BỘ Y TẾ HỌC VIỆN Y DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN VIỆT NAM BÁO CÁO KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI KHOA HỌC CẤP CƠ SỞ NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP VÀ TÁC DỤNG ĐIỀU CHỈNH RỐI LOẠN LIPID MÁU CỦA BÀI THUỐC BBT TRÊN THỰC NGHIỆM – MÔ HÌNH NỘI SINH Chủ nhiệm đề tài: GS.TS. Trương Việt Bình HÀ NỘI - 2012 1 BỘ Y TẾ HỌC VIỆN Y DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN VIỆT NAM BÁO CÁO KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI KHOA HỌC CẤP CƠ SỞ NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP VÀ TÁC DỤNG ĐIỀU CHỈNH RỐI LOẠN LIPID MÁU CỦA BÀI THUỐC BBT TRÊN THỰC NGHIỆM – MÔ HÌNH NỘI SINH Chủ nhiệm đề tài: GS.TS. Trương Việt Bình Người tham gia: BSCKI. Vũ Thị Thuận 2 HÀ NỘI - 2012 3 BÁO CÁO TÓM TẮT ĐỀ TÀI I. BÁO CÁO TÓM TẮT KẾT QUẢ ĐỀ TÀI 1. Có thực hiện được mục tiêu không: Có 2. Tính mới của đề tài: HCRLLPM, một nguy cơ quan trọng cho sự hình thành và phát triển của bệnh xơ vữa động mach, các thuốc YHHĐ điều trị có hiệu quả tốt nhưng nhiều tác dung không mong muốn , nhiều chống chỉ định. Xu hướng hiện nay, sử dụng cây thuốc có nguồn gộc tự nhiên vừa mang lại hiệu quả, vừa hạn chế được các tác dụng không mong muốn. Bán hạ bạch truật thiên ma thang (gọi tắt là bài thuốc BBT) – Bài thuốc cổ phương thường được dùng để điều trị chứng đàm thấp, hội chứng có nhiều điểm tương đồng với hội chứng RLLPM. 3. Sử dụng kinh phí: 100% ngân sách nhà nước. 4. Kết luận và kiến nghị: * Kết luận: + Độc tính cấp - Cao lỏng BBT với liều 750g dược liệu/kg thể trọng chuột, gấp 75 lần liều dùng trên người không có độc tính cấp. - Chưa xác định được LD 50 của cao lỏng BBT trên chuột nhắt trắng bằng đường uống theo phương pháp Litchfield – Wilcoxon + Tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu – mô hình nội sinh: BBT liều 50 g/kg uống 5 ngày trên chuột nhắt trắng có tác dụng hạn chế sự RLLPM gây ra do tiêm màng bụng Poloxamer 407, biểu hiện bằng sự giảm nồng độ TC: 7,79%. * Kiến nghị: + Tiếp tục nghiên cứu để tìm quy trình chiết xuất và bào chế phù hợp, tiện sử dụng và có hiệu quả để sớm làm thủ tục thử nghiệm trên lâm sàng. + Từ những kết quả thu được trên lâm sàng làm thủ tục đăng ký sản phẩm để sớm đưa ra sử dụng rộng rãi trong cộng đồng. 4 NHỮNG CHỮ VIẾT TẮT AST Aspartat aminotransferase ALT Alanin aminotransferase BBT Bán hạ - Bạch truật – Thiên ma thang BMI Body – Mass – Index (Chỉ số khối lượng cơ thể ) BN Bệnh nhân CM Chylomicron ĐMC Động mạch chủ HA Huyết áp HDL - C High-Density Lipoprotein Cholesterol HMG-CoA reductase 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase IDL Intemediate Desity Lipoprotein Chlesterol LCAT Lecithin cholesterol acyltransferase LDL - C Low Density Lipoprotein Cholesterol LP Lipoprotein LPL Lipoprotein lipase NC Nghiên cứu P - 407 Poloxamer 407 RLLPM Rối loạn lipid máu TC Total cholesterol (Cholesterol toàn phần) TG Triglycerid TBMMN Tai biến mạch máu não VLDL-C Very Low Density Lipoprotein