Trường Đại học Khoa Học Môn: Công nghệ sinh học vi sinh Lớp: CH Công nghệ sinh học K7 GVHD: TS. Vi Thị Đoan Chính  * Nguyễn Viết Tuyên: nhóm trưởng * Phạm Thùy Dung * Trần Thị Thanh Vân * Đinh Anh Tuấn * Đỗ Cảm Vân 1. Một số khái niệm 2. Kĩ thuật chuyển gene trên thực vật 3. Các phương pháp chuyển gene gián tiếp 4. Các phương pháp chuyển gene trực tiếp 5. Cây trồng chuyển gen BT Nội dung chính 1.Một số khái niệm Chuyển gen  !"#$% &&'( !)&* + * Thực vật chuyển gen: là thực vật có gen ngoại lai (gen chuyển) xen vào trong DNA genome của nó+ * Gen chuyển: là gen ngoại lai được chuyển từ một cơ thể sang một cơ thể mới bằng kỹ thuật di truyền. 2.Kỹ thuật chuyển gen ở thực vật • Kĩ thuật chuyển gen là kĩ thuật đưa một hay nhiều gen lạ đã được thiết kế ở dạng ADN tái tổ hợp vào tế bào chủ của cây trồng nói chung và của sinh vật nói riêng làm cho gen lạ có thể tồn tại ở dạng plasmid tái tổ hợp hoặc gắn vào bộ gen của tế bào chủ. • Trong tế bào chủ các gen này hoạt động tổng hợp nên các protein đặc trưng dẫn tới việc xuất hiện các đặc tính mới của cơ thể chuyển gen. [...]... cấy trên môi trường thích hợp để tái sinh thành cây và chọn lọc ra các cây chuyển gen - Thích hợp với đối tượng 1 lá mầm Máy xung điện 4.3 Chuyển gen bằng vi tiêm • Chuyển gene bằng vi tiêm là chuyển gene trực tiếp vào tế bào protoplast hoặc TB đơn ( chưa hình thành vỏ cứng) bằng cách sử dụng vi tiêm nhỏ, kính hiển vi và các vi thao tác • Phương pháp này cho phép đưa gen vào đúng vị trí mong muốn ở từng... cao Vi tiêm DNA vào tế bào 4.4 Chuyển gen qua ống phấn • Là phương pháp chuyển không qua nuôi cấy invitro, các DNA ngoại lai được chuyển trực tiếp bằng đường ống phấn • DNA ngoại lai chuyển vào cây theo đường ống phấn, chui vào bầu nhụy cái Thời gian chuyển gene là vào lúc hạt phấn mọc qua vòi nhụy và lúc đưa tinh vào thụ tinh 4.5 .Chuyển gene bằng kĩ thuật siêu âm • Dùng sóng siêu âm để chuyển gene... gen cần chuyển lớn hơn so với khả năng của plamid - Hạn chế: + Axit nucleic của virus không ghép nối với bộ gen của thực vật, chỉ truyền được qua nhân giống vô tính + Sự lây nhiễm của virus thường làm yếu tế bào thực vật 4 Các phương pháp chuyển gene trực tiếp • • • Súng bắn gen • Trực • tiếp Ống phấn • Siêu âm Xung điện • • Vi tiêm Hóa chất 4 Các phương pháp chuyển gene trực tiếp 4.1 .Chuyển gen bằng... bắn gen • • Súng bắn gen là một thiết bị sử dụng để đưa thông tin di truyền vào tế bào Đạn (vi đạn) được sử dụng là các hạt kim loại nặng được bao bọc ADN Các vi n đạn được bắn vào khối mô thực vật nhờ áp lực cao do khí helium, chúng sẽ xuyên vào tế bào Khi vào tế bào ADN tách khỏi hạt và cài vào ADN của cây Chuyển gene bằng súng bắn gene 4.2 Chuyển gen nhờ kĩ thuật xung điện - Sử dụng để chuyển gen. .. thích hợp Gen mã hóa cho tinh thể độc là gen cry Gen Cry được chia thành 4 lớp chính: Cry I, II, III, IV Gen