PHÂN lập ISOFLAVONE tử đậu NẢNH BẰNG PHƯƠNG PHÁP THỦY PHÂN GLYCOSIDE FLAVONE TƯƠNG ỨNG

41 1.2K 2
PHÂN lập ISOFLAVONE tử đậu NẢNH BẰNG PHƯƠNG PHÁP THỦY PHÂN GLYCOSIDE FLAVONE TƯƠNG ỨNG

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

Mục lục DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT.................................................3 ĐẶT VẤN ĐỀ.......................................................................................4 Chương 1 – TỔNG QUAN..................................................................5 1.1. ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT.............................................................................. 5 1.1.1.Vị trí phân loại: 2021...............................................................5 1.1.2.Hình thái thực vật..........................................................................6 1.1.3.Phân bố, sinh thái..........................................................................6 1.1.4.Bộ phận dùng, thu hái và chế biến................................................6 1.2. THÀNH PHẦN HÓA HỌC.......................................................................... 7 1.3. TÁC DỤNG DƯỢC LÝ.............................................................................. 12 Chương 2 – ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1. ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU.................................................................... 17 2.1.1.Nguyên liệu.................................................................................17 2.1.2.Dung môi, hóa chất.....................................................................17 2.1.3.Thiết bị, dụng cụ.........................................................................17 2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU.............................................................. 17 Chương 3 – KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU:..........................................20 3.1. Phương pháp 1: THỦY PHÂN ISOFLAVONE TỪ DỊCH CHIẾT ĐẬU NÀNH TOÀN PHẦN31..........................................20 3.2 Phương pháp 2: THỦY PHÂN ISOFLAVONE SAU KHI PHÂN LẬP TỪNG ISOFLAVONE GLYCOSID RIÊNG34........................................... 34 Chương 4 – BÀN LUẬN....................................................................37 Chương 5 – KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ...........................................38 TÀI LIỆU THAM KHẢO.................................................................38

