Đang tải... (xem toàn văn)
Bệnh cúm gia cầm là bệnh truyền nhiễm cấp tính gây bệnh ở hầu hết gia cầm như gà, vịt, chim… đặc biệt là ở người với tốc độ lây lan nhanh chóng. Nguyên nhân gây bệnh là do virus cúm type A thuộc họ Orthomyxoviridae gây ra, virut này tồn tại dưới dạng phân type dựa trên quan hệ kháng nguyên H (Hemagglutinin) và N (Neuraminidae).Virus A thích nghi hầu như với mọi loại vật chủ và hệ gen của chúng luôn biến đổi, định kỳ do vậy rất dễ lây nhiễm và trở thành đại dịch. Trong số những chủng virus cúm A thì virus cúm AH5N1 có độc lực rất mạnh chúng gây nguy hiểm cho cả người và động vật. Dịch cúm bùng phát nhanh, chúng gây ra hậu quả rất nghiêm trọng làm ảnh hưởng tới tính mạng con người cũng như gây thiệt hại cho người chăn nuôi và xa hơn là gây thiệt hại tới nền kinh tế quốc dân. Bệnh cúm gia cầm thể độc lực cao HPAI (High Pathogenic Avian Influenza) được tổ chức dịch tễ thế giới (OIE) xếp vào bảng A các bệnh truyền nhiễm cấp tính và cực kỳ nguy hiểm. Cúm AH5N1 được phát hiện ở nước ta vào khoảng tháng 122003. Từ cuối năm 2003 trở lại đây bệnh cúm gia cầm đã, đang và dự đoán trong nhiều năm nữa sẽ là mối nguy hiểm cho sự phát triển của nền chăn nuôi nước ta và đặc biệt hơn là cho cả cộng đồng. Đã có hàng triệu gia cầm bị tiêu hủy và hàng chục người tử vong cho dịch cúm. Do đó việc phòng chống dịch cúm gia cầm là một trong những chương trình phòng chống dịch bệnh cấp quốc gia. Các biện pháp phòng chống dịch bệnh được áp dụng ngay từ đầu như tiêu hủy đàn gia cầm, cấm lưu thông, tiêu thụ sản phẩm, kiểm soát giết mổ đã phần nào hạn chế được dịch bệnh. Tuy nhiên rất tốn kếm và hiệu quả thì chưa được như mong muốn khi mà điều kiện nước ta còn rất nhiều hộ gia đình chăn nuôi nhỏ lẻ, điều kiện vệ sinh, chăm sóc và phòng bệnh chưa tốt. Ngoài các biện pháp về an toàn sinh học trong chăn nuôi đã kể trên thì việc sử dụng vacxin tiêm phòng để tạo đáp ứng miễn dịch chủ động chống lại bệnh cúm là một biện pháp tích cực trong việc phòng và chống bệnh. Mặc dù vậy do đặc tính của dịch cúm AH5N1 là lây lan rất nhanh và gây chết cho động vật trong thời gian ngắn nên việc đưa vacxin kháng virus cúm vào cơ thể động vật cần phải có thời gian để vacxin kết hợp với kháng nguyên của cơ thể tạo nên kháng thể mới có tác dụng do vậy vẫn có thể gây thiệt hại cho người chăn nuôi.Việc nghiên cứu và sản xuất ra kháng thể để khi đưa vào cơ thể động vật có tác dụng nhanh kháng virus cúm AH5N1 là đề tài cần nghiên cứu
KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI ĐẶT VẤN ĐỀ Chăn nuôi gia cầm nghề truyền thống nước ta nguồn thu nhập phần lớn hộ gia đình nơng thôn trang trại chăn nuôi lớn Phát triển ngành chăn ni nói chung chăn ni gia cầm nói riêng trở thành ngành sản xuất hàng hóa, bước đáp ứng nhu cầu thực phẩm cho tiêu dùng nước xuất quan điểm phát triển ngành chăn nuôi đến năm 2020 Chính Phủ phê duyệt Chăn ni gia cầm trở thành nghề thiếu cấu sản xuất nông nghiệp Quốc gia Theo số liệu thống kê thời điểm 1/10/2009 tổng cục thống kê tổng số đàn gia cầm Việt Nam có khoảng 280,18 triệu Cùng với phát triển ngành nghề khác chăn ni phát triển nhanh số lượng chất lượng Bên cạnh chăn ni phải đối mặt với nhiều rủi ro lãi suất thấp, giá bấp bênh, tổng chi phí đầu vào chi phí