1 SỞ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TP. HỒ CHÍ MINH THÀNH ĐOÀN TP. HỒ CHÍ MINH CHƢƠNG TRÌNH VƢỜN ƢƠM SÁNG TẠO KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẺ  *  B B Á Á O O C C Á Á O O N N G G H H I I Ệ Ệ M M T T H H U U : MÃ CHÍ THÀNH : TRUNG TÂM PHÁT TRIỂN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẺ – tháng 02-2012 2 TÓM TẮT ĐỀ TÀI Nam đề tài Stephania cambodica Campuchia) . STUDY ON THE CHEMICAL CONSTITUENTS OF STEPHANIA SPP. AT AN GIANG MOUNTAIN The tuber of Stephania spp. (Menispermaceae) is widely used in traditional medicine for the treatment of fever, stomachache, dysentery and venomous snakebites. Many investigations in Stephania species concentrated in constituent of alkaloids which have proven that the alkaloid exerts diverse pharmacological effects include anti-inflammatory, antiallergic, sedative and reduce hypertension, anaesthetic, antimalaria, cytotoxicity. In South of Vietnam the tuber of Stephania cambodica Gagnep. (Menispermaceae) is used for treatment of insomnia, anxious…. Although it is used for a long time, the chemical constituents of this plant are still unknown. In this paper, the alkaloids constituents from tuber of Stephania cambodica will be reported. The aim of this study was investigated chemicals constituent of tuber Stephania cambodica by extraction, isolation give pure compound for further pharmacological studies or practical therapeutic of those compound. 3 TÓM TẮT ĐỀ TÀI 2 3 5 6 6 6 10 10 1.1. Đặc điểm về mặt thực vật học 10 1.2. Phân bố, sinh thái 14 15 15 2.1.1. Alcaloid khung protoberberin 15 2.1.2. Alcaloid khung aporphin 16 2.1.3. Alcaloid khung proaporphin 17 2.1.4. Alcaloid khung benzylisoquinolein 18 2.1.5. Alcaloid khung bisbenzylisoquinolein 18 2.1.6. Alcaloid khung hasubanan 20 2.1.7. Alcaloid khung morphinan 21 2.1.8. Alcaloid khung eribidin (benzazonin) 23 23 23 24 25 25 inh trung ƣơng 25 26 26 27 27 28 28 28 28 31 31 31 31 31 32 32 32 2.2.1. Phƣơng pháp định tính và định lƣợng sơ bộ thành phần alkaloid 32 2.2.2. Phƣơng pháp chiết xuất 32 2.2.3. Phƣơng pháp chiết phân bố lỏng – lỏng 32 2.2.4 33 33 33 2.2.5. Phƣơng pháp kết tinh phân đoạn 33 2.2.6. Phƣơng pháp xác định cấu trúc các chất 33 35 35 4 35 1.2. Xác định loài mẫu Bình vôi nghiên cứu 36 37 38 2.1. Định tính thành phần alkaloid 38 2.1.1. Định tính bằng hoá học 38 2.1.2. Định tính bằng sắc ký 38 39 2.2.1. Khảo sát các phƣơng pháp chiết 39 (phƣơng pháp A) 40 2 SO 4 1% (phƣơng pháp B) 41 2 SO 4 1% (phƣơng pháp C) 41 42 2.3. Chiết xuất và tách các phân đoạn alkaloid từ Bình vôi Campuchia 43 2-3 44 7 44 9-10 44 2.4. Phân lập các alkaloid 45 aloid từ cao A 45 3 A2 46 2.4.1.2. Phân lập chất 4 từ phân đoạn A3 47 48 48 49 2.5. Xác định cấu