Cholesterol VXĐM Vữa xơ động mạch WHO World Health Organization (Tổ chức Y tế thế giới) YHHĐ Y học hiện đại YHCT Y học cổ truyền 5 ĐẶT VẤN ĐỀ Những năm gần đây, cùng với sự phát triển nhanh chóng của nền kinh tế và đời sống xã hội, rối loạn lipid máu (RLLPM) đã trở thành một vấn đề quan trọng trong đánh giá, điều trị và tiên lượng một số bệnh lý tim mạch. Hội chứng rối loạn lipid máu (RLLPM) là yếu tố nguy cơ quan trọng cho sự hình thành, phát triển của bệnh xơ vữa động mạch (VXĐM). Đây là một bệnh của nền văn minh, của các nước công nghiệp phát triển. Hiện nay VXĐM là bệnh đang được chú ý, bởi các biến chứng và hậu quả của bệnh rất nặng như: Nhồi máu cơ tim, tai biến mạch máu não, tăng huyết áp. Theo Tổ chức Y tế thế giới, nguyên nhân gây tử vong nhiều nhất ở các nước có nền kinh tế phát triển là bệnh tim mạch có liên quan đến xơ vữa động mạch chiếm tỷ lệ 45%, trong đó mạch vành là 32%, mạch não là 13% và tỷ lệ tử vong vẫn cao trong những năm gần đây. Theo dự đoán đến năm 2020 các bệnh tim mạch, đặc biệt là VXĐM sẽ trở thành nguyên nhân hàng đầu của gánh nặng bệnh tật trên toàn thế giới. Bệnh VXĐM ở Việt Nam trong những năm gần đây có chiều hướng gia tăng. Theo thống kê của Viện Tim mạch thì tỷ lệ mắc bệnh mạch vành năm 1991 là 3%; năm 1996 là 6,1% và năm 2001 là 9,5%, trong đó bệnh nhồi máu cơ tim chiếm tỷ lệ cao. Theo nhịp độ phát triển của xã hội, đời sống vật chất ngày càng được cải thiện, số người mắc bệnh tim mạch có liên quan đến VXĐM ngày càng tăng, ảnh hưởng rõ rệt đến sức lao động, chất lượng cuộc sống và tuổi thọ của con người. Hiện nay hội chứng RLLPM đang là vấn đề thời sự của các nhà Y - Dược học trên thế giới và trong nước quan tâm nghiên cứu. Các nghiên cứu ở Việt Nam và thế giới đều khẳng định điều trị RLLPM có hiệu quả sẽ làm hạn chế sự phát triển của bệnh VXĐM, và ngăn ngừa được biến chứng của nó. Các kết quả nghiên cứu đã cho thấy hội chứng RLLPM của YHHĐ và chứng đàm thấp của YHCT có những điểm tương đồng. Khi điều trị chứng đàm thấp có hiệu quả thì kết quả xét nghiệm lipid máu cũng được cải thiện tốt. 6 Hiện nay, các thuốc của y học hiện đại như nhóm fibrat, nhóm statin, acid nicotinic… điều trị có hiệu quả tốt, tác dụng nhanh nhưng lại gây ra các tác dụng không mong muốn như đau cơ, tiêu cơ, tăng enzym gan, rối loạn tiêu hoá và không được chỉ định cho người suy gan, suy thận hoặc loét dạ dày – tá tràng. Vì thế một trong những xu hướng hiện nay trong điều trị hội chứng rối loạn lipid máu là hướng về các thuốc có nguồn gốc tự nhiên, vừa mang lại hiệu quả điều trị vừa hạn chế được các tác dụng không mong muốn cho người bệnh. Ở Việt Nam với truyền thống “Nam dược trị Nam nhân” nhiều bài thuốc cổ phương, nghiệm phương, các vị thuốc thảo mộc đã được sử dụng rộng rãi trong cả nước để chữa chứng bệnh này như bài: “Nhị trần thang”, “Bối mẫu qua lâu tán”, “Thanh khí hóa đàm thang”, viên ngưu tất, viên nghệ nén (Choletan) Bán hạ bạch truật thiên ma thang (gọi tắt là BBT) là bài thuốc cổ phương được