Đang tải... (xem toàn văn)
ĐẶT VẤN ĐỀ Những năm gần đây, hệ tiểu phân nano lipid rắn (SLNs) đã thu được sự chú ý rất lớn từ các nhà khoa học. SLNs kết hợp những ưu điểm chung của các hệ mang thuốc kích thước nano như tăng độ tan, tăng tính thấm của dược chất, kéo dài thời gian lưu hành thuốc trong máu và đưa thuốc hướng đích nhờ các kỹ thuật xử lý bề mặt tiểu phân; hạn chế được nhược điểm của các hệ mang trước đó như kém ổn định (liposome) và độc tính cao (tiểu phân nano polyme). Trong các nghiên cứu về SLNs trước đây được công bố trong nước và trên thế giới, các tác giả tập trung chủ yếu vào nhóm dược chất thân dầu và các đại phân tử thân nước như protein, albumin... Tuy nhiên, với sự đa dạng của hoạt chất cùng với mục đích điều trị khác nhau, mảng bào chế SLNs với dược chất thân nước là một lĩnh vực khó và hấp dẫn cho các nhà nghiên cứu. Mafenid acetat là một chất kháng khuẩn tổng hợp, cấu trúc có liên quan chặt chẽ đến nhóm sulfonamid, tan trong nước. Với độ tan trong nước ở 25 o C là 10 6 mgL, dược chất này là một thách thức thú vị với các nhà bào chế hệ tiểu phân nano lipid. Do vậy, mafenid acetat được dùng như một mô hình thuốc để ứng dụng vào dạng bào chế nano lipid rắn chứa dược chất thân nước. Với mục đích trên, đề tài “Nghiên cứu bào chế tiểu phân nano lipid rắn mafenid” được tiến hành với các mục tiêu sau: 1. Xây dựng được công thức bào chế hệ tiểu phân nano lipid rắn mafenid acetat. 2. Xác định được một số thông số quy trình bào chế hệ tiểu phân nano lipid rắn mafenid acetat.
BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ TH HƯƠNG MAI NGHIÊN CU BO CH TIU PHÂN NANO LIPID RN MAFENID KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2015 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LÊ TH HƯƠNG MAI NGHIÊN CU BO CH TIU PHÂN NANO LIPID RN MAFENID KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS.TS. Nguyễn Ngc Chin Nơi thực hiện: 1. Viện Công nghệ Dưc phm Quc gia 2. B môn Bo Ch HÀ NỘI - 2015 LỜI CM ƠN Li đu tiên, tôi xin by t lng bit ơn chân thnh v sâu sc ti: PGS.TS. Nguyễn Ngc Chin Ngưi thy đã trực tip hưng dẫn v tận tình chỉ bảo, giúp đỡ cho tôi trong suốt thi gian vừa qua. Tôi xin chân thnh cảm ơn DS. Nguyn Th Thy Trang, ngưi “thy”, ngưi bn đã luôn bên tôi, hưng dẫn v giải đp thc mc, kh khăn cho tôi trong suốt thi gian tôi thực hin kha luận. Tôi cng xin chân thnh cảm ơn ThS. Nguyn Hnh Thy, ThS. Bi Th Lan Phương, ThS. Trn Tun Hip đã c nhng giúp đỡ qu bu v tưng, kin thc v to mi điu kin thuận li đ tôi hon thnh kha luận ny. Tôi xin chân thnh cảm ơn cc thy, cô gio v cc anh ch nghiên cu viên, kỹ thuật viên Vin Công ngh Dưc phm Quốc gia, bộ môn Bo ch, t Bo Ch bộ môn Công Nghip Dưc đã to điu kin cho tôi s dng my mc thit b v hưng dẫn trong qu trình tôi lm thực nghim. Tôi xin trân trng cảm ơn cc thy cô trong Ban gim hiu, phng Đo to cùng ton th thy cô cc bộ môn v