MÔN: SINH HỌC PHÂN MÔN: SINH HỌC PHÂN TỬ TỬ GVHD: GVHD: NGUYỄN THỊ DUY KHOA NGUYỄN THỊ DUY KHOA GVHD: GVHD: NGUYỄN THỊ DUY KHOA NGUYỄN THỊ DUY KHOA [...]...Bến Tre ứng dụng công nghệ PCR Real-time trong xét nghiệm bệnh tôm Việc xét nghiệm bệnh tôm bằng hệ thống PCR Real-time được tiến hành theo qui trình khép kín Trước tiên, mẫu tôm Post được nghiền nhuyễn trong một dung dịch tách chiết gen di truyền (DNA) Sau đó, hỗn hợp này được đưa qua nồi hấp cách thủy trong vòng 10 phút nhằm làm sốc nhiệt để trích ly DNA Bến Tre ứng dụng công nghệ PCR Real-time... cuối cùng Hàng nghìn bản gel như thế đã được phân tích và hiện được lưu giữ tại Phòng thí nghiệm Phát hiện nhanh bệnh lạ Cán bộ nghiên cứu thuộc Viện Vệ sinh Y tế Công cộng pha trộn hóa chất - khâu quan trọng của ứng dụng kỹ thuật PCR Mỗi phản ứng PCR dùng 10-25 µl (micro lit) hóa chất ... bình 1,75 và hàm lượng >50ng/ml b Kỹ thuật PCR: Quá trình PCR với các giai đoạn cơ bản: biến tính, gắn mồi và tổng hợp Quá trình được thực hiện với các nhiệt độ gắn mồi khác nhau được lựa chọn từ 50oC đến 58oC Sản phẩm PCR sau đó được kiểm tra trên gel agaroza 2%, nhuộm ethidium bromide (25mg/ml) 2 Phương pháp: c Kỹ thuật điện di: Các mẫu sau khi thực hiện quá trình PCR đã được kiểm tra trên gel agaroza... thống: Đạt chính xác 99,9% GS Lê Đình Lương và các cộng sự đã tự bỏ tiền túi để nghiên cứu ứng dụng kỹ thuật này trong việc xác định quan hệ huyết thống Đến năm 2000, với đề tài "Xác định nhanh, chính xác các đặc trưng cá thể ở người bằng kỹ thuật PCR" Với các mẫu máu, tóc, nước bọt ở các cá thể khác nhau, dùng PCR có thể tìm ra các tính trạng chung ở các cá thể có cùng huyết thống Hiện nay, để xác định... nghiệm bệnh tôm Dùng thiết bị chuyên dụng lấy khoảng 2 µl (microlít) dung dịch này cho vào một ống có chứa hóa chất gọi là ống phản ứng Ống phản ứng được đặt vào máy lưu nhiệt trong vòng 2 tiếng đồng hồ Tại đây sẽ diễn ra quá trình phản ứng nhân bản DNA ỨNG DỤNG KỸ THUẬT PCR KHẢO SÁT SƠ BỘ TẦN SUẤT PHÂN BỐ CÁC ALEN CỦA LOCUS D7S820 NGƯỜI VIỆT NAM I Phương pháp nghiên cứu 1 Nguyên liệu: - Máu tươi của... nghiền nhuyễn lại trải qua công đoạn làm lạnh nhanh, cho vào tủ đông ở nhiệt độ (-200C) trong vòng 15 phút Hỗn hợp tiếp tục được đưa vào máy ly tâm khoảng 5 phút, với tốc độ 780.000 vòng/h để loại tạp chất Phần cặn bã và chất hữu cơ bị lắng xuống đáy Phần dung dịch còn lại có chứa DNA Bến Tre ứng dụng công nghệ PCR Real-time trong xét nghiệm bệnh tôm Dùng thiết bị chuyên dụng lấy khoảng 2 µl (microlít)... nghiệm bằng kỹ thuật PCR 4 Điện di: Điện di được dùng để tách biệt các đoạn ADN có độ dài ngắn khác nhau Độ tách biệt này phụ thuộc nhiều yếu tố Các yếu tố đã được lựa chọn và tối ưu hoá trên cơ sở vật liệu sẵn có, hạ giá thành đáng kể và tăng độ phân giải lên hàng trăm lần, giúp phân biệt rõ các đoạn ADN chỉ chênh lệch nhau bốn nucleotid Sáu khâu chính của quy trình xét nghiệm bằng kỹ thuật PCR 5 Nhuộm... có thể hiện rõ trên bản gel với quy trình nhuộm ADN được tối ưu hoá và phương pháp nhuộm thích hợp được lựa chọn Ngoài ra, kinh nghiệm và kỹ năng của kỹ thuật viên cũng rất cần thiết, góp phần hạ giá thành chung Sáu khâu chính của quy trình xét nghiệm bằng kỹ thuật PCR 6 Phân tích kết quả: Bản gel sau khi nhuộm xong sẽ có dạng như hình trên Các đoạn ADN có độ dài khác nhau hiện rõ trên bản gel, có thể... của quy trình xét nghiệm bằng kỹ thuật PCR 1 Lấy mẫu: ADN có thể tách chiết từ những mẫu khác nhau, như máu tươi, máu khô, tế bào niêm mạc, nước xúc miệng, tóc, da, phân, v.v Mẫu có thể lấy tại chỗ hoặc gửi từ xa hàng nghìn kilômet, mất nhiều ngày, trong phong bì bình thường, qua bưu điện, không cần bảo quản lạnh Sáu khâu chính của quy trình xét nghiệm bằng kỹ thuật PCR 2 Tách chiết ADN: Nhiều quy... mồi quá trình PCR : ở tất cả các điều kiện nhiệt độ gắn mồi từ 50oC đến 58oC đều có sự hình thành sản phẩm PCR thể hiện ở sự có mặt của các băng ADN trên bản gel agaroza Kết quả kiểm tra sản phẩm PCR ở một số mẫu trên gel agaroza theo điều kiện nhiệt độ gắn mồi 58oC 2 Kết quả chọn lọc alen và tạo thang alen : Thang alen chuẩn của locus D7S820 với 7 alen khác nhau được phân tách bằng kỹ thuật điện trên . phản ứng. Ống phản ứng được đặt vào máy lưu nhiệt trong vòng 2 tiếng đồng hồ. Tại đây sẽ diễn ra quá trình phản ứng nhân bản DNA. ỨNG DỤNG KỸ THUẬT PCR ỨNG DỤNG KỸ THUẬT PCR KHẢO SÁT SƠ BỘ. alt="" Bến Tre ứng dụng công nghệ PCR Real-time Bến Tre ứng dụng công nghệ PCR Real-time trong xét nghiệm bệnh tôm trong xét nghiệm bệnh tôm Việc xét nghiệm bệnh tôm bằng hệ thống PCR Real-time. NIỆM  PCR là chữ viết tắt của cụm từ Polymerase Chain Reaction  PCR là Phản ứng chuỗi trùng hợp hay gọi là "phản ứng khuếch đại gen".  PCR là một kỹ thuật phổ biến trong sinh học