KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA VIỆC BỔ SUNG β- GLUCANS VÀ MANNAN OLIGOSACCHARIDES (βG MOS) LÊN HỆ THỐNG NUÔI TẬP TRUNG CÁ BƠN (PARALICHTHYS ADSPERSUS) GVBM: Ths Phạm Minh Nhựt Nhóm 13 08DSH4 Nguyễn Ngọc Quỳnh Nhi Võ Thị Bích Vân Võ Thị Linh Phạm Thị Hương Tổng quan • Năm 1867 ở Peru và Chile loài cá Paralichthys adspersus được chú trong nuôi trồng thủy sản. Tuy nhiên, sự cản trở lớn trong giai đoạn đầu của ấu trùng là tỉ lệ tử vong cao. • Theo Silva (2000), ấu trùng 21 ngày đầu sau nở thì tỉ lệ tử vong gần 80%. Sự tử vong sau đó của cá vẫn tiếp tục, kèm theo bệnh do sự nhiễm trùng từ vi khuẩn gây bệnh cơ hội, stress trong môi trường và hệ thống nuôi. Ví dụ, tụ cầu khuẩn được phát hiện trong cá P.adsperus khi cá stress, liên quan đến ức chế miễn dịch. • Trong môi trường thâm canh, các tác nhân hóa lý của hệ thống nuôi là nguyên nhân gây ra stress sinh lí và tổn thương cơ thể đối với cá. Stress tăng tỉ lệ tử vong bởi vi khuẩn • Do đó người ta đề xuất giả thuyết rằng bổ sung βG MOS làm giảm sự tử vong của cá, đánh giá sự phát triển trong giai đoạn đầu của ấu trùng ứng với các nồng độ khác nhau và phát hiện đặc điểm hệ thống miễn dịch không đặc hiệu. βG MOS • Sự bổ sung thêm hợp chất βG MOS phòng bệnh như cải thiện sức khỏe của cá trong các giai đoạn sống chủ yếu kích thích hệ miễn dịch không đặc hiệu. Mặt khác, bổ sung thêm βG MOS tăng khả năng đề kháng với động vật ký sinh và cải thiện hiệu lực của vaccines. • βG MOS trong ruột hoạt động tương tự như probiotic, kích thích sự sinh sản của các vi khuẩn có lợi trợ giúp hệ miễn dịch. • βG MOS giúp hấp thụ độc tố trong khẩu phần ăn, kích hoạt đại thực bào sản sinh gama-interferon, peptides, protein và lipopolysaccharic. • Thưc hiện: tiêm qua màng bụng, trước hậu môn, tĩnh mạch hay là kết hợp những chất này trong thức ăn. Có thể thông qua con mồi còn sống hay được cho trực tiếp vào hệ thống nước nuôi. βG MOS tác động cơ bản lên hệ thống miễn dịch nên được hòa tan trong nước biển, thuận tiện cho sự hấp thu xuyên qua bề mặt da, mang, miệng. • Thêm βG MOS làm giảm việc sử dụng thuốc và vaccine tránh sự tồn dư trong môi trường với lượng lớn sẽ gây độc môi trường và sinh vật trong đó, phá vỡ hệ hữu cơ trong trầm tích. • Có nhiều phương pháp khác nhau để đánh giá tác động của các chất hữu cơ cải thiện sức khỏe ấu trùng:  Thí nghiệm với vi khuẩn gây bệnh,  Giải phẫu mô (được sử dụng nhiều và ít tốn kém)  Miễn dịch huỳnh quang.  Phân tích hóa sinh dựa trên máu và huyết thanh nhưng khó để thu được trên ấu trùng nhỏ. Trứng sau thụ tinh Nước biển Thùng 100l Thùng 100l Thùng 30l x 24 thùng Thùng 30l x 24 thùng Đếm ,đo, Phân tích mô học Ủ 54- 62 h Ủ 54- 62 h Lọc rửa Chọn trứng sống theo mô tả của silva Định lượng khử trùng Khử trùng bằng tia UV Thùng 500l Thùng 500l Theo dõi 10 ngày Theo dõi 10 ngày Cho ăn luân trùng Brachionus plicatilis, 5 – 10 con/ ml Cho ăn luân trùng Brachionus plicatilis, 5 – 10 con/ ml Kiểm tra cách 2 ngày một lần,duy trì mật độ ấu trùng 30 con/l và nồng độ βG MOS của từng thùng Kiểm tra cách 2 ngày một lần,duy trì mật độ ấu trùng 30 con/l