ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC NGUYỄN KIỀU LINH SO SÁNH TRÌNH TỰ ĐOẠN MÃ HĨA CỦA GEN GmEXP1 LIÊN QUAN ĐẾN SỰ KÉO DÀI RỄ Ở MỘT SỐ GIỐNG ĐẬU TƢƠNG ĐỊA PHƢƠNG LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Thái Nguyên - 2013 Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC NGUYỄN KIỀU LINH SO SÁNH TRÌNH TỰ ĐOẠN MÃ HĨA CỦA GEN GmEXP1 LIÊN QUAN ĐẾN SỰ KÉO DÀI RỄ Ở MỘT SỐ GIỐNG ĐẬU TƢƠNG ĐỊA PHƢƠNG Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60.42.02.01 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Ngƣời hƣớng dẫn khoa học: GS.TS Chu Hoàng Mậu Thái Nguyên - 2013 Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan nội dung trình bày luận văn tơi tìm hiểu, nghiên cứu và số kết cộng tác với cộng khác nhóm nghiên cứu Các số liệu kết trình bày luận án trung thực tài liệu trích dẫn ghi rõ nguồn gốc Tác giả luận văn Nguyễn Kiều Linh Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn ii LỜI CẢM ƠN Tơi xin bày tỏ lịng biết ơn tới GS.TS Chu Hồng Mậu tận tình hƣớng dẫn, bảo tạo điều kiện thuận lợi cho suốt q trình học tập, nghiên cứu hồn thành Bản luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn PGS.TS Nguyễn Vũ Thanh Thanh, Trƣởng khoa Khoa học Sự sống, Trƣờng Đại học Khoa học - Đại học Thái Ngun hết lịng giúp đỡ tơi q trình học tập nghiên cứu Tôi xin cảm ơn Nghiên cứu sinh Lò Thanh Sơn, Giảng viên trƣờng Đại học Tây Bắc nhiệt tình giúp đỡ tơi nhiều q trình thực thí nghiệm đề tài Tôi xin cảm ơn Thầy, Cô cán phịng thí nghiệm Di truyền Cơng nghệ gen thuộc khoa Sinh – Kỹ thuật Nông nghiệp, Trƣờng Đại học Sƣ phạm – Đại học Thái Nguyên; cảm ơn cán Phịng thí nghiệm sinh học, khoa Khoa học Sự sống, Trƣờng Đại học Khoa học- Đại học Thái Nguyên tạo điều kiện giúp đỡ q trình nghiên cứu Và cuối cùng, tơi xin bày tỏ lời cảm ơn tới gia đình, ngƣời thân bạn bè – ngƣời bên lúc khó khăn nhất, ln động viên tơi, khuyến khích tơi sống cơng việc Tác giả luận văn Nguyễn Kiều Linh Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn iii MỤC LỤC Trang Trang bìa phụ Lời cam đoan………………………………………………………… i Lời cảm ơn…………………………………………………………… ii Mục lục……………………………………………………………… iii Những chữ viết tắt…………………………………………………… iv Danh mục bảng………………………………………………… v Danh mục hình…………………………………………………… vi MỞ ĐẦU…………………………………………………………… 1 Lý chọn đề tài………………………………………………… Mục tiêu nghiên cứu……………………………………………… Nội dung nghiên cứu……………………………………………… Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU……………………………… 1.1 CÂY ĐẬU TƢƠNG…………………………………………… 1.1.1 Nguồn gốc, phân loại vị trí đậu tƣơng …………… 1.1.2 Đặc điểm sinh học sinh thái học đậu tƣơng…………… 1.1.3 Giá trị kinh tế đậu tƣơng……………………………… 1.2 TÁC ĐỘNG CỦA HẠN VÀ SỰ PHÁT TRIỂN BỘ RỄ CỦA CÂY ĐẬU TƢƠNG………………………………………………… 10 1.2.1 Đặc tính chịu hạn đậu tƣơng……………………………… 10 1.2.2 Khả điều chỉnh áp suất thẩm thấu……………………… 11 1.2.3 Mối liên quan tính chịu hạn phát triển rễ đậu tƣơng………………………………… ………………………… 13 1.3 EXPANSIN VÀ GEN EXPANSIN Ở CÂY ĐẬU TƢƠNG…… 15 1.3.1 Expansin………………………………………… …………… 15 1.3.2 Gen GmEXP1 đậu tƣơng 17 Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn iv Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU…… 21 2.1 VẬT LIỆU, HÓA CHẤT VÀ THIẾT BỊ……………………… 21 2.1.1 Vật liệu………………………………… …………………… 21 2.1.2 Hóa chất thiết bị…………………………………………… 23 2.1.3 Địa điểm nghiên cứu………………………………………… 23 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU……………………………… 24 2.2.1 Đánh giá khả chịu hạn đậu tƣơng điều kiện hạn nhân tạo giai đoạn nảy mầm giai đoạn non…………… 24 2.2.2 Các phƣơng pháp sinh học phân tử…………………………… 24 2.2.3 Phƣơng pháp xác định phân tích trình tự nucleotide gen 32 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN………………………… 33 3.1 SỰ PHÁT TRIỂN BỘ RỄ CỦA CÁC GIỐNG ĐẬU TƢƠNG NGHIÊN CỨU……………………………………………………… 33 3.2 TRÌNH TỰ ĐOẠN MÃ HĨA CỦA GEN GmEXP1 PHÂN LẬP TỪ HAI GIỐNG ĐẬU TƢƠNG SL2 VÀ SL4……………………… 35 3.2.1 Kết tách chiết RNA tổng số từ non giồng đậu tƣơng………………………………… ……………………………… 35 3.2.2 Kết biến nạp vector tái tổ hợp vào tế bào khả biến E.coli DH5α………………………………… ……………………………… 36 3.2.3 Kết tách plasmid từ khuẩn lạc hai mẫu nghiên cứu 38 3.2.4 Kết xác định so sánh trình tự nucleotide, acid amine gen GmEXP1………………………………… ……………………… 40 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ………………………………………… 47 TÀI LIỆU THAM KHẢO………………………………………… 48 Tài liệu Tiếng Việt 48 Tài liệu Tiếng Anh 49 Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn v NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT ASTT Bp cDNA DHA DNA dNTP DT84 Đtg Đ8 ĐVN14 GmEXP1 HSG HSP HSPL LEA MGPT MW RNA SL4 SL2 Áp suất thẩm thấu Cặp bazơ Sợi DNA bổ sung đƣợc tổng hợp từ mRNA nhờ Enzym phiên mã ngƣợc Docosa Hexaenoic acid Deoxyribonucleic acid Deoxynucleotide Giống đậu tƣơng DT84 Đồng tác giả Giống đậu tƣơng Đ8 Giống đậu tƣơng ĐVN14 Glycine max expansin gene Heat Shock Granules - Hạt sốc nhiệt Heat Shock protein - Protein sốc nhiệt Hệ số pha lỗng Late embryogenesis abundant (Protein đƣợc hình thành với số lƣợng lớn q trình hình thành phơi) Mơi giới phân tử - Molecular chaperone Molecular weight - Khối lƣợng phân tử Ribonucleic acid Giống đậu tƣơng Sơn La Giống đậu tƣơng Sơn La Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn vi DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 2.1 Nguồn gốc giống đậu tƣơng nghiên cứu 2.2 Trình tự cặp mồi sử dụng để nhân đoạn mã hóa gen 21 GmEXP1 25 2.3 Thành phần cho phản ứng tổng hợp cDNA 26 2.4 Thành phần phản ứng PCR 26 2.5 Chu kỳ nhiệt cho phản ứng PCR 27 2.6 Thành phần phản ứng gắn gen vào vector tách dòng pBT 28 2.7 Thành phần phản ứng colony – PCR 30 2.8 Chu trình nhiệt phản ứng colony – PCR 31 3.1 Kích thƣớc rễ giống đậu tƣơng giai đoạn hạt nảy 34 mầm ngày tuổi (giai đoạn mầm) 3.2 Kích thƣớc rễ giống đậu tƣơng giai đoạn thật 35 3.3 Hệ số tƣơng đồng hệ số sai khác giống đậu 43 tƣơng SL2 SL4, giống đậu tƣơng GenBank mã số AF516879 dựa trình tự đoạn mã hóa gen GmEXP1 3.4 Vị trí sai khác trình tự nucleotid đoạn mã hóa 43 gen GmEXP1 giống đậu tƣơng 3.5 Hệ số tƣơng đồng hệ số sai khác trình tự acid 45 amine suy diễn 3.6 Vị trí sai khác trình tự acid amine protein 46 gen GmEXP1 mã hóa giống đậu tƣơng Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn vii DANH MỤC CÁC HÌNH Bảng Tên hình Trang 2.1 Hình ảnh hạt giống đậu tƣơng nghiên cứu 22 2.2 Sơ đồ vector pBT 29 3.1 Hình ảnh giống đậu tƣơng giai đoạn nảy mầm 33 3.2 Rễ giống đậu tƣơng giai đoạn mầm 34 3.3 Rễ giống đậu tƣơng giai đoạn thật 35 3.4 Hình ảnh điện di sản phẩm RT-PCR khuếch đại đoạn mã 36 hoá gen GmEXP1 từ giống đậu tƣơng 3.5 Đĩa ni cấy dịng tế bào khả biến E.coli 5α 37 GmEXP1 3.6 Hình ảnh điện di sản phẩm Colony-PCR từ khuẩn lạc 38 3.7 Hình ảnh điện di kiểm tra kết tách plasmid tái tổ hợp 39 3.8 Hình ảnh điện di sản phẩm cắt kiểm tra plasmid tái tổ 39 hợp enzym BamHI 3.9 So sánh trình tự nucleotide đoạn mã hóa gen 41 GmEXP1 giống đậu tƣơng SL2 SL4 với đoạn mã hoá gen GmEXP1 giống đậu tƣơng có mã số AF516879 Ngân hàng gen quốc tế 3.10 So sánh trình tự amino acid mã hoá gen GmEXP1 44 giống đậu tƣơng SL2 SL4 với giống công bố Ngân hàng gen quốc tế Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn MỞ ĐẦU Lý chọn đề tài Cây đậu tƣơng (Glycine max (L) Merrill) trồng quan trọng không Việt Nam mà nhiều quốc gia giới Đậu tƣơng loại trồng thuộc họ đậu, có ý nghĩa mặt kinh tế dinh dƣỡng đồng thời cịn có ý nghĩa quan trọng trọng việc cải tạo độ phì sử dụng lâu bền nguồn tài nguyên đất Hạt đậu tƣơng chứa 30% - 56% protein, chứa nhiều loại acid amine không thay (lysin, trytophan, metionin, cystein, leucin ), 12% - 15% lipit, vitamin (B1, B2, C, D, E, K ) cần thiết cho thể ngƣời động vật [1], [9], [10] Một đặc tính quan trọng đậu tƣơng có nốt sần rễ tạo khả cố định nitơ khơng khí, trồng đậu tƣơng góp phần bảo vệ đất bảo vệ mơi trƣờng Nƣớc ta có hệ sinh thái đa dạng, khí hậu vùng, miền lại khơng giống Địa hình có đến 75% đồi núi thƣờng có mùa khơ hanh miền bắc Những năm gần diễn biến khí hậu ngày phức tạp lƣợng mƣa phân bố không đồng vùng thời kỳ năm nên hạn hán nắng nóng kéo dài Đậu tƣơng tƣơng đối mẫn cảm với điều kiện ngoại cảnh thuộc nhóm chịu hạn kém, cơng tác chọn tạo giống đậu tƣơng có kiểu gen chống chịu ngày đƣợc quan tâm nghiên cứu [10] Cây đậu tƣơng gieo trồng nhiều loại đất khác nhau, nhƣng phát triển bình thƣờng đất ngập úng Tùy theo điều kiện cung cấp nƣớc mà rễ đậu tƣơng sớm phát triển xuống sâu; đất nặng rễ tập trung lớp đất mặt Độ ẩm đất thích hợp cho đậu tƣơng sử dụng nằm khoảng từ 75 - 90% giá trị độ ẩm đất nhỏ 75% kìm hãm phát triển sinh trƣởng quan Vào thời kỳ nở hoa, yêu cầu độ ẩm đậu tƣơng tăng lên Kết nghiên cứu cho thấy, Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn 37 khả biến chủng E.coli DH5α đƣợc cấy trải môi trƣờng LB đặc (pepton cao nấm men NaCl agarose) có bổ sung kháng sinh ampicillin (100mg/l) Xgal (40mg/l) IPTG (100µM) Ủ đĩa 370C 16 Kết thu đƣợc có khuẩn lạc màu xanh màu trắng Hình 3.5 Đĩa ni cấy dịng tế bào khả biến E.coli tổ GmEXP1 Chúng chọn khuẩn lạc trắng mẫu nuôi môi trƣờng LB lỏng có bổ sung kháng sinh carbenicillin ni lắc với tốc độ 200 vòng/phút 37oC qua đêm Tế bào tái tổ hợp mẫu đƣợc thu lại cách li tâm thu dịch đáy Để chọn dịng chúng tơi thực phản ứng PCR trực tiếp từ khuẩn lạc với cặp mồi đặc hiệu với đoạn mã hóa gen GmEXP1 nhằm sàng lọc khuẩn lạc mang plasmid tái tổ hợp chứa đoạn mã hóa gen GmEXP1 (thành phần chu kỳ nhiệt phản ứng phần phƣơng pháp) Chọn ngẫu nhiên mẫu khuẩn giống mẫu giống SL2 mẫu SL4 thực PCR điện di kiểm tra sản phẩm PCR trực tiếp từ Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn 38 khuẩn lạc gel argarose 1% với có mặt thang DNA chuẩn chụp ảnh dƣới ánh sáng cực tím M 0,77kb Hình 3.6 Hình ảnh điện di sản phẩm colony-PCR từ khuẩn lạc (M: thang DNA chuẩn 1kb; 1-2: Dòng SL2; 3-4: Dòng SL4) Kết thu đƣợc băng điện di có kích thƣớc khoảng 0.77kb nhƣ kích thƣớc đoạn mã hóa gen GmEXP1 3.2.3 Kết tách plasmid từ khuẩn lạc mẫu nghiên cứu Sau kết biến nạp chọn dòng đƣợc thực tốt phản ứng PCR đạt mức tối ƣu tiếp tục tiến hành tách plasmid theo Kit AccuPrep Plasmid Extraction hãng Bioneer Sản phẩm tách plasmid đƣợc kiểm tra điện di gel agarose 1% TAE 1X với có mặt marker chuẩn chụp ảnh dƣới ánh sáng cực tím Sản phẩm tách plasmid đảm bảo chất lƣợng số lƣợng phục vụ cho việc xác định trình tự nucleotide gen GmEXP1 Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn 39 Hình 3.7 Hình ảnh điện di kiểm tra kết tách plasmid tái tổ hợp (1 SL2 SL4) Plasmid tái tổ hợp tách chiết mang đoạn mã hóa gen GmEXP1 đƣợc quan tâm để khẳng định chắn điều tiến hành phản ứng cắt plasmid enzyme BamHI Kết sản phẩm cắt DNA plasmid đƣợc kiểm tra enzyme giới hạn BamHI đƣợc điện di gel agarose 1% TAE 1X với có mặt maker chuẩn chụp ảnh dƣới ánh sáng đèn cực tím M ~3.5 kb ~2.7 kb ~0.77 kb Hình 3.8 Hình ảnh điện di sản phẩm cắt kiểm tra plasmid tái tổ hợp enzym BamHI (M: thang DNA chuẩn 1kb; SL2; 3.SL4) Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn 40 Kết tách plasmid kiểm tra plasmid tái tổ hợp khẳng định tách dòng thành cơng mẫu có vạch tƣơng ứng với vị trí 0.77kb đƣợc sử dụng cho việc xác định trình tự nucleotide đoạn mã hóa gen GmEXP1 3.2.4 Kết xác định so sánh trình tự nucleotide gen GmEXP1 Xác định trình tự nucleotide đoạn mã hóa gen GmEXP1 tách dịng.chúng tơi tiến hành đọc trình tự nucleotide đoạn mã hóa gen GmEXP1 máy đọc trình tự tự động ABI- 3130 DNA capillary electrophoresis system Sau đọc trình tự nucleotid chúng tơi sử dụng phần mềm DNAstar BioEdit để phân tích trình tự nucleotid đoạn mã hóa gen GmEXP1 trình tự acid amin protein EXP1 Trình tự nucleotid đoạn mã hóa gen GmEXP1 đậu tƣơng đƣợc chúng tơi xác định có kích thƣớc 768 bp Chúng tơi tiến hành so sánh trình tự với trình tự công bố Ngân hàng gen quốc tế mang mã số AF516879 để khẳng định đoạn cDNA phân lập đƣợc trình tự gen mã hố protein GmEXP1 đậu tƣơng (Hình 3.9) Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn 41 Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn 42 Hình 3.9 So sánh trình tự nucleotide đoạn mã hóa gen GmEXP1 giống đậu tƣơng SL2 SL4 với đoạn mã hoá gen EXP1 có mã số AF516879 Ngân hàng gen quốc tế Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn 43 Kết so sánh Hình 3.9 cho thấy trình tự nucleotid gen GmEXP1 có độ tƣơng đồng cao từ 99.2% đến 99.6% Trình tự nucleotide đoạn mã hóa gen GmEXP1 phân lập từ hai giống đậu tƣơng SL2 SL4 cho thấy hệ số tƣơng đồng chúng 99.3%; so với trình tự có mã số AF516879 Ngân hàng gen quốc tế SL2 có hệ số tƣơng đồng 99.6% SL4 có hệ số tƣơng đồng 99.2% (Bảng 3.3) Bảng 3.3 Hệ số tƣơng đồng hệ số sai khác giống đậu tƣơng SL2 SL4 giống đậu tƣơng GenBank mã số AF516879 dựa trình tự đoạn mã hóa gen GmEXP1 Bảng 3.3 cịn thể hệ số sai khác trình tự nucleotide từ 0.4% đến 0.8% sai khác cụ thể đƣợc trình bày Bảng 3.4 Bảng 3.4 Vị trí sai khác trình tự nucleotid đoạn mã hóa gen GmEXP1 giống đậu tƣơng STT Vị trí 93 AF516879 C SL2 T SL4 T 271 G G A 278 G G A 438 G G A 536 G G C 550 G G C 646 T T A 722 T C C Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn 44 Trong giống đậu tƣơng SL2 AF516879 có mức tƣơng đồng 99.6% khác vị trí (93 722) Giữa SL2 SL4 có mức độ tƣơng đồng 99.3% khác vị trí (536 550 646); SL4 AF516879 khác vị trí nucleotide (93 271 278 438 536 550 646 722) (Bảng 3.4) Hình 3.10 So sánh trình tự acid amine mã hoá gen GmEXP1 giống đậu tƣơng SL2 SL4 với giống công bố Ngân hàng gen quốc tế có mã số AF516879 Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn 45 Hình 3.10 cho thấy đoạn mã hóa gen GmEXP1 phân lập từ giống đậu tƣơng SL2 SL4 có kích thƣớc 768bp mã hoá cho 255 acid amine Kết so sánh trình tự acid amine suy diễn gen GmEXP1 hai giống đậu tƣơng