Tài liệu tập huẩn PHẦN I. MỞ ĐẦU Ô nhiễm thực phẩm là vấn đề đang được cả nhân loại quan tâm, ; nó không chỉ ảnh hưởng tới sức khỏe của người tiêu dùng mà còn liên quan đến phát triển kinh tế, thương mại, du lịch. Muốn kiểm soát được ô nhiễm thực phẩm, chỉ có một biện pháp duy nhất là thiết lập được hệ thống phân tích nguy cơ. Hệ thống pPhân tích nguy cơ là giải pháp chủ động, dự phòng một cách tích cực, cơ bản, toàn diện, được thực hiện ở bất cứ quốc gia nào nếu ở đó muốn có một thị trường thực phẩm an toàn. Sau khi phát hiện Sudan đỏ trong các sản phẩm từ ớt bột ở Trung Quốc, mới đây, người ta lại phát hiện Rhodamin B, loại chất để nhuộm len và lụa, có trong các sản phẩm gia vị của Trung Quốc nhập khẩu vào Tây Ban Nha. Bước đầu, cơ quan chức năng xác định chất nhuộm Rhodamin B đi vào các sản phẩm ớt là xuất phát từ việc sử dụng thuốc trừ sâu tại các cánh đồng trồng ớt. Tận dụng đặc tính phát quang của Rhodamin B, nông dân dùng chúng để giúp kiểm soát lượng thuốc bảo vệ thực vật phun lên cây ớt. Một số loại dầu thực vật cũng phát hiện thấy hóa chất phát quang này và người ta cũng nghi chúng bị dùng để kiểm soát thuốc trừ sâu khi phun lên các loài cây lấy dầu. Ngoài ra, không chỉ với ớt bột hay các chất gia vị nói chung, chất tạo màu Rhodamin B có nguy cơ xuất hiện trong hầu hết sản phẩm lương thực, thực phẩm đi từ cây trồng có dùng phân bón hóa học Lo ngại nguy cơ xâm nhập của Rhodamin B vào các loại thực phẩm, Ủy ban Gia vị châu Âu đang tìm cách ra lệnh cấm triệt để việc sử dụng Rhodamin B trong tất cả các khâu liên quan đến quá trình sản xuất lương thực và thực phẩm. Chi tử là quả của cây dành dành Thị trường thực phẩm Việt Nam rất đa dạng, đặc biệt chúng ta nhập rất nhiều loại thực phẩm từ Trung Quốc. Ngoài những thực phẩm nhập vào theo đường chính thống, còn rất nhiều loại thực phẩm trôi nổi không được kiểm soát chất lượng an toàn vệ sinh. Ở Việt Nam lần đầu tiên Rhodamin B được phát hiện trong cây chi tử - một loại dược liệu để điều chế thuốcdùng trong đông y. Gần đây, thông tin về việc Viện Kiểm nghiệm ATVSTP quốc gia 1 Tài liệu tập huẩn hạt dưa bị nhiễm phẩm màu Rhodamin B gây ung thư đã khiến người tiêu dùng vô cùng hoang mang lo lắng. Rhodamin B là một loại chất hoá học dùng để nhuộm quần áo, cấm tuyệt đối trong thực phẩm và thuốc. Trong bối cảnh đó, các kĩ thuật xác định Rhodamin B trong thực phẩm phù hợp với điều kiện phòng thí nghiệm trong nước sẽ trở thành công cụ hữu hiệu giúp các cơ quan chức năng kiểm soát tốt hơn vấn đề đảm bảo chất lượng vệ sinh an toàn thực phẩm. Là cơ quan đầu ngành trong lĩnh vực an toàn vệ sinh thực phẩm, Viện Kiểm nghiệm an toàn vệ sinh thực phẩm quốc gia đã tổ chức lớp tập huấn kỹ thuật: “Xác định hàm lượng Rhodamine B trong hạt dưa và gia vị bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao”. Viện Kiểm nghiệm ATVSTP quốc gia 2 Tài liệu tập huẩn SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO HPLC PGS Phạm gia Huệ Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC-High performance liquid chromatography) còn được gọi là sắc ký lỏng cao áp, hoặc chỉ đơn giản gọi là sắc ký lỏng vì ngày nay nó đã trở thành quá thông dụng. HPLC ra đời khi người ta sản xuất được chất nhồi