Mục lục DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT 3 ĐẶT VẤN ĐỀ 4 Chương 1 – TỔNG QUAN 5 1.1. ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT 5 1.1.1.Vị trí phân loại: [20][21] 5 1.1.2.Hình thái thực vật 6 1.1.3.Phân bố, sinh thái 6 1.1.4.Bộ phận dùng, thu hái và chế biến 6 1.2. THÀNH PHẦN HÓA HỌC 7 1.3. TÁC DỤNG DƯỢC LÝ 12 Chương 2 – ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 2.1. ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 17 2.1.1.Nguyên liệu 17 2.1.2.Dung môi, hóa chất 17 2.1.3.Thiết bị, dụng cụ 17 2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 17 Chương 3 – KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU: 20 3.1. Phương pháp 1: THỦY PHÂN ISOFLAVONE TỪ DỊCH CHIẾT ĐẬU NÀNH TOÀN PHẦN[31] 20 3.2 Phương pháp 2: THỦY PHÂN ISOFLAVONE SAU KHI PHÂN LẬP TỪNG ISOFLAVONE GLYCOSID RIÊNG[34] 34 Chương 4 – BÀN LUẬN 37 Chương 5 – KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 38 TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 ii DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT EtOH: Ethanol HDL-C: lipoprotein tỉ trọng cao toàn phần HPLC: sắc ký lỏng hiệu năng cao LDL-C: lipoprotein tỉ trọng thấp toàn phần MeOH: Methanol SFE: chiết bằng chất lỏng siêu tới hạn 3 ĐẶT VẤN ĐỀ Đậu nành và những chế phẩm từ đậu nành như đậu phụ, sữa đậu nành… từ lâu đã được người châu Á sử dụng như một thực phẩm giàu chất dinh dưỡng. Trong những thập kỉ gần đây, nhiều nghiên cứu dịch tể được thực hiện và cho thấy việc sử dụng đậu nành làm giảm nguy cơ của nhiều bệnh ung thư[1] như ung thư vú[2][3], ung thư tuyến tiền liệt[4], ung thư ruột kết[5], loãng xương[6][8], triệu chứng hậu mãn kinh[6][7][8] và bệnh động mạch vành[7][9]… Chính vì vậy, đậu nành trở thành đề tài thu hút nhiều nhà nghiên cứu trên thế giới, nhất là trong bối cảnh hiện nay, nhu cầu sử dụng estrogen thực vật thay cho trị liệu hormone truyền thống đối với phụ nữ mãn kinh hoặc sau mãn kinh ngày càng gia tăng[10][11]. Từ đó, hàng loạt các nghiên cứu về thành phần hoạt chất và phương pháp phân lập chúng ra khỏi đậu nành đã được tiến hành. Kết quả cho thấy đậu nành là một trong những nguồn cung cấp isoflavone dồi dào nhất[12]. Isoflavone trong đậu nành tồn tại chủ yếu ở dạng glycoside: 6״ - O – malonyl- glucosides, 6״ - O - acetyl – glucoside, β-glucoside và hiếm khi ở dạnh aglycone[13] [14][15][16][17]. Bên cạnh đó, những nghiên cứu lâm sàng cũng cho thấy isoflavone dạng aglycone có sự hấp thu nhanh hơn và nhiều hơn so với dạng glycoside ở cùng liều dùng[18]. Điều đó gợi ý rằng một chế phẩm giàu isoflavone dạng aglycone sẽ tốt hơn một chết phẩm giàu isoflavone dạng glycoside. Do đó, trong nghiên cứu này, chúng tôi sẽ khảo sát điều kiện tối ưu để chiết xuất isoflavone dạng aglycone từ đậu nành. 4 Chương 1 – TỔNG QUAN 1.1. ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT Tên gọi: Tên thường gọi: Đậu tương, đậu nành Tên khoa học: Glycine max (L) Merr. Họ: Đậu (Fabaceae)[19] 1.1.1. Vị trí phân loại: [20][21] Theo hệ thống phân loại Takhtajan, cây Đậu nành có vị trí phân loại như sau: Hình 1: cây đậu nành Ngành Ngọc Lan (Mangnoliophyta) Lớp Ngọc Lan (Magnoliopsida) Bộ Đậu (Fabales) Họ Đậu(Fabaceae) Chi Glycine Glycine max Sơ đồ 1: vị trí phân loại của đậu nành 5 1.1.2. Hình thái thực vật • Cây thảo hàng năm, có thân mảnh, cao 50-150 cm, có lông, các cành hướng lên trên. Lá mộc so le, có 3 lá chét hình trái xoan, gần mũi nhọn, gai hơi không đều. Hoa trắng hay tím, xếp thành chùm ở nách. Quả thẳng, hình liềm, có nhiều lông mềm, màu vàng lục hoặc xanh nhạt, thắt lại ở giữa các hạt. Có 2-5 hạt, hình cầu hoặc hình thận, có màu sắc thay đổi tùy theo giống[22]. • Ra hoa vào tháng 6-7, cho quả vào tháng 7-9.[22] 1.1.3. Phân bố, sinh thái • Cây có xuất xứ từ Trung Quốc[22]. • Trồng phổ biến ở khắp Việt Nam, nhất là các tỉnh Trung du, miền núi phía Bắc: Lai Châu (Tủa Chùa, Mường Lan, Quỳnh Mai), Lào Cai(Mường Khương, Bắc Hà), Cao Bằng, Lạng Sơn, Bắc Giang(Lục Ngạn) và các tỉnh miền Đông Nam Bộ. Ngoài ra, còn được trồng ở nhiều nước nhiệt đới và cận nhiệt đới trên thế giới, đặc biệt ở Trung Quốc và Hoa Kỳ[20]. 1.1.4. Bộ phận dùng, thu hái và chế biến Bộ phận dùng : hạt Hình 2: hạt đậu nành tươi 6 1.2. THÀNH PHẦN HÓA HỌC Trong hạt đậu nành có các thành phần đã biết: Protid 40%, lipid 12-25%, glucid 10- 15%; các muối khoáng như Ca, Fe, Mg, P, K, Na, S; các vitamin A, B1, B2, D, E, F; các men, sáp, nhựa, cellulose. Theo GS. Đỗ Tất Lợi[20], toàn cây chứa 12% nước, 16% glucid, 14-15% protein, 6% muối khoáng và các chất khác không có nitơ. - Protein. Nhiều nghiên cứu đã chỉ ra rằng, hạt Đậu nành có giá trị dinh dưỡng rất cao. Thành phần protein trong hạt Đậu nành chứa 8 loại amino axit thiết yếu : tryptophan, threonine, isoleuxin, valin, lysin, methionin, phenylalanin và leucin. Hàm lượng của các chất amino axit này tương đương với hàm lượng amino acid của trứng gà, đặc biệt là tryptophan, gần gấp rưỡi của trứng[23]. Protein trong hạt đậu nành chứa khoảng trên 38% tuỳ loại. Hiện nay, nhiều giống đậu nành có hàm lượng protein đặc biệt cao (tới 40-50%). Có những chế phẩm của đậu nành mang tới 90-95% protein, đây là nguồn protein thực vật có giá trị cao cung cấp cho con người[24]. Protein của Đậu nành dễ tiêu hoá, không có cholesterol và ít chất béo bão hoà như thường có ở thịt động vật. Hàm lượng protein của đậu nành cũng cao hơn cả thịt cá và gần gấp đôi các loại đậu khác[23]. - Vitamin và chất khoáng. Không chỉ giàu protein hơn bất cứ loại thực phẩm nào, kể cả thịt động vật. Đậu nành còn rất giàu vitamin và chất khoáng. Theo GS. Đỗ Tất Lợi[20], hạt Đậu nành chứa trung bình 8% nước, 4-5% chất vô cơ, trong đó Kali 2%, Natri 0,38%, Canxi 0,23%, photpho 0,65%, Magiê 0,24%, lưu huỳnh 0,45%. Đậu nành chứa các vitamin tan trong nước như: các vitamin B 1 , B 2 , B 3 , B 6 ; vitamin PP và chứa các vitamin tan trong dầu như: vitamin A, vitamin D, vitamin E (trong Đậu nành ở châu Á và châu Mỹ), vitamin K, vitamin F không có vitamin C. Các vitamin A và D xuất hiện khi hạt mới chín, sau 7 đó bị men oxy hoá phá huỷ. Trong nhóm vitamin B, Đậu nành chứa lượng vitamin B 1 gấp 3 lượng vitamin B 1 trong sữa bột và trong bột những loại đậu khác. Lượng vitamin B 2 chứa ít hơn trong sữa bột khoảng 1/3 nhưng lại gấp 6 lần so với một số loại Đậu khác. - Chất béo và chất cholesterol. Đậu nành là thực phẩm nhiều protein nhưng lại ít calorit, ít chất béo bão hoà và hoàn toàn không có cholesterol[23]. Chất béo chiếm khoảng 15-20%, có khi đạt tới 23%. Tỷ lệ phần trăm của các glycerid axit béo: linolein 49,3%, olein 32%, linolenin 2%, panmitin 6,5%, stearin 4,2%, aracgidin 0,7%, lignoxerin 0,1% và 0,5% axit panmitoleic[20]. So sánh với các loại đậu khác thì đậu nành có hàm lượng acid béo thiết yếu cao hơn. Tổng lượng chất béo chiếm khoảng 18%, còn thành phần cacbonhydrat chiếm khoảng 31%[22]. - Dầu đậu nành Dầu Đậu nành thuộc loại dầu khô như dầu hạt lanh, chứa khoảng 14% chất béo bão hoà, 59% chất béo không bão hoà nhiều nối đôi, 23% chất béo không bão hoà một nối đôi. Trong số lượng chất béo không bão hoà nhiều nối đôi lại chứa 8% linoleic acid (omega – 3- fatty acid)[22][25], hiếm có trong các thực phẩm nguồn gốc thực vật[20] [23]. Ngoài ra, trong dầu đậu nành còn có các phospholipid, chủ yếu là lecitin (1-5%). Ngoài ra, dầu béo còn có các chất steron như: stigmasteron, sitosteron và một số sapogenol khác[25] - Isoflavone Isoflavone là thành phần hoạt chất chính của đậu nành. Qua phân tích, cho thấy isoflavone trong đậu nành là một hợp chất phenolic gồm có: aglycone (daidzein, genistein và glycitein); β – glucosid (genistin, daidzin, glycitin); β – glycosid kết hợp với nhóm malonyl ( 6 ” - O –malonyldaidzin, 6 ” – O – 8 malonylgenistin và 6 ” – O – malonylglycitin); β- glycosid kết hợp với nhóm acetyl ( 6 ” – O – axetyldaidzin, 6 ” – O - axetylgenistin và 6 ” – O – axetylglycitin) [27]. Trong hạt Đậu nành các aglycone chiếm một lượng nhỏ, là các dẫn xuất malonyl và dẫn xuất acetyl của β– glycosid. Ngoài ra, còn chứa các aglycone : sissotrin, ononin; các dẫn xuất acetyl của β – glycosid : 6 ” – acetylsissotrin, 6 ” – acetylononin; các dẫn xuất malonyl của β – glycosid : 6 ” - malonylsissotrin, 6 ” – malonylononin. Năm 2006 các nhà khoa học Hàn Quốc đã thực hiện một nghiên cứu so sánh thành phần isoflavone trong phôi, lá mầm, hạt và vỏ hạt đậu nành. Kết quả nhận được, tổng tỉ lệ trung bình của isoflavone là 2887μg/g trong phôi, 575μg/g trong hạt, 325μg/g trong lá mầm, 33μg/g trong vỏ hạt. Các nhà khoa học cũng đã phân tách được 12 đồng phân isoflavone. Cấu trúc cơ bản của isoflavone gồm 2 vòng bezen: A và B nối với một dị vòng pyron. 9 Bảng 1: Cấu trúc hóa học của isoflavones 10 [...]... khiết -Bước 4: phân lập bằng hệ thống HPLC chế hóa 2.2.2 Phương pháp 2: THỦY PHÂN ISOFLAVONE SAU KHI PHÂN LẬP TỪNG ISOFLAVONE GLYCOSID RIÊNG[34] Một cách khác để phân lập isoflavone dạng aglycone, thay vì thủy phân dạng glycoside ngay sau khi chiết bằng cồn,ta có thể dùng sắc ký cột để tách riêng từng phân đoạn isoflavone trong dịch chiết cồn lúc đầu, sau khi thu được từng isoflavone dạng glycoside tinh... từng isoflavone cụ thể[31] hay là phân lập các isoflvone dạng glycoside, sau đó mới tiến hành thủy phân từng phân đoạn riêng biệt[34] Cả hai phương pháp trên lần lượt được khảo sát dưới đây 2.1.4 Phương pháp 1: THỦY PHÂN ISOFLAVONE TỪ ĐẦU DỊCH CHIẾT TOÀN PHẦN[31]: Quy trình chiết xuất gồm 4 bước chính: Chiết xuất Thủy phân Tinh chế Phân lập Sơ đồ 2: quy trình tổng quát -Bước 1: chiết xuất isoflavone. .. khác, lượng isoflavone thu được gấp đôi sau khi được tối ưu hóa Hình 7: lượng isoflavone từ đậu nành (µg isoflavone/ g bột đậu nành) trước và sau khi tối ưu hóa (Số liệu được thể hiện bằng giá trị trung bình ± độ lệch chuẩn của sản phẩm isoflavone từ 5 mẫu thử khác nhau) 3.1.4 Phân lập các isoflavoneoid bằng HPLC điều chế[35]: Đầu tiên, sử dụng hệ thống HPLC điều chế để phân lập từng isoflavone (genistein,... China) - Cột polymethacrylate 4‫ ״‬x 70‫ ,״‬Toso Hass CG71 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Trong hạt đậu nành, isoflavone tồn tại chủ yếu ở dạng glycozid,vì mục đích của nghiên cứu là phân lập isoflavone dạng aglycone nên cần thiết phải qua giai đoạn thủy phân 18 Có nhiều phương pháp để thủy phân isoflavone dạng glycozid, trong đó hai tác nhân thủy phân thường dùng là acid[31] hay enzyme (β-glucosidase)[32]... nhân thủy phân, và tác nhân được chọn là acid vì khả năng thủy phân hòan toàn của nó so với β-glucosidase ( chỉ thủy phân được glucosyl isoflavone và không có tác dụng với malonyl -isoflavone, hơn nữa hoạt tính enzyme sẽ bị ức chế bởi một số ion kim loại như là Hg2+, Cu3+…)[33] Có nhiều phương pháp để thu được isoflavone dạng aglycone tinh khiết, có thể thủy phân dịch chiết toàn phần sau đó phân lập. .. hóa và hứng ở các thời điểm khác nhau, thu được từng chất riêng biệt Sản phẩm phân lập được phân tích lại với hệ thống HPLC phân tích (hình 8:F, G, H), kết quả cho thấy mỗi phân đoạn chỉ có một pic riêng và độ tinh khiết đạt 99% 33 Hình 8: sắc ký đồ HPLC: E: isoflavone toàn phan; F: genistein; G: glycitein và H: daidzein 34 3.2 Phương pháp 2: THỦY PHÂN ISOFLAVONE SAU KHI PHÂN LẬP TỪNG ISOFLAVONE. .. T=800C, 8 giờ Dịch chiết EtOH 96% Acid HCl 0,13 mol/l t= 800C, 6 giờ Dịch thủy phân Nước cất-dịch thủy phân: 4:1 Kết tinh isoflavone toàn phần (dạng aglycone) Sơ đồ 3: sơ đồ chiết xuất và phân lập isoflavone dạnh aglycone từ đậu nành 29 Đánh giá hàm lượng từng isoflavone trong isoflavone toàn phần sau khi tối ưu hóa: Chuẩn bị mẫu: Isoflavone chuẩn được pha trong ethanol tinh khiết với hai dãy nồng độ khác... khiết mới tiến hành thủy phân để thu được dạng aglycone tương ứng Cách thực hiện: Bột đậu nành được chiết bằng cồn ( MeOH hay EtOH) Dịch chiết bột đậu nành toàn phần được pha loãng với nước cất cho đến khi đạt độ cồn cuối cùng là 20% Hỗn hợp thu được được lọc để loại những phần tử không tan 20 Bước tiếp theo, tiến hành phân lập isoflavone: vì hỗn hợp thu được không chỉ chứa isoflavone mà còn lẫn các... tương quan (R2) được sử dụng để đánh giá nồng độ isoflavone của mỗi mẫu và thể hiện ở độ nhạy phân tích (AS), giới hạn phát hiện (LOD), và giới hạn định lượng (LOQ) Định lượng hàm lượng isoflavone trong mẫu chiết Sắc kí đồ của các isoflavone trong dịch chiết bằng phương pháp tối ưu hóa được so sánh được thể hiện ở hình 5B Những peak tương ứng với 3 isoflavone chính (genistein, daidzein, glycitein) được... thủy phân ra khỏi sản phẩm cuối cùng, đồng thời hiệu suất thu được phải là cao nhất Do liên quan đến nhiều vấn đề phức tạp như tác nhân thủy phân, thời gian và nhiệt độ trong quá trình thủy phân nên ở đây ta khảo sát những điều kiện thủy phân khác nhau nhằm mục đích tiềm ra điều kiện thủy phân tối ưu Các mẫu lần lượt được thủy phân dưới những điều kiện khác nhau và ảnh hưởng của các thông số thủy phân . QUẢ NGHIÊN CỨU: 20 3.1. Phương pháp 1: THỦY PHÂN ISOFLAVONE TỪ DỊCH CHIẾT ĐẬU NÀNH TOÀN PHẦN[31] 20 3.2 Phương pháp 2: THỦY PHÂN ISOFLAVONE SAU KHI PHÂN LẬP TỪNG ISOFLAVONE GLYCOSID RIÊNG[34]. khiết. -Bước 4: phân lập bằng hệ thống HPLC chế hóa. 2.2.2. Phương pháp 2: THỦY PHÂN ISOFLAVONE SAU KHI PHÂN LẬP TỪNG ISOFLAVONE GLYCOSID RIÊNG[34]. Một cách khác để phân lập isoflavone dạng aglycone,. nhiều phương pháp để thu được isoflavone dạng aglycone tinh khiết, có thể thủy phân dịch chiết toàn phần sau đó phân lập từng isoflavone cụ thể[31] hay là phân lập các isoflvone dạng glycoside,

Ngày đăng: 16/04/2015, 09:02

Từ khóa liên quan

Mục lục

  • 1.1. ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT

  • 1.2. THÀNH PHẦN HÓA HỌC

  • 1.3. TÁC DỤNG DƯỢC LÝ

  • 2.1. ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU

  • 2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

  • 3.2 Phương pháp 2: THỦY PHÂN ISOFLAVONE SAU KHI PHÂN LẬP TỪNG ISOFLAVONE GLYCOSID RIÊNG[34]

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan