BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  NGUYỄN VĂN TỰ XÁC ðỊNH ðẶC TÍNH SINH HỌC CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI GÂY HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở LỢN RỪNG NUÔI TẠI MỘT SỐ TRANG TRẠI THUỘC TỈNH BẮC NINH, BẮC GIANG LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành: Thú y Mã số : 60640101 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS PHẠM NGỌC THẠCH Hà Nội - 2012 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan ñây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là trung thực và chưa từng ñược ai công bố trong bất cứ một công trình nào. Tôi cũng xin cam ñoan mọi sự giúp ñỡ ñể thực hiện luận văn ñã ñược cám ơn và mọi thông tin trích dẫn ñã ñược chỉ rõ nguồn gốc. Tác giả luận văn Nguyễn Văn Tự Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… ii LỜI CẢM ƠN ðể hoàn thành ñề tài này, ngoài sự cố gắng của bản thân, tôi còn nhận ñược rất nhiều sự quan tâm giúp ñỡ của các thầy cô giáo, cơ quan, gia ñình và ñồng nghiệp. Trước hết tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: PGS.TS. Phạm Ngọc Thạch, Bộ môn Nội chẩn - Dược - ðộc chất, Khoa Thú y, Trường ðại học Nông Nghiệp Hà Nội, người ñã tận tình hướng dẫn, chỉ bảo giúp ñỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện ñề tài. Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Chủ nhiệm Khoa Thú y, các thầy, cô giáo ñã tận tình giúp ñỡ chỉ bảo tôi trong quá trình học tập, nghiên cứu tại Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội. Tôi luôn biết ơn gia ñình, bạn bè, người thân ñã ñóng góp công sức, ñộng viên giúp ñỡ tôi hoàn thành ñề tài nghiên cứu và luận văn. Tác giả luận văn Nguyễn Văn Tự Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iii MỤC LỤC Trang LỜI CAM ðOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC iii CÁC CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN vi DANH MỤC BẢNG vii PHẦN I. MỞ ðẦU 1 1.1. Tính cấp thiết của ñề tài 1 1.2. Mục ñích của ñề tài 1 PHẦN II. TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2 2.1. Một số tư liệu về lợn rừng 2 2.2. Một số giống lợn rừng trên thế giới 6 2.3. Một số ñặc ñiểm sinh học của lợn rừng 12 2.3.1. Giống và ñặc ñiểm giống 12 2.3.2. Ngoại hình 14 2.3.3. Tập tính của lợn rừng 15 2.4. Hội chứng tiêu chảy ở gia súc 17 2.4.1. Khái niệm về hội chứng tiêu chảy 17 2.4.2. Nguyên nhân gây hội chứng tiêu chảy 18 2.5. Vai trò của vi khuẩn E.coli trong hội chứng tiêu chảy ở lợn 23 2.5.1. ðặc tính nuôi cấy 25 2.5.2. Cấu trúc kháng nguyên 26 2.5.3. Một số ñặc tính sinh hóa 27 2.5.4. Các yếu tố gây bệnh của vi khuẩn E.coli 27 PHẦN III. ðỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 34 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… iv 3.1. ðối tượng nghiên cứu 34 3.2. ðịa ñiểm nghiên cứu 34 3.3. Nội dung nghiên cứu 34 3.4. Phương pháp nghiên cứu 34 3.4.1. Nguyên liệu dùng trong nghiên