SL2 SL4 với với gen GmEXP1 trình tự gen có mã số AF516879 Ngân hàng gen quốc tế thể Bảng 3.5 Kết so sánh cho thấy hệ số tƣơng đồng trình tự acid amine suy diễn từ 98.4% đến 99.2%; hệ số tƣơng đồng SL2 SL4 98.4% SL2 AF516879 99.2%; SL4 AF516879 98.4% Bảng 3.5 Hệ số tƣơng đồng hệ số sai khác trình tự acid amine suy diễn Hệ số sai khác trình tự acid amine suy diễn dao động từ 0.8% đến 1.6% Sự sai khác cụ thể đƣợc thể Bảng 3.6 Bảng 3.6 cho thấy giống đậu tƣơng SL2 AF516879 có mức tƣơng đồng 99.2% khác vị trí (190 216 241) Giữa SL2 SL4 có mức độ tƣơng đồng 98.4% khác vị trí (91 93 179 184 190 216); SL4 AF516879 có mức độ tƣơng đồng 98.4% khác vị trí acid amine (91 93 179 184 216 241) Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn 46 Bảng 3.6 Vị trí sai khác trình tự acid amine protein gen GmEXP1 mã hóa giống đậu tƣơng STT Vị trí AF516879 SL2 SL4 91 D D N 93 R R K 179 S S T 184 A A P 190 V A V 216 L L M 241 V A A Từ kết phân tích chúng tơi khẳng định nhân tách dịng thành cơng xác định đƣợc trình tự nucleotide đoạn mã hóa gen GmEXP1 hai giống đậu tƣơng SL2 SL4 Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn 47 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ KẾT LUẬN 1.1 Bộ rễ năm giống đậu tƣơng nghiên cứu có phản ứng khác qua thời điểm gây hạn thể kích thƣớc rễ Kích thƣớc rễ có xu hƣớng tăng lên bị hạn Kích thƣớc rễ giống đậu tƣơng SL4 có trị số lớn tiếp hai giống ĐVN14 Đ8 cuối SL2 DT84 1.2 Đã nhân tách dịng thành cơng xác định đƣợc trình tự đoạn mã hóa gen GmEXP1 (cDNA) phân lập từ hai giống đậu tƣơng SL2 SL4 Đoạn mã hóa gen GmEXP1 có kích thƣớc 768bp mã hóa 255 acid amine 1.3 Trình tự nucleotide đoạn mã hóa gen GmEXP1 giống SL2 SL4 có sai khác vị trí nucleotide sai khác vị trí acid amine polypeptit suy diễn EXP1 So với trình tự mang mã số AF516879 Ngân hàng gen quốc tế (NCBI) trình tự nucleotide đoạn mã hóa gen GmEXP1 giống đậu tƣơng SL2 SL4 có hệ số tƣơng đồng từ 99,2% đến 99,6% hệ số sai khác từ 0,4% đến 0,8% Trình tự acid amine suy diễn giống đậu tƣơng SL2 SL4 có hệ số tƣơng đồng từ 98,% đến 99,% hệ số sai khác dao động từ 0,8% đến 1,6% ĐỀ NGHỊ Sử dụng trình tự đoạn mã hóa gen GmEXP1 phân lập từ giống có phát triển rễ tốt giống nghiên cứu làm nguyên liệu thiết kế vector phục vụ chuyển gen nhằm cải thiện khả chịu hạn giống đậu tƣơng chịu hạn Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt Ngô Thế Dân cộng (1999) Cây đậu tương Nxb Nông Nghiệp Hà Nội Trần văn Điền (2007) Giáo trình Cây đậu tương Nxb Nơng nghiệp Hà Nội Nguyễn Huy Hoàng (1992) Nghiên cứu khả chịu hạn giống đậu tương nhập nội Miền Bắc Việt Nam Luận án PTS.Hà Nội Nguyễn Thị Thúy Hƣờng (2011) Phân lập.tạo đột biến điểm gen P5CS liên quan đến tính chịu hạn thử nghiệm chuyển vào đậu tương Việt Nam Luận án tiến sĩ sinh học Thái Nguyên Trần Thị Phƣơng Liên (1999) Nghiên cứu đặc tính hố sinh sinh học phân tử số giống đậu tương có khả chịu nóng chịu hạn Việt Nam Luận án tiến sĩ Sinh học Viện Công nghệ Sinh học Hà Nội Trần Thị Phƣơng Liên (2010) Protein tính chịu chống chịu thực vật Nxb Khoa học tự nhiên cơng nghệ Hà Nội Lị Thanh Sơn Bùi Ngọc Bích Nguyễn Vũ Thanh Thanh Chu Hồng Mậu (2013) “Đặc điểm gen Expansin phân lập từ giống đậu tƣơng địa phƣơng Việt Nam” Tạp chí Sinh học 35(1) tr.99-105 Trần Đình Long (2000) Cây đậu tương Nxb Nơng nghiệp Hà Nội Chu Hồng Mậu (2008) Phương pháp phân tích di truyền đại chọn giống trồng Nxb Đại học Thái Nguyên 10 Chu Hoàng Mậu Nguyễn Thị Thúy Hƣờng Chu Hoàng Hà NguyễnVũ Thanh Thanh (2011) Gen đặc tính chịu hạn đậu tương Nxb Đại học Quốc Gia Hà Nội Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn 49 Tài liệu Tiếng Anh 11 Bray E.A (1997) “Plant responses to water deficit” Trends Plant Sci (2): 48-57 12 Cho H-T Cosgrove DJ (2000) modulates leaf growth “ Altered and pedicel expression of abscission expansin in Arabidopsis thaliana” Proc Natl Acad Sci USA97:9783–9788 13 Cho H-T Kende H (1998) “Tissue localization of expansins in deepwater rice” Plant J 15:805–812 14 Cosgrove DJ Li Z.C (1993) “ Role of expansin in cell enlargement of oat coleoptiles” Plant Physiol 103:1321–1328 15 Cosgrove DJ (1996) “Plant cell enlargement and the action of expansins” BioEssays 18:533–540 16 Cosgrove DJ (1997)“ Group I allergens of grass pollen as cell wall loosening agents Proe Natl Acad Sci USA 94: 6559 – 6564 17 Cosgrove DJ (1999)“Enzymes and other agents that enhance cell wall extensibility Annu Rev plant physiol Plant Mol Biol 50 : 391- 417 18 Cosgrove D.J (2000a) “ Expansive growth of plant cell walls” Plant Physiol Biochem 38:109–124 19 Cosgrove D.J (2000b) “ Loosening of plant cell walls by expansins Nature 407: 321- 326 20 Fleming A.J Caderas D Wehrli E McQueen Mason S Kuhlemeier C.( 1999) “Analysis of expansin-induced morphogenesis on the apical meristem of tomato” Planta 208:166–174 Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn 50 21 Fleming AJ McQueen Mason S Mandel T Kuhlemeier C (1997“Indu ction of leaf primordia by the cell wall protein expansin” Science 276:1415–1418 22 Fujita Y Fujita M Satoh R Maruyama K Parvez M M Seki M Hiratsu K Ohme-Takagi M Shinozaki K Yamaguchi-Shinozaki K (2005) “AREB1 is a transcription activator of novel ABRE-dependent ABA signaling that enhances drought stress tolerance in Arabidopsis” Plant Cel 17(12) pp 3470-88 23 Guo W Zhao J Li X Qin L Yan X Liao H (2011) “ A soybean ßexpansin gene GmEXPB2 intrinsically involved in root system architecture responses to abiotic stresses” Plant J 66(3): 541-52 24 Hartl F.U (1996).“Moleculer chaperones in cellular protein folding” Nature 381 pp 571- 580 25 Kam M J Yun H S Kaufman P B Chang S C Kim S C ( 2005) “Two expansins EXP1 and EXPB2 are correlated with the growth and development of maize roots” J Plant Physiol 48(3): 304-310 26 Kasper T.C Taylor H.M and RM Shibles 1984 “Taproot elongation rates of Soybean cultivars in the glasshouse and their relation to field rooting depth” Crop Sci 24:916-920 27 Lee D.K Ahn J.H Song S.K Choi Y.D Lee J.S (2003) “Expression of an Expansin Gene Is Correlated with Root Elongation in Soybean” Plant Physiology (131) pp 985 - 997 28 Lee D.K Ahn J.H Song S.K Choi SYD Lee J.S (2011) “ Expression of an Expansin gene is corre lated with root elongation in soybean (441-744) ” Korea Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn 51 29 Liao Y Zou H.F Wang H.W Zhang W.K Ma B Zhang J.S Chen S.Y (2008) “Soybean GmMYB76 GmMYB92 and GmMYB177 genes confer stress tolerance in transgenic Arabidopsis plants Cell Res” 18(10) pp 1047–1060 30 Li X.P Tian A.G Luo G.Z Gong Z.Z Zhang J.S Chen S.Y (2005) “Soybean DRE-binding transcription factors that are responsive to abiotic stresses” Theor Appl Genet 110(8) pp 1355-62 31 Li Y Darley C P Ongaro V Freming A Schipper O Baldauf S L McQueen.Mason S J (2002).“ Plant expansins are a comlex multigene family with an ancient evolutionary origin” J Plant Physiol 128 (3): 854-864 32 Link BM Cosgrove D.J (1998) “Acid-growth response and α-expansin in suspension cultures of bright yellow 2tobacco” Plant Physiol 118:907–916 33 Reinhardt D Wittwer F Mandel T Kuhlemeier C (1998)“ Localized upregulation of a new expansin gene predicts the site of leaf formation in the tomato meristem”.Plant Cell 10:1427–1437 34 Tran L.S Nakashima K Sakuma Y Osakabe Y Qin F Simopson S D Maruyama K Fujita Y Shinozaki K Yamaguchi – Shinozaki K (2007) “Co-expression of the stress- inducible zinc finger homeodomain ZFHD1 and NAC transcription factors enhances expression of the ERD1 gene in Arabidopsis” Plant J (1) pp 46-63 Số hóa trung tâm học liệu www: \\lrc-tnu.edu.vn ... KHOA HỌC NGUYỄN KIỀU LINH SO SÁNH TRÌNH TỰ ĐOẠN MÃ HĨA CỦA GEN GmEXP1 LIÊN QUAN ĐẾN SỰ KÉO DÀI RỄ Ở MỘT SỐ GIỐNG ĐẬU TƢƠNG ĐỊA PHƢƠNG Chuyên ngành: Công nghệ sinh học Mã số: 60.42.02.01 LUẬN VĂN... hệ số sai khác giống đậu 43 tƣơng SL2 SL4, giống đậu tƣơng GenBank mã số AF516879 dựa trình tự đoạn mã hóa gen GmEXP1 3.4 Vị trí sai khác trình tự nucleotid đoạn mã hóa 43 gen GmEXP1 giống đậu. .. BamHI 3.9 So sánh trình tự nucleotide đoạn mã hóa gen 41 GmEXP1 giống đậu tƣơng SL2 SL4 với đoạn mã hoá gen GmEXP1 giống đậu tƣơng có mã số AF516879 Ngân hàng gen quốc tế 3.10 So sánh trình tự amino