cột có cỡ hạt khoảng 10 µm hay nhỏ hơn (5 và 3 µm), có hiệu suất tách rất cao. Cỡ hạt bé đòi hỏi dùng bơm để nén dung môi qua cột. Với loại chất nhồi mới này và hệ thống máy vi tính, phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao ra đời. UPLC (Ultra performance liquid chromatography) hay sắc ký lỏng siêu hiệu năng với hạt chất nhồi cột có đường kính dưới 2 µm, có hiệu suất tách cao hơn nữa. Quá trình sắc ký và các đại lượng đặc trưng 1. Một số khái niệm mở đầu 1.1. Định nghĩa: Sắc ký là một nhóm các phương pháp hoá lý dùng để tách các thành phần của một hỗn hợp. Trong sắc ký các chất khác nhau được tách dựa trên sự phân chia khác nhau của chúng vào hai pha luôn tiếp xúc và không hoà lẫn vào nhau : một pha tĩnh và một pha động. Pha tĩnh được nhồi trên cột, pha động đi qua cột. Khi hỗn hợp cần tách được pha động kéo qua cột, chất nào có ái lực mạnh hơn với pha tĩnh sẽ di chuyển chậm hơn, vì vậy các chất có thể tách khỏi nhau. 1.2. Quá trình sắc ký: Quá trình tách sắc ký thường bao gồm 3 giai đoạn chính: a. Đưa hỗn hợp lên pha tĩnh: đưa hỗn hợp lên cột. b. Cho pha động chạy qua pha tĩnh: dung môi qua cột, kéo theo các chất di chuyển trên pha tĩnh với tốc độ khác nhau, tách khỏi nhau và có vị trí khác nhau trên cột tạo thành sắc đồ (sắc ký đồ). Giai đoạn này gọi là khai triển sắc ký (development). Nếu tiếp tục cho pha động chạy thì các chất có thể lần lượt bị kéo ra khỏi cột. Đó là quá trình rửa giải (elution) và dung môi được dùng là dung môi rửa giải (eluent), dịch hứng được ở cuối cột gọi là dịch rửa giải (eluate). Viện Kiểm nghiệm ATVSTP quốc gia 3 Tài liệu tập huẩn Nếu các chất được tách trên pha tĩnh (sắc ký khai triển) ta có thể lấy từng phần pha tĩnh có mang chất (phân đoạn bột trên cột) đem chiết lấy chất. Nếu các chất được tách ra ngoài pha tĩnh (sắc ký rửa giải) ta có thể hứng lấy các phân đoạn dịch rửa giải có chất. c. Phát hiện các chất : các chất màu có thể phát hiện dễ dàng, các chất không màu có thể phát hiện bằng đèn tử ngoại hay bằng các thuốc thử. Trong sắc ký rửa giải có thể phát hiện các chất khi chúng đi ra khỏi cột bằng cách cho dung dịch rửa giải đi qua một bộ phận phát hiện gọi là detectơ (detector) đặt sau cột. 1.3. Phân loại các phương pháp sắc ký. -Sắc ký hấp phụ (adsorption chromatography): pha tĩnh là chất rắn có khả năng hấp phụ. Pha động có thể là chất lỏng hay chất khí. -Sắc ký phân bố (partition chromatography): pha tĩnh được giữ trên bề mặt một chất rắn gọi là chất mang (support), chất mang phải là chất trơ, không tham gia vào quá trình sắc ký. Pha động có thể là chất lỏng hay chất khí. -Sắc ký trao đổi ion (ion-exchange chromatography): pha tĩnh là chất nhựa trao đổi ion (hợp chất cao phân tử có mang những ion có khả năng trao đổi với các ion cùng dấu của hỗn hợp sắc ký). -Sắc ký theo loại cỡ (size-exclusion chromatography) còn gọi là sắc ký trên gel. Các phân tử cỡ lớn sẽ được loại, các phân tử nhỏ hơn sẽ được tách theo kích thước, phân tử bé di chuyển chậm. Các phương pháp sắc ký khác: sắc ký ái lực, sắc ký điện… Ghi chú: Trong sắc ký khí, chủ yếu là sắc ký phân bố và sắc ký hấp phụ 2. Cơ sở lý thuyết sắc ký (Giới thiệu sơ lược): Có hai yếu tố quyết định quá trình tách sắc ký : - Tốc độ di chuyển của các chất: Các chất khác nhau phải có tốc độ di chuyển khác nhau, cho các pic ở vị trí khác nhau trên sắc đồ. - Sự mở rộng dải hay sự doãng pic (band broadening, peak spreading), do các tiểu phân của cùng một chất di chuyển với tốc độ khác nhau. Hai pic ở gần nhau trên sắc đồ nếu bị doãng nhiều sẽ trùm lên nhau (xen phủ lên nhau), không tách được khỏi nhau. Ta hãy xét hai vấn đề nêu trên : 2.1. Tốc độ di chuyển của các chất: 2.1.1. Tốc độ di chuyển của một chất: Viện Kiểm nghiệm ATVSTP quốc gia 4 Tài liệu tập huẩn Tốc độ di chuyển của một chất có thể được mô tả bởi các đại lượng về sự lưu giữ của chất đó trên pha tĩnh (thời gian lưu, thời gian lưu hiệu chính). a- Thời gian lưu (retention time): Trên sắc đồ, trục tung chỉ cường độ tín hiệu của detectơ, trục hoành là trục thời gian (hoặc thể tích dung môi). Hãy quan sát sắc đồ, trường hợp có một chất (hình 1). Thời gian lưu t R (phút) là thời gian cần để một chất di chuyển từ nơi tiêm mẫu qua cột sắc ký, tới detectơ và cho pic trên sắc đồ (tính từ lúc tiêm đến lúc xuất hiện đỉnh của pic). t 0 : là thời gian lưu của một chất không bị lưu giữ (là chất di chuyển với tốc độ của pha động). t 0 thường được gọi là thời gian chết. t R càng lớn, chất tan bị lưu giữ càng mạnh và di chuyển càng chậm. b-Thời gian lưu hiệu chính t’ R được tính theo công thức: t’ R = t R - t 0 Hình 1: Sắc đồ một chất 2.1.2. Tốc độ di chuyển tỷ đối của hai chất: Viện Kiểm nghiệm ATVSTP quốc gia 5 w Thời gian, phút w = chiều rộng pic đường nền t o Tín hiệu đến detector w Thời gian, phút w = chiều rộng pic đường nền t o Tín hiệu đến detector t R Tiê m Tài liệu tập huẩn Được đặc trưng bởi đại lượng thừa số chọn lọc hay hệ số chọn lọc α (selectivity factor), còn gọi là hệ số tách: α = ' ' RA RB t t Theo qui ước, B là chất bị lưu giữ mạnh hơn A vì vậy α luôn luôn lớn hơn 1. α còn được gọi là độ lưu giữ tỷ đối (relative retention). Để tách riêng hai chất, cần có α > 1, thường chọn α trong khoảng 1,05 đến 2,0. α càng lớn hai chất càng tách ra khỏi nhau, với α quá lớn thời gian phân tích sẽ kéo dài. 2.2 Sự doãng píc và hình dáng píc. Như trên đã trình bày, hình dáng của pic và sự doãng píc liên quan chặt chẽ đến sự tách sắc ký. Hình dáng lý tưởng của píc là píc đối xứng. Trên thực tế píc sắc ký thường chỉ gần đối xứng. Để đánh giá tính bất đối của píc người ta dùng hệ số bất đối AF (Asymmetry Factor). AF = b / a h b = phần chiều rộng phía sau của píc. a = phần chiều rộng phía trước của píc. a b w 1/10 = a+b = chiều rộng của píc được 10% h đo ở 1/10 chiều cao của píc. Hình 2 Tính bất đối của pic Một cột được nhồi tốt sẽ có AF trong khoảng 0,9 -1,1.(xác địnhAF với píc của các chất chuẩn). Cũng có thể dùng hệ số đối xứng SF (symmetry factor): SF= w 1/20 / 2a trong đó w 1/20 được đo ở 1/20 chiều cao của pic Sự doãng píc (peak spreading) hay sự mở rộng dải là một hiện tượng đặc biệt quan trọng trong sắc ký và được nghiên cứu qua thuyết về đĩa và thuyết động học. Sự doãng píc là kết quả của sự di chuyển nhanh chậm khác nhau của các phân tử của cùng một chất trong khi đi qua cột sắc ký. Các píc ra muộn bao giờ cũng tù hơn. Một cột sắc ký tốt (hiệu lực cao) sẽ cho các píc nhọn (ít bị doãng). Viện Kiểm nghiệm ATVSTP quốc gia 6 Tài liệu tập huẩn 2.3 - Hiệu lực của cột và đĩa lý thuyết: Hiệu lực của cột (column efficiency ) thường được đo bằng hai thông số: số đĩa lý thuyết N và chiều cao đĩa lý thuyết H (hay HETP). Ta có thể coi như cột sắc ký được chia thành N phần mỏng hay N lớp, ở mỗi lớp sự phân bố chất tan vào hai pha lại đạt đến một trạng thái cân bằng mới (sắc ký là một quá trình động, thực ra pha động chảy liên tục và thời gian không đủ để thiết lập trạng thái cân bằng). Những phần mỏng (hay lớp)giả định này được gọi là đĩa lý thuyết (vì không có thực). Nếu cột sắc ký có chiều dài là L thì ta có biểu thức: H = L / N Trong đó N: là số đĩa lý thuyết của cột. L : chiều dài cột H: là chiều cao của đĩa lý thuyết. Cột có N lớn (hay có H nhỏ) là cột có hiệu lực cao. a. Chiều cao đĩa lý thuyết và sự doãng píc. Ta có thể xác định H và N dựa vào thực nghiệm. Hình 3 Pic sắc ký (a) so sánh với đường cong phân bố chuẩn Gauss (b) Dựa vào sắc đồ (xem hình 3a) ta có thể tính số đĩa lý thuyết N N = 16 2         b R W t trong đó W b = chiều rộng píc ở đáy píc. hay N = 5,54 2 2/1         W t R với W 1/2 = chiều rộng píc đo ở nửa chiều cao của pic. Và từ đó tính H : H = L/N Qua đây ta thấy rõ : khi cột có hiệu lực cao (H nhỏ N lớn) thì W b nhỏ (độ doãng píc nhỏ). Viện Kiểm nghiệm ATVSTP quốc gia 7 t R Trục thời gian t R Trục thời gian Tín hiệu đo Tài liệu tập huẩn b. Độ phân giải và các yếu tố ảnh hưởng (sự tách hai chất). Độ phân giải (Resolution) là đại lượng đo mức độ tách hai chất trên một cột sắc ký. Xét trường hợp tách hai chất A và B (xem hình 4) Độ phân giải R S được định nghĩa như sau: R S = )(2/1 AB RARB WW tt + − hay R S = AB RARB WW tt ,2/1,2/1 )(18,1 + − trong đó W là chiều rộng pic ở đáy và W 1/2 là chiều rộng pic ở nửa chiều cao Hình 4 R S và sự tách 2 pic Với hai pic có độ lớn tương đương thì: R s = 0,75 hai pic không tách tốt, còn xen phủ nhau nhiều. R s = 1,0 hai pic tách khá tốt,còn xen phủ nhau 4% R s =1,5 hai pic tách gần hoàn toàn (chỉ xen phủ 0,3%) 2.4. Trường hợp tách nhiều chất, ảnh hưởng của thành phần dung môi và nhiệt độ. Khi có nhiều chất cần tách, trong sẵc ký lỏng thường có thể thay đổi thành phần dung môi để tách riêng được tất cả các chất trong hỗn hợp. Có thể phải thay đổi loại dung môi, cũng có thể chỉ cần thay đổi tỷ lệ giữa các thành phần. 2.4.1 Rửa giải đẳng dòng (isocratic elution, rửa giải thường) : Đó là cách dùng một hệ dung môi có thành phần xác định trong suốt quá trình phân tích. Hình 5 dưới đây cho sắc đồ của 4 lần phân tích 1 hỗn hợp 5 chất, mỗi lần dùng 1 pha động có thành phần khác. Viện Kiểm nghiệm ATVSTP quốc gia 8 Tài liệu tập huẩn Hình 5. ảnh hưởng của thành phần pha động (hỗn hợp methanol-nước) đến việc tách hỗn hợp 5 chất Hình 5 cho thấy việc thay đổi thành phần dung môi có thể ảnh hưởng đến quá trình tách mạnh mẽ như thế nào (thêm một ít nước vào Methanol 60% để có Methanol 50%: các pic 1, 2, 3, 4, 5 lần lượt được tách trên sắc đồ (c). Trong 4 hệ dung môi, hệ c (50% methanol) là thích hợp nhất vì các pic được tách tốt và chỉ cần 10 phút, hệ d tách rất tốt nhưng thời gian phân tích cần đến 20 phút. 2.4.2. Rửa giải gradient (gradient elution), chương trình hoá dung môi (solvent