sử dụng nhiều năm nay điều trị chứng đàm thấp có kết quả tốt tại các bệnh viện song chưa có nghiên cứu đánh giá một cách khoa học và tìm hiểu cơ chế tác dụng của BBT trên thực nghiệm. Do vậy, đề tài “Nghiên cứu độc tính cấp và tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu của bài thuốc BBT trên thực nghiệm – mô hình nội sinh” được thực hiện với 2 mục tiêu: 1. Nghiên cứu độc tính cấp của bài thuốc BBT trên thực nghiệm 2. Đánh giá tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu của bài thuốc BBT trên mô hình gây tăng cholesterol máu nội sinh. 7 Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. Hội chứng rối loạn lipid máu theo Y học hiện đại 1.1.1. Đại cương về lipid và lipoprotein máu 1.1.1.1. Lipid máu Lipid không tan trong nước và không tan trong máu, vì vậy lipid phải kết hợp với protein nhờ liên kết Vander - Walls để tạo thành lipoprotein (LP). Nhờ tạo thành lipoprotein nên các lipid tan được trong nước và vận chuyển đến các mô. Lipid máu bao gồm: cholesterol toàn phần (cholesterol tự do và cholesterol este hóa), triglycerid, phospholipid và các acid béo tự do. - Cholesterol là một alcol vòng không no, là thành phần tham gia cấu tạo màng tế bào. - Triglycerid cấu tạo gồm một phân tử glycerol và 3 acid béo, có 3 chức năng chính là: tạo nên mỡ trung tính dưới dạng dự trữ và cung cấp năng lượng, cách nhiệt, là lớp đệm để bảo vệ các cơ quan trong cơ thể. - Phospholipid là một phức hợp có nhiều dạng, có nhiều chức năng đặc hiệu như: truyền tin trong tế bào, chất làm căng bề mặt, tham gia cấu tạo màng tế bào. - Acid béo là những chuỗi cacbon có mạch thẳng được chia thành 2 nhóm chính: acid béo bão hòa và acid béo không bão hòa. Protein gắn vào các lipid có nguồn gốc tại niêm mạc ruột hoặc tại gan gọi là apolipoprotein. 1.1.1.2. Cấu trúc của lipoprotein Lipid không tan trong nước, chúng được vận chuyển trong huyết tương dưới dạng kết hợp với protein đặc hiệu (gọi là apolipoprotein, viết tắt là Apo) tạo nên phức hợp phân tử lớn gọi là lipoprotein (LP). Lipoprotein là các phân tử hình cầu, cấu trúc gồm 2 phần: 8 - Phần ưa nước (vỏ ngoài) có các apoprotein, cholesterol tự do và các phospholipid. - Phần kỵ nước (trong lõi), có cholesterol este và triglycerid. Mỗi một loại lipoprotein chứa một hoặc nhiều apolipoprotein. Các Apo này tạo sự ổn định cấu trúc cho lipoprotein, tạo cầu nối với thụ thể của tế bào, các thụ thể này quyết định chuyển hóa của một phân tử lipoprotein và hoạt động như các đồng yếu tố của các enzym trong quá trình chuyển hóa lipid. Hình 1.1. Cấu trúc lipoprotein 1.1.1.3. Phân loại Các lipoprotein có tỷ lệ lipid và protein khác nhau nên chúng có tỷ trọng và độ di chuyển điện di khác nhau. Dựa vào tỷ trọng của lipoprotein, người ta xếp các lipoprotein thành 5 loại khác nhau. - Hạt vi thể dưỡng chấp (chylomicron): thành phần chủ yếu trong hạt vi thể dưỡng chấp là triglycerid (85 – 95%), cholesterol chỉ chiếm 2- 5%. Hạt vi thể dưỡng chấp là chất vận chuyển triglycerid ngoại sinh tới