cn bộ cc phng ban trưng Đi hc Dưc H Nội đã tận tình dy dỗ tôi trong nhng năm thng hc tập ti trưng. Cuối cng, tôi xin gi li bit ơn sâu sc đn gia đình v bn b đã luôn bên tôi, động viên v to điu kin cho tôi hon thnh kha luận ny. H Nội, thng 5 năm 2015 Sinh viên Lê Thị Hương Mai MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ VIT TT DANH MỤC CÁC BNG DANH MỤC CÁC HÌNH ĐT VN Đ 1 CHƯƠNG 1: TNG QUAN 2 1.1. Tng quan v hệ nano lipid rn cha dưc cht thân nước 2 1.1.1. Đc đim ca h tiu phân nano lipid rn cha dưc cht thân nưc 2 1.1.2 Thnh phn 3 1.1.3 Ưu, nhưc đim ca h tiu phân nano lipid rn 5 1.1.4 K thut bo ch 6 1.2. Tng quan v mafenid acetat 12 1.2.1. Công thc 12 1.2.2. Tính cht lý hóa 12 1.2.3 Định lưng 12 1.2.4 Tác dụng dưc lý, chỉ định, tác dụng không mong muốn 12 1.2.5 Cc nghiên cu liên quan đn dng bo ch ca mafenid acetat 13 CHƯƠNG 2. ĐỐI TƯỢNG V PHƯƠNG PHP NGHIÊN CU 14 2.1. Đi tưng nghiên cu, nguyên vt liệu, thit b 14 2.1.1. Đối tưng nghiên cu 14 2.1.2. Nguyên vt liu 14 2.1.3. Thit bị 15 2.2. Ni dung nghiên cu 15 2.3. Phương php nghiên cu 15 2.3.1. Phương php đnh gi khả năng hòa tan ca cc lipid khc nhau trong cc dung môi khc nhau. 15 2.3.2. Phương php bo ch h tiu phân nano lipid rn 16 2.3.3. Phương php định lưng mafenid acetat trong ch phm. 18 2.3.4 Thm định mt số chỉ tiêu ca phương php định lưng HPLC trong môi trưng nưc 19 2.3.5. Phương php đnh gi h tiu phân nano lipid rn mafenid acetat 20 CHƯƠNG 3. THC NGHIỆM, BN LUẬN V KT QU 22 3.1 Kt qu thm đnh mt s ch tiêu phương php đnh lưng HPLC mafenid acetat trong môi trường nước 22 3.2.1 Xc định đ đc hiu 22 3.2.1 Đ tuyn tnh 23 3.2.3 Đ đng 24 3.2 Kt qu kho st đ tan ca lipid trong mt s dung môi hu cơ 25 3.3 Xây dựng quy trnh bo ch hệ tiu phân nano lipid rn cha dưc cht mafenid acetat 27 3.3.1 Khảo st phương php bo ch 28 3.4.2 Khảo st loi lipid 30 3.4.3 Khảo st nng đ lipid trong h tiu phân nano lipid rn 32 3.4.4 Khảo st la chn cht din hot thân nưc 33 3.4.5 Khảo st t l th tch pha nưc ni : pha du 34 3.4.6 Khảo st thi gian siêu âm 36 KT LUẬN V Đ XUT 40 TI LIỆU THAM KHO PHỤ LỤC DANH MỤC CC CHỮ VIT TT DCM Dicloromethan DL Lưng thuốc tải np (Drug Loading) EE Hiu sut bao gi dưc cht (Entrapment Efficiency) KTTP Kch thưc tiu phân LDCs H liên hp lipid-dưc cht (Lipid-Drug Conjugates) LogP H số phân bố octanol/nưc O/W Du trong nưc P90G Phospholipon 90G PDI Chỉ số đa phân tn (PolyDispersity Index) PEG Poly ethylen glycol PVA Polyvinyl alcol RES H thống lưi nội mô (ReticuloEndothelial System) SLN Tiu phân nano lipid rn SLNs H tiu phân nano lipid rn v/p Vòng/phút W/O Nưc trong du W/O/W Nưc trong du trong nưc w/v Khối lưng/th tích w/w Khối lưng/khối lưng DANH MỤC CC BNG Bảng 1. 1 So snh h tiu phân thông thưng vi h phân phối thuốc c kim sot SLNs [10], [17] 6 Bảng 2. 1 Nguyên vt liu s dụng trong qu trnh thc nghim 14 Bảng 2. 2 Công thc bo ch SLNs lm mu trng t dưc 20 Bảng 3. 1 Mối tương quan gia din tch pic v nng đ mafenid acetat trong môi trưng nưc 23 Bảng 3. 2 Đ đng ca phương php định lưng HPLC 24 Bảng 3. 3 Khả năng tan trong dung môi hu cơ ca lipid nhit đ thưng 25 Bảng 3. 4 Công thc khảo st cho SLNs s dụng 2 phương php bo ch 28 Bảng 3. 5 Công thc khảo st cho h SLNs s dụng cc loi lipid khc nhau 30 Bảng 3. 6 Cc cht din hot thân nưc dng đ khảo st công thc SLNs 33 Bảng 3. 7 Cc t l pha ni:pha du dng đ khảo st công thc SLNs 35 Bảng 3. 8 Cc thi gian siêu âm s dụng đ khảo sát 37 Bảng 3. 9 Công thc bào ch h tiu phân nano lipid rn mafenid acetat tối ưu 39 DANH MỤC CC HNH Hình 1. 1 Cu trc ca SLNs cha dưc cht thân du 2 Hình 1. 2 Mô hnh SLN đ xut vi 2 b mt phân cch pha không tải np (A) v tải np (B) BSA [35] 3 Hình 2. 1 Sơ đ quy trnh bo ch SLNs theo hai phương php 18 Hình 3. 1 Sc k đ mu trng t dưc 22 Hình 3. 2 Sc k đ mu chun mafenid acetat 22 Hình 3. 3 Sc k đ mu th mafenid acetat 22 Hình 3. 4 Đ thị biu din mối tương quan gia din tch pic v nng đ mafenid acetat trong môi trưng nưc 23 Hình 3. 5 Đ thị th hin ảnh hưng ca phương php bo ch đn KTTP và PDI ca SLNs bào ch đưc 29 Hình 3. 6 Đ thị th hin ảnh hưng ca các loi lipid đn KTTP và PDI ca SLNs bào ch đưc 31 Hình 3.7 Đ thị th hin ảnh hưng ca nng đ lipid đn KTTP, PDI và EE ca SLNs bào ch đưc 32 Hình 3. 8 Đ thị th hin ảnh hưng ca loi cht din hot thân nưc đn KTTP và PDI ca SLNs bào ch đưc 34 Hình 3. 9 Đ thị th hin ảnh hưng t l pha ni : pha du đn KTTP và PDI ca SLNs bào ch đưc 35 Hình 3. 10 Đ thị th hin ảnh hưng ca thi gian siêu âm đn KTTP và PDI ca SLNs bào ch đưc 37 Hình 3. 11 Đ thị th hin ảnh hưng ca thi gian siêu âm đn EE ca SLNs bào ch đưc 38 1 ĐT VN Đ Nhng năm gn đây, h tiu phân nano lipid rn (SLNs) đã thu đưc sự chú rt ln từ cc nh khoa hc. SLNs kt hp nhng ưu đim chung ca cc h mang thuốc kch thưc nano như tăng độ tan, tăng tnh thm ca dưc cht, ko di thi gian lưu hnh thuốc trong mu v đưa thuốc hưng đch nh cc kỹ thuật x l b mt tiu phân; hn ch đưc nhưc đim ca cc h mang trưc đ như km n đnh (liposome) v độc tnh cao (tiu phân nano polyme). Trong cc nghiên cu v SLNs trưc đây đưc công bố trong nưc v trên th gii, cc tc giả tập trung ch yu vo nhm dưc cht thân du v cc đi phân t thân nưc như protein, albumin Tuy nhiên, vi sự đa dng ca hot cht cng vi mc đch điu tr khc nhau, mảng bo ch SLNs vi dưc cht thân nưc l một lnh vực kh v hp dẫn cho cc nh nghiên cu. Mafenid acetat l một cht khng khun tng hp, cu trúc c liên quan cht ch đn nhm sulfonamid, tan trong nưc. Vi độ tan trong nưc 25 o C l 10 6 mg/L, dưc cht ny l một thch thc thú v vi cc nh bo ch h tiu phân nano lipid. Do vậy, mafenid acetat đưc dng như một mô hình thuốc đ ng dng vo dng bo ch nano lipid rn cha dưc cht thân nưc. Vi mc đch trên, đ ti “Nghiên cu bo ch tiu phân nano lipid rn mafenid” đưc tin hnh vi cc mc tiêu sau: 1. Xây dựng đưc công thc bo ch h tiu phân nano lipid rn mafenid acetat. 2. Xc đnh đưc một số thông số quy trình bào ch h tiu phân nano lipid rn mafenid acetat. 2 CHƯƠNG 1: TNG QUAN 1.1. Tng quan v hệ nano lipid rn cha dưc cht thân nước H tiu phân nano lipid rn (SLNs) ln đu tiên đưc gii thiu vào nhng năm 1990. Vi kch thưc cỡ nano, SLNs đã thu hút đưc sự chú đng k từ cc nh khoa hc. Nhng ht ny đ nh đ đi qua cc h thống vi mch mu v ngăn chn sự hp thu ca đi thực bo, do đ đc bit thích hp lm h phân phối thuốc. L dng bo ch mi thay th cho cc tiu phân nano polyme, nh tương v liposome, SLNs l một h mang dưc cht tim năng đối vi một số loi thuốc, do quy trình bo ch đơn giản, c th sản xut quy mô ln, v độc tính thp [10], [24], [31]. 1.1.1. Đc đim ca h tiu phân nano lipid rn cha dưc cht thân nưc Một cách tng quát, SLNs là nhng tiu phân c đưng kính trung bình từ 50 – 1000 nm đưc phân tn trong nưc hoc trong một dung dch cht din hot thân nưc. Mỗi tiu phân có cu to gồm một mng lipid đơn, bao quanh một lõi cha cốt lipid rn, hot cht thân du đưc đan xen trong cốt lipid dng hòa tan hoc kt tinh [3]. Hình 1. 1 Cu trc ca SLNs cha dưc cht thân du Đối vi nhm dưc cht thân nưc, Li v cộng sự đã đ xut mô hình cu trúc ca tiu phân nano lipid rn (SLN) cha albumin huyt thanh b (BSA) đưc bo ch bng kỹ thuật nh ha kp. Theo đ, dưc cht nm pha nưc nội đưc bao quanh bi pha lipid rn cu to giống như tiu phân SLN cha dưc cht thân du. Cc tiu phân ny đưc phân tn trong pha ngoi l nưc hoc dung dch cht din hot thân nưc c nồng độ thch hp [35]. [...]... thước 10.000 Dalton - Cân phân tích Sartorius (Đức), cân kỹ thuật, bể điều nhiệt - Máy đo thế Zeta và xác định phân bố kích thước tiểu phân Zetasizer NanoZS90 Malvern (Anh) - Hệ thống HPLC Agilent 1260 (Đức) - Các thiết bị khác (cốc có mỏ, pipet, bình định mức…) 2.2 Nội dung nghiên cứu - Xây dựng công thức và quy trình bào chế tiểu phân nano lipid rắn mafenid acetat dựa trên... thức - Đánh giá hệ tiểu phân bào chế được về các chỉ tiêu Kích thước, chỉ số PDI Hàm lượng dược chất trong hệ tiểu phân nano lipid rắn Hiệu suất bao gói thuốc của hệ tiểu phân nano lipid rắn 2.3 Phương pháp nghiên cứu 2.3.1 Phương pháp đánh giá khả năng hòa tan của các lipid khác nhau trong các dung môi khác nhau Lấy khoảng 1 g mỗi lipid (Compritol, Precirol,... được sử dụng để ổn định hệ phân tán lipid Việc phối hợp các loại chất diện hoạt có thể cho hiệu quả ngăn chặn sự kết lắng tiểu phân tốt hơn Hiện nay, hệ mang dược chất sử dụng hỗn hợp lipid lỏng và rắn (được gọi là hệ mang lipid cấu trúc nano – NLC) đang được nghiên cứu rộng rãi [6], [17], [24], [31] 4 Cốt lipid Việc lựa chọn lipid là rất quan trọng để... định từ hệ [23] 14 CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu, nguyên vật liệu, thiết bị 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu - Mafenid acetat - Tiểu phân nano lipid rắn mafenid acetat 2.1.2 Nguyên vật liệu Bảng 2 1 Nguyên vật liệu sử dụng trong quá trình thực nghiệm STT Tên nguyên liệu Nguồn gốc 1 Mafenid acetat Mỹ 2 3 Glyceryl dibehenat (Compritol Gattefossé... chế hệ tiểu phân nano lipid rắn Các kỹ thuật bào chế SLNs chủ yếu dựa trên nguyên tắc tạo nhũ tương: dầu trong nước (O/W) hoặc nước trong dầu trong nước (W/O/W) với các giọt lipid được phân tán trong pha nước chứa chất ổn định Hạ nhiệt độ hỗn hợp này xuống dưới nhiệt độ nóng chảy, lipid kết tinh lại trong các tiểu phân thu được hỗn dịch SLNs Do lipid sử dụng... hưởng đến sự phân hủy cốt lipid trong cơ thể Cuối cùng, sự có mặt của các chất diện hoạt và đồng diện hoạt cũng ảnh hưởng đến kích thước tiểu phân của SLNs SLNs bào chế từ các lipid như nhau có thể cho kích thước tiểu phân khác nhau do sử dụng các chất diện hoạt khác nhau Các chất diện hoạt ion hóa như natri dodecyl sulfat cho hệ tiểu phân với phân bố kích... SLNs là phân tán các lipid nóng chảy vào pha nước và ổn định các tiểu phân nano sau khi đã làm lạnh Một số yếu tố được xem xét khi lựa chọn chất diện hoạt trong bào chế SLNs là giá trị HLB, đường dùng của SLNs, độc tính và khả năng ảnh hưởng lên sự biến đổi lipid và kích thước tiểu phân Chất diện hoạt với HLB từ 8-18 thích hợp cho việc bào chế hệ phân tán... chất- phospholipid được tạo ra bằng cách hòa tan dược chất và phospholipid trong cùng một dung môi hữu cơ để tạo được dung dịch đồng nhất rồi cho bốc hơi dung môi dưới áp suất giảm Phân tích nhiễu xạ tia X cho thấy natri diclofenac trong phospholipid đã ở trạng thái phân tán đồng nhất hoặc vô định hình Tiểu phân thu được có kích thước nhỏ (khoảng 200 nm) và phân bố hẹp,... trong khoảng 98-102% Độ lặp lại của phương pháp được đánh giá bằng RSD%, RSD% không vượt quá 2% 2.3.5 Phương pháp đánh giá hệ tiểu phân nano lipid rắn mafenid acetat 2.3.5.1 Đánh giá kích thước tiểu phân và phân bố kích thước tiểu phân Nguyên tắc xác định KTTP: Kích thước hạt được xác định bằng phương pháp tán xạ lase Nguyên lý của phương pháp là khi chiếu chùm... khuếch tán dung môi và tạo thành các tiểu phân lipid Để duy trì được quá trình khuếch tán, lipid phải tan hoàn toàn trong dung môi hữu cơ ở nhiệt độ phối hợp 2 pha Khi tiến hành ở nhiệt độ cao, tiểu phân lipid hình thành sẽ lập tức bị chảy lỏng, nếu làm lạnh ngay 27 mặc dù giữ được cấu trúc của tiểu phân SLN nhưng khả năng lipid đông vón trước khi dung môi kịp khuếch . số quy trình bào ch h tiu phân nano lipid rn mafenid acetat. 2 CHƯƠNG 1: TNG QUAN 1.1. Tng quan v hệ nano lipid rn cha dưc cht thân nước H tiu phân nano lipid rn (SLNs). đ ti Nghiên cu bo ch tiu phân nano lipid rn mafenid đưc tin hnh vi cc mc tiêu sau: 1. Xây dựng đưc công thc bo ch h tiu phân nano lipid rn mafenid acetat. 2. Xc đnh. v hệ nano lipid rn cha dưc cht thân nước 2 1.1.1. Đc đim ca h tiu phân nano lipid rn cha dưc cht thân nưc 2 1.1.2 Thnh phn 3 1.1.3 Ưu, nhưc đim ca h tiu phân nano lipid