BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRIỆU THỊ NHUNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ THỬ TÁC DỤNG GÂY ĐỘC TRÊN MỘT SỐ DÒNG TẾ BÀO UNG THƯ CỦA CỎ SEO GÀ LUẬN VĂN THẠC SĨ DƯỢC HỌC HÀ NỘI 2014 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRIỆU THỊ NHUNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ THỬ TÁC DỤNG GÂY ĐỘC TRÊN MỘT SỐ DÒNG TẾ BÀO UNG THƯ CỦA CỎ SEO GÀ CHUYÊN NGÀNH DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 60720406 Người hướng dẫn: 1. PGS.TS. Nguyễn Thái An 2. NCS. ThS. Nguyễn Duy Chí HÀ NỘI 2014 LỜI CẢM ƠN Trong suốt quá trình làm khóa luận tốt nghiệp, tôi đã nhận được rất nhiều sự giúp đỡ từ thầy cô, gia đình và bạn bè. Những sự giúp đỡ quý báu ấy đã giúp tôi hoàn thành luận văn này, đồng thời cũng cho tôi hiểu biết thêm nhiều điều về cách tư duy trong nghiên cứu khoa học. Với lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, tôi xin chân thành cảm ơn PGS. TS. Nguyễn Thái An và NCS. ThS. Nguyễn Duy Chí đã trực tiếp hướng dẫn, tạo mọi điều kiện, chỉ bảo tận tình cho tôi trong suốt quá trình nghiên cứu và hoàn thiện luận văn này. Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành tới TS. Đỗ Thị Xuyếnvà TS. Đỗ Nguyệt Quế đã giúp tôi trong quá trình thực hiện luận văn. Tôi cũng xin chân thành cảm ơn các thầy cô, các cán bộ trong Bộ môn Dược liệu, bộ môn Dược lý Trường Đại học Dược Hà Nội; Ban Giám hiệu, Phòng Sau đại học cùng toàn thể các thầy cô giáo trong trường đã dạy cho tôi những kiến thức bổ ích, giúp đỡ tạo điều kiện cho tôi trong suốt thời gian học tập nghiên cứu và thực hiện luận văn này. Cuối cùng, tôi xin cảm ơn gia đình, bạn bè đã động viên, khích lệ tôi rất nhiều để tôi có thêm sự nhiệt tình và say mê trong nghiên cứu khoa học. Hà Nội, ngày 27 tháng 10 năm 2014 Triệu Thị Nhung MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC HÌNH ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 3 1.1.VỊ TRÍ PHÂN LOẠI, ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ PHÂN BỐ 3 1.1.1.Vị trí phân loại của chi Pteris L. 3 1.1.2.Đặc điểm thực vật và phân bố của họ Cỏ luồng (Pteridaceae) 3 1.1.3.Đặc điểm chung của chi Pteris L. 3 1.1.4.Đặc điểm thực vật và phân bố của Cỏ seo gà (Pteris multifida Poir.)……… 4 1.2.THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CỎ SEO GÀ 5 1.3.TÁC DỤNG DƯỢC LÝ 10 1.3.1. Tác dụng hạ lipid máu 10 1.3.2. Tác dụng chống đột biến 10 1.3.3.Tác dụng kháng khuẩn và kháng nấm 10 1.3.4.Tác dụng chống ung thư 11 1.3.5.Tác dụng chống oxy hóa và độc tính 13 1.3.6.Tác dụng chống lại phì đại tuyến tiền liệt lành tính 13 1.4.CÔNG DỤNG 13 1.5.MỘT SỐ ĐƠN THUỐC 14 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1. ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 15 2.1.1. Mẫu nghiên cứu 15 2.1.2. Các dòng tế bào thí nghiệm 15 2.1.3. Thuốc thử, dung môi, hoá chất 15 2.1.4. Thiết bị, dụng cụ nghiên cứu 16 2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.2.1. Mô tả đặc điểm thực vật 16 2.2.2. Xác định thành phần hóa học 17 2.2.3. Đánh giá tác dụng gây độc tế bào ung thư của Cỏ seo gà 19 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 22 3.1. ĐẶC ĐIÊM THỰC VẬT CỦA CỎ SEO GÀ 22 3.1.1. Đặc điểm hình thái và giám định tên khoa học 22 3.1.2. Đặc điểm vi phẫu lá 24 3.1.3. Đặc điểm vi phẫu thân rễ 25 3.1.4. Đặc điểm bột lá………… …………………………………… 27 3.1.5. Đặc điểm bột thân rễ 28 3.2.THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CỎ SEO GÀ 28 3.2.1. Chiết xuất 28 3.2.2.Định tính các nhóm chất trong dược liệu và cắn các phân đoạn bằng các phản ứng hóa học 31 3.2.3.Định tính cắn toàn phần và các phân đoạn bằng sắc ký lớp mỏng 32 3.2.4. Phân lập 35 3.3. TÁC DỤNG GÂY ĐỘC TRÊN MỘT SỐ DÒNG TẾ BÀO UNG THƯ CỦA CỎ SEO GÀ 48 3.3.1. Mẫu thử 48 3.3.2. Chất đối chứng 48 3.3.3. Tiến hành thí nghiệm 48 3.3.4. Kết quả 50 3.3.5. Nhận xét 51 CHƯƠNG 4: BÀN LUẬN 52 4.1. VỀ NGUỒN NGUYÊN LIỆU………………………………………….52 4.2. VỀ THỰC VẬT……………………………………………………… 52 4.3. VỀ THÀNH PHẦN HÓA HỌC……………………………………… 53 4.4. VỀ TÁC DỤNG GÂY ĐỘC TẾ BÀO UNG THƯ…………………… 55 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 57 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT STT Chữ viết tắt Chữ viết đầy đủ 1 1 H-NMR Proton (1) Nuclear Magnetic Resonance 2 13 C-NMR Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance 3 1D-NMR One dimension-Nuclear Magnetic Resonance 4 2D-NMR Two dimension-Nuclear Magnetic Resonance 5 ABTS + 2,2’-azino-bis(3-ethylbenzthiazolin-6-sulfonic)acid 6 AST Ánh sáng thường 7 C Cắn cloroform 8 Dd Dung dịch 9 DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer 10 Dm Dung môi 11 DMEM Dulbecco's Modified Eagle's medium 12 DMSO Dimethyl sulfoxid 13 E Cắn ethylacetat 14 EDTA Ethylene DiamineTetraacetic Acid 15 ESI/MS Electrospray Ionization-Mass spectrometry 16 EtOAc Ethyl acetat 17 FBS Fetal bovine serum 18 H Cắn n-hexan 19 HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation 20 HPLC High Performance Liquid Chromatography 21 HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation 22 IC 50 Giá trị nồng độ có hiệu lực ức chế 50% 23 KHV Kính hiển vi 24 MeOH Methanol 25 MS Mass Spectroscopy 26 MT Môi trường 27 MTS 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3- carboxymethoxyphenyl) -2-(4-sulfophenyl)-2H- tetrazolium 28 n-BuOH n-butanol 29 NCI National Cancer Institute 30 OD Mật độ quang học 31 PMS Phenazin methosulfat 32 R f Hệ số di chuyển 33 RPMI Roswell Park Memorial Institute 34 SKLM Sắc kí lớp mỏng 35 STT Số thứ tự 36 TLC Thin Layer Chromatography 37 TLTK Tài liệu tham khảo 38 TT Thuốc thử 39 UV 254nm Ánh sáng tử ngoại bước sóng 254nm 40 UV 366nm Ánh sáng tử ngoại bước sóng 366nm DANH MỤC BẢNG Bảng Tên bảng Trang Bảng 1.1 Một số hợp chất phân lập từ Cỏ seo gà 8 Bảng 1.2 Nồng độ ức chế tối thiểu của một số hợp chất phân lập từ Cỏ seo gà trên dòng tế bào HL-60 12 Bảng 3.1 Kết quả xác định độ ẩm bột Cỏ seo gà 28 Bảng 3.2 Hàm lượng cắn các phân đoạn chiết xuất từ Cỏ seo gà 29 Bảng 3.3 Kết quả định tính các nhóm chất trong Cỏ seo gà 30 Bảng 3.4 Kết quả định tính flavonoid và coumarin trong cắn toànphần, cắn các phân đoạn n-hexan, cloroform và ethyl acetat 32 Bảng 3.5 Kết quả SKLM của PM9 với 3 hệ dung môi ở UV 254 nm 37 Bảng 3.6 Dữ liệu phổ NMR của PM9 39 Bảng 3.7 Kết quả SKLM của PM15 với 3 hệ dung môi ở UV 254 nm 41 Bảng 3.8 Dữ liệu phổ NMR của hợp chất PM15 43 Bảng 3.9 Kết quả SKLM của PM18 với 3 hệ dung môi ở UV 254 nm 45 Bảng 3.10 Dữ liệu phổ NMR của hợp chất PM18 47 Bảng 3.11 Dải nồng độ thử nghiệm của các mẫu thử và taxol (đơn vị μg/ml) 49 Bảng 3.12 Giá trị IC 50 của các mẫu thử và chất đối chứng dương taxol trên các dòng tế bào thử (đơn vị μg/ml) 51 DANH MỤC HÌNH Hình Tên hình Trang Hình 3.1 Cỏ seo gà mọc tự nhiên 23 Hình 3.2 Toàn cây Cỏ seo gà 23 Hình 3.3 Lá không sinh sản 23 Hình 3.4 Lá sinh sản 23 Hình 3.5 Lá sinh sản có mép lá gập lại mang túi bào tử 24 Hình 3.6 Thân rễ Cỏ seo gà 24 Hình 3.7 Cuống lá Cỏ seo gà 24 Hình 3.8 Túi bào tử dày đặc ở mép lá (quan sát bằng kính soi nổi) 24 Hình 3.9 Túi bào tử và bào tử (quan sát bằng kính soi nổi) 24 Hình 3.10 Vi phẫu lá Cỏ seo gà 26 Hình 3.11 Vi phẫu cuống lá Cỏ seo gà 26 Hình 3.12 Vi phẫu thân rễ Cỏ seo gà 27 Hình 3.13 Một số đặc điểm bột lá Cỏ seo gà 27 Hình 3.14 Một số đặc điểm bột thân rễ Cỏ seo gà 28 Hình 3.15 Sơ đồ chiết xuất cắn các phân đoạn từ Cỏ seo gà 30 Hình 3.16 Sắc ký đồ của cắn toàn phần khai triển với hệ dm II 33 Hình 3.17 Sắc ký đồ của cắn phân đoạn n-hexan khai triển với hệ dmV 35 Hình 3.18 Sắc ký đồ của cắn phân đoạncloroform khai triển với hệ dm IV 35 Hình 3.19 Sắc ký đồ của cắn phân đoạn ethyl acetat khai triển với hệ dmI 35 Hình 3.20 Sơ đồ phân lập PM9, PM15 và PM18 từ phân đoạn ethyl 36 [...]... dụng Cỏ seo gà trong dân gian góp phần bổ sung vào kho tàng cây thuốc Việt Nam một dược liệu mới, đề tài: Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và thử tác dụng gây độc trên một số dòng tế bào ung thư của Cỏ seo gà ʹ được thực hiện với những mục tiêu sau: 1 Mô tả đặc điểm thực vật của Cỏ seo gà 2 Xác định thành phần hóa học của Cỏ seo gà 3 Đánh giá tác dụng gây độc trên một số dòng tế bào ung. .. trong Cỏ seo gà có tác dụng gây độc với tế bào ung thư máu [31], [32]  Tác dụng gây độc lên hai dòng tế bào ung thư tụy và tế bào ung thư phổi: Ouyang Dan-Wei và cộng sự (2010) nghiên cứu tác dụng gây độc với tế bào ung thư (ung thư tụy, ung thư phổi, ung thư ruột) của các chất tách chiết phân lập từ Cỏ seo gà Kết quả thu được 3 chất có tác dụng gây độc mạnh lên hai dòng tế bào ung thư tụy và ung thư tế. .. Poir.) [27], [55]  Tác dụng gây độc trên tế bào ung thư gan:  Năm 2008, Ge Xin và cộng sự đã đánh giá tác dụng gây độc tế bào của các hợp chất tách chiết phân lập từ Cỏ seo gà trên các dòng tế bào ung thư gan, ung thư máu, ung thư cổ tử cung và ung thư đại tràng Kết quả thu được có hai chất có tác dụng gây độc trên tế bào ung thư gan với IC50 < 10 μg [27]  Tác dụng chống ung thư của các flavonoid... thư tế bào phổi với IC 50 trong khoảng 4,27-14,63 μM [40] 12  Tác dụng gây độc trên dòng tế bào ung thư cổ tử cung, ung thư vú và ung thư phổi: Năm 2014, Hoàng Lê Sơn và Trần Huỳnh Phước Thảo tiến hành phân lập và xác định các hợp chất từ lá Cỏ seo gà, đồng thời đánh giá tác dụng chống oxy hóa và tác dụng chống ung thư cổ tử cung trên các dòng tế bào ung thư cổ tử cung (HeLa), dòng tế bào ung thư phổi... mẫu nghiên cứu Chiết xuất, phân lập và nhận dạng một số chất tinh khiết dựa trên các dữ liệu phổ 3 Đánh giá tác dụng gây độc trên một số dòng tế bào ung thư: tế bào ung thư cổ tử cung (HeLa), tế bào ung thư vú (MCF7), tế bào ung thư dạ dày (N87) 2 CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN 1.1 VỊ TRÍ PHÂN LOẠI, ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ PHÂN BỐ 1.1.1 Vị trí phân loại của chi Pteris L Theo [1], [9], [14], [18] Cỏ seo gà thuộc chi... trên dòng tế bào ung thư máu: Jicheng Shu và cộng sự (2011-2012) tiến hành nghiên cứu đánh giá tác dụng gây độc trên dòng tế bào ung thư máu của các chất phân lập tách chiết từ Cỏ seo gà Nồng độ ức chế tối thiểu trên dòng tế bào HL-60 của các chất được trình bày trong bảng 1.2 Bảng 1.2 Nồng độ ức chế tối thiểu của một số hợp chất phân lập từ Cỏ seo gà trên dòng tế bào HL-60 Tên chất STT IC50 (µM) 1 Bimutipterosin... khối, phổ cộng hưởng từ hạt nhân một chiều (1D-NMR) và hai chiều (2D-NMR) Sau đó, căn cứ vào các dữ liệu phổ thu được sẽ xác định cấu trúc chất phân lập 2.2.3 Đánh giá tác dụng gây độc tế bào ung thư của Cỏ seo gà Thử tác dụng gây độc tế bào của dịch chiết phân đoạn ethyl acetat và chất phân lập được từ Cỏ seo gà bằng phương pháp MTS-xác định độc tính với tế bào ung thư trong mô hình in vitro 2.2.3.1... ung thư Để thực hiện mục tiêu đề ra, đề tài được tiến hành với các nội dung như sau: 1 Mô tả đặc điểm thực vật: Mô tả đặc điểm hình thái, đặc điểm vi phẫu lá, thân rễ, đặc điểm bột lá, thân rễ Cỏ seo gà Giám định tên khoa học của mẫu nghiên cứu 2 Xác định thành phần hóa học: Định tính các nhóm chất bằng các phản ứng hóa học và sắc ký lớp mỏng đối với cắn toàn phần và cắn các phân đoạn của các mẫu nghiên. .. chống oxy hóa mạnh trong khi (2) có tác dụng gây độc mạnh trên tế bào ung thư vú dòng MCF7 [28] 1.3.5 Tác dụng chống oxy hóa và độc tính Theo Wang T.C., Lin C.C., Lee H.I., Yang C., Yang C.C (2007), dịch chiết nước Cỏ seo gà có tác dụng chống oxy hóa và loại trừ các gốc tự do [50] Wang T.C., Lin C.C., Lee H.I., Yang C., Yang C.C (2007) cũng đã nghiên cứu thử nghiệm độc tính của dịch chiết nước của P multifida... có tác dụng ức chế cả 6 loại vi khuẩn trên ở mức độ vừa phải Tuy hiệu lực tác dụng của các hợp chất trên không ở mức so sánh được với các kháng sinh, nhưng sự có mặt của chúng cũng gợi mở phần nào về khả năng kháng khuẩn của Cỏ seo gà [30] 1.3.4 Tác dụng chống ung thư Gần đây Trung Quốc đã công bố rất nhiều nghiên cứu liên quan đến tác dụng điều trị ung thư của các thuốc Trung y, trong đó có Cỏ seo gà . DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRIỆU THỊ NHUNG NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ THỬ TÁC DỤNG GÂY ĐỘC TRÊN MỘT SỐ DÒNG TẾ BÀO UNG THƯ. dòng tế bào ung thư của Cỏ seo gà ʹ được thực hiện với những mục tiêu sau: 1. Mô tả đặc điểm thực vật của Cỏ seo gà. 2. Xác định thành phần hóa học của Cỏ seo gà. 3. Đánh giá tác dụng gây độc. Cỏ seo gà trong dân gian góp phần bổ sung vào kho tàng cây thuốc Việt Nam một dược liệu mới, đề tài: Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và thử tác dụng gây độc trên một số dòng