trúc các alkaloid phân lập đƣợc 50 2.5.1. Xác định cấu trúc hợp chất 3 50 2.5.2. Xác định cấu trúc hợp chất 4 51 2.5.3. Xác định cấu trúc hợp chất 6 53 2.5.4. Xác định cấu trúc hợp chất 7 55 58 58 58 60 PHỤ LỤC 1 63 Phổ khối của rotundin (l-tetrahydropalmatin) 63 PHỤ LỤC 2 63 Phổ khối của crebanin 63 Phổ 1 H-NMR của crebanin (CDCl 3 , 500 MHz) 64 Phổ 13 C-NMR của crebanin (CDCl 3 , 125 MHz) 64 Phổ DEPT của crebanin 65 Phổ COSY của crebanin 65 Phổ HMBC của crebanin 66 Phổ HSQC của crebanin 67 PHỤ LỤC 3 68 Phổ khối của palmatin 68 Phổ 1 H-NMR của palmatin (CD 3 OD, 500 MHz) 68 Phổ 13 C-NMR của palmatin (CD 3 OD, 125 MHz) 69 Phổ DEPT của palmatin 69 Phổ COSY của palmatin 70 Phổ HSQC của palmatin 71 Phổ HMBC của palmatin 72 PHỤ LỤC 4 73 Phổ khối của jatrorrhizin 73 Phổ 1 H-NMR của jatrorrhizin (CD 3 OD, 500 MHz) 73 Phổ 13 C-NMR của jatrorrhizin (CD 3 OD, 125 MHz) 74 5 Phổ DEPT của jatrorrhizin 74 Phổ HMBC của jatrorrhizin 75 Phổ HSQC của jatrorrhizin 76 Phổ NOESY của jatrorrhizin 77 Phổ NOESY của jatrorrhizin 77 S. Stephania STT cs. NO Nitric oxide oxit nitơ PGE 2 Prostaglandin E 2 Prostaglandin E 2 COX-1 Cyclooxygenase 1 Cyclooxygenase 1 COX-2 Cyclooxygenase 2 Cyclooxygenase 2 DĐVN III CHCl 3 Cloroform Cloroform MeOH Methanol Methanol n-BuOH n-butanol n-butanol UV Ultra – Violet AcOH Acid acetic Acid acetic SKLM VLC Vacuum Liquid Chromatoghraphy MS Mass spectroscopy Phổ khối IR Infrared Phổ hồng ngoại 1D và 2D 1 Dimension and 2 Dimension 1 chiều và 2 chiều HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation HMBC Heteronuclear Multiple Bond Coherence NMR Nuclear magnetic resonance Phổ cộng hƣởng từ hạt nhân NOESY Nuclear overhauser Enhancement Spectroscopy DEPT Distortionless Enhancemant by Polarization Transfer COSY Correlation Spectroscopy 6 Trang Bản Stephania 12 S. cambodica Gagnep. Menispermaceae 36 38 42 Bảng 5: Dữ liệu phổ của chất 4 so sánh với crebanin 52 Bảng 6: Dữ liệu phổ của chất 6 so sánh với palmatin 54 Bảng 7: 56 Trang 35 35 36 Hình 4: Cụm hoa 36 36 38 Hình 7: Sắc ký đồ của cao chiết toàn phần so sánh với rotundin chuẩn 39 – aceton (1 : 1) 46 Hình 9: Sắc ký đồ của chất 3 với hệ dung môi CHCl 3 – MeOH (13 : 1) 46 – ethyl acetat (1 : 4) 47 Hình 11: Sắc ký đồ của chất 4 với 2 hệ dung môi 47 Hình 12: Sắc ký đồ tinh thể 6 và 7 49 Hình 13: Sắc ký đồ của tinh thể 8 50 Hình 14: Cấu trúc của rotundin 50 Hình 15: Cấu trúc và các tƣơng tác của hợp chất 4 53 54 56 Trang 40 41 Sơ 41 45 7 . . , h . Chi Stephania (chi Bình vôi, chi Lõi vôi vôi. vôi nhƣ S. rotunda Lour., S. pierrei Diels., S. dielsiana C.Y.Wu, S. sinica Diels. S. hernandiifolia (Willd.) Walp. thƣờng đƣợc dùng ở Việt Nam chữa hen suyễn, đau đầu, mất ngủ, đau dạ dày, kiết lỵ, sốt rét, tiểu tiện khó, chữa viêm khớp, viêm họng, rắn cắn [1,2,3,4,5,6]. , dehydroremerin, 8 tetrahydropalmatin, cepharanthin, xy , roemerin có [3,5]… Giang, Kiên Giang Bình . Trong phạm vi nghiên cứu về chi Stephania, Giang đề tài mang tên ― An Giang‖. : – Giang : . . – . 