Đang tải... (xem toàn văn)
Bài thuyết trình THIẾT KẾ MỘT QUY TRÌNH NGHIÊN CỨU VÀ SẢN XUẤT CHẾ PHẨM CHO CÁ TRA CÓ CHỨC NĂNG HỖ TRỢ TIÊU HÓA, ĐỐI KHÁNG SINH HỌC Edwardsiella ictaluri.Bài thuyết trình có nội dung dễ hiểu, hình ảnh sinh động, sơ đồ cụ thể, phù hợp cho sinh viên nghành công nghệ sinh học.Trong những năm gần đây nghề nuôi cá tra (P. hypophthalmus) ở đồng bằng sông Cửu Long phát triển rất mạnh đã đưa năng suất nuôi tăng lên đáng kể. Tuy nhiên, không thể tránh khỏi những rũi ro xảy ra dịch bệnh trong môi trường nuôi.Do đó, để đạt được sản lượng và lợi nhuận cao nhất, người nuôi không ngừng sử dụng hoá chất và kháng sinh trong nuôi trồng thuỷ sản để phòng và điều trị bệnh gây tổn hại đến môi trường và làm tăng sức đề kháng của các vi sinh vật gây bệnh Chính vì vậy, việc sử dụng các chế phẩm sinh học hoặc vi khuẩn có lợi để kiểm soát mầm bệnh, tăng sức đề kháng và giải quyết vấn đề ô nhiễm môi trường ao nuôi ngày càng được xem là một giải pháp thay thế cho điều trị kháng sinh. Nhiều nghiên cứu đã chỉ ra rằng, vi khuẩn Bacillus có tiềm năng làm probiotic và là tác nhân kiểm soát sinh học trong nuôi trồng thuỷ sản. Trong bài nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng những chủng vi khuẩn Bacillus subtilis phân lập từ ao nuôi cá tra để sản xuất chế phẩm cho cá tra có chức năng hỗ trợ tiêu hóa, làm tác nhân đối kháng sinh học Edwardsiella ictalluri,là tác nhân gây bệnh gan thận mủ trên cá tra (Pangasianodon hypophthalmus).
TRƯỜNG ĐẠI HỌC MỞ TP.HCM KHOA CÔNG NGHỆ SINH HỌC Đề tài: THIẾT KẾ MỘT QUY TRÌNH NGHIÊN CỨU VÀ SẢN XUẤT CHẾ PHẨM CHO CÁ TRA CÓ CHỨC NĂNG HỖ TRỢ TIÊU HÓA, ĐỐI KHÁNG SINH HỌC Edwardsiella ictaluri 5/12/15 VI SINH ỨNG DỤNG I Đặt vấn đề II Khái quát đối tượng nghiên cứu Chủng vi khuẩn Bacillus spp Bệnh gan thận mủ cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) III Phương pháp nghiên cứu IV Quy trình sản xuất I ĐẶT VẤN ĐỀ • • • • • 5/12/15 Trong năm gần nghề nuôi cá tra (P hypophthalmus) đồng sông Cửu Long phát triển mạnh đưa suất nuôi tăng lên đáng kể Tuy nhiên, tránh khỏi rũi ro xảy dịch bệnh môi trường nuôi Do đó, để đạt sản lượng lợi nhuận cao nhất, người ni khơng ngừng sử dụng hố chất kháng sinh ni trồng thuỷ sản để phịng điều trị bệnh gây tổn hại đến môi trường làm tăng sức đề kháng vi sinh vật gây bệnh Chính vậy, việc sử dụng chế phẩm sinh học vi khuẩn có lợi để kiểm soát mầm bệnh, tăng sức đề kháng giải vấn đề ô nhiễm môi trường ao nuôi ngày xem giải pháp thay cho điều trị kháng sinh Nhiều nghiên cứu rằng, vi khuẩn Bacillus có tiềm làm probiotic tác nhân kiểm sốt sinh học ni trồng thuỷ sản Trong nghiên cứu này, sử dụng chủng vi khuẩn Bacillus subtilis phân lập từ ao nuôi cá tra để sản xuất chế phẩm cho cá tra có chức hỗ trợ tiêu hóa, làm tác nhân đối kháng sinh học Edwardsiella ictalluri,là tác nhân gây bệnh gan thận mủ cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) VI SINH ỨNG DỤNG II KHÁI QUÁT VỀ ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU Bệnh gan thận mủ cá tra (Pangasianodon hypophthalmus) - Edwardsiella ictaluri vi khuẩn gram âm, hình que, oxidase âm tính, có tiên mao, lên men Hình 1.2: Biểu bệnh lý Hình 1.1: Cá tra 5/12/15 VI SINH ỨNG DỤNG Chủng vi khuẩn Bacillus spp : • • • Nguồn phân lập: Các chủng vi khuẩn Bacillus có hoạt tính probiotic phân lập từ mẫu