gan. - Lipoprotein có tỷ trọng rất thấp (VLDL) được tạo ra ở gan có thành phần chủ yếu là triglycerid và cholesterol. Lipoprotein có tỷ trọng rất thấp là chất vận chuyển triglycerid nội sinh. 9 - Lipoprotein có tỷ trọng thấp (LDL): do gan tổng hợp, là chất vận chuyển cholesterol đến các tổ chức, tỷ trọng 1,019 – 1,063, kích thước 200 – 220A 0 , hằng số nổi SF 0 – 20, mang chủ yếu apoprotein B. - Lipoprotein có tỷ trọng trung gian (IDL): được tạo ra trong quá trình chuyển hóa của VLDL. - Lipoprotein có tỷ trọng cao (HDL): là chất vận chuyển cholesterol từ các tổ chức về gan, tỷ trọng 1,063 – 1,210, kích thước 75 – 95A 0 , mang apoprotein AI, AII, XX. Hình 1.2. Mô phỏng các loại lipoprotein 1.1.2. Chuyển hóa của lipoprotein 1.1.2.1. Chuyển hóa lipoprotein ngoại sinh Sau khi ăn chất béo, triglycerid và cholesterol được hấp thu vào tế bào ruột dưới dạng acid béo và cholesterol tự do. Trong tế bào ruột, acid béo được tái este hóa cùng với cholesterol, chúng sát nhập vào chân của phân tử chylomicron mới sinh. Lớp bề mặt của phân tử này gồm: phospholipid và các apo AI, AII, AIV, apo B48 là một protein được sinh ra cùng một gen mã hóa apo B100 ở gan. 10 [...]... nghiên cứu thử độc tính cấp và tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu trên mô hình nội sinh đều được tiến hành tại Bộ môn Dược lý – Trường Đại học Y Hà Nội Các xét nghiệm sinh hoá, định lượng các chất trong các nghiên cứu trên đều được thực hiện tại phòng xét nghiệm, Bộ môn Dược lý – Đại học Y Hà Nội - Thời gian nghiên cứu: Từ tháng 9/ 2011 đến tháng 4/ 2012 2.3 Đối tượng nghiên cứu: Động vật thực nghiệm. .. gấp 75lần liều dùng trên người (tính chuột nhắt trắng hệ số ngoại suy liều là 10) nhưng thuốc thử không có biểu hiện độc tính cấp Vì vậy chưa xác định được LD50 của cao lỏng BBT trên chuột nhắt trắng bằng đường uống theo phương pháp Litchfield – Wilcoxon 3.2 Tác dụng của bài thuốc BBT trên mô hình gây tăng lipid máu nội sinh trên chuột nhắt trắng Bảng 3.1 Mô hình rối loạn lipid máu bằng Poloxamer 407... nghiên cứu thuốc điều trị rối loạn lipid máu, trước hết phải gây được mô hình tăng lipid máu Nhiều loài động vật đã được sử dụng và nhiều mô hình dược lý cũng đã được nghiên cứu và áp dụng thành công trên động vật thực nghiệm Các mô hình có thể thuộc loại: gây tăng cholesterol hoặc lipid máu ngoại sinh (đưa cholesterol và mỡ theo đường thức ăn), gây tăng cholesterol máu nội sinh (gây tăng tổng hợp cholesterol)... polyphenol của cây chè dây và cao chiết từ cây giảo cổ lam) trên thỏ gây tăng lipid máu Kết quả nghiên cứu cho thấy Gylopsin làm giảm các chỉ số TG, TC, LDL-C, làm tăng HDL-C huyết tương, đồng thời giảm MDA huyết tương Ngoài ra, Gylopsin còn làm giảm mức độ XVĐM * Một số mô hình dược lý thực nghiệm gây tăng cholesterol máu để nghiên cứu thuốc điều trị rồi loạn lipid máu 24 Để nghiên cứu thuốc điều trị rối loạn. .. độ cholesterol máu và bệnh mạch vành * Điều trị RLLPM là giảm tai biến mạch vành Kết quả nghiên cứu của Gonld AL và cộng sự (1995) đã phân tích 35 nghiên cứu lớn trên 77.257 bệnh nhân, theo dõi trong 2 – 12 năm, thấy cứ giảm 20% cholesterol thì giảm được 18,1% tử vong chung và 2,41% tử vong do bệnh mạch vành * Rối loạn lipid máu và tai biến mạch máu não Qua kết quả nghiên cứu của các tác giả đều chứng... 88,3mg%, TG máu cao có 43 BN sau điều trị giảm trung bình 68,1mg % 1.2.5.2 Nghiên cứu trên thực nghiệm: - Nghệ Curcuma Longa được nghiên cứu trên thực nghiệm và thử nghiệm lâm sàng cho thấy cao lỏng và viên nén với liều tương đương 10g nghệ tươi/ngày, dùng trong 1 tháng làm giảm 11,7 % TC, gần như tác dụng của clofibrat với liều 1g/ngày - Nguyễn Thị Như Ái và cộng sự đã tiến hành nghiên cứu tác dụng của chế... nghiên cứu 2.4.2 Mô hình gây tăng lipid máu nội sinh trên chuột nhắt trắng: Sử dụng và điều chỉnh mô hình gây tăng lipid máu nội sinh bằng Poloxamer 407 (P - 407) theo Millar và cộng sự [ 64] Chuẩn bị dung dịch P-407 5 % bằng cách pha 1g P-407 trong 20 ml nước muối sinh lý 0,9 %, để tủ lạnh qua đêm để làm tăng độ tan của P407 Kim và xylanh dùng để tiêm chuột được ngâm trong nước đá trước khi sử dụng. .. các loại lipid thay đổi trong mô hình nghiên cứu trên động vật có sự khác biệt với hội chứng rối loạn lipid máu ở người nhưng phần lớn các mô hình nghiên cứu này cho kết quả có sự tương quan cao với thử nghiệm lâm sàng Động vật được sử dụng trong các mô hình tăng cholesterol máu thường là: thỏ, chuột cống, chuột nhắt, chuột đồng (hamster), ngoài ra có thể dùng khỉ, lợn, chim cút Trên thỏ, mô hình Anichkov... + Pháp điều trị: Ích khí, kiện tỳ, ôn dương, bổ thận 1.2.5 Tình hình nghiên cứu và ứng dụng thuốc YHCT điều trị hội chứng RLLPM 1.2.5.1 Nghiên cứu trên lâm sàng * Nghiên cứu tại Việt Nam: + Nghiên cứu độc vị: - Ngưu tất: Phạm Khuê và Đoàn Thị Nhu: viên Bidentin chiết xuất từ ngưu tất làm giảm TC máu ở 43% bệnh nhân - Tỏi: Vũ Hiền Hạnh, Lương Thúy Quỳnh nghiên cứu viên tỏi (Allisa) thấy có tác dụng làm... nhất là khi có giảm đồng thời HDL- C Nghiên cứu dịch tễ về cholesterol máu trong bệnh vữa xơ động mạch tại Framingham cho thấy giữa nộng độ cholesterol máu và tỷ lệ tử vong do VXĐM có mối tương quan tỷ lệ thuận 1.1.6 Rối loạn lipid máu và tai biến mạch vành, mạch não * Rối loạn lipid máu và tai biến mạch vành Kannell và các cộng sự năm 1971 (Framingham) nghiên cứu trên 5.000 bệnh nhân, theo dõi trong . chế tác dụng của BBT trên thực nghiệm. Do vậy, đề tài Nghiên cứu độc tính cấp và tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu của bài thuốc BBT trên thực nghiệm – mô hình nội sinh được thực hiện với. mục tiêu: 1. Nghiên cứu độc tính cấp của bài thuốc BBT trên thực nghiệm 2. Đánh giá tác dụng điều chỉnh rối loạn lipid máu của bài thuốc BBT trên mô hình gây tăng cholesterol máu nội sinh. 7 Chương. NAM BÁO CÁO KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỀ TÀI KHOA HỌC CẤP CƠ SỞ NGHIÊN CỨU ĐỘC TÍNH CẤP VÀ TÁC DỤNG ĐIỀU CHỈNH RỐI LOẠN LIPID MÁU CỦA BÀI THUỐC BBT TRÊN THỰC NGHIỆM – MÔ HÌNH NỘI SINH Chủ nhiệm đề tài: