BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI  NGUYỄN THỊ HỒNG VÂN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC IN VITRO CỦA CÂY CẦN TÂY (Apium graveolens L.) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI – 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI  NGUYỄN THỊ HỒNG VÂN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC IN VITRO CỦA CÂY CẦN TÂY (Apium graveolens L.) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƢỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 60 72 04 06 Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: TS. Nguyễn Thu Hằng HÀ NỘI – 2013 LỜI CẢM ƠN Lời đầu tiên, tôi xin gửi lời cảm ơn tới Ban giám hiệu nhà trường, phòng sau đại học đã tạo điều kiện để tôi có thể hoàn thành luận văn của mình. Với lòng biết ơn sâu sắc nhất, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS.Nguyễn Thu Hằng người thầy đã tận tình chỉ bảo, dồn hết tâm huyết truyền đạt cho tôi nhiều kiến thức và kinh nghiệm khoa học vô cùng quý báu. Cô còn là người dẫn đường tận tụy, nhiệt tình đã dìu dắt, động viên, giúp đỡ tôi trên từng bước đường trong suốt thời gian học tập hoàn thành luận văn thạc sĩ tại bộ môn Dược Liệu – Trường Đại Học Dược Hà Nội. Tôi cũng xin chân thành cảm ơn TS. Nguyễn Quốc Huy – Bộ môn Thực vật trƣờng đại học Dƣợc hà nội, TS. Nguyễn Văn Hân – Bộ môn công nghiệp Dược trường Đại học dược Hà nội đã động viên, giúp đỡ tôi trong quá trình học tập và thực hiện luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn sâu sắc tới toàn thể thầy cô, các anh chị kỹ thuật viên của bộ môn Dược Liệu trường Đại Học Dược Hà Nội đã giúp đỡ tôi trong toàn bộ thời gian hoàn thành đề tài tốt nghiệp. Xin gửi lời cảm ơn chân thành tới các bạn, các anh chị em chuyên ngành Dược học cổ truyền, các em sinh viên khóa 62,63,64 làm đề tài tại bộ môn Dược liệu – trường Đại học Dược Hà Nội đã chia sẻ, động viên, giúp đỡ tôi hoàn thành quá trình học tập và nghiên cứu. Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành, sâu sắc nhất tới bố mẹ, gia đình, những người thân đã luôn bên cạnh, động viên, ủng hộ tôi trong suốt quá trình học tập và đạt kết quả như ngày hôm nay. Hà Nôi, ngày 30 tháng 10 năm 2013 Học viên Nguyễn Thị Hồng Vân MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN 3 1.1. TÊN GỌI 3 1.2. VỀ THỰC VẬT 3 1.3. THÀNH PHẦN HÓA HỌC 5 1.4. TÁC DỤNG SINH HỌC 15 1.5. ĐỘC TÍNH 18 1.6. CÔNG DỤNG 19 1.7. MỘT SỐ BÀI THUỐC CÓ THÀNH PHẦN LÀ CẦN TÂY 20 CHƢƠNG 2: ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 22 2.1. NGUYÊN VẬT LIỆU, THIẾT BỊ 22 2.2. PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.2.1. Nghiên cứu đặc điểm thực vật 24 2.2.2. Nghiên cứu thành phần hóa học 24 2.2.3. nghiên cứu tác dụng sinh học 25 2.3.4. Xử lý kết quả thực nghiệm 28 CHƢƠNG 3: THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ 29 3.1. NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT 29 3.1.1.Mô tả đặc điểm hình thái của mẫu nghiên cứu 29 3.1.2. Xác định tên khoa học của mẫu nghiên cứu 29 3.1.3.Đặc điểm vi phẫu hạt Cần tây 32 3.1.4. Đặc điểm bột Cần tây 32 3.1.4.1. Đặc điểm bột lá 32 3.1.4.2. Đặc điểm bột thân 32 3.1.4.3. Đặc điểm bột rễ 34 3.1.4.4. Đặc điểm bột hoa 34 3.1.4.5. Đặc điểm bột hạt 34 3.2. NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC 37 3.2.1. Nghiên cứu tinh dầu Cần tây 37 3.2.1.1. Định lượng tinh dầu trong BPTMĐ và hạt Cần tây 37 3.2.1.2. Nghiên cứu thành phần tinh dầu Cần tây bằng phương pháp sắc ký khí kết hợp khối phổ (GC/MS) 37 3.2.2. Định tính các nhóm chất chính trong cây Cần tây bằng phản ứng hóa học 41 3.2.3. Định tính dịch chiết methanol BPTMĐ và hạt của Cần tây bằng SKLM 43 3.2.4. Xác định lƣợng chất chiết đƣợc bằng ethanol của BPTMĐ và hạt Cần tây 47 3.2.5. Chiết xuất các phân đoạn dịch chiết từ hạt Cần tây 49 3.2.6. Định tính phân đoạn dịch chiết DC 2 50 3.2.6.1. Định tính phân đoạn dịch chiết DC 2 bằng phản ứng hóa học 50 3.2.6.2. Định tính phân đoạn dịch chiết DC 2 bằng SKLM 53 3.2.7. Phân lập chất từ phân đoạn dịch chiết DC 2 hạt Cần tây 55 3.2.7.1. Phân lập lần 1 56 3.2.7.2. Phân lập lần 2 57 3.2.7.3. Phân lập lần 3 58 3.2.8. Kiểm tra độ tinh khiết của CT 3 bằng SKLM 59 3.2.9. Sơ bộ nhận dạng chất CT 3 61 3.2.9.1. Độ hòa tan 61 3.2.9.2. Định tính CT 3 bằng phản ứng hóa học 61 3.2.10. Xác định cấu trúc hóa học của CT 3 62 3.3. ĐÁNH GIÁ ẢNH HƢỞNG IN VITRO CỦA DỊCH CHIẾT CẦN TÂY ĐỐI VỚI HỆ ĐÔNG MÁU VÀ SỰ NGƢNG TẬP TIỂU CẦU 64 3.3.1. Đánh giá ảnh hƣởng in vitro của dịch chiết Cần tây đối với hệ đông máu 64 3.3.1.1. Chuẩn bị dịch chiết 64 3.3.1.2. Chuẩn bị mẫu máu 64 3.3.1.3. Tiến hành và kết quả 65 3.3.2. Đánh giá ảnh hƣởng in vitro của dịch chiết hạt Cần tây đối với sự ngƣng tập tiểu cầu 67 3.3.2.1. Chuẩn bị dịch chiết dược liệu 67 3.3.2.2. Chuẩn bị huyết tương giàu tiểu cầu 68 3.3.2.3. Tiến hành và kết quả 68 CHƢƠNG 4: BÀN LUẬN 70 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 77 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU – CÁC CHỮ VIẾT TẮT 3nB 3-n-butylphthalid ALAT Alanin amino transferase ASAT Aspartat amino transferase BPTMĐ Bộ phận trên mặt đất DD Dung dịch EtOAc Ethyl acetat GLP Good laboratory practice HDL High density lipoprotein iNOS Inducible nitric oxid synthase LDL Low density lipoprotein MeOH Methanol NO Nitric oxid Nxb Nhà xuất bản PƢ Phản ứng SKLM Sắc ký lớp mỏng STT Số thứ tự TT Thuốc thử UV Ultra violet Spectroscopy DANH MỤC CÁC BẢNG STT TÊN BẢNG TRANG 1 Bảng 1.1: Các hợp chất flavonoid có trong cây Cần tây (Apium graveolens L.) 6 2 Bảng 1.2 : Thành phần hóa học của tinh dầu Cần tây (Apium graveolens L.) 9 3 Bảng 1.3: Các hợp chất furocoumarin có trong cây Cần tây (Apium graveolens L.) 11 4 Bảng 1.4: Các hợp chất coumarin khác có trong hạt Cần tây 13 5 Bảng 1.5: Một số hợp chất khác có trong cây Cần tây (Apium graveolens L.) 14 6 Bảng 2.1: Thành phần các mẫu trong thí nghiệm đánh giá ảnh hƣởng của dịch chiết hạt Cần tây đối với hệ đông máu 26 7 Bảng 3.1: Kết quả phân tích thành phần hóa học tinh dầu BPTMĐ và tinh dầu hạt Cần tây bằng phƣơng pháp GC/MS 40 8 Bảng 3.2: Kết quả định tính các nhóm chất chính trong cây Cần tây 41 9 Bảng 3.3: Kết quả SKLM dịch chiết methanol BPTMĐ Cần tây với hệ dung môi khai triển IV : Toluen : EtOAc : Acid formic (5:4:1) 45 10 Bảng 3.4 : Kết quả SKLM dịch chiết methanol hạt Cần tây với hệ dung môi khai triển XI : Toluen : EtOAc : Chloroform (5:4:1) 46 11 Bảng 3.5 : % lƣợng chất chiết đƣợc bằng ethanol của BPTMĐ cây Cần tây 48 12 Bảng 3.6: % lƣợng chất chiết đƣợc trong ethanol của hạt Cần tây 48 13 Bảng 3.7: Kết quả định tính phân đoạn dịch chiết DC 2 từ hạt Cần tây 53 14 Bảng 3.8: Kết quả SKLM phân đoạn dịch chiết DC2 với hệ dung môi XIX 55 15 Bảng 3.9: Độ tan của CT 3 trong một số dung môi 61 16 Bảng 3.10 : Dữ liệu phổ cộng hƣởng từ hạt nhân của chất CT 3 63 17 Bảng 3.12: Kết quả đánh giá ảnh hƣởng in vitro của dịch chiết hạt Cần tây trên các thời gian PT. 65 18 Bảng 3.13: Kết quả đánh giá ảnh hƣởng in vitro của dịch chiết hạt Cần tây trên các thời gian APTT. 66 19 Bảng 3.14: Kết quả đánh giá ảnh hƣởng in vitro của dịch chiết hạt Cần tây trên các thời gian TT. 67 20 Bảng 3.15: Kết quả đánh giá ảnh hƣởng in vitro của dịch chiết hạt Cần tây trên sự ngƣng tập tiểu cầu 69 DANH MỤC CÁC HÌNH STT TÊN HÌNH TRANG 1 Hình 1.1. Khung cấu trúc của các hợp chất flavonoid có trong Cần tây 5 2 Hình 1.2: Khung cấu trúc các hợp chất furocoumarin 11 3 Hình 3.1: Ảnh chụp cây Cần tây 30 4 Hình 3.2: Ảnh chụp các đặc điểm của cây Cần tây 31 5 Hình 3.3: Ảnh chụp vi phẫu quả Cần tây dƣới kính hiển vi 33 6 Hình 3.4: Ảnh chụp các đặc điểm bột lá Cần tây dƣới kính hiển vi 33 7 Hình 3.5: Ảnh chụp các đặc điểm bột thân Cần tây dƣới kính hiển vi 35 8 Hình 3.6: Ảnh chụp các đặc điểm bột rễ Cần tây dƣới kính hiển vi 35 9 Hình 3.7: Ảnh chụp các đặc điểm bột hoa Cần tây dƣới kính hiển vi 36 10 Hình 3.8: Ảnh chụp các đặc điểm bột quả Cần tây dƣới kính hiển vi 36 11 Hình 3.9: Ảnh chụp sắc ký đồ dịch chiết methanol PTMĐ Cần tây với hệ dung môi khai triển IV : Toluen : EtOAc : Acid formic (5:4:1) 44 12 Hình 3.10: Ảnh chụp sắc ký đồ dịch chiết methanol hạt Cần tây với hệ dung môi khai triển XI : Toluen : EtOAc : Chloroform (8:6:1) 44 [...]... tây nhƣng các nghiên cứu còn rời rạc, chƣa thành hệ thống đầy đủ Đặc biệt, những nghiên cứu về hạt Cần tây còn rất ít Vì vậy, đề tài Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học và một số tác dụng sinh học in vitro của cây Cần tây (Apium graveolens L.)‖ đƣợc tiến hành với những mục tiêu sau: 1 1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật của cây Cần tây 2 Nghiên cứu thành phần hóa học của cây Cần tây 3 Đánh giá... những năm 1970 và 1980 đã chứng minh rằng tinh dầu Cần tây có tác dụng làm dịu hệ thần kinh trung ƣơng [1] Nƣớc ép của Cần tây có tác dụng kéo dài và làm tăng tác động gây ngủ của pentobarbital và tác dụng giảm đau của paracetamol và aminopyrine trên chuột [46] 1.4.5 Tác dụng giải độc, bảo vệ gan Dịch chiết nƣớc từ rễ, lá và hạt Cần tây có tác dụng làm giảm độc tính của acrylamid Nghiên cứu thực hiện trên... thực Cần tây cũng là một loài thực vật di thực và đến nay đã thích nghi với điều kiện khí hậu của nƣớc ta Từ xa xƣa, cây Cần tây đã đƣợc sử dụng rộng rãi làm thuốc ở nhiều nền văn hóa: ngƣời Hy lạp dùng làm thuốc lợi tiểu, ngƣời Ai cập dùng Cần tây để chữa bệnh tim, ngƣời phƣơng Tây đã dùng rễ Cần tây làm thuốc lợi tiểu…Hạt Cần tây đã đƣợc đƣa vào sách Từ điển cây thuốc của Anh (1983) [31] nhƣ là một. .. PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1 Nghiên cứu đặc điểm thực vật - Mô tả đặc điểm hình thái của mẫu cây Cần tây theo phƣơng pháp mô tả phân tích, đối chiếu với khóa phân loại chi Apium L và bản mô tả loài Apium graveolens L của tài liệu Thực vật chí Trung Quốc [39] để xác định tên khoa học của mẫu Cần tây nghiên cứu - Sấy khô dƣợc liệu (lá, thân, rễ, hoa) trong tủ sấy ở nhiệt độ 60 0C sau đó dùng thuyền tán và chày... thuộc nhóm coumarin, 45 chất thuộc nhóm tinh dầu và 20 chất khác 14 1.4 TÁC DỤNG SINH HỌC 1.4.1 Tác dụng hạ huyết áp Dịch chiết nƣớc thân lá, rễ Cần tây, flavonoid toàn phần từ lá Cần tây có tác dụng lợi tiểu trên chuột cống trắng Rễ Cần tây còn có tác dụng hạ huyết áp rõ rệt trên mèo [18] Hoạt chất 3-n-butylphthalid đƣợc phân lập từ Cần tây có tác dụng hạ huyết áp trên chuột tăng huyết áp tự nhiên... yếu là limonen, selinen, myrcen [9], [14], [20] Ngoài ra còn có pinen, terpinen, ocimen [9] Các thành phần khác của tinh dầu Cần tây là santalol, α và β- eudesmol, dihydrocarvon và L- carvon [9] Thành phần hóa học của tinh dầu Cần tây đƣợc tổng hợp ở bảng 1.2 8 Bảng 1.2 : Thành phần hóa học của tinh dầu Cần tây (Apium graveolens L.) (18) (19) β-Pinen Sabinen Trans-β-oximen [9] 31,48 [9] Hạt 1,63 [62]... (protein toàn phần) và TA (albumin toàn phần Trong đó dịch chiết methanol có tác dụng bảo vệ gan tốt nhất có thể so sánh với thuốc silymarin [21] 1.4.7 Tác dụng chống oxy hóa Tinh dầu hạt, các furanocoumarin [56] và một số thành phần tinh dầu (sedanolid, senkyunolide-J) [53] trong Cần tây đƣợc chứng minh là có khả năng chống oxy hoá 1.4.8 Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm Tinh dầu hạt Cần tây có tác dụng ức... Bằng thực nghiệm khoa học, Cần tây đã đƣợc chứng minh có tác dụng hạ huyết áp [11], [68], hạ lipid máu [69], chống viêm [11], giảm đau [1]… Gần đây, hạt Cần tây đƣợc chú ý đến bởi có nhiều tác dụng sinh học quan trọng nhƣ tác dụng chống viêm [11], hạ lipid máu [69], hạ huyết áp [68], chống ung thƣ [64], chống loét đƣờng tiêu hóa [23], bảo vệ gan [31], Ở Việt Nam đã có một số nghiên cứu về Cần tây nhƣng... hóa Lipopolysacchride (LPS) ở tế bào J774.A1 dịch chiết Cần tây có tác dụng chống viêm ở ID50 là 730 µg/cm2 [52] 1.4.4 Tác dụng giảm đau, an thần Các thành phần phthalid trong tinh dầu Cần tây có tác dụng giảm đau an dịu trên chuột 3-n-butylphthalid có tác dụng chống co giật trên chuột cống thí nghiệm Tác dụng chống co giật yếu hơn dẫn chất diazepam nhƣng không độc trên tế bào não [11] Nghiên cứu vào... Cholesterol toàn phần trong huyết thanh và lƣợng Cholesterol HDL trên chuột Rico trƣởng thành [69] Trong luận văn thạc sĩ dƣợc học, Nguyễn Thị Bảo đã xác định đƣợc flavonoid trong Cần tây không độc Flavonoid toàn phần của thân, lá Cần tây có tác dụng hạ cholesterol toàn phần với liều 0,3g/kg chuột [2] 15 1.4.3 Tác dụng chống viêm Dịch chiết nƣớc của thân Cần tây đƣợc chứng minh là có tác dụng chống viêm . NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC IN VITRO CỦA CÂY CẦN TÂY (Apium graveolens L.) LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƢỢC HỌC CỔ. phần hóa học và một số tác dụng sinh học in vitro của cây Cần tây (Apium graveolens L.)‖ đƣợc tiến hành với những mục tiêu sau: 2 1. Nghiên cứu đặc điểm thực vật của cây Cần tây. 2. Nghiên. DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI  NGUYỄN THỊ HỒNG VÂN NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNG SINH HỌC IN VITRO CỦA CÂY CẦN