B GIÁO DC & ÀO TO B Y T VINăDCăLIU ==oo0oo== PHMăVNăVNG NGHIÊNăCUăTHĨNHăPHNăHịAăHCă VĨăMTăSăTÁCăDNGăSINHăHCăCAă CÂYăNăKIMă(BIDENS PILOSA L., HăASTERACEAE)ă CHUYÊN NGÀNH: DC HC C TRUYN Mà S : 62.72.04.06 TịMăTTăLUNăÁNăTINăSăDCăHC HĨăNIă- 2014 CỌNGăTRỊNHăHOĨNăTHĨNHăTI: Vin Dc liu Hc vin Quân Y Vin Hóa Sinh Bin – Vin Hàn Lâm Khoa hc và Công ngh Vit Nam Trng i hc Dc Hà Ni Ngiăhngădnăkhoaăhc:ă 1. GS.TS. Phm Thanh K 2. PGS. TS. Nguyn Th Bích Thu Phnăbină1: Phnăbină2: Phnăbină3: Lun án s đc bo v trc hi đng chm lun án cp Vin t chc ti Vin Dc liu. Vào hi gi, ngày tháng nm 2015 CóăthătìmăđcăLunăánăti: - Th vin Quc gia Hà Ni - Th vin Vin Dc liu GIIăTHIUăLUNăÁN 1. Tínhăcpăthităcaălunăán Cây n kim thuc chi Song nha (Bidens L.), là cây mc hoang  khp nc ta t min núi, trung du đn đng bng và có  nhiu nc trên th gii nh: Trung Quc, Hàn Quc, Nht Bn, Brazilầ.vv. ây là loài cây mc quanh nm, sc sinh sn nhanh và đc coi nh loài “c di” [6], [15], [19]. T lâu, cây n kim đư đc nhân dân nhiu nc trên th gii s dng đ điu tr các bnh nh mn nga, vàng da, ung nht, viêm loét d dàyầ  Vit Nam, theo tài liu ca Võ Vn Chi, cây n kim có v đng, tính mát, có tác dng thanh nhit gii đc, ch t kh , hot huyt [6]. Trên th gii, cây n kim đc các nhà khoa hc quan tâm nghiên cu và đư có nhiu công trình công b v thành phn hóa hc cng nh tác dng sinh hc ca dc liu này. Cây n kim đư đc chng minh có tác dng: Chng viêm [27], [37], [57], [58], chng oxy hóa [39], [73]; kháng ung th [34], [69-72]; chng đái tháo đng [33], [41], [114]; kháng khun, kháng nm [25], [27]; kháng ký sinh trùng st rét và điu hoà min dch [27]. Gn đây, các nghiên cu v cây n kim tp trung vào tác dng điu tr tiu đng [131] và c ch t bào ung th [27]. Cho đn nay, các công trình nghiên cu đư công b v thành phn hóa hc cng nh tác dng sinh hc ca cây n kim mc hoang  Vit Nam còn rt ít, do đó đ tài: “NghiênăcuăthƠnhăphnăhóaăhcăvƠă mtăsătácădngăsinhăhcăcaăcơyănăkimă(Bidens pilosa L.,ăhăAsteraceae)” đư đc thc hin vi 2 mc tiêu chính: 2.ăMcătiêuăcaăLunăán 1. Xác đnh thành phn hóa hc ca cây n kim. 2. Th đc tính cp, mt s tác dng sinh hc ca dch chit và cht tinh khit đc phân lp t cây n kim.  đt đc mc tiêu đ ra, Lun án đư đc tin hành vi các ni dung sau:  VăthƠnhăphnăhóaăhc: - nh tính các nhóm cht hu c chính trong mu nghiên cu; - Xác đnh các nguyên t vô c trong mu nghiên cu; - nh lng và phân tích thành phn tinh du lá; - Chit xut, phân lp và nhn dng các cht phân lp đc.  VăthăđcătínhăvƠătácădngăsinhăhc: - Th đc tính cp ca cao lng r và phn trên mt đt cây n kim; - Th tác dng kháng khun, kháng nm ca tinh du lá; - Th tác dng chng viêm cp và mn ca cao lng r và phn trên mt đt cây n kim; - Th tác dng bo v gan ca flavonoid toàn phn chit t phn trên mt đt cây n kim; - Th tác dng gây đc t bào ung th ca các cht phân lp đc. 3.ăNhngăđóngăgópămiăcaăLunăán 3.1. V thành phn hóa hc - ư xác đnh phn trên mt trên mt đt cây n kim có: alcaloid, saponin, flavonoid, acid hu c, carotenoid, acid amin, tanin, phytosterol, tinh du, đng kh và cht béo; trong r có: alcaloid, saponin, flavonoid, acid amin, tinh du, đng kh và cht béo. - ư xác đnh trong phn trên mt đt và r cây n kim có 34 nguyên t vô c. Trong đó, nguyên t có hàm lng cao nht là K, sau đó đn Mg, P, Ca và Fe, nhng nguyên t đc nh As, Hg, Cd, Pb đu nm trong gii hn cho phép. - ư xác đnh hàm lng tinh du trong lá n kim là 0,18% (tt/kl) tính theo khi lng dc liu ti. Trong tinh du có 36 hp cht, thành phn chính là 1-phenyl-hepta-1,3,5 triyn (74,46%). - ư phân lp đc 17 hp cht, có 6 hp cht t phn trên mt đt và 11 hp cht t r cây n kim. Trong đó: + Có 2ă chtă mi là: Natri 3,5-dimethoxy-4-O--L-rhamnosyl-benzoat (BP19) và (R,R)-4- (hydroxymethyl)-5-[3-methoxy-4-hydroxyphenyl]-2,2-dimethyl-1,3-dioxolan (đ ngh gi tên là Pilosolane) (BP20); + Có 11ăchtălnăđuăcôngăbăcóătrongăchiăBidens: (1R, 2R)-guaiacyl glycerol (BP1); Scopolin (BP2); Benzyl-O-  -D-glucopyranosid (BP3); D-threo-guaiacylglycerol-8-O--D-glucopyranosid (BP4); Maltol 3-O--D-glucopyranosid (BP5); Ficuscarpanosid B (BP6); 4-allyl-2,6-dimethoxy phenol-1-O--D- glucopyranosid (BP13); 3-[(4'-hydoxy-3'-methoxyphenyl) propan-1,2 diol-2-O--D-glucopyranosid (BP15); (3S,6S)-6,7-dihydroxy-6,7-dihydrolinalool (BP17); 3-(4'-hydroxy-3'-methoxyphenyl) propan-1,2-diol (BP18); Daucosterol (BP22); + Có 2ăchtă lnă đuă tiênă phơnă lpă tă loƠiă Bidens pilosa L.: Quercetin-3--L-arabinofuranosid (BP7); Quercetin-3-  -D-galactopyranosid (BP8); + Có 2 cht trùng vi mt s tác gi nc ngoài đư phân lp t loài Bidens pilosa L.: 7-phenyl-2- hepten-4,6-diyn-1-ol (BP11); Stigmasterol (BP23). Các kt qu nghiên cu v thành phn hóa hc là nhng công b ln đu tiên v thành phn hóa hc ca cây n kim (Bidens pilosa L.) mc hoang  Vit Nam. 3.2. V tác dng sinh hc Các kt qu nghiên cu đu là nhng thông báo đu tiên v tác dng sinh hc ca loài Bidens pilosa L. mc hoang  Vit Nam. - Th đc tính cp ca phn trên mt đt và r cây n kim  mc liu 160 g dc liu/kg chut không thy biu hin ng đc. -  liu 160g dc liu/kg chut, cao gp 56 ln so vi liu dùng cho ngi, phn trên mt đt và r cây n kim không gây ra các biu hin bt thng và không gây cht chut nht trng trong 72 gi theo dõi, do đó không xác đnh đc LD 50 . -  liu 10g/kg và 20g/kg, r cây n kim có tác dng chng viêm cp trên c 2 mô hình gây phù bàn chân chut và mô hình gây dch r viêm. ng thi có tác dng gim đau trên mô hình gây đau bng acid acetic, không có tác dng trên mô hình gây đau bng mâm nóng. -  liu 10g/kg và 20g/kg, phn trên mt đt cây n kim có tác dng chng viêm cp trên mô hình gây dch r viêm. -  liu 7,5g/kg và 15g/kg, c phn trên mt đt cây và r cây n kim đu có tác dng chng viêm mn. -  liu 60 mg/kg và 120 mg/kg, flavonoid toàn phn chit t phn trên mt đt cây n kim có tác dng bo v gan trên mô hình gây đc bng CCl 4 thông qua tác dng hn ch tng hot đ ALT, AST và hn ch tn thng c cu trúc đi th và vi th gan; đng thi làm tng nng đ GSH và gim đc MDA trong gan. - Th tác dng c ch t bào ung th in vitro 17 hp cht t cây n kim cho thy: Có 9 cht tác dng yu đi vi dòng t bào ung th máu (HL-60) (IC 50 : 18,5 – 85,7 µg/ml); có 3 cht BP20, BP2 và BP23 có tác dng gây đc đi vi t bào ung th vú (MCF-7) vi IC 50 tng ng là 45,8 µg/ml, 114,8 µg/ml và 185,9 µg/ml; Có 3 cht BP7, BP8 và BP23 có tác dng đi dòng t bào ung th phi (A549) vi IC 50 tng ng là 36,5 µg/ml, 68,1 µg/ml và 183,6 µg/ml. c bit 2 cht mi là BP19 và BP20 đu có c ch đi vi dòng t bào ung th máu (HL-60) vi IC 50 tng ng là 58,6 µg/ml, 25,3 µg/ml. 4.ăụănghaăcaăLunăán - Kt qu phân tích các nguyên t vô c trong cây n kim cho thy trong cây có các nguyên t vi lng có tác dng tt cho sc khe nh Mg, Mn, Ge, Fe, Ca, Zn , đng thi cng cho thy trong cây có các kim loi nng nh Pb, Hg, As, Cd, nhng hàm lng  gii hn cho phép theo qui đnh ca WHO. - Kt qu đnh lng tinh du trong lá và xác đnh trong tinh du lá cây n kim có 36 hp cht là mt đóng góp b sung thêm nhng s liu v tinh du cây n kim mc hoang  Vit Nam. - Kt qu phân lp đc 17 hp cht, trong đó có 2 cht mi, 11 cht ln đu tiên công b có trong chi Bidens, 2 cht ln đu tiên công b có trong loài Bidens pilosa L., đư góp phn làm phong phú kho tàng các hp cht thiên nhiên nói chung và v cây thuc thuc chi Bidens  Vit Nam nói riêng. Kt qu nghiên cu v thành phn hóa hc cng là c s khoa hc đ tip tc đnh hng nghiên cu v tác dng sinh hc. - Kt qu nghiên cu v đc tính cp đư chng minh dc liu (c phn trên mt đt và r) không gây đc  mc liu gp khong 56 ln liu dùng trên ngi, điu đó cho thy liu dùng theo kinh nghim dân gian (10 – 16 g/ngày) là an toàn. - Kt qu nghiên cu v tác dng sinh hc đư góp phn gii thích kinh nghim s dng cây n kim điu tr mt s bnh nh mn nga, viêm gan, viêm thn, ung nht ca nhân dân là có c s khoa hc. ng thi, Kt qu ngiên cu ca Lun án đư m ra trin vng nghiên cu tip tc đ có th ng dng dc liu n kim phc vc v sc khe cng đng hiu qu hn. 5.ăBăccăcaăLunăán Lun án gm 4 chng, 36 bng, 29 hình, 138 tài liu tham kho, 20 ph lc. Lun án có 147 trang gm các phn chính: t vn đ (2 trang), tng quan (40 trang), nguyên liu và phng pháp nghiên cu (13 trang), kt qu (65 trang), bàn lun (24 trang), kt lun và kin ngh (3 trang). A. NIăDUNGăCAăLUNăÁN CHNGă1.ăTNGăQUAN ư tp hp và trình bày có h thng các kt qu nghiên cu t trc đn nay v thc vt hc, thành phn hóa hc, đc tính, tác dng sinh hc, ng dng trên lâm sàng ca mt s loài thuc chi Bidens nói chung và loài Bidens pilosa L., nói riêng trên th gii và Vit Nam. CHNGă2. NGUYÊNăVTăLIUă VĨăPHNGăPHÁPăNGHIÊNăCU 2.1. Nguyên vt liuănghiênăcu Nguyên liu nghiên cu là phn trên mt đt và r cây n kim, thu hái ti Hà ông – Hà Ni vào tháng 9 – 11 nm 2008, 2010 và ti Yên Lc – Vnh Phúc vào tháng 9 – 11 nm 2010. - Chut nht trng chng Swiss, c hai ging, khi lng 20  2g, đt tiêu chun thí nghim, mua ti Ban đng vt – Hc vin Quân Y. - Chut cng trng dòng Wistar trng thành, kho mnh, khi lng 200  20g đt tiêu chun thí nghim, mua ti Ban đng vt – Hc vin Quân Y. - Ging vi sinh vt kim đnh do B môn Vi sinh - Sinh hc, Trng i hc Dc Hà Ni cung cp. - Các dòng t bào ung th do trng i hc Catholic cung cp. - Các hoá cht và thuc th đt tiêu chun phân tích theo quy đnh ca Dc đin Vit Nam IV (methanol, ethanol, n-butanol, ethylacetat, cloroform, n-hexan ). 2.2. Phngăphápănghiênăcu - Phân tích s b các nhóm cht hu c: Theo phng pháp phân tích sàng lc các nhóm hp cht thiên nhiên có trong cây bng phn ng hoá hc [9]. - Xác đnh các nguyên t vô c có trong mu bng thit b thit b ICP-MS. - nh lng và phân tích thành phn tinh du lá: đc tin hành theo phng pháp ghi trong tài liu [46]. - Chit xut các cht có trong dc liu bng phng pháp ngâm vi dung môi  nhit đ phòng. - Phân lp các hp cht trong r và phn trên mt đt cây n kim bng sc ký ct. Theo dõi các phân đon bng SKLM. + Sc ký ct dùng cht hp ph là silica gel pha thng c ht là 0,04-0,063mm (240 – 430 mesh, Merck) và pha đo ODS hoc YMC (30-50 m, Fujisilisa Chemical Ltd), Sephadex LH20. + Sc ký lp mng đc thc hin trên bn mng tráng sn silica gel DC-Alufolien 60 F254 (Merck 1.05715), RP18 F254s (Merck). Phát hin cht bng đèn t ngoi  hai bc sóng 254 và 365 nm, hoc dùng thuc th là dung dch H2SO4 10% đc phun đu lên bn mng, sy khô, h nóng trên bp đin t t đn khi hin màu. - Xác đnh cu trúc các hp cht phân lp đc da trên các phng pháp ph bao gm: ph khi lng, ph khi phân gii cao, ph cng hng t ht nhân mt chiu, hai chiu và đi chiu vi tài liu tham kho. - Da theo phng pháp nghiên cu xác đnh đc tính cp ca Abrham W.B., Turner A. và theo quy đnh ca B Y t Vit nam và T chc Y t th gii v nghiên cu đc tính ca thuc [16], [113]. - Th tác dng kháng khun, kháng nm bng phng pháp khuch tán, đo vòng kháng khun, kháng nm trên đa thch. - ánh giá tác dng gim đau trên chut nht trng gây đau qun bng acid acetic (phng pháp Koster) và gây đau bng mâm nóng. - ánh giá tác dng chng viêm cp bng carragenin trên mô hình gây phù chân chut và mô hình gây viêm màng bng. - ánh giá tác dng chng viêm mn theo mô hình gây u ht thc nghim trên chut bng amiant. - ánh giá tác dng bo v gan trên mô hình gây tn thng gan thc nghim bng tetraclorid carbon. - ánh giá tác dng c ch t bào ng th in vitro theo phng pháp MTT. - Các s liu thc nghim đc x lý theo phng pháp thng kê dùng trong Y - Sinh hc, s dng Microsoft Excel. Kt qu thí nghim đc biu th bng tr s trung bình cng/tr đ lch chun (M  SD). S khác bit có ý ngha thng kê vi p<0,01 hoc p<0,05. CHNGă3. KTăQUăNGHIÊNăCU 3.1.ăKTăQUăNGHIÊNăCUăVăTHĨNHăPHNăHOÁăHCă 3.1.1.ănhătínhăcácănhómăchtăhuăcătrongăcơyănăkim - Trong phn trên mt đt cây n kim có 11 nhóm cht: alcaloid, saponin, flavonoid, acid hu c, carotenoid, acid amin, tanin, phytosterol,đng kh, tinh du và cht béo. - Trong r cây n kim có 7 nhóm cht: alcaloid, saponin, flavonoid, acid amin, tinh du, cht béo và đng kh. - Không có s khác bit v đnh tính các nhóm cht hu c trong n kim thu hái  Yên Lc - Vnh Phúc và Hà ông – Hà Ni. 3.1.2. Xácăđnhăcácănguyênătăvôăcătrongăcơy năkim - ư xác đnh đc 34 nguyên t có mt trong r và phn trên mt đt cây n kim. - i vi phn trên mt đt, nguyên t có hàm lng cao nht là K, sau đó đn Mg, P, Ca và Fe. Còn vi r, nguyên t có hàm lng cao nht là K, sau đó đn Mg, P, Fe, Al, Ca và Na. - Hàm lng kim loi nng có đc tính cao nh As, Pb, Hg, Cd  c phn trên mt đt và r trong khong gii hn cho phép theo tiêu chun ca WHO ( <1 mg/kg dc liu khô) [127]. 