programming) Trong nhiều trường hợp, rửa giải đẳng dòng (dùng một hệ dung môi có thành phần không đổi) không giải được bài toán tách các chất. Trong những trường hợp này, người ta phải thay đổi thành phần dung môi ngay trong quá trình phân tích (chương trình hoá dung môi hay rửa giải gradient). Xem hình 6. Viện Kiểm nghiệm ATVSTP quốc gia 9 Tài liệu tập huẩn Hình 7 Rửa giải gradient cho phép tách hỗn hợp 10 chất, hình (b) Trên hình 7 ta thấy nếu rửa giải với một hệ dung môi có thành phần cố định (sắc đồ a) trong số 10 chất, thì 5 chất đầu không tách được (các pic quá gần nhau) trong khi 5 chất sau ra chậm và quá tù. Bằng phương pháp chương trình hoá dung môi (thành phần dung môi biến đổi dần trong quá trình chạy sắc ký, bắt đầu từ một hệ dung môi yếu hơn và kết thúc bằng một hệ mạnh hơn so với hệ dung môi dùng ở sắc đồ a) ta có sắc đồ b ở đó các pic được phân bố đều và tách rất tốt. Chương trình dung môi có thể chia làm nhiều đoạn với các kiểu biến đổi thành phần dung môi khác nhau. Để giải các bài toán tách nhiều chất với yêu cầu thời gian phân tích càng ngắn càng tốt, nếu không thể chọn một điều kiện sắc ký thích hợp, ta có thể dùng phương pháp biến đổi dần dần điều kiện sắc ký theo một chương trình nào đó. Trong sắc ký lỏng, hay dùng chương trình hoá dung môi (rửa giải gradient). 3. Máy sắc ký lỏng hiệu năng cao: Viện Kiểm nghiệm ATVSTP quốc gia 10 [...]... RhodamineRhodamin B trong hạt dưa và gia vị Viện Kiểm nghiệm ATVSTP quốc gia 32 Tài liệu tập huẩn PHẦN IV QUY TRÌNH KỸ THUẬT Xác < /b> định < /b> hàm < /b> lượng < /b> Rhodamin < /b> B trong hạt dưa và gia vị b ng kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu năng cao 1 Nguyên tắc RhodamineRhodamin B trong hạt dưa và gia vị được chiết ra khỏi nền mẫu với methanol, tách và định < /b> lượng < /b> trên hệ thống sắc ký lỏng hiệu năng cao với detector tử ngoại khả kiến ở b ớc sóng... phần b phận khuếch đại, computer máy tính và phần mềm xử lí số liệu, b phận ghi tín hiệu • Sắc ký lỏng hiệu năng cao bao gồm nhiều phương pháp có đặc thù riêng, đó là sắc ký hấp phụ, sắc ký lỏng pha liên kết; sắc ký trao đổi ion; sắc ký cặp ion, sắc ký điện di mao quản; sắc ký phân b lỏng- lỏng; sắc ký rây phân tử Phương pháp được sử dụng rộng rãi nhất là sắc ký lỏng pha liên kết 2.2 Pha tĩnh trong. .. trưng) và định < /b> lượng < /b> dựa vào việc đo mật độ (abundance) của các mảnh đặc trưng Việc phân tích b ng khối phổ 2 lần liên tiếp làm tăng độ nhạy và độ chính xác < /b> của kết quả Hệ thống sắc ký- khối phổ có thư viện phổ khối cho phép xác < /b> định < /b> nhiều chất chưa biết 4 Các phương pháp sắc ký 4.1 Sắc ký phân b (Partition chromatography) Gồm 2 loại: Phương pháp sắc ký lỏng- lỏng và sắc ký pha liên kết - Sắc ký lỏng- lỏng... 5×10-10 mol/L Viện Kiểm nghiệm ATVSTP quốc gia 31 Tài liệu tập huẩn Cục sức khỏe và an toàn lao động Mỹ OSHA đã ban hành phương pháp (PV2072) [35] xác < /b> định < /b> RhodamineRhodamin B trong không khí b ng sắc ký lỏng hiệu năng cao với detector UV và huỳnh quang Mẫu không khí được thu vào trong b nh polyvinyl chloride, chiết RhodamineRhodamin B với methanol và xác < /b> định < /b> b ng HPLC với các điều kiện như sau: - Cột:... Yellow 13065 30 Violet 6B 42640 Brown - Tại Việt nam, RhodamineRhodamin B không có trong “Danh mục các chất phụ gia được phép sử dụng trong thực phẩm ban hành kèm theo Quyết định < /b> 3742/2001/QĐ-BYT và cũng chưa có một con số cụ thể về giới hạn cho phép của RhodamineRhodamin B trong hạt dưa và gia vị 3.5 Một số phương pháp xác < /b> định < /b> RhodamineRhodamin B Viện Kiểm nghiệm ATVSTP quốc gia 30 Tài liệu tập huẩn... RhodamineRhodamin B lại được tìm thấy trong trong hàng loạt mẫu gia vị, từ b t điều xay, b t sa tế, cho đến các loại gia vị nấu b kho, nấu thịt hầm ragu Tính đến tháng 01/2010, trong số các mẫu hạt dưa và ớt b t được xét nghiệm tại Viện Kiểm nghiệm ATVSTP quốc gia thì có tới 80% mẫu dương tính với RhodamineRhodamin B RhodamineRhodamin B không chỉ có trong hạt dưa, ớt b t mà có nguy cơ nhiễm trong hầu hết các loại... chuẩn b sẵn ở (3.1.3) Xác < /b> định < /b> diện tích hoặc chiều cao pic của các mẫu chuẩn, dựng đường chuẩn 5.5 B m mẫu B m mẫu với cùng điều kiện như b m chuẩn Dựa vào đường chuẩn, xác < /b> định < /b> hàm < /b> lượng < /b> RhodamineRhodamin B có trong mẫu Nếu diện tích pic hoặc chiều cao pic của mẫu lớn hơn diện tích pic hoặc chiều cao pic của chuẩn cao nhất, thì phải tiến hành pha loãng mẫu và b m lại 6 Tính toán kết quả Hàm < /b> lượng < /b> Rhodamin.< /b> .. để cho 2 chất A và B tách ra khỏi nhau thì cực tiểu của pic A nằm gần nhất vị trí cực đại của B, và để tách hoàn toàn rõ ràng thì cực tiểu của pic phía sau B phải kề với cực tiểu phía sau pic A, tức là RAB = WA + WB 2.6 Phân tích định < /b> tính và định < /b> lượng < /b> b ng HPLC 2.6.1 Phân tích định < /b> tính Một trong các đại lượng < /b> đặc trưng cho sự tách sắc ký của các chất trong một hệ pha đã chọn là thời gian lưu của các... 546nm) (xác < /b> nhận lại b ng detector huỳnh quang với b ớc sóng kích hoạt λ ex = 250nm và b ớc sóng phát xạ λ em = 550nm) 2 Phạm vi áp dụng Một số loại thực phẩm: Hạt dưa, ớt b t, tương ớt, muối gia vị 3 Thuốc thử 3.1 RhodamineRhodamin B, tinh khiết (≥ 97%) 3.1.1 Dung dịch chuẩn gốc, 1000 µg/mL Cân 0,1g Rhodamin < /b> B tinh khiết (3.1), chính xác < /b> đến 0,0001g cho vào b nh định < /b> mức 100 ml (4.11) Hòa tan và pha... ở b rung siêu âm trong 5 phút, ly tâm ở máy ly tâm (4.5) trong 5 phút Gạn dịch trong vào b nh định < /b> mức 100 ml (4.11) B được chiết lặp hai lần nữa, mỗi lần 30 ml metanolmethanol và để ở b điều nhiệt 30 phút Gộp toàn b dịch chiết vào b nh định < /b> mức 100 ml ở trên Định mức đến vạch b ng metanolmethanol Lọc qua giấy lọc thô (4.12), và qua màng lọc (4.15) trước khi b m vào máy HPLC 5.3 Điều kiện chạy sắc . thuật: Xác định hàm lượng Rhodamine B trong hạt dưa và gia vị b ng sắc ký lỏng hiệu năng cao . Viện Kiểm nghiệm ATVSTP quốc gia 2 Tài liệu tập huẩn SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO HPLC PGS Phạm gia. phân tử b di chuyển chậm. Các phương pháp sắc ký khác: sắc ký ái lực, sắc ký điện… Ghi chú: Trong sắc ký khí, chủ yếu là sắc ký phân b và sắc ký hấp phụ 2. Cơ sở lý thuyết sắc ký (Giới thiệu. pháp có đặc thù riêng, đó là sắc ký hấp phụ, sắc ký lỏng pha liên kết; sắc ký trao đổi ion; sắc ký cặp ion, sắc ký điện di mao quản; sắc ký phân b lỏng- lỏng; sắc ký rây phân tử Phương pháp