và nồng độ βG MOS của từng thùng Sơ đồ quy trình phương pháp nghiên cứu Vật liệu • Ấu trùng: thu từ 2 cá thể cá bố mẹ sinh sản tự nhiên, trứng sau thụ tinh được tập hợp trong rây 400 μm được lọc, rửa, để yên 20 phút trong bể 10lit; chọn các trứng sống sót (theo mô tả của Silva và Castello’ 2005). Những trứng được chọn đem đi định lượng và trử trùng. ủ 54 – 62 h, nước biển khử trùng bằng tia UV. Trứng đã nở chuyển qua bể trụ với hệ thống lọc nước biển có độ mặn 34 ± 0.5, nạp khí liên tục, giữ ở 16 – 17 o C đến lúc thí nghiệm. • Nước biển: độ mặn 34 ± 0.5; khử trùng bằng tia UV • Dụng cụ: 24 thùng 30 lit hình nón, màu đen; xiphon Vật liệu • βG MOS :  Gọi là DP MOS βG được cung cấp bởi công ty DESPRO S.A: Hợp chất này bao gồm:46% β glucan,53% mannan-oligosaccharide và 1% dịch huyết tương  β glucan: thu được bằng cách thủy phân và ly tâm thành tế bào nấm men Saccharomyces ceresiviae với kích thước trong khoảng 0.5-10 μm Vật liệu Thức ăn của ấu trùng cá bơn là trùng bánh xe ( Brachionus plicatilis, 5 – 10 con/ ml; được nuôi trong hệ thống mẻ nhỏ và cho ăn bằng nấm men (Saccharomyces ceresiviae) có bổ sung thêm vi tảo (Isochrysis sp., Nannochloropsis sp.) Phương pháp nghiên cứu Thí nghiệm 1 Sử dụng ấu trùng nở trứng sau 6 ngày có độ dài chuần 4.0 ± 0.3 mm Nồng độ Lặp lại 0 mg/l 5 mg/l 10 mg/l 15 mg/l 1 2 3 Phương pháp nghiên cứu Nồng độ Lặp lại 0 mg/l 5 mg/l 10 mg/l 15 mg/l 1 2 3 Sử dụng ấu trùng đã nở trứng sau nở trứng 15 ngày có dài chuẩn 5.4 ± 0.2 mm. Thí nghiệm 2 [...]... của βG MOS trong môi trường nuôi dưỡng Có một số các hợp chất từ cá mẹ giúp bảo vệ ấu trùng khỏi tác nhân gây bệnh Trứng cá rất giàu kháng thể không đặc hiệu như lectin, lisosome (có thể tạo ra từ buồng trứng) tạo các đại thực bào hình thành sớm từ trong phôi (Ellis 2001) Tuy nhiên các chất này sẽ bị giảm theo tuổi của ấu trùng (Browman và cs 2003) Vì vậy việc thêm βG MOS giúp tăng sức mạnh của hệ. .. mẫu đối chứng và các nồng độ khác Nồng độ 10mg/l, 15mg/l giảm xuống có ý nghĩa so với mẫu đối chứng • Sự sống sót của ấu trùng cũng bị ảnh hưởng bởi tuổi của ấu trùng khi bổ sung βG MOS Đối với ấu trùng 6 ngày cho kết quả sống sót cao hơn 13 % so với ấu trùng 15 ngày Tuy nhiên tỉ lệ sống sót của ấu trùng 6 ngày so với 15 ngày là 12% ( 5mg/l), 18% (1 0mg/l), 10% (1 5 mg/l βG MOS) Sự sống sót của ấu trùng... tiêu chuẩn của ấu trùng P adspersus 6 ngày và 15 ngày sau nở với nồng độ βG MOS khác nhau ( ối chứng là βG MOS 0 mg/l) Sự phát triển Hình 3: tốc độ phát triển của ấu trùng P adspersus 6 ngày và 15 ngày sau nở với nồng độ βG MOS khác nhau ( ối chứng là βG MOS 0 mg/l) Phân tích mô học Thảo luận Qua những kết quả trên ta thấy được việc bổ sung βG MOS đã có sự cải thiện rõ rệt đối với sức khỏe của ấu trùng... cầu( Esteban) Bạch cầu là tiền thân của đại thực bào, nó là tế bào mấu chốt của hệ thống miễn dịch không đặc hiệu trong cá khi thể thực bào được kích thích,chúng tạo ra các sản phẩm trung gian như NO2,enzymes,lysozymes,cytokines ,và những phân tử đánh dấu khác Lượng bạch cầu lớn trong mô ruột,sự sống sót,sự phát triển của các ấu trùng khi được xử lý với