3.1.3. nhălngăvƠăphơnătíchăthƠnhăphnăhóaăhcătrongătinhăđu lá cây năkim 3.1.3.1. Xác đnh hàm lng tinh du lá cây n kim Hàm lng tinh du có trong lá n kim tính theo tt/kl là 0,18 ± 0.01%, còn tính theo kl/kl là 0,11 ± 0,004 % (tính theo dc liu ti). 3.1.3.2. Phân tích thành phn tinh du lá cây n kim Có 36 hp cht đư đc xác đnh trong tinh du lá cây n kim, trong đó hp cht chim t l cao nht là 1-phenyl-hepta-1,3,5-triyn (74,46%), -isoindol-1,3(2H)-dion (3,07%) . 3.1.4. ChităxutăvƠăphơnălpăcácăhpăchtătăcơyănăkim Chit xut và phân lp các hp cht t cây n kim đc tin hành nh s đ hình 3.1 và hình 3.2: - T r cây n kim đư phân lp đc 11 hp cht, ký hiu là: BP1, BP2, BP3, BP4, BP5, BP6, BP7, BP8, BP11, BP13, BP15. - T phn trên mt đt cây n kim đư phân lp đc 6 hp cht, ký hiu là BP17, BP18, BP19, BP20, BP22, BP23. 3.1.5. Xác đnhăcuătrúcăhóaăhcăcaăcácăhpăchtăphơnălpăđc 3.1.5.1. ảp cht BP1 Hp cht BP1 thu đc di dng bt màu trng, đ quay cc    - 26 0 (c= 0,3, MeOH). Cu trúc ca hp cht BP1 đc xác đnh da vào phân tích d liu ph NMR đc trình bày  bng 3.6: Bngă3.6. D liu ph NMR ca hp cht BP1 VătríăC #  C (ppm)  C a,b (ppm) DEPT  H a, c (ppm) mult. (J in Hz) HMBC (H  C) 1 135.4 134.3 C - 2 111.7 111.1 CH 6.89 br s 1, 3, 4, 6, 1 3 148.5 147.0 C - 4 147.3 145.3 C - 5 116.1 114.7 CH 6.69 d (8.0) 4, 6 6 120.5 119.1 CH 6.69 br d (8.0) 5, 1, 2, 1 1 74.9 72.8 CH 4.38 d (6.0) 1, 2, 6, 2, 3 2 77.9 75.9 CH 3.44 m 1, 3 3 64.3 62.6 CH 2 3,30 dd (6.0, 11.5) 3,14 dd (4.0, 11.5) 1, 2 3-OCH 3 55.8 55.6 3.73 s 3 4-OH - - 8.69 s 3, 4, 5 1-OH - - 4.86 s 1, 1, 2 2-OH - - 4.43 s 1, 2, 3 a o trong DMSO, b 125MHz, c 500MHz, #  C ca hp cht Guaiacyl glycerol (Hp cht 13) [61]. Kt hp so sánh d kin ph NMR, đ quay cc ca hp cht BP1 vi hp cht (1R, 2R)-guaiacyl glycerol (hp cht s 13 trong tài liu tham kho [61]) thy hoàn toàn tng đng. Do đó, hp cht BP1 đc xác đnh là (1R, 2R)-guaiacyl glycerol, mt hp cht ln đu tiên đc phân lp t chi Bidens và đư bit t loài Pimpinella anisum L. [61]. Cu trúc hóa hc ca hp cht BP1 đc trình bày  hình 3.3: Hình 3.3. Cu trúc hóa hc ca hp cht BP1 3.1.5.2. ảp cht BP2 Hp cht BP2 thu đc  dng bt màu trng. D liu ph NMR ca hp cht BP2 đc trình bày  bng 3.7: Bngă3.7. D liu ph NMR ca hp cht BP2 V trí C  * C (ppm) DMSO  C a,b (ppm) DMSO  H a,c (ppm, J, Hz) HMBC (HăăC) 2 160.4 160.5 - 3 113.2 113.3 6.31 d (9.5) 2, 10 4 114.1 114.2 7.95 d (9.5) 2, 5, 9 5 109.3 109.8 7.29 s 4, 6, 7, 9 6 146.6 146.0 - 7 149.9 150.0 - 8 103.0 103.0 7.14 s 6, 10 9 148.9 148.9 - 10 112.2 112.3 - 1' 99.7 99.7 5.06 d (7.5) 7 2' 73.3 73.1 3.28 3' 76.7 76.7 3.29 1', 2', 4' 4' 69.6 69.6 3.15 3', 6' 5' 77.1 77.1 3.43 6' 60.6 60.7 3.43 dd (2.0, 12.0) 3.67 dd (5.5, 12.0) 4', 5' 6-OCH 3 56.0 56.1 3.81 s 6  * C Scopolin đo trong DMSO [65], a đo trong DMSO, b 125 MHz, c 500 MHz. So sánh s liu ph NMR ca hp cht BP2 vi các s liu tng ng ca hp cht spocolin [65], cho thy kt qu hoàn toàn phù hp. T đó, có th khng đnh hp cht BP2 là scopolin. Hình 3.5. Cu trúc hóa hc và các tng tác HMBC chính ca hp cht BP2 3.1.5.3. ảp cht BP3 Hp cht BP3 thu đc là tinh th không màu,    – 59,2 0 (c= 0,67, MeOH). Ph 1 H-NMR xut hin các tín hiu trong vùng  H 7,287,44 (5H), trong đó có 2 tín hiu có cng đ mnh tng ng vi 2 cp proton đi xng, điu này khng đnh s có mt ca 1 vòng benzen th mono. Ngoài ra còn có s cng hng ca các proton ca mt phân t đng ( H 3,284,38, 7H), vi tín hiu đc trng ti  H 4,38 (1H, d, J = 7,5 Hz) ca proton anome. Hai proton còn li vi  H 3,93 (1H, d, J = 12,0 Hz) và  H 3,72 (1H, d, J = 12,0 Hz) tng ng vi mt nhóm oxymethylen. D liu ph NMR ca hp cht BP3 đc trình bày  bng 3.8: Bngă3.8. D liu ph NMR ca hp cht BP3 V trí C  * C (ppm)  C a,b (ppm)  H a,c (ppm, J, Hz) HMBCă(HăăC) 1 139.0 139.1 - 2 128.6 129.2 7.44 m 1, 3, 4 3 129.2 129.3 7.36 m 2, 5 4 129.1 128.7 7.30 m 3, 5, 2, 6 5 129.2 129.3 7.44 m 2, 3 6 128.6 129.2 7.36 m 1, 3, 4 7 71.6 71.7 4.96 d (12.0) 4.70 d (12.0) 1, 2, 3, 1' 1' 103.2 103.3 4.38 d (7.5) 7, 2', 3', 5' 2' 75.0 75.2 3.28 m 3' 78.0 78.1 3.29 m 4' 71.6 71.8 3.32 m 5' 77.9 78.0 3.36 m 6' 62.8 62.8 3.93 dd (2.0, 12,0) 3.72 dd (5.5, 12,0) 4', 5'  * C Benzylalcoholglucoside đo trong CD 3 OD [43], a đo trong CD 3 OD, b 125 MHz, c 500 MHz. Kt hp phân tích ph 13 C-NMR, DEPT, HSQC, HMBC và đi chiu d liu ph NMR, đ quay cc ca hp cht BP3 vi benzyl-O-  -D-glucopyranosid (hp cht 3 trong tài liu 43) giúp ta xác đnh đc hp cht BP3 là benzyl-O-  -D-glucopyranosid, mt hp cht đư bit t loài Cedronella canariensis [43]. Hình 3.6. Cu trúc hóa hc ca hp cht BP3 3.1.5.4. ảp cht BP4 Hp cht BP4 thu đc di dng bt màu trng, đ quay cc    – 48,1 0 (c= 0,5, MeOH). Trên ph proton xut hin 3 tín hiu đc trng cho vòng thm ti các v trí cng hng  H 7,03 (1H, d, J = 1,5 Hz), 6,83 (1H, dd , J = 2,0, 8,0 Hz), 6,78 (1H, d, J = 8,0 Hz); 1 tín hiu proton anome ca đng ti v trí  H 4,44 (1H, d, J = 7,5 Hz), da vào giá tr J = 7,5 Hz có th suy ra đng có cu hình -D và mt tín hiu đc trng ca nhóm methoxy cng hng ti v trí  H 3,89 (3H, s). Kt qu phân tích ph 13 C-NMR và DEPT cho thy hp cht BP4 có tín hiu ca 16 carbon trong đó có 1 nhóm methoxy ti  C 56,4 ppm; hai tín hiu oxymethylen ti  C 62,5, 63,2 ppm; 7 tín hiu oxymethin trong khong tín hiu t  C 71,4 – 105,3 ppm và các tín hiu đc trng cho vòng thm th 3 ln trong khong tín hiu  C 111,7 – 149,0 ppm. Da vào kt qu phân tích trên và kt hp so sánh vi s liu ph ca hp cht D-threo- guaiacylglycerol-8-O--D-glucopyranosid và L-threo-guaiacylglycerol-8-O--D-glucopyranosid [63], thy có s tng đng ti các v trí tín hiu carbon tng ng. Mt khác, so sánh đ quay cc ca hp cht BP4 và 2 cht trên có th xác đnh hp cht BP4 chính là D-threo-guaiacylglycerol-8-O--D-glucopyranosid. Hình 3.8. Cu trúc hóa hc ca hp cht BP4 3.1.5.5. ảp cht BP5 Tin hành phân tích d liu ph NMR ca hp cht BP5, kt qu trình bày  bng 3.10: Bngă3.10. D liu ph NMR ca hp cht BP5 VătríăC  C1 (ppm)  C2 (ppm)  C a,b (ppm)  H a,c (ppm) mult. (J = Hz) HMBC (HC) 1 2 161.8 164.6 164.5 3 143.3 143.3 143.6 4 175.9 177.0 177.2 5 116.9 117.2 117.3 6.46 d (5.5) 3, 6 6 155.3 157.1 157.1 8.02 d (6.0) 2, 4, 5 7 15.4 15.9 15.8 2.48 s 2, 3 1' 106.1 105.0 105.5 4.82 d (8.0) 3 2' 75.6 74.9 75.4 3.40 dd (8.0, 9,0) 1', 5' 3' 78.4 77.9 78.5 3.28 dd (8.0, 9.0) 4' 4' 71.1 71.2 71.1 3.38 dd (9.0, 9.0) 5' 5' 79.0 77.4 78.0 3.42 m 2', 4' 6' 62.6 68.5 62.5 3.68 dd (5.0, 12.0) 3.84 dd (2.0, 12.0)  C1 đo trong C 5 D 5 N [117],  C2 đo trong CD 3 OD at 500 MHz, 125 MHz [78], a đo trong CD 3 OD, b 125, c 500 MHz.  xác đinh cu trúc ca hp cht BP5, d liu ph NMR ca hp cht này đc so sánh vi hp cht Maltol 3-O--D-glucopyranosid [117], thy hoàn toàn phù hp. S sai lch gia các giá tr là do s sai khác v dung môi đo nhng đây là sai s nm trong gii hn cho phép.  khng đnh thêm tính chính xác, s liu ph NMR ca hp cht BP5 đc so sánh vi hp cht Maltol 6'-O-  -D-apiofuranosyl-  -D-glucopyranosid [78], cho thy hoàn toàn tng đng ti các tín hiu carbon tng ng. S sai khác duy nht là giá tr carbon ti v trí C-6' ( C 68.5 so vi 62.5), đó là do ti v trí C-6' ca hp cht Maltol 6'-O-  -D-apiofuranosyl--D- glucopyranosid có thêm 1 phân t đng. Kt hp các d kin phân tích  trên, có th khng đnh hp cht BP5 chính là Maltol 3-O--D-glucopyranosid. O O O HO O OH 4 ' 2 ' 6 ' 5 ' 1 ' 3 ' 2 OH OH 4 6 O O O HO O OH OH OH CH 3 CH 3 Hình 3.9. Cu trúc hóa hc và các tng tác chính HMBC ca hp cht BP5 3.1.5.6. ảp cht BP6 Hp cht BP6 thu đc di dng bt không màu, đ quay cc    +16,1 0 (c= 0,3, MeOH). Trên ph proton thy xut hin tín hiu cng hng ca 2 proton vòng thm  H 6,73 (s, 2H), 2 nhóm methoxy ti  H 3,87 (s, 6H); các tín hiu proton ca phân t đng trong khong  H 3,18 – 3,94. Trên ph 13C và DEPT xut hin tín hiu cng hng ca 17 carbon, trong đó có 2 nhóm methoxy ti  C 56,9 (x2); 2 nhóm [...]... 5g/kg [52] kim 7 - dùng này khi dùng dài ng L 50 16 g M m, oài B.pilosa 4 4.3.3 Trên k kim in có protein nói chung và albumin nói riêng [11], [88] tính , viêm cây cho 4.3.4 20g/kg K 20g/kg 4.3.5 4, peroxid ho ALT vào máu, , 4 LTP 133] 4.3.6 in vitro - -60) - hóm flavonoid là BP7 và BP8 50 50: 36,5 ± 5,5 và 68,1 ± 8,1 µg/ml BP20 50: 36,5 ± BP19 50 50: in vitro in vitro 4.3.7 , 73 có tác và morin) và 103... 1,06 18,65 ± 2,80 0,93 ± 0,08 p2,3,4,5-1 < 0,01; p3,4,5-2 < 0,05 ; p3-4 > 0,05, p3-5>0,05, p4-5>0,05 FLTP 4 , s s 4 t và lô dùng silymarin không in vitro - BP20, BP2 và BP23 - 50 và 185,9 µg/ml - C BP7, BP8 và BP23 50 36,5 µg/ml, 68,1 µg/ml và 183,6 µg/ml -C - 50 BP23 50 (IC50 BP19 và BP20 50 25,3 µg/ml Bidens pilosa Bidens Bidens pilosa Bidens pilosa (Bidens pilosa var radiata Sch-Bip.) L 04% (kl/kl)... -240,10 a m t flavon, t nhóm methilen t i n 121,6 ppm, chín nguyên t carbon b c 4 có C 164,1 ppm và m t nhóm carbonyl t i C 177,7 ppm Phân tích k các tín hi u trên ph C-8 và C- n C C-NMR c a BP7 cho -6 ( -8 ( -6, C-7, C-9 và C- H -1', C- - -2, C- H -3 ( H carbon C76,9), C-4'' ( 3'' ( C -1'' ( C 85,8); H-3'' ( 76,9) và H- -2'' ( H -3'' ( C 76,9), C-4'' ( C - ng -5, C-7, H -2, C- H -5' ( H -3'' ( C - C -3''...oxymethylen C C C 106,3 (x 2), 99,8, 82,6, 80,8, 80,5, 79,8, 75,1, 71,9 và 4 149,2 (x 2), 137,0, 129,3 BP6 C 13 C- BP6 BP6 -epoxy-syringoylglycerol 8-O- -DBP6 Bidens HO O 1' 8 2' 7 O O 6' OH 9 5' HO O 1 4 OH OH O Hình 3.10 BP6 H p ch t BP7 nh i d ng b t màu vàng (c= 0,14, MeOH) D li u ph NMR c a h p ch Ph c trình bày b ng 3.12: 13 C-NMR c a BP7 xu t hi n tín hi u... 2,06 ± 0,13 2: Diclofenac (10 mg/kg) 25,69 p4-6>0,05 cây Lô protein (mg/dl) 24,33 ± 1,35 p1-2,3,4,5,6 0,05; 41,67 ± 1,41 21,83 ± 1,88 p3-5>0,05 39,20 ± 1,74 p 53,50 ± 3,22 2: Diclofenac (10 mg/kg) albumin (mg/dl) 19,40 ± 1,81 p4-6>0,05 cây Lô p 9,45 ± 0,97 p2-3,4,5,6>0,05 p3-4> 0,05 8,71... Quercetin-3- -D-galactopyranosid flavonoid có vai trò quan trong , Ngoài ra : Luteolin 20 hoá nh có tác 73]; 102]; C - Bidens pilosa L.) có: alcaloid, saponin, có: alcaloid, saponin, flavonoid, acid amin, hép -phenyl-hepta-1,3,5 triyn (74,46%) + Có Natri 3,5-dimethoxy-4-O- -L-rhamnosyl-benzoat (BP19) và (R,R)-4-(hydroxymethyl)-5- -methoxy- -hydroxyphenyl]-2,2-dimethyl-1,3-dioxolan + Có Pilosolane)... 4 70mg/kg - 50: 18,5 Tá tràng ) 1 Bidens pilosa L.) -37 2 và sterol Bidens pilosa - trang 216-220 3 Bidens pilosa - - 289 4 Bidens pilosa 0 37, N 8, tháng 10/2012, trang 7-12 5 Bidens pilosa trang 34-37 6 Bidens pilosa trang 31-34 7 -O- -Dpilosa Bidens -44 8 Bidens pilosa -2013, trang 46-52 9 Bidens pilosa -2013, trang 55- 58 10 Pilosolane và Sodium 3,5-dimethoxy 4-O- -L(Bidens pilosa L.) -2014, trang... 76,9) và H- -2'' ( H -3'' ( C 76,9), C-4'' ( C - ng -5, C-7, H -2, C- H -5' ( H -3'' ( C - C -3'' ( H -2' ( 60,6 ppm, 13 th y, 15 nguyên t carbon thu c khung quercetin, 5 nguyên t carbon còn l i thu c vào 1 phân t BP7 C C 76,9), C-4'' ( 82,1), C-4'' ( C C 85,8); H-2'' ( 85,8), C-5'' ( C H 60,6); H-4'' ( H - C BP7 Quercetin-3- -LL Bidens pilosa Bidens sulphurea [100] Hình 3.11 BP7 BP8 1 H-NMR, 13C-... cây Lô p 9,45 ± 0,97 p2-3,4,5,6>0,05 p3-4> 0,05 8,71 ± 1,51 p5-6>0,05 8,15 ± 1,14 p3-5>0,05 8,49 ± 1,33 3.26, 3.27, 3.28 7,94 ± 1,08 8,33 ± 1,40 2: Diclofenac (10 mg/kg) p1-2,3,4,5,6< 0,05 p4-6>0,05 cây Lô p 70,87 ± 4,38 58,93 ± 3,34 p1-3< 0,05 55,20 ± 4,74 p1-4 0,05 58,11 ± 3,29 p2-3>0,05 54,09 ± 3,89 2: Diclofenac (10 mg/kg) p1-2< 0,05 p2-4>0,05 tic Lô NC 2: Aspirin 100... 1,46 12,40 ± 0,86 12,60 ± 1,18 11,33 ± 0,90 p1-2,3,4< 0,05 p2-3,4 < 0,05 p3-4 >0,05 15 20 phút 11,50 ± 1,29 9,40 ± 0,96 10,20 ± 1,03 8,33 ± 0,87 p1-2,3,4< 0,05 p2-3,4 < 0,05 p3-4 >0,05 sau 10, 15, 20 và 25 phút (p>0,05) Lô NC p - sau 0) 21,88 ± 2,15 2: Morphin 10mg/kg 1) 22,33 ± 1,30 p>0,05 21,15 ± 1,86 30,81 ± 2,13 p0,05 22,08 ± 1,79 24,36 ± 2,35 p>0,05 . b v thành phn hóa hc cng nh tác dng sinh hc ca cây n kim mc hoang  Vit Nam còn rt ít, do đó đ tài: Nghiên cuăthƠnhăphn hóa hcăvƠă mtăs tác dng sinh hcăcaăcơyăn kim (Bidens. Trên th gii, cây n kim đc các nhà khoa hc quan tâm nghiên cu và đư có nhiu công trình công b v thành phn hóa hc cng nh tác dng sinh hc ca dc liu này. Cây n kim đư đc chng. mt đt và r cây n kim. 3.2.2. Th tác dngăkhángăkhun,ăkhángănm Kt qu th tác dng kháng khun, kháng nm ca tinh du lá cây đn kim cho thy: - Tinh du lá cây n kim có tác dng