TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI THIẾT KẾ MỒI PCR VÀ XÂY DỰNG VECTOR BIỂU HIỆN GEN SINH ENZYME β-LACTAMASE Ở TẾ BÀO VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS. GVHD: TS.LÊ QUANG HÒA SVTH : Nguyễn Thị Diệp 20112848 Trần Thị Linh 20113543 Bùi Trung Hiếu 20112988 Mục lục I. Tổng quan II. Thiết kế mồi PCR III. Xây dựng vector biểu hiện Tài liệu tham khảo I. Tổng quan β-lactamase -β-lactamase là một enzyme được một số vi khuẩn sinh ra để kháng các kháng sinh thuộc họ β-lactam. - Một số chủng có khả năng sinh β-lactamase đã được phát hiện: E.cloacae, S.marcescens, P.aeruginosa, B.subtilis,…. - Protein cấu trúc β-lactamase ít có biến đổi sau dịch mã : không glucosyl hóa. I. Tổng quan Nguồn gen -Vi khuẩn B.subtilis BEST7003 phân lập từ đất -Vị trí gen: nucleotide thứ 2014727-2015647 II.Thiết kế mồi PCR Xác định trình tự gen đích Xác định trình tự gen mã hóa protein enzyme Kiểm tra lại trình tự gen Kiểm tra lại trình tự gen [...]... Thiết kế mồi Thiết kế mồi Kiểm tra sự bắt cặp của mồi với genome Kiểm tra sự bắt cặp của mồi với genome Kiểm tra primer-dimers III Xây dựng vector biểu hiện  Vector chọn là pET-32a  Hệ thống biểu hiện: vi khuẩn Escherichia Coli BL 21 Ưu điểm: tốc độ sinh trưởng nhanh, khả năng biểu hiện protein tái tổ hợp mạnh, chỉ sau 8h nuôi cấy ở điều kiện thích hợp đã có sản phẩm... đặc điểm di truyền được biết tương đối đầy đủ, tạo thuận lợi cho biểu hiện protein tái tổ hợp E.coli ít sinh enzyme protease, sự tạo thành thể vùi thuận lợi cho tinh sạch Vector sử dụng Kiểm tra enzyme không cắt trình tự gen đích Kiểm tra enzyme không cắt trình tự gen đích Kiểm tra enzyme không cắt trình tự gen đích Trình tự gen đầu vào  GATATC  ATGAAGTTGAAAACTAAAGCGTCAATAAAATTCGGAATATGTGTTGGGCTTTTATGTTTAAGCATTACTG... CGGGACACGAAACGACATTGCTATCGTTTGGCCGCCAAACAGAGCTCCTATTGTTGTGGCAATTCTGTCA  AACCGCTTTACGAAAGATGCTAATTATGATAATGCTCTTATCGCTGAGGCTGCAAAAGTCGTCCTTAACG  ATCTCAAATAA  CTCGAG Tính lại mồi Các công cụ sử dụng http://www.ncbi.nlm.nih.gov/ http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi http://bioinfo.ut.ee/primer3-0.4.0/ http://www.helmholtz-muenchen.de/fileadmin/PEPF/pET_vectors/pET32a-c_map.pdf http://tools.neb.com/NEBcutter2/listbycuts.php http://www.promega.com/techserv/tools/biomath/calc11.htm . TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA HÀ NỘI THIẾT KẾ MỒI PCR VÀ XÂY DỰNG VECTOR BIỂU HIỆN GEN SINH ENZYME β-LACTAMASE Ở TẾ BÀO VI KHUẨN BACILLUS SUBTILIS. GVHD: TS.LÊ QUANG HÒA SVTH : Nguyễn. Tổng quan II. Thiết kế mồi PCR III. Xây dựng vector biểu hiện Tài liệu tham khảo I. Tổng quan β-lactamase -β-lactamase là một enzyme được một số vi khuẩn sinh ra để kháng các kháng sinh thuộc họ. primer-dimers III. Xây dựng vector biểu hiện  Vector chọn là pET-32a  Hệ thống biểu hiện: vi khuẩn Escherichia Coli BL 21 Ưu điểm: tốc độ sinh trưởng nhanh, khả năng biểu hiện protein tái tổ