9 10 CHƢƠNG 1: Chi Stephania Lour. t . Th : của chi Stephania Giới (regnum): Plantae Ngành (divisio): Magnoliophyta Lớp (class): Magnoliopsida Bộ (ordo): Ranunculales Họ (familia): Menispermaceae Chi (genus): Stephania Lour. 1.1. Đặc điểm về mặt thực vật học Chi vôi . [7 : – Stephania bancroftii FM Bailey – Stephania cambodica Gagnep.: Bình vôi Campuchia – Stephania cepharantha Hayata: Kim tuyến điếu ô quy, hán phòng kỷ – Stephania dielsiana C.Y.Wu: Củ dòm, củ ngỗng, củ gà ấp – Stephania elegans Hook.f. & Thomson [...]... 5: Cụm h 1.2 Xác định loài mẫu Bình vôi nghiên cứu Việc xác định tên loài của mẫu nghiên cứu chủ yếu dựa vào đặc điểm hình thái của cây gồm thân, các đặc điểm địa lý phân bố của các loài So sánh mẫu Bình vôi nghiên cứu với các tài liệu mô tả đƣợc trình bày ở Bảng 3 Bảng 2: So mẫu Bình vôi nghiên cứu vôi S cambodica Gagnep Menispermaceae S cambodica Gagnep 1938 Mẫu Bình vôi nghiên cứu Menispermaceae [3,9]...– Stephania glabra (Roxb.) Miers: Bình vôi – Stephania hernandiifolia (Willd.) Walp.: Dây Lõi tiền – Stephania hispidula Yamamoto: – Stephania japonica (Thunb.) Miers: Dây Lõi tiền, Thiên kim đằng, dây mối – Stephania longa Lour.: Dây Lõi – Stephania pierrei Diels.: Bình vôi, dây Đồng tiền – Stephania rotunda Lour.: Bình vôi, củ một, dây mối trơn – Stephania sinica Diels.: Bình vôi – Stephania suberosa... việc ra lá non trên cá – Để có 1 củ Bình vôi nặng 3-5 kg cây phải có độ tuổi khoảng 10 năm Nam, loài S sinica Diels có vùng phân bố rộng rãi nhất ở các tỉnh phía Bắc, nhất là Thanh Hóa, Ninh Bình, Hà Nam, Hòa Bình và các tỉnh khác ở vùng Đông Bắc cũng nhƣ Tây Bắc Loài này còn có ở Trung Quốc và Lào Trữ lƣợng Bình vôi ở Việt Nam trƣớc đây rất phong phú Gần 10 năm trở lại đây, do bị khai thác ồ ạt bán... tetrandra ở , Ngô Vân Thu C S rotunda Lour S glabra Stephania – Stephania japonica – , dây sƣơng sâm Stephania hernandiifolia Spreng.: Dây – [1]: Stephania rotunda 13 – Stephania pierrei – Stephania longa Lour 1.2 Phân bố, sinh thái Stephania Lour là chi có khoảng 45 loài dây leo, thƣờng xanh hoặc rụng lá, trong đó nhiều loài có rễ phình to thành củ Ở Malaysia, có 12 hoặc 13 loài, Trung Quốc hơn 40 13 loài[ 4],... bị can kiệt nhanh chóng Vấn đề bảo vệ và khai thác hợp lý các loài bình vôi ở Việt Nam đang là vấn đề cấp thiết hiện nay [1,4,5] Trong đó Sách đỏ Việt Nam đã đƣa một số loài vào danh sách cần đƣợc bảo vệ nghiêm ngặt để duy trì nguồn gen quý hiếm [9] Cụ thể với một số loài: – Stephania cepharantha Hayata (S