đầu có biên độ hẹp…, với dịch bệnh nguy xảy đại dịch cao có nguy xảy dịch cúm A/H5N1 người chăn nuôi không tuân thủ chặt chẽ điều kiện chăn ni quy trình kiểm dịch Bệnh cúm gia cầm bệnh truyền nhiễm cấp tính gây bệnh hầu hết gia cầm gà, vịt, chim… đặc biệt người với tốc độ lây lan nhanh chóng Nguyên nhân gây bệnh virus cúm type A thuộc họ Orthomyxoviridae gây ra, virut tồn dạng phân type dựa quan hệ kháng nguyên H (Hemagglutinin) N (Neuraminidae).Virus A thích nghi với loại vật chủ hệ gen chúng biến đổi, định kỳ dễ lây nhiễm trở thành đại dịch Trong số chủng virus cúm A virus cúm A/H5N1 có độc lực mạnh chúng gây nguy hiểm cho người động vật Dịch cúm TRẦN THẾ ANH Lớp: KSCNSH 0802-K15 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI bùng phát nhanh, chúng gây hậu nghiêm trọng làm ảnh hưởng tới tính mạng người gây thiệt hại cho người chăn nuôi xa gây thiệt hại tới kinh tế quốc dân Bệnh cúm gia cầm thể độc lực cao HPAI (High Pathogenic Avian Influenza) tổ chức dịch tễ giới (OIE) xếp vào bảng A bệnh truyền nhiễm cấp tính nguy hiểm Cúm A/H5N1 phát nước ta vào khoảng tháng 12/2003 Từ cuối năm 2003 trở lại bệnh cúm gia cầm đã, dự đoán nhiều năm mối nguy hiểm cho phát triển chăn nuôi nước ta đặc biệt cho cộng đồng Đã có hàng triệu gia cầm bị tiêu hủy hàng chục người tử vong cho dịch cúm Do việc phịng chống dịch cúm gia cầm chương trình phịng chống dịch bệnh cấp quốc gia Các biện pháp phòng chống dịch bệnh áp dụng từ đầu tiêu hủy đàn gia cầm, cấm lưu thông, tiêu thụ sản phẩm, kiểm soát giết mổ phần hạn chế dịch bệnh Tuy nhiên tốn kếm hiệu chưa mong muốn mà điều kiện nước ta cịn nhiều hộ gia đình chăn ni nhỏ lẻ, điều kiện vệ sinh, chăm sóc phịng bệnh chưa tốt Ngồi biện pháp an tồn sinh học chăn ni kể việc sử dụng vacxin tiêm phòng để tạo đáp ứng miễn dịch chủ động chống lại bệnh cúm biện pháp tích cực việc phịng chống bệnh Mặc dù đặc tính dịch cúm A/H5N1 lây lan nhanh gây chết cho động vật thời gian ngắn nên việc đưa vacxin kháng virus cúm vào thể động vật cần phải có thời gian để vacxin kết hợp với kháng nguyên thể tạo nên kháng thể có tác dụng gây thiệt hại cho người chăn nuôi.Việc nghiên cứu sản xuất kháng thể để đưa vào thể động vật có tác dụng nhanh kháng virus cúm A/H5N1 đề tài cần nghiên cứu TRẦN THẾ ANH Lớp: KSCNSH 0802-K15 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI Chúng tiến hành nghiên cứu đề tài “ Nghiên cứu, sản xuất kháng thể kháng virus cúm A/H5N1chủng NIBGR – 14 phục vụ phòng trị bệnh “ Với mong muốn góp phần làm giảm thiệt hại cho người chăn nuôi đặc biệt sản xuất kháng thể kháng virus cúm A/H5N1 phục vụ phòng trị bệnh Đề tài có mục tiêu cụ thể sau: - Nghiên cứu quy trình sản xuất kháng thể kháng virus cúm A/H5N1 qua thỏ lòng đỏ trứng gà - Sản xuất kháng thể phục vụ phòng trị bệnh Đề tài nghiên cứu Cơ sở Hóa sinh Dược Thú y, Trường đại học Nông Nghiệp Hà Nội TRẦN THẾ ANH Lớp: KSCNSH 0802-K15 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI PHẦN I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Giới thiệu chung bệnh cúm gia cầm 1.1.1 Khái niệm bệnh cúm gia cầm: Bệnh cúm gia cầm (Avian Influenza) cịn gọi bệnh cúm gà hay cúm lồi chim Là bệnh truyền nhiễm gây virus cúm type A thuộc họ Orthomyxoviridae Virus cúm gia cầm gây bệnh cho gà, vịt, ngan, ngỗng, gà tây, chim cút, đà điểu, loài chim cảnh chim hoang dã Và nguy hiểm bệnh lây sang người số loài thú khác Trước bệnh gọi bệnh dịch tả gà (fowl plague) từ hội nghị quốc tế lần thứ bệnh cúm gia cầm Beltsville - Mỹ năm 1981 thay tên tên bệnh cúm gia cầm độc lực cao (HPAI - Highty Pathogenic Avian Inluenza) để virus cúm type A có độc lực mạnh, gây lây lan nhanh, tỷ lệ tử vong cao [2] 1.1.2 Lịch sử bệnh cúm gia cầm: Năm 412 trước công nguyên, Hippocrates mô tả bệnh cúm Năm 1680 vụ đại dịch cúm mơ tả kỹ từ đến xảy 31 vụ đại dịch Trong 100 năm qua xảy vụ đại dịch cúm vào năm 1889, 1918, 1957, 1968 Bệnh cúm gia cầm thể độc lực cao (HPAI) phát lần Italia vào năm 1878 đặt tên bệnh dịch hạch gà, bệnh gây tỷ lệ tử vong cao đàn gia cầm TRẦN THẾ ANH Lớp: KSCNSH 0802-K15 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI Đến năm 1901, virus bệnh nguyên Centanny Samnozzi xác định tác nhân virus qua lọc Nhưng phải đến năm 1955 xác định virus virus cúm type A (H7N1 H7N7) gây chết nhiều gà, gà tây loài khác Qua nhiều năm nghiên cứu nhà khoa học phát bệnh dịch nghiêm trọng xảy với gà chủng gây bệnh cao thuộc phân type H5 H7 Scotland năm 1959 H5N1, Mỹ năm 1983 - 1984 H5N2 Cuối thập kỷ 60, phân type H1N1 phát lợn có liên quan đến ổ dịch gà tây với biểu đặc trưng triệu chứng đường hô hấp giảm suất [2] Vào kỷ 20, bệnh xuất hầu Châu Âu, Nga, Bắc Phi, Trung Đông Châu Á, Nam Bắc Mỹ Virus cúm gia cầm subtype H5 tìm thấy Canada vào năm 1966 vùng Wisconsin thuộc nước Mỹ năm 1968 Từ năm 1977, nhiều subtype thuộc virus cúm A H5 H7 phân lập mô tả Trong năm 1972, virus cúm gia cầm phát từ vịt chạy đồng qua chương trình giám sát virus bệnh Newcastle theo dõi chim hải âu Australia Đầu năm 1996, bệnh cúm gia cầm thông báo ngỗng Năm 1997, dịch xảy Hồng Kông, xác định virus H5N1 gây phải tiêu huỷ khoảng 1,5 triệu gà [26] 1.2 Tình hình dịch cúm A/H5N1 1.2.1 Tình hình dịch cúm gia cầm A/H5N1 giới: Cúm A/H5N1 virus có độc lực cao, gây bệnh người vụ dịch cúm gà năm 1996 - 2008, đặc biệt ác liệt virus cúm A/H5N1 thể độc lực cao (HPAI, highly pathogenic avian influenza) gây kể từ năm TRẦN THẾ ANH Lớp: KSCNSH 0802-K15 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI 2003 phát sinh nhiều nhóm, phân nhóm (clade) có độc lực cao Chủng virus cúm A/H5N1 phát lần gây bệnh dịch gà Scotland vào năm 1959 Từ nay, H5 N1 có thay đổi lớn xét cấu trúc thành phần gen kháng nguyên miễn dịch Sau gần 40 năm không phát hiện, cúm A/H5N1 xuất Quảng Đông (1996), Hồng Kông (1997) với biến đổi sâu sắc, khơng gây chết gia cầm mà cịn thích ứng gây chết người bệnh Có thể coi dòng virus cúm A/H5N1 từ 1996 đến cúm A/H5N1 đại xuất Đặc biệt, từ 2003 đến nay, virus H5N1 gây dịch cúm gia cầm Hồng Kông, Trung Quốc lây lan sang hàng chục quốc gia giới châu Á, châu Âu châu Phi Cúm A/H5N1 giai đoạn 2003 đến nay, cấu trúc trước đó, xét độc lực (tính gây bệnh), lồi vật chủ nhiễm bệnh, tính kháng nguyên - miễn dịch mức độ truyền lây có nhiều nét đặc trưng khác với nhiều biến chủng H5N1 trước Từ cuối 2005, cúm A/H5N1, chủ yếu chủng virus thuộc phân dòng Thanh Hải (nguồn gốc vùng Bắc Trung Quốc) bắt đầu lan sang số nước vùng Trung Á, có Nga, tràn ngập Đơng Âu xâm nhập vào nước vùng Tiểu Á, bao gồm Thổ Nhĩ Kỳ, nước