cứu 34 3.4.2. Phương pháp lấy mẫu 35 3.4.3. Phương pháp phân lập vi khuẩn E.coli 36 3.4.4. Phương pháp giám ñịnh một số ñặc tính sinh học chủ yếu của các chủng vi khuẩn E.coli phân lập ñược 37 3.4.5. Phương pháp xác ñịnh các yếu tố gây bệnh của các chủng vi khuẩn E.coli phân lập ñược bằng phương pháp PCR 38 3.4.6. Xác ñịnh Serotyp kháng nguyên O của các chủng vi khuẩn E.coli phân lập ñược bằng phản ứng ngưng kết nhanh trên phiến kính 40 3.4.7. Kiểm tra ñộc lực của chủng vi khuẩn E.coli phân lập trên chuột bạch 41 3.4.8. Xác ñịnh khả năng mẫn cảm với kháng sinh của các vi khuẩn phân lập ñược 42 3.4.9. Thử nghiệm một số phác ñồ ñiều trị hội chứng tiêu chảy trên ñàn lợn rừng nuôi tại một số trang trại thuộc tỉnh Bắc Ninh, Bắc Giang 43 3.4.10. Phương pháp xử lý số liệu 44 PHẦN IV. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 45 4.1. Cơ cấu ñàn lợn rừng ñang ñược nuôi tại một số trang trại thuộc tỉnh Bắc Ninh và Bắc Giang qua các năm (từ 2010 ñến tháng 6/2012) 45 4.2. Kết quả ñiều tra tình hình mắc hội chứng tiêu chảy trên ñàn lợn rừng nuôi tại một số trang trại thuộc tỉnh Bắc Ninh và Bắc Giang 46 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… v 4.3. Kết quả phân lập vi khuẩn E.coli từ các mẫu bệnh phẩm của lợn rừng bị tiêu chảy theo các ñộ tuổi 47 4.4. Kết quả nghiên cứu sự biến ñộng về số lượng vi khuẩn E.coli trong 1 gam phân lợn rừng ở các lứa tuổi khác nhau 49 4.5. Kết quả giám ñịnh ñặc tính sinh học của các chủng vi khuẩn phân lập ñược 53 4.6. Xác ñịnh yếu tố gây bệnh của các chủng vi khuẩn E.coli phân lập ñược từ lợn rừng mắc hội chứng tiêu chảy nuôi tại một số trang trại thuộc tỉnh Bắc Ninh, Bắc Giang. 54 4.7. Kết quả xác ñịnh serotype kháng nguyên O của các chủng vi khuẩn E.coli phân lập ñược 59 4.8. Kết quả kiểm tra ñộc lực của một số chủng E.coli phân lập ñược ở lợn rừng 62 4.9. Kết quả xác ñịnh mức ñộ mẫn cảm của vi khuẩn E.coli phân lập ñược ở lợn rừng mắc hội chứng tiêu chảy với một số loại kháng sinh 65 4.10 Kết quả ñiều trị hội chứng tiêu chảy ở lợn nuôi tại Bắc Ninh, Bắc Giang 68 PHẦN V. KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 72 5.1. Kết luận 72 5.2. ðề Nghị 73 TÀI LIỆU THAM KHẢO 74 PHỤ LỤC Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vi CÁC CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN Cs. Cộng sự E.coli Escherichia coli Hly Heamolysin LT Heat Lable Toxin (ðộc tố không chịu nhiệt) MR Methyl Red PCR Polymerase Chain Reaction ST Heat stable Toxin (ðộc tố chịu nhiệt) TGE Transmissible gastroenteritis (Bệnh viêm dạ dày và ruột truyền nhiễm) Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… vii DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 4.1. Cơ cấu ñàn lợn rừng ñang ñược nuôi tại một số trang trại thuộc tỉnh Bắc Ninh và Bắc Gian g qua các năm (2010 ñến tháng 6 năm 2012) 45 Bảng 4.2. Kết quả ñiều tra tình hình mắc hội chứng tiêu chảy ở lợn rừng nuôi tại một số trang trại thuộc tỉnh Bắc Ninh và Bắc Giang (từ tháng 10/2011 ñến tháng 5 năm 2012) 46 Bảng 4.3. Kết quả phân lập vi khuẩn E.coli 48 Bảng 4.4. Kết quả xác ñịnh số lượng E.coli/1 gam phân ở các lứa tuổi của lợn rừng nuôi tại một số nông hộ thuộc tỉnh Bắc Ninh, Bắc Giang 52 Bảng 4.5. Kết quả giám ñịnh ñặc tính sinh học của các chủng vi khuẩn E.coli phân lập ñược 53 Bảng 4.6.a. Kết quả xác ñịnh yếu tố bám dính F4, F5, F6 (K88, K99, 987P) của các chủng vi khuẩn E.coli phân lập ñược từ lợn rừng bị tiêu chảy qua các lứa tuổi 55 Bảng 4.6.b. Kết quả xác ñịnh ñộc tố ñường ruột của các chủng E.coli phân lập từ phân của lợn rừng 57 Bảng 4.7. Kết quả xác ñịnh serotype kháng nguyên O của các chủng vi khuẩn E.coli phân lập ñược 61 Bảng 4.8. Tổng hợp kết quả xác ñịnh ñộc lực của các chủng E.coli phân lập ñược ở lợn rừng các lứa tuổi 64 Bảng 4.9. Kết quả xác ñinh ñộ mẫn cảm của các chủng vi khuẩn E.coli phân lập ñược ở lợn bị tiêu chảy với một số loại kháng sinh 67 Bảng 4.10. Kết quả ñiều trị hội chứng tiêu chảy ở lợn nuôi tại Bắc Ninh, Bắc Giang 71 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 1 PHẦN I MỞ ðẦU 1.1. Tính cấp thiết của ñề tài Những năm gần ñây, chăn nuôi lợn rừng ñang trở thành nghề kiếm ra tiền của nhiều hộ nông dân. ðây là loài ñộng vật hoang dã mới ñược thuần hóa nên thịt lợn ñược bán với giá rất cao. Do tập quán sinh hoạt của người việt, thịt lợn vốn là thực phẩm truyền thống và ưa thích. ðặc biệt là thịt lợn rừng thịt ngon, gần như không có mỡ, da giòn rất hấp dẫn mà cung thì không ñủ cầu nên hiện vẫn ñược coi là hàng “ñặc sản”. Hơn nữa, vốn ñầu tư cho chăn nuôi lợn rừng không cao, thị trường rất tiềm năng, kỹ thuật chăm sóc chăn nuôi ñơn giản, rủi do ít, sức cạnh với thịt lợn công nghiệp rất cao. Hiện nay, nhà nước ñang thực hiện chính sách “ khóa cửa rừng” làm hạn chế việc săn bắn lợn rừng tự nhiên nên thị trường cung cấp lợn rừng chủ yếu là nguồn chăn nuôi trong dân. Bên cạnh ñó, việc chăn nuôi lợn rừng không bị rằng buộc từ các chính sách về bảo tồn ñộng vật hoang dã. Với các lý do ñó, nuôi lợn rừng ñã và ñang là một nghề chăn nuôi ñầy hứa hẹn. Tuy nhiên, trong quá trình chăn nuôi lợn rừng cũng xuất hiện một số bệnh. ðặc biệt là bệnh về ñường tiêu hóa do vi khuẩn E.coli gây nên làm thiệt hại không nhỏ về kinh tế ñối với các hộ nông dân chăn nuôi lợn rừng. Với mục ñích tìm hiểu rõ về các ñặc tính sinh học của vi khuẩn gây bệnh tiêu chảy trên lợn rừng. Qua ñó có những biện pháp phòng, trị bệnh hợp lý. Chúng tôi ñã tiến hành nghiên cứu ñề tài: “Xác ñịnh ñặc tính sinh học của vi khuẩn Escherichia coli gây hội chứng tiêu ch ở lợn rừng nuôi tại một số trang trại thuộc tỉnh Bắc Ninh, Bắc Giang’’. 1.2. Mục ñích của ñề tài Xác ñịnh ñặc tính sinh học và vai trò gây bệnh của vi khuẩn E.coli trong hội chứng tiêu chảy nuôi ở lợn rừng nuôi tại một số trang trại thuộc tỉnh Bắc Ninh và Bắc Giang. Từ ñó có biện pháp hiệu quả trong việc phòng, trị hội chứng tiêu chảy ở lợn rừng. Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp …………………… 2 PHẦN II TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1. Một số tư liệu về lợn rừng Lợn rừng tên tiếng Anh là Common Wild Pig, tên khoa học là Sus. Scrofa. Trong lịch sử phát triển của sản xuất nông nghiệp của loài người thì lợn rừng là một trong những loài ñộng vật ñược thuần hóa sớm nhất và chúng chính là nguồn gốc của các giống lợn nhà hiện ñang ñược nuôi phổ biến hiện nay ở nhiều nước. Trong phân loại ñộng vật thì lợn rừng là sinh vật thuộc hệ thống phân loại sau: - Giới ñộng vật (Animalia ) - Ngành dây sống (Chordata) - Phân ngành có xương sống (Vertebrata ) - Nhóm ñộng vật có hàm (Gnathostomata ) - Lớp thú (Mamalia ) - Phân lớp thú cao hay thú có nhau (Eutheria ) - Bộ có guốc (Ungulata ) - Bộ phụ guốc chẵn (Artioaactyla ) - Họ guốc chẵn không nhai lại (Sus ) - Loài lợn rừng (Sus Scrofa ) Theo nghiên cứu của Trung tâm Hợp tác Nghiên cứu Quốc tế Phát triển nông nghiệp (Pháp) thì lợn rừng có tới 36 giống phân bố ở hầu hết các lục ñịa trên thế giới. Sự phân bố này ñược thể hiện ở bảng sau: [...]... H u Phú và cs, 2004) * Tiêu ch y do virus Virus cũng là nguyên nhân chính gây tiêu ch y ðã có nhi u công trình nghiên c u kh ng ñ nh vai trò c a m t s virus như: Rotavirus, Enterovirus, Transmissble Gastroenteritis Virus (TGE) là nh ng nguyên nhân ch y u gây vi m d dày, ru t và gây tri u ch ng tiêu ch y ñ c trưng l n Các virus này tác ñ ng gây vi m ru t và gây r lo n quá trình tiêu hóa, h p thu c a... v t gi m sút, vi khu n E.coli thư ng xuyên cư trú trong ru t l n th a cơ sinh s n r t nhanh à gây nên s m t cân b ng h vi khu n ñư ng ru t, t ñó gây tiêu ch y Các vi khu n ñư ng ru t là nh ng vi khu n c ng sinh thư ng tr c trong ñư ng ru t H vi khu n này mu n t vi khu n c ng sinh tr thành vi khu n gây b nh ph i có 3 ñi u ki n (Lê Văn T o, 1997) + Trên cơ th v t ch có c u trúc giúp cho vi khu n th c... u ch ng tiêu ch y Khooteng Huat (1995) ñã th ng kê hơn 10 lo i virus có tác ñ ng làm t n thương ñư ng tiêu hóa, gây vi m ru t a ch y như: Enterovirus, rotavirus, Coronavirus, Adenovirus IV, virus d ch t l n, Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 20 S xu t hi n c a virus ñã làm t n thương niêm m c ru t, làm suy gi m s c ñ kháng c a cơ th và gây tiêu ch y... d ng c p tính v i các t l ch t cao (Ph m Ng c Th ch, 1996) Theo tài li u c a Bergeland (1980) (trích theo ðào Tr ng ð t, 1996) trong s nh ng m m b nh thư ng g p l n trư c và sau cai s a b tiêu ch y có r t nhi u lo i virus: 20,9% s l n b nh phân l p ñư c Rotavirus; 11,2% có virus vi m d dày, ru t truy n nhi m; 2% có Enterovirus; 0,7% có Parvovirus Rotavirus và Coronavirus là nh ng virus gây tiêu ch y... nguyên nhân th phát gây ra tiêu ch y * Tiêu ch y do vi khu n Trong ñư ng tiêu hóa c a gia súc có h vi khu n g i là h vi khu n ñư ng ru t, ñư c chia thành hai lo i Trong ñó vi khu n có l i có tác d ng lên men phân gi i các ch t dinh dư ng, giúp cho quá trình tiêu hóa ñư c thu n l i và vi khu n có h i khi g p ñi u ki n thu n l i thì gây b nh Nguy n Lương (1963) ñã phân l p t l n con tiêu ch y ñư c 5 serotyp... còn ñ i v i gia súc sau cai s a là ch ng khó tiêu, ch ng r i lo n tiêu hóa… Xét v nguyên nhân chính gây b nh thì có các tên g i như: Colibacsilllosos do vi khu n E.coli gây ra, b nh phó thương hàn l n do vi khu n Salmonella choleraesuis gây ra, b nh vi m d dày truy n nhi m (TGE) do Coronavirus gây ra B nh x y ra m i lúc, m i nơi v i tri u ch ng b nh chung là tiêu ch y, m t nư c và ñi n gi i, suy ki t,... ký sinh trùng Tác h i c a ký sinh trùng ñư ng tiêu hóa không ch là cư p ñi các ch t dinh dư ng c a v t ch mà còn tác ñ ng ñ n v t ch thông qua n i và ngo i ñ c t do chúng ti t ra làm gi m s c ñ kháng, gây trúng ñ c, t o ñi u ki n cho các b nh khác phát sinh Ngoài ra, ký sinh trùng còn gây t n thương niêm m c ñư ng tiêu hóa, gây vi m ru t, a ch y (Ph m Văn Khuê và Phan L c, 1996) Có nhi u lo i ký sinh. .. nguyên nhân gây b nh (ðào Tr ng ð t và cs, 1996) Theo Nguy n Như Thanh (2001), b nh do tr c khu n E.coli gây ra như m t k phát trên cơ s con v t b thi u vitamin ho c m c các b nh ký sinh trùng, b nh do virus Vi c phân bi t các ch ng E.coli gây b nh v i các ch ng thu c h vi sinh v t ñư ng ru t bình thư ng d a trên cơ s xác ñ nh các y u t ñ c l c c a chúng (Guler L và cs, 2008) Các ch ng E.coli gây b nh... có th gây ch t hàng lo t gia súc, gia c m v i bi u hi n nhi m ñ c ñư ng tiêu hóa, gây tiêu ch y d d i, mà thư ng chúng ta không nghĩ ñ n nguyên nhân này, nên m i phác ñ ñi u tr kháng sinh ñ u không hi u qu Ngoài vi c gây tiêu ch y cho gia súc, ñ c t n m m c còn gây ñ c tr c ti p cho ngư i t th c ph m b ô nhi m n m m c ho c gián ti p t nh ng ñ c t t n dư trong th c ph m (Biro, 1985) 2.4.2.2 Tiêu ch... tác nhân quan tr ng gây tiêu ch y l n con là vi khu n y m khí Clostridium perfringens typ C Vi khu n này là nguyên nhân gây vi m ru t ho i t , xu t huy t tr m tr ng l n sơ sinh, t n th t do b nh gây ra t 50 - 100% Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p …………………… 19 Khi nghiên c u h vi khu n ñư ng ru t gia súc, Nguy n Bá Hiên (2001) cho bi t: có loài vi khu n hi u khí . tài: Xác ñịnh ñặc tính sinh học của vi khuẩn Escherichia coli gây hội chứng tiêu ch ở lợn rừng nuôi tại một số trang trại thuộc tỉnh Bắc Ninh, Bắc Giang ’. 1.2. Mục ñích của ñề tài Xác ñịnh. tài Xác ñịnh ñặc tính sinh học và vai trò gây bệnh của vi khuẩn E.coli trong hội chứng tiêu chảy nuôi ở lợn rừng nuôi tại một số trang trại thuộc tỉnh Bắc Ninh và Bắc Giang. Từ ñó có biện. ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI  NGUYỄN VĂN TỰ XÁC ðỊNH ðẶC TÍNH SINH HỌC CỦA VI KHUẨN ESCHERICHIA COLI GÂY HỘI CHỨNG TIÊU CHẢY Ở LỢN RỪNG NUÔI TẠI MỘT SỐ TRANG TRẠI THUỘC TỈNH BẮC