5 năm2015 Sinh viên Phạm Thị Việt Hồng MỤC LỤC Trang DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 3 1.1. Đặc điểm thực vật chi Callerya và một số loài thuộc chi Callerya 3 1.1.1. Vị trí phân loại chi Callerya 3 1.1.2. Đặc điểm thực vật và khóa phân loại chi Callerya 3 1.1.3. Phân bố chi Callerya trên thế giới và Việt Nsm 6 1.1.4. Đặc điểm thực vật, phân bố của một số loài trong chi Callerya ở Việt Nam 7 1.2. Thành phần hóa học một số loài thuộc chi Callerya 12 1.3. Tác dụng và công dụng một số loài thuộc chi Calleya 14 1.3.1. Tác dụng sinh học một số loài thuộc chi Callerya 14 1.3.2. Công dụng một số loài thuộc chi Callerya 15 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1. Nguyên liệu, phương tiện nghiên cứu 17 2.1.1. Nguyên liệu nghiên cứu 17 2.1.2. Phương tiện nghiên cứu 16 2.2. Nội dung nghiên cứu 17 2.2.1. Nghiên cứu về thực vật 17 2.2.2. Nghiên cứu về hóa học 17 2.3. Phương pháp nghiên cứu 18 2.3.1. Nghiên cứu về thực vật 18 2.3.2. Nghiên cứu về hóa học 19 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 22 3.1. Nghiên cứu về thực vật và giám định tên khoa học cây Cát sâm 22 3.1.1. Mô tả đặc điểm thực vật và giám định tên khoa học 22 3.1.2. Mô tả đặc điểm vi phẫu 24 3.1.3. Mô tả đặc điểm bột dược liệu 29 3.2. Định tính các nhóm chất trong củ cây Cát sâm bằng các phản ứng hóa học 30 3.3. Bước đầu nghiên cứu phân lập thành phần hóa học trong dịch chiết củ Cát sâm 32 3.3.1. Chiết phân đoạn dịch chiết tổng 32 3.3.2. Chọn hệ dung môi khai triển sắc kí thích hợp 32 BÀN LUẬN 36 KẾT LUẬN 46 ĐỀ XUẤT 46 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC Phụ lục 1: Phiếu giám định tên khoa học Phụ lục 2: Giấy chứng nhận mã số tiêu bản Phụ lục 3: SKĐ SKLM khai triển soi dưới các bước sóng UV 254 và 366 nm Phụ lục 4: Số các vết tách sắc kí được phát hiện bởi phần mềm Video Scan từ SKĐ các bản mỏng khai triển với các hệ pha động khác nhau soi dưới bước sóng UV 254 nm DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT Viết tắt Viết đầy đủ a. : acid C : cắn C. : Callerya CTHH : công thức hóa học DC : dịch chiết dd : dung dịch dm : dung môi M. : Millettia PĐ : phân đoạn R f : Retention factor (Hệ số lưu) SHTB : số hiệu tiêu bản SKĐ : sắc kí đồ SKLM : sắc kí lớp mỏng STT : số thứ tự TT : thuốc thử UV : Ultraviolet DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1 Kết quả định tính các nhóm chất trong mẫu nghiên cứu 31 Bảng 3.2 Thống kê số lượng vết tách sắc kí của từng cắn PĐ khi khai triển với các hệ pha động khác nhau 33 Bảng 4.1 So sánh đặc điểm hình thái thực vật loài nghiên cứu với hai chi Callerya và Millettia 36 Bảng 4.2 So sánh đặc điểm loài nghiên cứu với một số loài trong chi Callerya phân bố ở Việt Nam 38 Bảng 4.3 So sánh đặc điểm mẫu nghiên cứu với loài C. speciosa theo Thực vật chí Trung Quốc và Thực vật chí Đông Dương 42 Bảng 4.4 So sánh một số nhóm chất trong mẫu nghiên cứu với các mẫu nghiên cứu C. speciosa trước đây 45 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ Trang Hình 1.1 Phân bố chi Callerya ở khu vực châu Á 6 Hình 1.2 Phân bố chi Callerya ở khu vực châu Phi 6 Hình 1.3 Công thức hóa học của các chất millettiaspecoside A, millettiaspecoside B, millettiaspecoside C, khaephuoside B, seguinoside K, ablbrissinoside B theo thứ tự kí hiệu từ 1 đến 6 12 Hình 1.4 Công thức hóa học cuả formonoetin 13 Hình 1.5 Công thức hóa học của vestitol 13 Hình 1.6 Công thức hóa học của genistein 14 Hình 1.7 Công thức hóa học cuả (-) epicatechin 14 Hình 2.1 Sơ đồ chiết xuất, chiết phân đoạn dịch chiết củ Cát sâm 21 Hình 3.1 Ảnh chụp cây Cát sâm tại thực địa 22 Hình 3.2 Phân tích cụm hoa cây Cát sâm 23 Hình 3.3 Đặc điểm vi phẫu gân giữa 25 Hình 3.4 Đặc điểm vi phẫu phiến lá 26 Hình 3.5 Đặc điểm vi phẫu cuống lá 27 Hình 3.6 Đặc điểm vi phẫu cuống lá chét 28 Hình 3.7 Đặc điểm vi phẫu thân 29 Hình 3.8 Đặc điểm bột củ cây Cát sâm 30 Hình 3.9 Sắc kí đồ các cắn khai triển sắc kí lớp mỏng với hệ I soi dưới bước sóng UV 254 nm 35 Hình 3.10 Sắc kí đồ các cắn khai triển sắc kí lớp mỏng với hệ I soi dưới bước sóng UV 366 nm 35 Hình 4.1 Hình ảnh mẫu nghiên cứu và các loài thuộc chi Callerya phân bố ở Việt Nam theo Cây cỏ Việt Nam 41 Hình 4.2 Hình ảnh mẫu nghiên cứu và loài C. speciosa trong thực vật chí Trung Quốc 43 Hình 4.3 Hình ảnh mẫu nghiên cứu và tiêu bản loài C. speciosa tại các phòng tiêu bản trên thế giới 44 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Xã hội phát triển, mọi mặt của đời sống người dân được nâng cao, cùng với đó là tỷ lệ người dân mắc các bệnh mạn tính như thấp khớp, viêm gan, đau lưng ngày càng tăng. Theo tổ chức y tế thế giới WHO [40], mỗi năm có khoảng thêm 20 triệu người mắc viêm gan E, 1,4 triệu người mắc viêm gan A. Các chủng virus viêm gan dẫn đầu nguyên nhân gây đến bệnh tật và tử vong cho người, mỗi năm có trên 1 triệu người chết vì viêm gan B, C [40]. Viêm khớp dạng thấp (VKDT) là một bệnh lý tự miễn, mạn tính ảnh hưởng đến khớp và có thể gây tàn phá nặng nề. Khi bệnh tiến triển gây ảnh hưởng nhiều cơ quan như viêm mạch máu hoặc rối loạn chức năng thần kinh. Tình trạng viêm mang tính chất hệ thống của VKDT dẫn tới phá hủy khớp, mất vận động và tử vong sớm. Tỷ lệ mắc bệnh tại miền Bắc Việt Nam năm 2000 theo thống kê là 0,28 %[10]. Theo ước tính của WHO, năm 1995, toàn thế giới có 165 triệu người bị thấp khớp [40]. Trước tình hình đó cũng như với xu hướng phát triển các sản phẩm thuốc cũng như thực phẩm chức năng hiện nay là từ các dược liệu thiên nhiên, việc phát hiện và đi sâu nghiên cứu một dược liệu có tác dụng hiệu quả với các bệnh lý mạn tính trên là hết sức quan trọng. Theo Đỗ Tất Lợi [11], dược liệu tên Cát sâm được nhân dân sử dụng để điều trị các bệnh thấp, viêm gan mạn tính, thấp khớp, viêm phế quản mạn Cây Cát sâm thuộc chi Callerya được nhân dân một số huyện miền núi tỉnh Bắc Giang (Lục Nam, Lục Ngạn, Sơn Động ) sử dụng để chữa các bệnh lý mạn tính như viêm gan mạn, thấp khớp. Ngoài những thông tin thu thập được từ dân gian thì chưa có nghiên cứu chuyên sâu trong nước nào về tác dụng cũng như về mặt thực vật, hóa học và tác dụng của cây. Nhằm góp phần vào mục tiêu chăm sóc sức khỏe cho nhân dân của nghành Y tế nói chung và nền Y học cổ truyền nói riêng, nghiên cứu này sẽ thực hiện những bước đầu tiên trong quá trình nghiên cứu, phát triển cây Cát sâm, làm cơ sở cho các nghiên cứu về tác dụng sinh học sau này. [...]... Chính vì các lý do trên, đề tài Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học cây Cát sâm thu hái tại Bắc Giang đã được thực hiện với các mục tiêu sau: - Mô tả đặc điểm thực vật, giám định tên khoa học, mô tả đặc điểm vi phẫu và đặc điểm bột dược liệu - Xác định các nhóm chất hóa học trong cây 3 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Đặc điểm thực vật chi Callerya và một số loài thu c chi Callerya 1.1.1 Vị trí... và hệ thống máy tính kết nối với máy soi 2.2 Nội dung nghiên cứu 2.2.1 Nghiên cứu về thực vật - Mô tả đặc điểm hình thái; giám định tên khoa học loài nghiên cứu - Mô tả đặc điểm vi phẫu lá, cuống lá, thân cây - Mô tả đặc điểm bột dược liệu 2.2.2 Nghiên cứu về hóa học - Định tính các nhóm chất - Chiết xuất, bước đầu nghiên cứu phân lập chất hóa học trong rễ củ cây 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Nghiên. .. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên liệu, phương tiện nghiên cứu 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu Mẫu cát sâm được thu hái cơ quan sinh sản và sinh dưỡng vào tháng 9 năm 2014, thu hái rễ củ vào tháng 2 năm 2015 và thu hái cơ quan sinh dưỡng vào tháng 4 năm 2015 tại xã Nghĩa Phương - huyện Lục Nam - tỉnh Bắc Giang - Mẫu cây được làm tiêu bản theo phương pháp làm tiêu bản khô [12] và lưu tại Phòng... dược liệu theo tài liệu Nghiên cứu về thực vật, thành phần hoá học, một số tác dụng sinh học của một số loài thu c chi Stephania Lour ở Việt Nam” [9] - Chiết xuất và chiết phân đoạn dịch chiết theo phương pháp chiết xuất dược liệu và ứng dụng các kỹ thu t sắc kí trong nghiên cứu hóa thực vật ghi trong dược liệu: “Phương pháp nghiên cứu hóa học cây thu c” [7], “Phương pháp nghiên cứu dược liệu” [1], “Bài... phần không tan PĐ n-butanol Cô tới cắn C5 n-butanol DC nước PĐ dichloromethan Cô tới cắn C8 Cô tới cắn DC nước C6 PĐ n-butanol Cô tới cắn Phần không tan (C3) Dung dịch C10 C9 Cô tới cắn C2 Hình 2.1 Sơ đồ chiết xuất và chiết PĐ dịch chiết củ Cát sâm 22 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 3.1 Nghiên cứu về thực vật và giám định tên khoa học cây cát sâm 3.1.1 Mô tả đặc điểm thực vật, giám định tên khoa học. .. pháp nghiên cứu 2.3.1 Nghiên cứu về thực vật - Phân tích hình thái thực vật:  Mô tả đặc điểm hình thái theo phương pháp mô tả phân tích [12]  Phân tích hoa theo phương pháp phân tích hoa [13] và chụp lại bằng máy ảnh - Giám định tên khoa học của mẫu nghiên cứu:  Đối chiếu mô tả với các tài liệu chuyên sâu: Thực vật chí Trung Quốc” [25], Cây cỏ Việt Nam” [8], Thực vật chí Đông Dương” [28]  So... là một chi thu c họ Đậu – Fabaceae Vị trí phân loại của chi Callerya được tóm tắt như sau: Giới Thực vật (Plantae) Nghành Ngọc Lan (Magnoliophyta) Lớp Ngọc lan (Magnoliopsida) Phân lớp Hoa Hồng (Rosidae) Bộ Đậu (Fabales) Họ Đậu (Fabaceae) Chi Callerya 1.1.2 Đặc điểm thực vật và khóa phân loại chi Callerya 1.1.2.1 Đặc điểm thực vật chi Callerya Cây dây leo hóa gỗ, cây leo bụi hoặc gần như cây cao Lá... đoạn dốc trên đồi, ở độ cao 100-1000 m 12 Phân bố: An Huy, Quảng Đông, Quảng Châu, Quảng Tây, Hải Nam, Giang Tô, Giang Tây, Đài Loan (Trung Quốc), Long Châu - Việt Nam (nay là một phần tỉnh An Giang và Đồng Tháp) 1.2 Thành phần hóa học một số loài thu c chi Callerya 1.2.1 Thành phần hóa học một số loài thu c chi Callerya trên thế giới - Callerya speciosa (Champ.) (Millettia speciosa): đã phân lập được... phận sinh dưỡng và sinh sản của cây theo phương pháp làm mẫu khô [12] 2.3.2 Nghiên cứu về hóa học - Định tính các nhóm chức hữu cơ thường có trong dược liệu bằng các phản ứng hóa học đặc hiệu và sắc kí lớp mỏng theo phương pháp ghi trong tài liệu “Bài giảng dược liệu tập 1” [14] và Thực tập dược liệu - kiểm nghiệm dược liệu bằng phương pháp hóa học [13], bộ môn Dược liệu, trường Đại học Dược Hà Nội... phần phân tán trong nước cất Chia dịch chiết nước làm 3 phần đều nhau, các phần dịch được kí hiệu lần lượt là phần A, phần B, phần C Tiến hành xử lý các phần dịch chiết theo 3 cách khác nhau: - Phần A: lọc tách riêng phần dung dịch và phần không tan Phần dung dịch đem cô đến cắn (C2), phần không tan (C3) được rửa lại nhiều lần bằng nước cất [6 ] - Phần B: lắc phân đoạn dịch chiết nước theo thứ tự với . Nghiên cứu đặc điểm thực vật và thành phần hóa học cây Cát sâm thu hái tại Bắc Giang đã được thực hiện với các mục tiêu sau: - Mô tả đặc điểm thực vật, giám định tên khoa học, mô tả đặc điểm. 2015 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHẠM THỊ VIỆT HỒNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC CÂY CÁT SÂM THU HÁI TẠI BẮC GIANG KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ. pháp nghiên cứu 18 2.3.1. Nghiên cứu về thực vật 18 2.3.2. Nghiên cứu về hóa học 19 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 22 3.1. Nghiên cứu về thực vật và giám định tên khoa học cây Cát sâm