Bắc- Trung Phi, đặc biệt Ai Cập Nigeria nước chịu thiệt hại nhiều Nhằm ngăn chặn dịch bệnh lây lan, mười năm qua, giới có hàng trăm triệu gia cầm bị tiêu hủy, gây thiệt hại nặng nề cho ngành chăn nuôi kinh tế Đặc biệt, số người nhiễm tử vong virus cúm A/H5N1 năm cao hơn, theo thống kê số người bị nhiễm cúm gia cầm H5N1 báo cáo với Tổ chức Y tế giới (WHO), từ năm 2003 đến tháng 6/2008, có tới 385 trường hợp mắc cúm A/H5N1, đó, 243 trường hợp tử vong chiếm tới 63,11% Việt Nam Indonesia quốc gia có số người nhiễm tử vong cao virus cúm TRẦN THẾ ANH Lớp: KSCNSH 0802-K15 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI A/H5N1 giới Trong số 16 nước có người chết cúm gia cầm, Indonesia Việt Nam WHO xác định quốc gia “điểm nóng” cúm A/H5N1 có điều kiện thuận lợi để tiến hóa thích nghi lây nhiễm trở thành virus người [24] 1.2.2 Tình hình dịch cúm A/H5N1 Việt Nam: Dịch cúm gia cầm A/H5N1 bùng phát Việt Nam vào cuối tháng 12/2003 tỉnh phía Bắc, sau nhanh chóng lan tới hầu hết tỉnh, thành nước thời gian ngắn Đây lần dịch cúm gia cầm A/H5N1 xảy Việt Nam, có tới hàng chục triệu gia cầm bị tiêu hủy, gây thiệt hại nặng tới kinh tế quốc dân Tính đến (tháng 10/2008), dịch cúm gia cầm liên tục tái bùng phát hàng năm nhiều địa phương nước, phân chia thành đợt dịch lớn sau: - Đợt dịch thứ từ tháng 12/2003 30/3/2004: dịch cúm xảy tỉnh Hà Tây, Long An Tiền Giang Dịch bệnh lây lan nhanh, vòng hai tháng xuất 57/64 tỉnh thành nước Tổng số gà thủy cầm mắc bệnh, chết tiêu hủy 43,9 triệu con, chiếm 17% tổng đàn gia cầm Trong đó, gà chiếm 30,4 triệu con, thủy cầm 13,5 triệu Ngồi ra, có 14,8 triệu chim cút loài khác bị chết tiêu hủy Đặc biệt, có người xác định nhiễm virus cúm A/H5N1 tử vong đợt dịch [11] - Đợt dịch thứ từ tháng đến tháng 11/2004: dịch bệnh tái phát 17 tỉnh, thời gian cao điểm tháng 7, sau giảm dần đến tháng 11/2004 điểm phát dịch Tổng số gia cầm tiêu hủy thống kê vụ dịch 84.078 Trong đó, có gần 56.000 gà; 8.132 vịt; TRẦN THẾ ANH Lớp: KSCNSH 0802-K15 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI 19.950 chim cút Và có tới 27 người mắc bệnh virus cúm A/H5N1, có ca tử vong [11] - Đợt từ tháng 12/2004 tháng 12/2005: dịch cúm gà xảy 36 tỉnh/thành nước Số gia cầm bị tiêu hủy Cục Thú y thống kê 1,846 triệu (gồm 470.000 gà, 825.000 thủy cầm 551.000 chim cút) Vào tháng cuối năm 2005, dịch cúm gà xảy tháng 10/2005 lan nhanh gần 40 tỉnh/thành giảm dần tháng 12/2005 [21] - Năm 2006, áp dụng chương trình tiêm chủng rộng rãi cho đàn gia cầm nước, với biện pháp phòng chống dịch liệt, dịch cúm A/H5N1 không xảy Việt Nam Mặc dù vậy, đến 06/12/2006 dịch cúm gia cầm A/H5N1 tái bùng phát Cà Mau, sau lan sang tỉnh Bạc Liêu, Hậu Giang, Vĩnh Long Cần Thơ [11] - Năm 2007, dịch bệnh tái phát Hải Dương vào ngày 17/2/2007 khống chế sau tháng Tuy nhiên, đến ngày 01/5/2007 dịch bệnh tiếp tục tái phát Nghệ An, sau lan sang nhiều tỉnh/thành nước Theo báo cáo Cục Thú y (Bộ Nông nghiệp Phát triển Nông thôn) đến ngày 10/6/2007 dịch xảy 16 tỉnh/thành khống chế hoàn toàn vào tháng 8/2007 - Những tháng đầu năm 2012, theo báo cáo Cục Thú y dịch cúm gia cầm xuất số tỉnh/thành như: Kom Tum, Thanh Hóa, Hà Tĩnh, Hà Nội, Quảng Nam đến khống chế dịch [11] - Theo thống kê Cục Thú y, từ ngày 26/12/2003 đến ngày 31/3/2010 nước ta có 59 người chết/117 trường hợp nhiễm bệnh 1.2.3 Những kết nghiên cứu đạt bệnh cúm gia cầm Việt Nam TRẦN THẾ ANH Lớp: KSCNSH 0802-K15 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI 1.2.3.1 Sự lưu hành virus cúm gia cầm Việt Nam[5] Virus cúm gia cầm H5N1 gây bệnh cho gia cầm Việt Nam có nguồn gốc từ Trung Quốc thuộc gennotyp Z Virus cúm H5N1 có tính kháng ngun đa dạng từ xuất Việt Nam xuất số chủng có tính kháng ngun hồn tồn khác phân vào nhóm kháng ngun HA Clade Genotyp G Virus H5N1 tồn lâu môi trường so với loại virus cúm khác Điều quan trọng điều kiện mơi trường bình thường (nước sơng suối, nhiệt độ 20 - 300C) virus bị hoạt lực sau 90 giờ, mơi trường có chất hữu virus tồn lâu Đối với virus thể gia cầm bệnh chôn đất chúng giữ tính gây nhiễm khơng q ngày Để làm nâng cao tính nhạy cảm phương pháp chẩn đoán nên chẩn đoán virus cúm phương pháp RT-PCR, xác định virus type A trước (thơng qua xác định gen M) sau xét nghiệm đặc tính subtype khác Đã phát cầy hương rừng Cúc Phương bị chết virus H5N1 Điều cho thấy cần phải có biện pháp an toàn sinh học cho vườn quốc gia sở thú Đã chế tạo thành công kháng nguyên HA H5N1 dùng giám sát huyết cúm gia cầm Mặt khác chế tạo thành công kháng huyết kháng H5N1 dùng nghiên cứu chẩn đoán bệnh Đã khảo sát chất sát trùng Alpha Terpineol từ tinh dầu tràm có khả sát khuẩn làm giảm nhân lên virus H5N1 môi trường tế bào TRẦN THẾ ANH Lớp: KSCNSH 0802-K15 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI 1.2.3.2 Kết nghiên cứu phát triển vacxin phòng bệnh cúm gia cầm Việt Nam: Đã nghiên cứu thành cơng: - Quy trình sản xuất vacxin cúm A/H5N1 - Quy trình bảo quản sử dụng vacxin cúm A/H5N1 - Quy trình tiếp truyền giống gốc sản xuất giống cấp 1.3 Dịch tễ học cúm gia cầm 1.3.1 Phân loại: Virus nói riêng virus cúm nói chung thường phân loại chủ yếu theo tính kháng nguyên Khi dùng phản ứng kết tủa thạch kết hợp bổ thể người ta thấy có nhóm virus khác đặt tên cho nhóm virus A, B, C Dùng phản ứng ngăn trở ngưng kết hồng cầu người ta thấy virus type A lại có nhiều loại khác Trên sở kết phản ứng ức chế ngưng kết hồng cầu, phát kháng thể kháng ngưng kết hồng cầu kháng thể tạo để chống lại protein HA không ức chế tồn virus type A Từ virus type A chia type phụ (subtype) sở có phản ứng HI đặc hiệu Cho đến năm 2004 tổng số subtype chia theo khả ngưng kết hồng cầu 16 Cũng với protein NA, người ta phát loại NA có tính kháng nguyên khác đặt tên từ N1 N9 Virus cúm type A kết tổ hợp loại protein Chính có virus cúm đặt tên HxNy Việc phân loại virus ủy ban định danh quốc tế tiến hành [6] Có kiểu phân loại virus cúm dòng Châu Á (theo quy định WHO) là: TRẦN THẾ ANH 10 Lớp: KSCNSH 0802-K15 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ Kết luận Từ kết thu q trình nghiên cứu chúng tơi rút kết luận sau: Đàn gà gây miễn dịch sở vacxin cúm A/H5N1 vô hoạt nhũ dầu có đáp ứng miễn dịch tốt, hàm lượng kháng thể máu cao Giữa lượng kháng thể máu lịng đỏ trứng có sẹ tương quan chặt chẽ đồng biến, lượng kháng thể máu cao lịng đỏ trứng cao với hệ số tương quan đạt 0,921 Đã chế tạo chế phẩm gây miễn dịch với kháng nguyên virus cúm gia cầm A/H5N1chủng NIBRG - 14, chế phẩm đạt tiêu độ khiết, độ an toàn, độ vơ trùng hiệu lực Sử dụng chế phẩm dạng nhũ dầu có đáp ứng miễn dịch tốt cho gà thỏ Nghiên cứu, hoàn thiện quy trình sản xuất kháng thể, tiêu chất lượng đảm bảo tiêu chuẩn độ vô trùng, độ khiết, độ an toàn hiệu lực Sử dụng kháng thể kháng virus cúm A/H5N1 với liều trình sau: Tiêm đợt, đợt cách 10 ngày Tiêm lần cho gà tuổi ngày 20, lần với gà 30 ngày tuổi với liều 1ml/con/lần Kiến nghị TRẦN THẾ ANH 55 Lớp: KSCNSH 0802-K15 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI Qua thời gian nghiên cứu thấy chế phẩm kháng thể thụ động kháng virus cúm gia cầm A/H5N1 có tác dụng phịng trị bệnh Vì đề nghị kiểm nghiệm chế phẩm để sử dụng rộng rãi cho chăn nuôi gia cầm đặc biệt đàn gia cầm có số lượng lớn gà, vịt… nhằm phòng trị bệnh cúm A/H5N1giảm rủi ro cho người chăn nuôi TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt [33].GS.TSKH Phan Thanh Phượng – TS Phạm Công Hoạt, PGS.TS Trương Văn Dung – TS Vũ Dũng Tiến, Miễn dịch học thú y ứng dụng, Nhà xuất nông nghiệp, 2007 [1] Bùi Quang Anh, Văn Đăng Kỳ, Bệnh cúm gia cầm: Lưu hành bệnh, chẩn đoán kiểm sốt dịch bệnh, Tạp chí khoa học kỹ thuật Thú y, Tập XI, số 3, 2004, 69 - 75 [2] Trần Hữu Cổn, Bùi Quang Anh, Bệnh cúm gia cầm biện pháp phịng chống, NXB Nơng Nghiệp - Hà Nội, 2004, - 33 [3] Ban đạo quốc gia phòng chống dịch cúm gia cầm, Sổ tay giám sát bệnh cúm gia cầm, NXB Nông Nghiệp - Hà Nội, 2007, 11 - 12 [4] Bùi Bá Bổng, Bùi Quang Anh, Trần Kim Anh, Lê Văn Bầm, Trương Văn Dung, Phạm Văn Đông, Đậu Ngọc Hào, Văn Đăng Kỳ, Hoàng Văn Năm, Lê Thị TRẦN THẾ ANH 56 Lớp: KSCNSH 0802-K15 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI Kim Oanh, Nguyễn Thanh Sơn, Cẩm nang phòng chống bệnh cúm gia cầm thể độc lực cao (H5N1), NXB Nông Nghiệp - Hà Nội, 2007, - 9, 25 - 30 [5] Trương Văn Dung, Những kết đạt bệnh cúm gia cầm Việt Nam, Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, Tập XV, số 4, 2008, - [6] Nguyễn Tiến Dũng, Vài nét virus cúm gia cầm H5N1, Tạp chí khoa học kỹ thuật Thú y, Tập XV, số 4, 2008, 80 - 86 [7] Marie Edan, Thomas Delquigny, Hồng Hải Hóa, Patrice Gautier, Điều tra dịch tễ, NXB Nông Nghiệp - Hà Nội, 2007, 18 [8] Marie Edan , Thomas Delquigny, Hồng Hải Hóa, Patrice Gautier, Chẩn đốn cúm gia cầm, NXB Nơng Nghiệp - Hà Nội, 2007, - 21, 27 - 28 [9] Trần Xuân Hạnh, Một vài vấn đề phòng bệnh virus cúm gia cầm vaccine, Tạp chí khoa học kỹ thuật Thú y, Tập XI, số 3, 2004, 84 - 85 [10] Trần Thị Hồi, Thơng tin chăn ni - thú y - Hội chăn nuôi Thừa Thiên Huế, 2003, 30 - 31 [11] Văn Đăng Kỳ, Diễn biến tình hình dịch cúm gia cầm Việt Nam giải pháp phịng chống, Tạp chí khoa học kỹ thuật Thú y, Tập XV, số 4, 2008, 87 - 89 [12] Lê Văn Năm, Kết khảo sát biểu lâm sàng bệnh tích đại thể bệnh cúm gia cầm số sở chăn nuôi tỉnh phía Bắc, Tạp chí khoa học kỹ thuật Thú y, Tập XI, số 3, 2004, 87 - 89 [13] Phạm Hồng Sơn, Nghiên cứu tạo kháng nguyên ngưng kết hồng cầu gián tiếp gắn virus cúm A vận dụng chẩn đoán bệnh cúm gia cầm, Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, Tập XVI, số 2, 2009, 12 - 22 TRẦN THẾ ANH 57 Lớp: KSCNSH 0802-K15 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI [14] Tô Long Thành, Miễn dịch chống virus, Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, Tập XVI, số 2, 2009, 77 - 89 [15] Tô Long Thành, Các loại vaccine cúm gia cầm đánh giá hiệu tiêm phịng, Tạp chí khoa học kỹ thuật Thú y, Tập XIV, số 2, 2007, 84 - 90 [16] Chu Thị Thơm, Phan Thị Lài, Nguyễn Văn Tó, Bệnh cúm H5N1 gà chim, NXB Lao động, Hà Nội, 2006 [17] Tin khoa học kỹ thuật cúm gia cầm, Tại virus cúm có tính lây nhiễm cao nhiệt độ lạnh mùa đơng?, Tạp chí khoa học kỹ thuật Thú y, Tập XV, số 4, 2008, 92 - 93 [18] Trung tâm chẩn đoán thú y trung ương, Các phương pháp chẩn đoán, xét nghiệm bệnh cúm gia cầm, NXB Nông Nghiệp - Hà Nội, 2004, 5, 33 - 38 [19] Trung tâm chẩn đoán thú y trung ương, Tài liệu giám sát bệnh cúm gia cầm, NXB Nông Nghiệp - Hà Nội, 2004, - Các trang web tiếng việt [20] Cục thú y, 2009 Báo cáo dịch cúm gia cầm biện pháp phòng dịch http://www.cucthuy.gov.vn [21] Cục thú y, 2005, Quy trình chẩn đốn bệnh cúm gia cầm http://www.cucthuy.gov.vn [22].http://www.benhcum.com/kien-thuc-ve-benh-cum/240-benh-cum-gia-camh5n1.htm/ [23] Nguyễn Quốc Bình, Vũ Thủy Tiên, Thơng tin chung hướng giải pháp vaccine cúm gia cầm TRẦN THẾ ANH 58 Lớp: KSCNSH 0802-K15 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI TrungtmcngnghsinhhcThnhPhHChMinh_htm.zip - ZIP archive, unpacked size 12,681 bytes [24] Le Thanh Hoa*, Dinh Duy Khang, Phan Văn Chi, Nong Van Hai, Truong Nam Hai, Pham Viet Cuong, Nguyen Thi Bich Nga, Le Tran Binh, Tổng quan virus cúm A/H5N1: vấn đề dịch tễ học, tiến hóa, hình thành genotype tương đồng kháng nguyên-miễn dịch-vaccine Institute of Biotechnology http://www.impe-qn.org.vn/impe-qn/vn/portal/InfoDetail.jsp? area=58&cat=1101&ID=3194 [25] http://travinh.gov.vn/ [26] Phát virus cúm gia cầm lây nhiễm chó http://www.baotructuyen.com/c10/A535577/ [27] Tình hình dịch bệnh gia súc, gia cầm năm 2008 biện pháp phòng chống dịch năm 2009 http://sonongnghiep.binhduong.gov.vn/thuy/tintuc/chitiettintuc/tabid/1291/ [28] Tổng đàn gia cầm đàn lợn tăng trưởng http://vovnews.vn/Home/Tong-dan-gia-cam-va-dan-lon-tang-truongkha/20101/130971.vov [29] H.Y (2005), Dịch cúm gia cầm Việt Nam http://vietnamnet.vn/dichcumga/tulieu/2005/10/504128/ Các trang web tiếng Anh * TRẦN THẾ ANH 59 Lớp: KSCNSH 0802-K15 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI [30] Tien Dung Nguyen, The Vinh Nguyen, Dhanasekaran Vijaykrishna, Robert G Webster, Yi Guan, J.S Malik Peiris and Gavin J.D Smith (2008), Multiple sublineages of Influenza A virus (H5N1), Vietnam, 2005-2007 http://www.cdc.gov/eid/content/14/4/632.htm [31] Jennifer L Mckimm-Breschkin, Paul W Selleck, Tri Bhakti Usman, and Michael A Johnson, Reduced sensitivity of Influenza A (H5N1) to Oseltamivir http://www.cdc.gov/eid/content/13/9/1354.htm [32] Avian Influenza-Highly Pathogenic (HPAI), Fowl Plague http://www.thepoultrysite.com/diseaseinfo/62/avian-influenzahighly-pathogenichpai-fowl-plague TRẦN THẾ ANH 60 Lớp: KSCNSH 0802-K15 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận tốt nghiệp này, trước tiên tơi xin bày tỏ lịng cảm ơn sâu sắc tới TS Phạm Công Hoạt – giáo viên trực tiếp hướng dẫn tơi hồn thành đề tài tốt nghiệp Thầy ln bên tơi để đóng góp bảo cho khuyết điểm cần sửa chữa khơng học tập, nghiên cứu mà cịn sống Sự bảo thầy giúp quan tâm người hơn, biết chia sẻ niềm vui, nỗi buồn với người thân bạn bè Tôi xin gửi tới thầy, cô khoa Công