nước, bùn đáy ao ruột cá tra Đặc điểm hình thái: Bacillus trực khuẩn nhỏ, hai đầu tròn, G+, đứng đơn lẻ thành chuỗi ngắn Vi khuẩn có khả di động, có - 12 lơng, sinh bào tử hình bầu dục Đặc điểm nuôi cấy điều kiện phát triển: Hiếu khí, nhiệt độ tối ưu 37C Nhu cầu O2: Bacillus vi khuẩn hiếu khí lại có khả phát triển yếu mơi trường thiếu oxy Độ pH: Bacillus thích hợp với pH = 7,0 - 7,4 – – – 5/12/15 VI SINH ỨNG DỤNG Bacillus subtilis 5/12/15 VI SINH ỨNG DỤNG • Đặc tính cần có vi khuẩn Bacillus dùng làm chế phẩm cho cá tra có chức đối kháng sinh học Edwardsiela ictaluri ??? Chúng có khả đối kháng với E.ictaluri; Thích nghi rộng điều kiện môi trường nhiệt độ, pH nồng độ muối; Có khả chịu đựng mơi trường có pH thấp muối mật Khơng có khả dung huyết (tiêu huyết) Có khả sinh enzyme ngoại bào Khơng mang gen đề kháng kháng sinh truyền => Tiềm dùng làm probiotic cần nghiên cứu khả bảo vệ cá tra kháng bệnh gan thận mủ nhằm kiểm soát bệnh – – – – – – 5/12/15 VI SINH ỨNG DỤNG III PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phân lập vi khuẩn Bacillus Thử nghiệm đối kháng với E.ictaluri Thử nghiệm khả sinh enzyme ngoại bào Thử nghiệm khả chịu muối chịu pH môi trường nuôi Thử nghiệm khả chịu đựng pH acid dày khả chịu muối mật Thử nghiệm khả sinh enzyme hemolysin Thử nghiệm khả nhạy/ kháng với kháng sinh (MIC) 5/12/15 VI SINH ỨNG DỤNG Phân lập vi khuẩn Bacillus • Các mẫu phân lập pha loãng tới độ pha loãng cần thiết xử lý nhiệt 80 C 15 phút, sau cấy gạt lên môi trường thạch dinh dưỡng(môi trường Nutrient Agar (NA) Nuôi nhiệt độ 28 – 30 C 24 Các khuẩn lạc mọc lên kiểm tra kính hiển vi kiểm tra đặc điểm khác, phù hợp cới đặc điểm Bacillus cấy truyền sang thạch nghiêng để bảo quản • 5/12/15 Các chủng thu định danh sơ phương pháp thường quy, bắt màu Gram (+), sinh bào tử, oxydase (+) catalase (+) VI SINH ỨNG DỤNG Thử nghiệm khả đối kháng với E ictaluri Phương pháp kiểm tra sơ (phương pháp Kolmen Boerner) 5/12/15 VI SINH ỨNG DỤNG 10 Sơ đồ: Thử nghiệm khả phân giải lipid 5/12/15 VI SINH ỨNG DỤNG 13 Thử nghiệm khả chịu pH • • Khoảng pH khảo sát từ 4-10 Điều chỉnh độ pH môi trường người ta dùng HCl 10 % hay NaCl 10 % Ngồi dùng số hoá chất khác như: H3PO4, H2SO4, KOH, NaHCO3, Na2CO3 Muốn kiểm tra độ pH mơi trường ta nên dùng máy đo pH • => Phương pháp nhanh nhạy cho độ xác cao Trong phịng thí nghiệm dùng thị màu xanh bromotomol hay giấy quỳ để đo pH => Phương pháp tiện lợi, nhanh không cho độ xác cao • => Vi khuẩn xem có khả chịu pH có khả tăng trưởng làm đục môi trường nuôi cấy 5/12/15 VI SINH ỨNG DỤNG 14 Thử nghiệm khả chịu đựng pH acid dày => Nếu vi khuẩn có khả sống sót tăng trưởng sau 2h vi khuẩn Bacillus có khả chịu pH acid dày 5/12/15 VI SINH ỨNG DỤNG 15 Thử nghiệm khả chịu muối mật => Nếu vi khuẩn Bacillus tăng trưởng tốt nồng độ muối mật tủ lệ sống sót qua ruột non ruột già cao 5/12/15 VI SINH ỨNG DỤNG 16 Thử nghiệm khả sinh enzyme hemolysin • Kết cho thấy vi khuẩn Bacillus khơng có khả dung huyết ứng dụng an tồn cho người bị lây nhiễm qua chuỗi thức ăn Nếu bị dung huyết khơng sử dụng Mơi trường thạch máu Blood Agar (BA), có bổ sung 5% máu cừu Dùng que cấy vòng lấy VK cấy lên môi trường o Ủ 30 C 24 Đọc kết 5/12/15 VI SINH ỨNG DỤNG 17 Thử nghiệm khả nhạy/ kháng với kháng sinh (MIC) • Phương pháp kháng sinh đồ: Nguyên tắc: Khi đặt đĩa kháng sinh môi trường trải khuẩn, kháng sinh từ đĩa giấy khuếch tán môi trường ức chế phát triển vi khuẩn tạo thành vòng vơ khuẩn Dựa vào đường kính vịng vơ khuẩn xung quanh đĩa kháng sinh để biện luận vi khuẩn đề kháng, trung gian nhạy cảm theo tiêu chuẩn 5/12/15 VI SINH ỨNG DỤNG 18 Sơ đồ: Phương pháp kháng sinh đồ đĩa kháng sinh 5/12/15 VI SINH ỨNG DỤNG 19 5/12/15 VI SINH ỨNG DỤNG 20 Biện luận kháng sinh đồ (S, I, R) dựa vào đường kính vịng vơ khuẩn => Nếu vi khuẩn kháng lại kháng sinh vi khuẩn phải khơng mang gen đề kháng truyền 5/12/15 VI SINH ỨNG DỤNG 21 Định danh chủng vi khuẩn • Các chủng vi khuẩn tuyển chọn định danh thử nghiệm sinh hố theo khóa phân loại Bergey (1994) [10] định danh phương pháp giải trình tự gene mã hoá 16S rRNA 5/12/15 VI SINH ỨNG DỤNG 22 IV QUY TRÌNH SẢN XUẤT TÀI LIỆU THAM KHẢO • • • • • • • • • • • 5/12/15 Nguyễn Hoàng Tuấn Duy cs, 2013 Phân lập sàng lọc vi khuẩn Bacillus spp có hoạt tính probiotic dùng cho cá tra ni Hội nghị CNSH tồn quốc khu vực phía Nam Nguyễn Văn Minh cs, 2013 Khả kiểm soát sinh học Edwardsiella ictaluri gây bệnh số chủng Bacillus spp phân lập từ ao nuôi cá tra Hội nghị khoa học công nghệ quốc tế ISCE2013 Lê Xuân Phương, Thí nghiệm vi sinh vật học, trang 77 Nguyễn Văn Minh, Thực tập vi sinh sở, trang 47 – 58 Dương Nhật Linh, Kiểm soát sinh trưởng phát triển vi sinh vật (PDF), trang 19 – 21 Hồ Thị Trường Thy, Khào sát số đặc tính chủng bacillus subtilis b20.1 làm sở cho việc sản xuất probiotic phòng bệnh gan thận mũ edwardseilla ictaluti cá tra (pangasius hypophthalmus) nuôi thâm canh, Bộ môn bệnh học thủy sản, khoa thủy sản trường Đại học nông lâm TPHCM Ngô Gia Tự, Bùi Thị Việt Hà, Nghiên cứu enzyme ngoại bào số chủng Bacillus phân lập khả ứng dụng chúng xử lý nước thải, Tạp chí Khoa học ĐHQGHN, Khoa học Tự nhiên Công nghệ 25 (2009) 101 -106 http://www.nihe.org.vn/new-vn/thuong-quy-va-huong-dan-ky-thuat/936/Ky-thuat-khoanh-giay-khang-sinh-khuech-tan.vhtm http://www.nihe.org.vn/new-vn/thuong-quy-va-huong-dan-ky-thuat/937/Qui-trinh-xac-dinh-nong-do-khang-sinh-toi-thieu-uc-che-vi-khuan-MIC vhtm http://vietsciences.free.fr/khaocuu/nguyenlandung/phuongphapthucnghiem-dinhtenvk02.htm http://www.vinhthinhbiostadt.com/vi/tin-tuc/san-xuat-probiotic-chat-luong-cao-la-hoat-dong-khoa-hoc-va-nghe-thuat-109.html VI SINH ỨNG DỤNG 25 NHÓM THỰC HIỆN 10 11 5/12/15 Trần Thị Thùy Trinh (NT) (1253012428) Hồ Quý Đăng (1253012080) Lương Thị Bích Thuận (1253010037) Đinh Trọng Hửu (1253010151) Phan Quang Lợi (1253010188) Trương Thị Trâm (1253010422) Trương Thị Xuân Diểm (1253010048) Đỗ Thị Tuyết Sang (1253010316) Nguyễn Thị Hòa (1253010136) Phạm Thị Chanh (1253010032) Nguyễn Huỳnh Gia Bảo (1253010021) VI SINH ỨNG DỤNG 26 ... thuỷ sản Trong nghiên cứu này, sử dụng chủng vi khuẩn Bacillus subtilis phân lập từ ao nuôi cá tra để sản xuất chế phẩm cho cá tra có chức hỗ trợ tiêu hóa, làm tác nhân đối kháng sinh học Edwardsiella. .. dùng làm chế phẩm cho cá tra có chức đối kháng sinh học Edwardsiela ictaluri ??? Chúng có khả đối kháng với E .ictaluri; Thích nghi rộng điều kiện môi trường nhiệt độ, pH nồng độ muối; Có khả chịu... trường có pH thấp muối mật Khơng có khả dung huyết (tiêu huyết) Có khả sinh enzyme ngoại bào Không mang gen đề kháng kháng sinh truyền => Tiềm dùng làm probiotic cần nghiên cứu khả bảo vệ cá tra kháng