BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM KHOA : CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM MƠN: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM Bài báo cáo PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH Tổng số VI KhuẩN HIẾU KHÍ Determination Aerobic Colony (Plate) Count GVHD: Nguyễn Thị Mỹ Lệ Nhóm Danh sách nhóm  Nguyễn Thị Minh Trang  Nguyễn Như Tuyết  Nguyễn Ngọc Thùy 2005100091 2005100310 2005100384  Biện Thị Hồng Thắm 2005100062  Lâm Hoàng Quân 2005100083  Trịnh Đình Trung Trực 2005100019 ỨNG DỤNG NGUYÊN TẮC NGUYÊN LIỆU & THIẾT BỊ CHUYÊN DỤNG CÁCH TIẾN HÀNH ỨNG DỤNG Phương pháp này được áp dụng cho việc đếm số vi khuẩn hiếu khí hiện diện mẫu thực phẩm : Vi khuẩn ưa lạnh Vi khuẩn ưa ấm Vi khuẩn ưa nhiệt NGUYÊN TẮC Chỉ số ACC (hay APC) đánh giá số lượng vi sinh vật hiếu khí hiện diện mẫu thực phẩm biểu diễn dưới dạng số đơn vị hình thành khuẩn lạc (CFU) một đơn vị thực phẩm (g, ml) ACC = CFU/g (ml) NGUYÊN TẮC Mẫu thực phẩm  trộn vào môi trường Agar (đặc trưng cho VSV mẫu thực phẩm đó)  ni cấy dưới điều kiện nhiệt độ và thời gian thích hợp  mỗi vi khuẩn hiếu khí hiện diện sẽ nhân lên và sinh số khuẩn lạc khả kiến có thể đếm được Vi khuẩn ưa lạnh: sinh trưởng tối ưu ở nhiệt độ < 15oC (0 – 20oC) Vi khuẩn ưa ấm: sinh trưởng tối ưu ở nhiệt độ giữa 20 - 45oC Vi kh̉n ưa nóng: sinh trưởng tới ưu ở nhiệt độ > 45oC NGUYÊN LIỆU & THIẾT BỊ CHUN DỤNG + Mơi trường PCA + Chất hịa tan: đệm BPB KH2PO4 Nước cất  u chỉnh pH Điề 34g 500ml = 7.2 với dung dịch NaOH 1N  nh mức lên thể tích 1lít bằng nước cất Đị  trùng tại nhiệt độ 121oC 15 phút Vô  o quản tủ lạnh Bả + Natri 2,3,5 triphenyltetrazolium clorua (0,1%) (không bắt buộc) Kết 25 < Khuẩn lạc < 250  Có thể đếm Kết nhiều để đếm (TNTC) Kết 25 < Khuẩn lạc < 250 Có thể đếm Đĩa 10-2 10-3 Đĩa Đĩa 10-4 10-5 Đĩa Khuẩn lạc >< Phần tử ảnh hưởng Các phần tử thực phẩm thịt, bột sữa,… thường ảnh hưởng đến việc đếm khuẩn lạc đĩa Điều này có thể được loại bỏ bằng cách đổ song song một đĩa khác với từng nồng độ mà có chứa các phần tử ảnh hưởng và kiểm soát chúng điều kiện lạnh để so sánh quá trình đếm 2ml dung dịch đệm Natri 2,3,5 triphenyltetrazolium clorua (0,1%)  Dung dịch bao phủ toàn bộ đĩa (nhiệt độ phòng, 3h) Các vi khuẩn sẽ làm giảm lượng chất chỉ thị hình thành chất formanzan, chất này nhuộm những khuẩn lạc đơn thành màu đỏ, và hỗ trợ cho việc phân biệt với các phần tử thực phẩm Báo cáo kết thí nghiệm Cơng thức : N = A x D N : số đơn vị khuẩn lạc g(ml) mẫu A : số khuẩn lạc trung bình mỡi đĩa D : hệ số pha loãng tương ứng Báo cáo kết thí nghiệm Tính số khuẩn lạc trung bình đếm Tính số lượng VSV hiếu khí (ACC or APC ) Nguyên tắc ghi kết Ước lượng VSV hiếu khí (EAPC) Tính số VSV hiếu khí (ACC or APC ) Cơng thức : N = A x D N : số đơn vị khuẩn lạc g(ml) mẫu A : số khuẩn lạc trung bình mỡi đĩa D : hệ số pha loãng tương ứng Nguyên tắc ghi kết  Kết quả làm tròn đến chữ số có nghĩa C  hỉ lại chữ số đầu tiên bên tay trái : Ví dụ: 11,300 CFU/g báo cáo là 1,1 x 104 CFU/g 235,000 CFU/g báo cáo là 2,4 x 105 CFU/g Ước lượng VSV hiếu khí (EAPC)  Kết quả làm tròn đến chữ số có nghĩa C  hỉ lại chữ số đầu tiên bên tay trái : Ví dụ: 11,300 CFU/g báo cáo là 1,1 x 104 CFU/g 235,000 CFU/g báo cáo là 2,4 x 105 CFU/g Ví dụ kết bất thường Độ pha loãng Khuẩn lạc 1:100 1:1000 EAPC/ml (g) Mẫu 18 1.900 Mẫu 0 < 100 ( 600.000 Ví dụ kết bất thường TNTC: Quá nhiều để đếm EAPC: Dự đoán số vi sinh vật hiếu khí LA: Sự cố phịng thí nghiệm SPR: Mọc loang (a): Dựa 1/4 đĩa Ví dụ kết bất thường 5.2 Trường hợp số đếm thấp Trường hợp có đĩa (mẫu thử huyền phù ban đầu dung dịch pha lỗng thứ nhất) có chứa 10 khuẩn lạc - Nếu đĩa chứa 10 khuẩn lạc, có khuẩn lạc, tính kết theo trường hợp chung báo cáo kết số ước tính x vi sinh vật ml (sản phẩm lỏng) gam (sản phẩm dạng khác) - Nếu tổng số từ đến 1, kết ghi sau: "Có mặt vi sinh vật nhỏ (4xd) gam ml" Trường hợp đĩa (mẫu thử huyền phù ban đầu dung dịch pha loãng thứ nhất) không chứa khuẩn lạc - Nếu đĩa mẫu thử huyền phù ban đầu từ độ pha lỗng thứ cấy giữ lại khơng chứa khuẩn lạc nào, biểu thị kết sau: “ít 1/d vi sinh vật milit (sản phẩm dạng lỏng) 1/d vi sinh vật gam (sản phẩm dạng khác)’’ ... chứa 10 khuẩn lạc - Nếu đĩa chứa 10 khuẩn lạc, có khuẩn lạc, tính kết theo trường hợp chung báo cáo kết số ước tính x vi sinh vật ml (sản phẩm lỏng) gam (sản phẩm dạng khác) - Nếu tổng số từ đến... kết Ước lượng VSV hiếu khí (EAPC) Tính số VSV hiếu khí (ACC or APC ) Cơng thức : N = A x D N : số đơn vi? ? khuẩn lạc g(ml) mẫu A : số khuẩn lạc trung bình mỡi đĩa D : hệ số pha loãng tương... số đơn vi? ? khuẩn lạc g(ml) mẫu A : số khuẩn lạc trung bình mỡi đĩa D : hệ số pha loãng tương ứng 8 Báo cáo kết thí nghiệm Tính số khuẩn lạc trung bình đếm Tính số lượng VSV hiếu khí (ACC