này được tách , thiết kế vào các vector chuyển gen và chuyển vào nhiều loại cây trồng khác nhau đặc biệt là bông, ngô, đậu tương, lúa Những lợi ích của cây trồng Bt 1 Tăng cường quản lý sâu bệnh 2 Giảm sử dụng thuốc trừ sâu 3 Thu được lợi nhuận nhiều hơn 4 Cải thiện điều kiện cho các sinh vật... để chuyển ADN vào tế bào thực vật nhờ A tumefaciens (1) Vector liên hợp: Là sự hợp nhất của vài loại plasmid khác nhau (2) Vector nhị thể: gồm 2 plasmid cùng tồn tại trong Agrobacterium A- Vector liên hợp B- Vector nhị thể 3.2 Chuyển gen nhờ virus - Bên cạnh vi khuẩn Agrobacterium, người ta còn dùng virus làm vector chuyển gen, do virus dễ xâm nhập và lây lan trong cơ thể thực vật, có thể mang đoạn gen. .. của vi khuẩn BT phụ thuộc vào các độc tố do vi khuẩn sinh ra trong quá trình sinh trưởng và phát triển Bacillus Thuringenesis • Theo Kreig, Langenbrusch (1981) có gần 525 loài thuộc 13 bộ côn trùng đã ghi nhận bị nhiễm vi khuẩn BT • Trong đó, nhiều nhất là bộ cánh vảy (có 318 loài), sau đó là bộ hai cánh (59 loài), bộ cánh màng (57 loài), bộ cánh cứng (34 loài), các bộ khác có từ 1-12 loài bị nhiễm vi. .. màng sinh chất Sau đó, bằng cách loại bỏ PEG và xử lý nồng độ cao của Ca2+ hoặc ở độ pH cao, ADN biến nạp sẽ được chuyển nạp vào trong tế bào protoplast 5 Cây trồng chuyển gen BT • • • • 1911, Ernst Berliner (Đức) đã phân lập được và đặt tên cho loài vi khuẩn này là BT (hay Bacillus thuringenesis ) 1915, Ernst Berliner tiếp tục đưa ra báo cáo về một loại độc tố protein, là một thành phần sản sinh. ..3.1 Chuyển gen nhờ vi khuẩn đất agrobacterium • A.tumefaciens xâm nhiễm vào thực vật qua vết thương , do tế bào bị thương tiết ra những hợp chất polyphenol thu hút chúng • A tumefaciens có 1loại plasmid quyết định đặc tính gây khối u được gọi là Tiplasmid • Vi khuẩn không xâm nhập mà chuyển Ti-plasmid vào tế bào thực vật 3.1 Chuyển gen nhờ vi khuẩn đất agrobacterium - Con... chứa gene mong muốn tạo dung dịch huyền phù - Tiến hành cắm đầu máy siêu âm vào dung dịch huyền phù khoảng 3mm và cho máy phát với tần số 20kHz, thời gian 600- 900 ms - Sóng siêu âm làm cho lớp màng protoplast biến đổi tạo ra các lỗ giúp cho DNA ngoại lai xâm nhập vào tế bào 4.6 .Chuyển gene trực tiếp nhờ hóa chất • • • Là phương pháp chuyển gene vào protoplast (tế bào trần) nhờ các chất hóa học như . Trường Đại học Khoa Học Môn: Công nghệ sinh học vi sinh Lớp: CH Công nghệ sinh học K7 GVHD: TS. Vi Thị Đoan Chính  * Nguyễn Vi t Tuyên: nhóm trưởng . hợp để tái sinh thành cây và chọn lọc ra các cây chuyển gen. - Thích hợp với đối tượng 1 lá mầm B!: * 4.3. Chuyển gen bằng vi tiêm • Chuyển gene bằng vi tiêm là chuyển gene trực tiếp. thuật chuyển gene trên thực vật 3. Các phương pháp chuyển gene gián tiếp 4. Các phương pháp chuyển gene trực tiếp 5. Cây trồng chuyển gen BT Nội dung chính 1.Một số khái niệm  Chuyển gen 