1 TUYÊN BỐ BẢN QUYỀN Tài liệu thuộc loại sách giáo trình nên nguồn thơng tin phép dùng nguyên trích dẫn dùng cho mục đích đào tạo tham khảo Mọi mục đích khác mang tính lệch lạc sử dụng với mục đích kinh doanh thiếu lành mạnh bị nghiêm cấm Mã tài liệu: MĐ 03 LỜI GIỚI THIỆU Quy trình vi nhân giống nhằm mục tiêu hướng dẫn học viên thực khâu quy trình vi nhân giống Mo đun trang bị cho học viên kiến thức kỹ sau: - Trình bày trình tự bước: Ni cấy khởi đầu, nhân nhanh, tạo hoàn chỉnh huấn luyện mầm - Thực thành thạo thao tác theo trình tự vi nhân giống để nhân giống thành công cho số loại hoa Nội dung mo dun thiết kế với thời lượng 94 tiết bao gồm bài: Bài mở đầu: Nguyên tắc chung nhân giống in vitro Bài 1: Lấy mẫu nuôi cấy khởi đầu Bài 2: Nhân nhanh Bài 3: Ni cấy tạo hồn chỉnh Bài 4: Huấn luyện mầm Modun sở cho giáo viên soạn giảng để giảng dạy, tài liệu nghiên cứu học tập học viên học nghề “Vi nhân giống hoa” Các thơng tin modun có giá trị hướng dẫn giáo viên thiết kế tổ chức giảng dạy cách hợp lý Giáo viên vận dụng cho phù hợp với điều kiện bối cảnh thực tế trình dạy học Trong trình biên soạn nội dung modun chắn khơng tránh khỏi sai sót, Ban chủ nhiệm tác giả mong nhận nhiều ý kiến đóng góp nhà khoa học, cán kỹ thuật, đồng nghiệp để modun hoàn thiện Xin chân thành cảm ơn! Tham gia biên soạn Trần Văn Dư - chủ biên Kiều Thị Thuyên Nguyễn Thị Thao Nguyễn Quang Thạch MỤC LỤC Bài mở đầu Nguyên tắc chung nhân giống in vitro Bài Lấy mẫu nuôi cấy khởi đầu Các kiến thức cần thiết để thực công việc 1.1 Chuẩn bị mẫu cấy 1.2 Xử lý mẫu 11 1.3 Nuôi cấy khởi đầu: 11 Quy trình cách thức thực cơng việc 15 2.1 Sơ đồ quy trình thực 15 2.2 Trình tự bước 15 2.3 Tiến hành nuôi cấy khởi đầu 17 Bài Nhân nhanh 24 Kiến thức cần thiết để thực công việc 24 Quy trình cách thức thực công việc 26 2.1 Trình tự bước nhân nhanh 26 2.2 Sơ đồ quy trình thực 27 2.3 Các bước 27 2.4 Tiến hành nhân nhanh 28 Bài Ni cấy tạo hồn chỉnh 32 Kiến thức cần thiết để thực công việc 32 Quy trình cách thức thực công việc 33 2.1 Trình tự bước ni cấy tạo hồn chỉnh 33 2.2 Sơ đồ quy trình thực 34 2.3 Các bước 34 2.4 Tiến hành tạo hoàn chỉnh 35 Bài 4: Huấn luyện mầm 41 Kiến thức cần thiết để thực công việc: 41 Quy trình cách thức thực công việc: 47 2.1 Dụng cụ thiết bị địa điểm 47 2.2 Nội dung tiến hành 47 MƠ ĐUN: QUY TRÌNH VI NHÂN GIỐNG Mã mô đun: MĐ 03 Giới thiệu mơ đun: Là mơ đun quan trọng chương trình đào tạo nghề Vi nhân giống hoa, nhằm cung cấp kiến thức kỹ cần thiết để thực giai đoạn vi nhân giống Thời lượng mô đun 94 giờ; lý thuyết 20; thực hành 66; kiểm tra Bài mở đầu Nguyên tắc chung nhân giống in vitro Nuôi cấy mô tế bào thực vật cịn gọi q trình ni cấy invitro ống nghiệm khác với tự nhiên q trình ni cấy thực vật điều kiện tự nhiên Nuôi cấy mô tế bào thực vật phạm trù khái niệm chung cho tất loại nuôi cấy, nguyên liệu thực vật hoàn toàn sạch, vi sinh vật môi trường dinh dưỡng nhân tạo điều kiện vô trùng Về lĩnh vực nuôi cấy mô tế bào thực vật nhân giống vơ tính invitro kỹ thuật có khả ứng dụng cao Kỹ thuật tạo hàng loạt giống bệnh, sinh trưởng phát triển đồng đều, có hệ số nhân giống cao, bảo quản tập đoàn nhân giống vơ tính lồi giao phấn thuộc ngân hàng gen Nhân giống vơ tính invitro trải qua giai đoạn: Giai đoạn chuẩn bị, giai đoạn tái sinh mầm nuôi cấy, giai đoạn nhân nhanh, giai đoạn tạo hoàn chỉnh giai đoạn đưa invitro vườn Giai đoạn chuẩn bị giai đoạn quan trọng chí định tồn quy trình nhân invitro tạo nguồn nguyên liệu ban đầu cho quy trình Giai đoạn tái sinh mẫu ni cấy giai đoạn loại mẫu sau cấy vào mơi trường có khả tái sinh, tuỳ theo mẫu nuôi cấy đỉnh chồi, mảnh lá… lấy mẫu cần phải giai đoạn phát triển cây, nguyên tắc mô lấy từ non có khả tái sinh cao mơ trưởng thành Giai đoạn nhân nhanh giai đoạn đánh giá tính ưu việt hay khơng ưu việt phương pháp nhân giống invitro, định hệ số nhân quy trình nhân giống Giai đoạn tạo hoàn chỉnh, giai đoạn người ta thường bổ sung vào môi trường nuôi cấy chất điều tiết sinh trưởng IAA, NAA, 2,4D…với nồng độ thích hợp để tạo rễ cho chồi invitro mau chóng đạt tiêu chuẩn vườn Tuy nhiên số lồi có khả hình thành rễ tốt môi trường không bổ sung chất điều tiết sinh trưởng Giai đoạn đưa vườn giai đoạn cuối quy trình nhân giống, muốn sinh trưởng, phát triển tốt ngồi vườn invitro phải đạt tiêu chuẩn định số lá, chiều cao, số rế Quan trọng phải có biện pháp kỹ thuật chăm sóc tối ưu giống điều kiện tự nhiên để invitro thích ứng tốt đạt tỷ lệ sống cao giai đoạn Vào mẫ u Cắt lát mỏng ã PSH T Điều khiển hoa Nhân nhanh cụm chồi Tạo hoàn chØnh T¹o chåi Hình 3.1: Qui trình nhân nhanh hoa lan Bài Lấy mẫu nuôi cấy khởi đầu Mã bài: MĐ 03 – 01 Mục tiêu: - Trình bày khái niệm, mục đích, u cầu trình tự bước ni cấy khởi đầu - Thực kỹ năng: Chọn, cắt mẫu, khử trùng mẫu, cấy mẫu, chăm sóc cấy chuyển mẫu yêu cầu kỹ thuật, đạt tỷ lệ mẫu nảy chồi từ - 10% - Tiết kiệm vật tư, nguyên liệu đảm bảo an toàn lao động A Nội dung chính: Các kiến thức cần thiết để thực công việc Nuôi cấy khởi động giai đoạn khử trùng đưa mẫu vào nuôi cấy in vitro Mục đích u cầu ni cấy khởi động là: Tạo vật liệu (mẫu cấy) khởi đầu bệnh cho q trình nhân nhanh tạo hồn chỉnh Tỷ lệ nhiễm thấp Tỷ lệ sống cao Mô tồn sinh trưởng tốt Khi lấy mẫu cần chọn loại mô, giai đoạn phát triển Quan trọng đỉnh chồi ngọn, đỉnh chồi nách, sau đoa chồi hoa, đoạn thân, mảnh lá… Ví dụ: Chồi ngọn, chồi nách sử dụng để nhân nhanh hoa cúc, cẩm chướng Mảnh sử dụng để nhân nhanh hoa chuông 1.1 Chuẩn bị mẫu cấy Chọn cung cấp nguồn mẫu cấy Trên vườn sản xuất chọn có chất lượng tốt giai đoạn sinh trưởng phát triển mạnh, mang đặc điểm đặc trưng giống để làm gốc cung cấp nguồn mẫu ni cấy Đặc biệt gốc khơng có nguồn sâu bệnh hại Chọn lựa gốc phải kết hợp với quan sát hình thái cần phải lấy mẫu để kiểm tra nguồn bệnh hại có virut vi khuẩn phải loại bỏ khơng lấy mẫu ni cấy Nguyên liệu sử dụng cho nuôi cấy mơ tế bào thực vật phận cây: đoạn rễ, thân, phần lá, cấu trúc phơi cuống mầm, hạt phấn, nỗn chí mẩu thân ngầm hay quan dự trữ mặt đất dùng cho ni cấy Mục đích ni cấy đặc tính cảu loại định lựa chọn loại mẫu phù hợp Cây mẹ phải mang nhiều đặc tính ưu việt mà ta quan tâm sinh trưởng tốt, cho sản lượng, chất lượng cao hoa, quả, hạt hay quan sinh dưỡng, bị nhiễm bệnh, có khả chống chịu với điều kiện bất lợi môi trường (chịu hạn, chịu lạnh ), mẫu thường lấy vào đầu mùa sinh trưởng, lúc sáng sớm tồn cịn trạng thái căng trương Sự tái sinh mẫu phụ thuộc vào thành phần mơi trường ni cấy, đặc điểm di truyền lồi, trạng thái sinh lý lấy mẫu chịu ảnh hưởng mùa năm (ở hoa loa kèn có mẫu thu thập vào mùa xuân mùa thu có khả tái sinh cịn mùa khác khơng thể đạt kết tương tự) Cây hai mầm tái sinh dễ mầm Tuổi sinh lý mẫu ảnh hưởng nhiều tới khả tái sinh cây: mẫu lấy từ trẻ có khả tái sinh cao mẫu lấy từ già, đặc biệt thân gỗ Để khắc phục tượng người ta làm trẻ hố mẫu nhiều biện pháp nuôi cấy meristem, ghép meristem hay chồi đỉnh lên gốc giốn, tách mẫu từ vùng non, tỉa cành vài lần để kích thích chồi ngủ Mặc dù chồi phơi bất định thường hình thành q trình trẻ hố, chúng thường khơng thích hợp thường tạo đột biến khơng mong muốn Sự trẻ hố phương pháp nuôi cấy đỉnh sinh trưởng khó biện pháp thích hợp trì tính bền vững di truyền, loại trừ nấm, vi khuẩn, virus Đặc biệt khả tái sinh loài khác tăng lên thời gian hoa Mẫu lấy để cấy chồi đỉnh, mầm ngủ, non…của phải có khả tái sinh mạnh mang đặc tính sinh học mẹ 1.2 Xử lý mẫu Mẫu lấy từ mẹ cần phải sử lý sơ loại bỏ phần khơng cần thiết rửa đất cát vịi nước chảy Để giảm nguồn lây nhiễm bám vào gốc chuyển gốc ni trồng điều kiện có cách ly chăm sóc phịng trừ sâu bệnh tốt trồng nhà kính nhà lưới đảm bảo cách ly với mơi trường bên ngồi 1.3 Nuôi cấy khởi đầu: Giai đoạn bao gồm khâu công việc khử trùng mẫu, tách lấy mẫu nuôi cấy cấy vào môi trường dinh dưỡng Nguyên liệu để nuôi cấy invitro lựa chọn từ cá thể ưu tú loài, khoẻ bệnh nhiều có nhiễm vi sinh vật nấm, tuỳ thuộc vào tiếp xúc chúng với môi trường xung quanh Các phận khác nhâu tỷ lệ nhiễm vi sinh vật khác Phương pháp thông dụng để loại bỏ hệ vi sinh vật khỏi vật liệu cấy sử dụng hố chất có hoạt tính diệt khuẩn nấm + Tạo mẫu cấy vô trùng: khử trùng bề mặt mẫu cấy: Mẫu lấy cắt bóc bỏ rửa xà phòng rửa vòi nước chảy, rửa tráng lại nhiều lần nước vô trùng đưa vào phịng cấy vơ trùng để tiến hành khử trùng hoá chất Khả tiêu diệt nấm khuẩn hoá chất khử trùng tuỳ thuộc vào nồng độ, thời gian xử lý mức độ xâm nhập chúng vào ngõ ngách bề mặt mô cấy Để làm tăng hiệu người ta thường nhúng mẫu vào ethanol 70 – 80% 30 giây, sau xử lý dung dịch diệt khuẩn Đối với mẫu có bề mặt bao phủ lớp sáp, muốn đạt kết tốt cần cho thêm vào dung dịch khử trùng vài giọt tween 20, tween 80 chất làm tăng tính bám dính hố chất khử trùng Với mẫu bẩn, việc rửa kỹ nước xà phòng để vòi nước chảy từ 20 – 30 phút có tác dụng làm giảm đáng kể hệ vi khuẩn khỏi mẫu cấy Tác nhân khử trùng tác dụng diệt vi sinh vật cịn ảnh hưởng đến mơ cấy, việc lựa chọn hố chất phải vào mức độ nhiễm khuẩn độ mẫn cảm mẫu Trong số hoá chất thường dùng để khử trùng canxihypoclorit natrihypoclorit hay sử dụng có độc tính thấp với mô xử lý, không gây ức chế sinh trưởng hiệu diệt khuẩn tốt Nồng độ canxihypoclorit natrihypoclorit tương ứng thường – 15% 0,5 – 2% thời gian từ 15 – 30 phút Tuy nhiên chất không bền nên thực tế, HgCl2 hay dừng để thay Yêu cầu mẫu sau khử trùng phải đảm bảo vô trùng để tỷ lệ mẫu bị nhiễm tạp thấp tỷ lệ mẫu sống không bị nhiễm nấm khuẩn cao Dùng dao, dụng cụ nuôi cấy mô cắt tách lấy mẫu (đỉnh sinh trưởng…) để nuôi cấy + Môi trường nuôi cấy khởi đầu Thành công phương pháp nuôi cấy invitro phụ thuộc nhiều vào điều kiện nuôi cấy Nhu