βG MOS đã cho thấy được vai trò của hỗn hợp này lên. .. cứu • Những nhóm ấu trùng được bổ sung βG MOS được hòa tan trong nước biển ở nồng đô 5 mg/l, 10 mg/l, 15 mg/l trong suốt 5 năm ngày đầu của thí nghiệm • Nồng độ của βG MOS được duy trì hàng ngày trong bể bằng cách dẫn nước biển có chứa βG MOS đã được pha loãng ở nồng đô thích hợp vào bằng một ống xiphon và thay thế nước cũ • Vào ngày thứ 2,4,6,8,10 lấy ra 30 ấu trùng của mỗi bể thí nghiệm để ngăn chặn... trên cho Sparus aurata thì hệ thống miễn dịch không đặc hiệu không được phát huy và làm giảm sự sống, sự phát triển của các ấu trùng Điều đó giải thích một phần cho kết quả mà nghiên cứu này tìm ra những loài khác nhau thì tác động của hỗn hợp trên là khác nhau chẳng hạn gây trở ngại hoặc làm chậm sự phát triển của hệ thống miễn dịch Và các yếu tố như nhiệt độ, ánh sáng, các yếu tố môi trường khác... của ấu trùng P.adspersus trong môi trường nuôi có sự giám sát, điều này còn phụ thuộc nồng độ βG MOS Trong nghiên cứu này thêm 5mg/l βG MOS giúp tăng sự sống và phát triển của P.adspersus nhưng khi thêm nồng độ 15mg/l βG MOS thì sẽ làm giảm những chỉ tiêu theo dõi Kết quả là tương tự khi áp dụng lên ấu trùng Hippoglossus và Scophthalmus maximus cũng như các loài cá quan trọng khác đã từng được nghiên... nước biển bằng chai nhưa màu đen bằng nhựa (dán nhãn) cho phân tích mô học • Vết cắt mô Kết quả Sự sống sót của ấu trùng: • Ảnh hưởng của βG MOS lên sự sống sót của P.adspersus phụ thuộc vào nồng độ pha loãng trong nước nuôi Đối với ấu trùng nở 6 ngày: Không có ý nghĩa khác nhau giữa tỉ lệ sống sót ở nồng độ 5mg/l so với mẫu đối chứng Sự sống sót giảm xuống một cách ý nghĩa ở nồng độ 10 mg/l, 15mg/l so... miễn dịch trong ấu trùng cá vốn đã được di truyền bởi mẹ trong suốt giai đoạn phát triển đầu tiên.Tuy nhiên cơ chế phòng bệnh bẩm sinh của trứng và ấu trùng phụ thuộc vào sức khỏe của cá mẹ Sự tăng chiều dài của ấu trùng theo thời gian trong nghiên cứu này có xu hướng giống với những nghiên cứu trước đây Tuy nhiên, khi so sánh với những nghiên cứu đó ấu trùng được xử lý với βG MOS có sự tăng chiều... để duy trì mật độ ấu trùng (3 0 ấu trùng /l) • Thời gian theo dõi 10 ngày Phương pháp nghiên cứu Tính toán • Sống sót: S = (nf/ni)* 100 nf, ni lần lượt là tổng số ấu trùng sau cùng và ban đầu trong thí nghiệm S: % sống sót của ấu trùng • Tốc độ tăng trưởng riêng Gs = ([ ln ω2 - ln ω1]/T2 - T1)* 100 ω1 là chiều dài ấu trùng trong thời gian T1(mm) Gs tỉ lệ tăng trưởng riêng (% ) • Phân tích mô học: Mẫu . KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA VIỆC BỔ SUNG β- GLUCANS VÀ MANNAN OLIGOSACCHARIDES ( G MOS) LÊN HỆ THỐNG NUÔI TẬP TRUNG CÁ BƠN (PARALICHTHYS ADSPERSUS) GVBM: Ths Phạm Minh. bổ sung βG MOS làm giảm sự tử vong của cá, đánh giá sự phát triển trong giai đoạn đầu của ấu trùng ứng với các nồng độ khác nhau và phát hiện đặc điểm hệ thống miễn dịch không đặc hiệu. βG. nhựa (dán nhãn) cho phân tích mô học. • Vết cắt mô Kết quả Sự sống sót của ấu trùng: • Ảnh hưởng của βG MOS lên sự sống sót của P .adspersus phụ thuộc vào nồng độ pha loãng trong nước nuôi. Đối