Nghệ Sinh Học – Viện Đại học Mở Hà Nội lời cảm ơn chân thành Thầy cô tận tình giảng dạy, tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ chúng tơi suốt q trình học tập q trình nghiên cứu tơi trường Cuối tơi xin gửi tới gia đình, bạn bè, người thân yêu đồng hành tơi khúc khó khăn vất vả để tơi có ngày hơm lời cám ơn sâu sắc Kính chúc thầy bạn sức khỏe thành công Hà Nội, tháng năm 2012 Sinh viên Trần Thế Anh TRẦN THẾ ANH 61 Lớp: KSCNSH 0802-K15 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ PHẦN I: TỔNG QUAN TÀI LIỆU .4 1.2 Tình hình dịch cúm A/H5N1 1.2.1 Tình hình dịch cúm gia cầm A/H5N1 giới: 1.2.2 Tình hình dịch cúm A/H5N1 Việt Nam: 1.3 Dịch tễ học cúm gia cầm 10 1.3.1 Phân loại: 10 1.3.5 Sự nhân lên virus cúm A/H5N1 tế bào vật chủ 13 1.5 Chẩn đoán bệnh cúm gia cầm 22 1.5.1 Dựa vào đặc điểm dịch tễ: 22 2.2 Nội dung nghiên cứu 31 2.3.2 Thiết bị hóa chất 31 Địa điểm nghiên cứu: 32 2.4 Phương pháp nghiên cứu 32 2.4.1 Phương pháp gây miễn dịch 32 2.4.2 Phương pháp gây miễn dịch thỏ 33 2.4.3 Phương pháp tách huyết 33 2.4.5.1 Phản ứng HA 35 2.4.5.2 Phản ứng HI 36 PHẦN III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 39 3.1 Tiếp truyền giống virus cúm A/H5N1 chủng NIBRG-14 phương pháp tiêm chủng gà mẫm cảm 39 Lâm sàng 40 Bệnh tích 40 Mào sưng phù 40 Phân lỏng màu xanh trắng .40 TRẦN THẾ ANH 62 Lớp: KSCNSH 0802-K15 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI Phù thũng đầu mặt .40 Kém ăn, uống nhiều nước .40 Xung huyết khí quản 40 Xuất huyết tim 40 Niêm mạc dày xuất huyết điểm 40 Túi Fabricius xuất huyết 40 + .40 + .40 +++ 40 +++ 40 Tỷ lệ % .40 16,65 40 53,28 40 46,62 40 83,25 40 89,91 40 83,25 40 73,30 40 100,00 40 Ghi : 40 +++ : Bệnh tích điển hình ++ : Bệnh tích điển hình + : Có bệnh tích 40 3.2 Tiếp truyền giống virus H5N1 phương pháp tiêm phôi trứng 41 Ghi : 41 3.3 Kết chuẩn độ giống virus 42 3.4 Đánh giá khả tạo kháng thể thỏ gây miễn dịch với virus H5N1 44 3.5 Đánh giá kháng thể tạo thành gà đẻ trứng 45 Sau gây miễn dịch lần ngày thứ 1, ngày thứ 7, ngày thứ 14, 21 ngày thứ 35, tiến hành lấy máu gà, chắt huyết đồng thời lấy trứng chúng để kiểm tra hàm lượng kháng thể virus cúm A/H5N1 phản ứng HI Hàm lượng kháng thể trung bình đo phản ứng HI thể bảng sau: .45 3.6 Đánh giá khả trung hòa virus cúm A/H5N1 kháng thể tao .47 3.7 Kiểm tra tiêu chế phẩm kháng thể cúm A/H5N1 48 TRẦN THẾ ANH 63 Lớp: KSCNSH 0802-K15 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI 3.7.1 Kiểm tra vô trùng chế phẩm 48 3.7.2 Kiểm tra độ an toàn 49 3.7.3 Kiểm tra hiệu lực chế phẩm kháng thể 50 TRẦN THẾ ANH 64 Lớp: KSCNSH 0802-K15 ... 0802-K15 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI 3.6 Đánh giá khả trung hòa virus cúm A/H5N1 kháng thể tao Kháng thể thu thỏ, gà, trứng gà ngày thứ 35 pha loãng hiệu giá kháng đánh giá hiệu... tồn sinh học cho vườn quốc gia sở thú Đã chế tạo thành công kháng nguyên HA H5N1 dùng giám sát huyết cúm gia cầm Mặt khác chế tạo thành công kháng huyết kháng H5N1 dùng nghiên cứu chẩn đoán bệnh... kháng thể ngăn cản tiếp xúc mầm bệnh với tế bào TRẦN THẾ ANH 28 Lớp: KSCNSH 0802-K15 KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP VIỆN ĐẠI HỌC MỞ HÀ NỘI đích chúng Phức hợp kháng nguyên - kháng thể sau bị tế bào đại