cầu dinh dưỡng cho sinh trưởng phát triển tối ưu lồi khơng giống nhau, phận thể nhiều có khác Sự lựa chọn môi trường nuôi cấy, bao gồm chất lượng số lượng hoá chất sử dụng đóng vai trị định thân phân hoá chiều hướng phân hoá tế bào Cho đến có nhiều loại mơi trường dinh dưỡng tìm ra: mơi trường MS (Murasihige Skoog), môi trường Gamborg, môi trường Knop Đây nhứng môi trường cải tiến thành nhiều loại môi trường khác cho phù hợp với đối tượng nghiên cứu mục đích thí nghiệm Trong mơi trường MS đánh giá phù hợp cho đa số loài thực vật Murashige dùng mơi trường để ni cấy cho nhiều loại trồng Thành phần chủ yếu tất loại mơi trường gồm nhóm chất sau: muối khoáng đa lượng vi lượng(muối chlorid, nitrat, sulphat, phosphat iodid Ca, Mg, K, Na, Fe, Mn, Zn, B), vitamin, nguồn cácbon, yếu tố sinh trưởng hữu (axitamin, pepton), hoocmôn sinh trưởng Đường thành phần thiếu môi trường ni cấy nào, sử dụng làm nguồn bon cung cấp lượng chủ yếu môi trường ni cấy nhiều lồi thực vật Mơ tế bào thực vật nuôi cấy invitro sống chủ yếu theo phương thức dị dưỡng, số trường hợp chúng sống theo phương thức bán dị dưỡng nhờ ánh sáng nhân tạo lục lạp có khả quang hợp Hơn nữa, đường cịn đóng vai trị thẩm thấu mơi trường Nồng độ đường saccaroza thường sử dụng – 8% đường xanh vận chuyển tổng hợp tự nhiên Ngoài dạng đường khác manitol, mantoza, glucoza dùng nuôi cấy 10 Vitamin có vai trị xúc tác q trình trao đổi chất diễn tế bào Hầu hết mô ni cấy có khả tổng hợp vitamin cần thiết khơng đầy đủ số lượng, để đạt sinh trưởng tối ưu người ta thường bổ sung thêm số vitamin B1, PP, B5, B6 Trong B1 coi thiết yếu sinh trưởng tế bào thực vật Ngồi cịn sử dụng vitain C chất chống oxy hoá khác Các vitamin thường dùng nồnh độ 0,1 – 1mg/l Môi trường nuôi cấy giai đoạn thường sử dụng môi trường MS có auxin xytokinin với nồng độ tỷ lệ thích hợp Nếu muốn mơ ni cấy khởi đầu phát triển thành phơi vơ tính cụm chồi khơng cần qua hình thành mơ sẹo bổ sung xytokinin BA vào mơi trường làm việc.Ví dụ với phong lan BA= 1mg/lit môi trường MS Trường hợp để hình thành mơ sẹo tiền đề hình thành phơi vơ tính cụm chồi auxin cần bổ sung 2,4D vào môi trường nuôi cấy + Cấy mẫu vào bình chứa mơi trường dinh dưỡng chuẩn bị sẵn + Ni dưỡng sau cấy: Đưa bình mẫu cấy sang phịng ni điều kiện nhân tạo có quang chu kỳ 16- 18 sáng/ ngày, cường độ 4.000lux nhiệt độ 26- 280C Với điều kiện sau 20- 30 ngày mơ cấy hình thành phơi vơ tính hay chồi nhỏ chồng chất lên tạo thành cụm chồi cần phải cấy chuyển sang môi trường dinh dưỡng (nhân chồi) Nếu để tạo mơ sẹo cần để điều kiện khơng có ánh sáng Để mô nuôi cấy tái sinh thành chồi cần ý số vấn đề sau: + Chọn môi trường dinh dưỡng phù hợp: Nuôi cấy mô nuôi cấy phận sống độc lập tách rời khỏi sống mô cần cung cấp đầy đủ chất để tiếp tục phát triển Mỗi lồi phù hợp với loại mơi trường khác Mỗi moi trường có thành phần tỷ lệ muối khống khác nhau.Trong ni cấy mơ cần thăm dị để tìm mơi trường thích hợp Trong thực tế thường sử dụng mơi trường MS Vì mơi trường giàu cân dinh dưỡng Hơn thích hợp cho ni cấy mơ mầm hai mầm + Đảm bảo nồng độ đường môi trường nuôi cấy: 40 Chú ý: Khi gặp điều kiện thời tiết không thuận lợi mưa to gió lớn…khơng đưa huấn luyện Thời tiết nắng nên chọn nơi có cường độ chiếu sáng để huấn luyện Đưa mầm huấn luyện Đặt bình ni vào nơi chọn làm nơi huấn luyện Có thể đặt cách để chịu ảnh hưởng điều kiện ngoại cảnh tạo độ đồng cho vào giá thể Đƣa vào nhà huấn luyện: Cây nhân nuôi cấy mô sống môi trường nhân tạo lý tưởng nhiệt độ ánh sáng môi trường dinh dưỡng nên non vơ trùng Để có tỷ lệ sống cao trước cần phải đưa vào nhà huấn luyện (còn gọi môi trường bán nhân tạo) thời gian khoảng tuần để thích nghi đần với điều kiện tự nhiên tiếp xúc với ánh sáng (có cường độ 5000- 10000 lux) nhiệt độ tự nhiên Ra vƣờn ƣơm Sau thời gian sống nhà huấn luyện cần đưa sang giai đoạn vườn ươm trước trồng ngồi sản xuất Mục đích ni dưỡng chăm sóc cho thuận lợi tạo nhiều giống đạt tiêu chuẩn để tăng thêm hệ số nhân 41 Hình 3.9: Ra ngơi vƣờn ƣơm * Vƣờn ƣơm cấp 1: - Tiêu chuẩn đem ươm (ra ngơi): có –10 + –7cm + 3- rễ khối lượng từ 0,8 đến g - Thời vụ ươm từ tháng đến tháng10 Mật độ ươm 500 cây/m2 Để cho sinh trưởng tốt cần phải xử đất bàng thuốc tím nồng độ 0,1% trước cấy 12 Nếu mùa có nhiều nấm bệnh tăng nồng độ lên 0,2- 0,3% Hiện ngơi giâm giá thể rắn cịn trồng dung dịch (thuỷ canh) Kỹ thuật có tác dụng làm tăng nhanh q trình sinh trưởng cịn có khả rút ngắn giai đoạn vườn ươm Các điều kiện để trồng dung dịch: + Hộp xốp tích 15- 20 lit để đựng dung dịch dinh dưỡng ni + Nilon màu đen để lót hộp xốp nhằm tạo bóng tối khơng để dung dịch dinh dưỡng thấm + Rổ nhựa để đựng trấu hun (làm giá thể để giâm con) có kích thước kích thước chiều dài rộng miệng hộp xốp Độ dày lớp trấu hun khoảng –7cm 42 + Dung dịch dinh dưỡng nuôi nên dùng môi trường Knop Cách tiến hành: dung dịch Knop pha theo bảng chuẩn cho dung dịch vào hộp xốp, đặt rổ nhựa đựng giá thể lên hộp xốp đáy rổ nhựa ngập 0,51 cm vào dung dịch Sau lấy cấy bình rửa thạch đem cấy lên nề trấu hun Nếu khơng có hộp xốp làm sau: đào hố có kích thước sâu khoảng 15cm rộng –1,2m dài –3 mét Nèn chặt đáy xung thành lót nilon để khơng cho dung dịch dinh dưỡng thấm qua Làm khung để đựng giá thể trấu hun tre gỗ Cây lấy khỏi bình không làm dập nhẹ nhàng rửa thạch bám rễ cấy vào giá thể Che tum cho để tránh mưa có nhiệt độ ánh sáng thích hợp, hàng ngày tưới nước phun mù để ướt phum thuốc để trừ nấm bệnh để vảo vệ Kết thúc giai đoạn đạt khối lượng 10 gram * Vƣờn ƣơm cấp 2: Trồng dung dịch vườn ươm cấp Nhưng mật độ trồng thưa 200 cây/m2 phun dung dịch Knop bổ sung định kỳ lần/ tuần Trong thực tế ươm giá thể (nền giâm) đất Nền giâm làm thành luống có kích thước rộng 1m cao 15cm Giá thể làm vật liệu xốp mạt cưa, tro trấu đất trộn với phân hoai mục đập mịn với có độ ẩm thích hợp Ra ngơi đất cần ý số điểm không cấy sâu làm đất lọt vào tim cây, không nén chặt đất làm ảnh hưởng đến rễ mặt luống làm phẳng để dễ trồng chăm sóc Trước cấy cần phải khử trùng giâm để trừ nấm khuẩn trước ngày phun vicarben, COC 85 Trong giai đoạn ươm cần thường xuyên giữ ẩm tưới phum mù Kết thúc giai đoạn phải đạt 40 –50 gam/ Chăm sóc sau ngôi: Cây nuôi cấy mô sống môi trường nhân tạo lý tưởng nhiệt độ ánh sáng môi trường dinh dưỡng nên non, vô trùng dễ bị chết 43 Khi ngơi, để có tỷ lệ sống cao cần thực khâu kỹ thuật sau: Tuần quan trọng Yêu cầu nhiệt độ giai đoạn khoảng 25 –30oC ẩm độ 80 –90% ý điều chỉnh ánh sáng Ngày có to cần phải che râm không để ánh sáng trực xạ trực tiếp chiều vào liên tiếp –10 ngày với độ che 50 - 60% Sau khoảng tuần bén rễ cần bón thúc tưới nước phân NPK tỷ lệ 5:10:3 với nồng độ loãng khoảng 0,2-0,3% với chu kỳ 5-7 ngày/lần tưới Sau tưới cần phun rửa nước Phun phòng nấm bệnh dung dịch Bellate nồng độ 5g/10 lít nước cho 100m2 tuần lần phun Nếu phát có nấm bệnh phun với nồng độ cao thời gian hâi lần phun ngắn lại Sau 45- 50 ngày cần phân loại theo mức độ sinh trưởng để có chế độ chăm sóc cho phù hợp tạo vườn có độ đồng cao Kết thúc giai đoạn huấn luyện mầm Giai đoạn huấn luyện mầmcó thể kéo dài 5-12 ngày Sau giai đoạn huấn luyện mầm giống có khả thích nghi với điều kiện ngoại cảnh cao, có sức sinh trưởng tốt ngồi vườn ươm 44 Hình 3.10: Cây kết thúc giai đoạn huấn luyện mầm Quy trình cách thức thực công việc: Bƣớc 1: Chọn địa điểm huấn luyện mầm, chọn mầm đem huấn luyện Bƣớc 2: Đưa mầm huấn luyện Bƣớc 3: Kết thúc giai đoạn huấn luyện mầm Khi thực bước giai đoạn huấn luyện mầm cần ý tới đặc điểm loại hoa mà lựa chọn địa điểm, môi trường phù hợp tạo điều kiện cho mầm sinh trưởng phát triển tốt 2.1 Dụng cụ thiết bị địa điểm - Dụng cụ: Panh, con, hóa chất để pha dung dịch dinh dưỡng, hộp xốp… - Địa điểm: 45 Tại vườn ươm, 2.2 Nội dung tiến hành - Chuẩn bị hay giá thể để giâm: + Nền giâm giá thể rắn * Bước 1: Chọn đất tốt xốp thoáng * Bước 2: làm đất tơi xốp thành luống chìm.hoặc đóng bầu PE * Bước 3: xử lý đất trước cấy 12-24 thuốc tím 0,1% + Nền giâm dung dịch (thuỷ canh) Chuẩn bị dung dịch thuỷ canh * Bước 1: Chuẩn bị hộp xốp tích 15- 20 lit * Bước 1: Lót nilon màu đen để hộp xốp * Bước 3: Pha 10lit dung dịch Knop hay B5 theo bảng chuẩn đổ vào hộp xốp Chú ý : Nếu khơng có hộp xốp tạo sau: + Bước 1: Đào hố có kích thước sâu khoảng 50 cm rộng –1,2m dài –3 mét + Bước 2: Nèn chặt đáy xung thành hố + Bước 3: Lót nilon đen xung quanh thành hố + Bước 4: Đổ dung dịch dinh dưỡng vào + Bước 5: Đặt khung để đựng giá thể làm tre gỗ Giá thể trấu hun Khung đỡ giá thể nilon đen đất Dung dịch dinh dưỡng 46 Hình 3.24 : Mơ hình dung dịch thuỷ canh - Chuẩn bị để hay để cấy vào giâm: * Bước 1: Chọn để giâm: Cẩn thận nhẹ nhàng lấy đạt tiêu chuẩn (có khối lượng khoảng 0,8 –1g với chiều cao –7cm, có 8- 10 lá/ có 3- rễ) bình không làm tổn thương * Bước 2: Gạt bỏ thạch bám rễ rửa rễ thật nhẹ nhàng đặt vào rổ nhựa - Cấy vào giâm * Bước 1: Dùng que cứng nhọn để tạo hố nhỏ giâm * Bước 2: cấy vào (thao tác thật cẩn thận để tránh dập nát cây) Mật độ cấy 500 cây/m2 * Bước 3: Đặt rổ cấy lên miệng hộp xốp (đặt thật khít) để đáy rổ nhựa ngập từ 1/3- vào dung dịch dinh dưỡng Chú ý: Nếu để ngập sâu vào dung dịch chết Còn đáy rổ không chạm vào đung dịch bị chết khô * Bước 4: Phun nước mù che tum để tránh mưa tạo điều kiện có ánh sáng thích hợp Hình 3.25: Lấy từ bình 47 Hình 3.26: Rửa thạch bám gốc Trấu hun Dung dịch dinh dưỡng Hình 3.27 : Trồng thuỷ canh: Cây 2.Giá thể để cấy (trấu hun) Dung dịch dinh dưỡng Hình 3.28: Trồng dung dịch 48 Hình 29: Cấy giá thể rắn 49 B Bài tập sản phẩm thực hành học viên Bài tập 1: Thực hành chuẩn bị giá thể cho mầm? - Cách thức: chia nhóm nhỏ (3 – học viên/nhóm), nhóm nhận nhiệm vụ chuẩn bị giá thể cho loại hoa - Thời gian hồn thành: giờ/1 nhóm - Hình thức trình bày: thực hành chỗ - Phương pháp đánh giá: kỹ vận dụng lý thuyết vào thực hành học viên nhóm thái độ thực hành học viên - Kết cần đạt được: + Chọn xác loại vật liệu làm giá thể, + Thực thứ tự bước làm giá thể theo quy trình, + An tồn người môi trường làm việc + Giá thể sau chuẩn bị đạt yêu cầu cho sử dụng Bài tập 2: Thực hành kỹ thuật cấy vào giá thể vườn ươm? - Cách thức: học viên nhận nhiệm vụ cấy – 10 mầm vào giá thể - Thời gian hoàn thành: phút/1 học viên - Hình thức trình bày: thực hành chỗ - Phương pháp đánh giá: kỹ vận dụng lý thuyết vào thực hành học viên nhóm thái độ thực hành học viên - Kết sản phẩm cần đạt được: + Chọn xác mầm đạt tiêu chuẩn, + Thực thứ tự bước cấy theo quy trình, + An tồn người mơi trường làm việc + Cây mầm sau cấy bị đạt yêu cầu tỷ lệ sống C Ghi nhớ: Cần ý số nội dung trọng tâm: - Giá thể cho mầm - Kỹ thuật 50 HƢỚNG DẪN GIẢNG DẠY MƠ ĐUN/MƠN HỌC I Vị trí, tính chất mơ đun : - Vị trí: + Mơ đun quy trình vi nhân giống mơ đun bắt buộc học chương trình đào tạo Nội dung mơ đun bố trí tích hợp dạy lý thuyết thực hành chương trình đào tạo - Tính chất: + Đây mơ đun kỹ quan trọng nghề vi nhân giống Yêu cầu học viên cần phải đảm bảo đủ số lý thuyết thực hành II Mục tiêu: - Về kiến thức: + Phân biệt khái niệm, mục đích yêu cầu giai đoạn vi nhân giống; + Trình bày trình tự bước: Ni cấy khởi đầu, nhân nhanh, tạo hồn chỉnh huấn luyện mầm - Về kỹ năng: + Thực thành thạo thao tác theo trình tự vi nhân giống để nhân giống thành công cho số loại hoa đảm bảo tỷ lệ cấy mẫu thành công > 50%, tỷ lệ nhiễm nấm (khuẩn) nhân chồi 10% tỷ lệ rễ >90% + Chăm sóc, huấn luyện cho mầm đảm bảo chất lượng tỷ lệ sống cao - Về thái độ: + Có tinh thần trách nhiệm, có thái độ bảo vệ mơi trường, an tồn cho người sản phẩm; + Có ý thức, tác phong cơng nghiệp, tiết kiệm vật tư, giống tuân thủ quy định phòng vi nhân giống 51 III Nội dung mơ đun: Mã Loại dạy Tên Bài mở đầu: Lý thuyết Thời gian Địa điểm Tổng số Phòng học Lý Thực Kiểm thuyết hành tra* 2 22 17 cấy 22 17 MĐ 03-03 Ni cấy tạo Tích hồn chỉnh hợp phịng ni cấy mơ 20 14 MĐ 03-04 Huấn mầm Vườn ươm, nhà 24 17 MĐ 03-01 Lấy mẫu ni Tích cấy khởi đầu Vườn hợp Tích phịng hợp MĐ 03-02 Nhân nhanh mẹ/Phịng ni cấy ni mơ luyện Tích hợp lưới Kiểm tra hết mô đun Cộng 94 * Ghi chú: Thời gian kiểm tra tính vào thực hành IV Hƣớng dẫn thực tập, thực hành - Nguồn lực cần thiết: Các dụng cụ để khử trùng mẫu cấy Dụng cụ cấy chuyển mẫu Mẫu đủ tiêu chuẩn Các loại giá thể, vườn ươm Bình chồi đạt tiêu chuẩn Bảo hộ lao động - Cách chức tổ chức thực hiện: Chia lớp thành nhóm nhỏ: người/nhóm - Tiêu chuẩn sản phẩm: 20 66 52 Khử trùng mẫu đạt tiêu chuẩn đảm bảo an toàn lao động Xác định xác bình chồi đạt tiêu chuẩn Cắt, tách cấy chuyển mẫu đạt yêu cầu Lựa chọn giá thể phù hợp với loại hoa Cấy yêu cầu kỹ thuật V Yêu cầu đánh giá kết học tập 5.1 Bài 1: Lấy mẫu ni cấy khởi đầu Tiêu chí đánh giá Tiêu chuẩn mẫu nuôi cấy khởi đầu Cách thức đánh giá Lắng nghe quan sát việc lựa chọn đối chiếu với bảng kết chuẩn bị trước Thao tác chọn, cắt mẫu, khử trùng Quan sát, ý thứ tự bước thao tác, mẫu, cấy mẫu, chăm sóc cấy đối chiếu với yêu cầu bước, tỷ chuyển mẫu lệ mẫu khởi đầu đạt tiêu chuẩn 5.2 Bài 2: Nhân nhanh Tiêu chí đánh giá Cách thức đánh giá Kỹ thuật khử trùng buồng cấy, Quan sát, ý thứ tự bước thao tác, dụng cụ cấy mức độ an toàn người trực tiếp làm công việc khử trùng đối chiếu với bảng yêu cầu Thao tác cắt, tách chồi cấy Quan sát, theo dõi bước thực chuyển vào môi trường nhanh học viên để đánh giá mức độ đạt học viên 5.3 Bài 3: Ni cấy hồn chỉnh Tiêu chí đánh giá Cách thức đánh giá Thao tác cắt, tách chồi cấy Quan sát, theo dõi bước thực chuyển vào mơi trường tạo hồn học viên để đánh giá mức độ đạt chỉnh học viên 5.4 Bài 4: Huấn luyện mầm Tiêu chí đánh giá Cách thức đánh giá Chuẩn bị giá thể cho mầm Quan sát, ý thứ tự bước thao tác, mức độ an toàn người trực tiếp làm công việc chuẩn bị đối chiếu với bảng yêu cầu Kỹ thuật cấy vào giá thể Quan sát, theo dõi bước thực cấy học viên để đánh giá mức độ đạt học viên 53 VI Tài liệu tham khảo [1] Đỗ Năng Vịnh (2005): Công nghệ tế bào thực vật - ứng dụng NXB Nông nghiệp [2] Trần Văn Minh (1999), Công nghệ tế bào thực vật, Đại học quốc gia thành phố Hồ Chí Minh - Trường ĐH Nơng Lâm [3] Nguyễn văn Uyển (1993), Nuôi cấy mô tế bào thực vật Nhà xuất nông nghiệp [4] Nguyễn Quang Thạch, Nguyễn Thị Lý Anh, Nguyễn Thị Phương Thảo (2005) Giáo trình Cơng nghệ sinh học Nơng nghiệp.NXB Nông nghiệp 54 DANH SÁCH BAN CHỦ NHIỆM CHỈNH SỬA CHƢƠNG TRÌNH DẠY NGHỀ TRÌNH ĐỘ SƠ CẤP (Kèm theo Quyết định số 2949 /BNN-TCCB ngày 03 tháng 11 năm 2010 Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp Phát triển nơng thơn) Chủ nhiệm: Ơng Trần Văn Dư - Phó hiệu trưởng Trường Cao đẳng Nơng nghiệp Phát triển nông thôn Bắc Bộ Thƣ ký: Bà Kiều Thị Thuyên - Trưởng môn Trường Cao đẳng Nông nghiệp Phát triển nông thôn Bắc Bộ Các ủy viên: - Bà Nguyễn Thị Thao, Giảng viên Trường Cao đẳng Nông nghiệp Phát triển nông thôn Bắc Bộ - Ơng Phùng Hữu Cần, Chun viên Vụ Tổ chức cán bộ, Bộ Nông nghiệp Phát triển nơng thơn - Ơng Nguyễn Quang Thạch, Viện trưởng Viện sinh học nông nghiệp./ DANH SÁCH HỘI ĐỒNG NGHIỆM THU CHƢƠNG TRÌNH, GIÁO TRÌNH DẠY NGHỀ TRÌNH ĐỘ SƠ CẤP (Theo Quyết định số 3495 /QĐ-BNN-TCCB ngày 29 tháng 12 năm 2010 Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp Phát triển nơng thơn) Chủ nhiệm: Ơng Nghiêm Xn Hội - Hiệu trưởng Trường Cao đẳng Nông Lâm Thƣ ký: Ơng Phùng Hữu Cần - Chun viên Vụ Tổ chức cán bộ, Bộ Nông nghiệp Phát triển nơng thơn Các ủy viên: - Ơng Nguyễn Văn Vượng - Trưởng khoa Trường Cao đẳng Nông Lâm - Bà Đoàn Thị Chăm - Giảng viên Trường Cao đẳng Cơ điện Nơng nghiệp Nam Bộ - Ơng Thân Ngọc Hoàng - Giám đốc Trung tâm ứng dụng tiến khoa học công nghệ tỉnh Bắc Giang./ ... THIỆU Quy trình vi nhân giống nhằm mục tiêu hướng dẫn học vi? ?n thực khâu quy trình vi nhân giống Mo đun trang bị cho học vi? ?n kiến thức kỹ sau: - Trình bày trình tự bước: Ni cấy khởi đầu, nhân. .. MĐ 03 Giới thiệu mô đun: Là mô đun quan trọng chương trình đào tạo nghề Vi nhân giống hoa, nhằm cung cấp kiến thức kỹ cần thiết để thực giai đoạn vi nhân giống Thời lượng mô đun 94 giờ; lý thuyết... tắc mô lấy từ non có khả tái sinh cao mô trưởng thành Giai đoạn nhân nhanh giai đoạn đánh giá tính ưu vi? ??t hay khơng ưu vi? ??t phương pháp nhân giống invitro, định hệ số nhân quy trình nhân giống