tetrandra S Moore var glabra Maxim, S disciflora Hand - Mazz.) - Mức độ đe dọa: Bậc V – Stephania... L.L.Forman: – Stephania tetrandra S Moore: Thạch thiềm thừ, phòng kỷ, phấn phòng kỷ, hán n cơ đốc phòng kỷ, đảo địa củng – Stephania venosa (Blume) Spreng Năm 1999 Phạm Hoàng Hộ mô tả một số loài thƣờng thấy ở Việt Nam trong đó có 7 loài [8]: – Stephania rotunda Lour – Stephania pierrei Diels – Stephania longa Lour – Stephania venosa (Blume) Spreng – Stephania sinica Diels.: Bình vôi – Stephania japonica... Seco-obaberin Bisnorobamegin 19 H O H3C N H3CO OCH3 H CO 3 O O H N H CH3 H3C N N HO H O O O OCH3 H3CO Cepharanthin Stephasubin H3CO H3C N N O H H CH3 O OCH3 O 2-N-Methyltelobin 2.1.6 Alcaloid khung hasubanan Stephania [10]: – Hasubanan-6-on – Hasubanan-8-on – 8,10-Epoxyhasubanan – Dehydrohasubanan N O Hasubanan alkaloid S abyssinica O N H3C O O HO OCH3 Oxoxylobin H3 C N N O HO OMe OH HO O Stephabolin O OCH3... Stephania kwangsiensis H S Lo - Mức độ đe dọa: Bậc E – Stephania brachyandra Diels - Mức độ đe dọa: Bậc R – Stephania dielsiana C Y Wu - Mức độ đe dọa: Bậc V Stephania Stephania : Benzylisoquinolin, bisbenzylisoquinolin, protoberberin, aporphin, proaporphin, hasubanan, morphinan, dibenzazonin [5] 2.1.1 Alcaloid khung protoberberin Stephania ), Tinospora ), Fibraurea protoberberin: Abuta, Anamirta, Anisocycla,... Trung Quốc hơn 40 13 loài[ 4], trong đó 8-9 loài có rễ củ to thƣờng đƣợc gọi chung là ―củ Bình vôi Bình vôi là cây ƣa sáng, khi còn nhỏ cây có thể chịu bóng, thƣờng mọc trong các quần thể cây bụi và dây leo nhỏ ở rừng núi đá vôi ẩm Độ cao phân bố phổ biến ở Việt Nam từ vài chục đến vài trăm mét Chƣa phát hiện thấy cây ở độ cao trên 1000 m[5] Hằng năm, Bình vôi có hiện tƣợng rụng lá vào cuối thu, đầu... stepharotin, kuduranin l-tetrahydropalmatin nh vôi S sinica Diels Nam Ninh 1,13% Stephania – S kwangsiensis l-tetrahydropalmatin, [5]: palmatin, dihydropalmatin, stepharin – S brachyandra l-tetrahydropalmatin, cepharanthin, cycleanin, dehydrodicentrin, dicentrin, stepharin, sinoacutin – S hainanensis l-tetrahydropalmatin, crebain, oxocrebain – S cepharantha berbamin, , isotetrandrin, cycleanin, cepharanolin, . tetrahydropalmatin, cepharanthin, xy , roemerin có [3,5]… Giang, Kiên Giang Bình . Trong phạm vi nghiên cứu về chi Stephania, Giang đề tài mang tên ― An Giang . : – Giang : . . – . . crebanin 65 Phổ COSY của crebanin 65 Phổ HMBC của crebanin 66 Phổ HSQC của crebanin 67 PHỤ LỤC 3 68 Phổ khối của palmatin 68 Phổ 1 H-NMR của palmatin (CD 3 OD, 500 MHz) 68 Phổ 13 C-NMR của. (genus): Stephania Lour. 1.1. Đặc điểm về mặt thực vật học Chi vôi . [7 : – Stephania bancroftii FM Bailey – Stephania cambodica Gagnep.: Bình vôi Campuchia – Stephania cepharantha Hayata: