BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI NGUYỄN THỊ KIỀU LY NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG PHỐI HỢP CỦA MỘT SỐ LOẠI HÓA CHẤT CÓ HOẠT TÍNH ESTROGEN ðẾN KHẢ NĂNG SINH SẢN CỦA CHUỘT CÁI SWISS-ALBINO LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI – 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI NGUYỄN THỊ KIỀU LY NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG PHỐI HỢP CỦA MỘT SỐ LOẠI HÓA CHẤT CÓ HOẠT TÍNH ESTROGEN ðẾN KHẢ NĂNG SINH SẢN CỦA CHUỘT CÁI SWISS-ALBINO LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành : Thú y Mã số : 60.64.01.01 Người hướng dẫn khoa học : TS. Huỳnh Thị Mỹ Lệ TS. Võ Thị Bích Thủy HÀ NỘI – 2013 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan ñây là ñề tài nghiên cứu của tôi và các ñồng nghiệp. Các số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn là trung thực, do tôi khảo sát nghiên cứu, có sự giúp ñỡ của các ñồng nghiệp . Tôi xin cam ñoan, các thông tin trích dẫn trong luận văn ñều ñược chỉ rõ nguồn gốc. Tác giả luận văn Nguyễn Thị Kiều Ly Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp ii LỜI CẢM ƠN ðể hoàn thành bản luận văn này, ngoài sự cố gắng, nỗ lực hết mình của bản thân còn có sự hướng dẫn tận tình của cô giáo hướng dẫn khoa học TS. Võ Thị Bích Thủy, TS. Huỳnh Thị Mỹ Lệ Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc ñến cô giáo hướng dẫn, người ñã giành nhiều thời gian quý báu tận tình giúp ñỡ, hướng dẫn tôi trong suốt quá trình nghiên cứu và hoàn thành luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn: - Ban lãnh ñạoViện Nghiên cứu Hệ Gen - Viện Hàn Lâm Khoa Học và Công Nghệ Việt Nam - Tập thể cán bộ công nhân viên Viện Nghiên cứu Hệ Gen - Viện Hàn Lâm Khoa Học và Công Nghệ Việt Nam - Ban ñào tạo sau ñại học – Trường ñại học Nông Nghiệp Hà Nội. ðã tận tình giúp ñỡ tôi trong suốt quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn. Nhân dịp này, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới gia ñình, người thân, bạn bè, ñồng nghiệp - Những người luôn tạo ñiều kiện, ñộng viên, giúp ñỡ tôi vượt qua mọi khó khăn trong quá trình học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận văn. Hà Nội, ngày … tháng … năm 2013 Tác giả luận văn Nguyễn Thị Kiều Ly Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp iii MỤC LỤC LỜI CAM ðOAN i LỜI CẢM ƠN ii MỤC LỤC …………………………………………………………… iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT ……………………………………… vi DANH MỤC BẢNG ……………………………………………….……vii DANH MỤC HÌNH …………………………………………………….viii PHẦN 1: MỞ ðẦU 1 1.1. ðặt vấn ñề 1 1.2.Mục tiêu của ñề tài 3 1.3.Ý nghĩa khoa học 3 1.4.Ý nghĩa thực tiễn 3 PHẦN 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 4 2.1. Các hoạt chất gây rối loạn nội tiết và tình hình sử dụng hoạt chất trong thực tế 4 2.2. Tình hình nghiên cứu ảnh hưởng của các hoạt chất gây rối loạn nội tiết trên thế giới 9 2.3. Tình hình nghiên cứu về ảnh hưởng của các hoạt chất gây rối loạn nội tiết ở Việt Nam 12 PHẦN 3: NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU, 18 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 3.1. ðối tượng nghiên cứu 18 3.2. Nội dung nghiên cứu 19 3.2.1. Nghiên cứu ảnh hưởng của hoạt chất ñến khả năng mang thai của chuột mẹ 19 3.2.2. Nghiên cứu ảnh hưởng của hoạt chất ñến khả năng sinh sản và nuôi con của chuột cái 19 3.2.3. Nghiên cứu ảnh hưởng của hoạt chất ñến sự sinh trưởng và phát triển của chuột con ñẻ ra 19 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp iv 3.3. Nguyên liệu 20 3.3.1. Hóa chất. 20 3.3.2. ðộng vật 20 3. 4. Phương pháp nghiên cứu 21 3.4.1. Công thức phối hợp hoạt chất 21 3.4.2. Bố trí thí nghiệm 23 3.4.3. Phương pháp theo dõi các chỉ số 23 3.5. Phương pháp xử lý số liệu 25 PHẦN 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 27 4.1. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của các hóa chất phối hợp tới thời gian mang thai của chuột mẹ 27 4.2. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của hoạt chất ñến khả năng sinh sản và nuôi con của chuột cái 29 4.3. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của các hóa chất phối hợp ñến sự sinh trưởng và phát triển của chuột con ñẻ ra 35 4.3.1. Khả năng tăng trọng của chuột cái và chuột ñực F1 tại ngày cai sữa (21 ngày tuổi) và thời ñiểm kết thúc tiền trưởng thành (41 ngày tuổi) 35 4.3.2. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của các hóa chất phối hợp tới thời gian phát dục (thời gian mở âm ñạo (Vaginal open day- VO) của chuột cái F1 41 4.3.3. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của các hóa chất phối hợp tới trọng lượng các cơ quan sản sinh hormone của chuột cái và chuột ñực F1 trưởng thành 43 4.3.4. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của các hóa chất phối hợp tới trọng lượng các cơ quan sinh sản của chuột F1 trưởng thành (buồng trứng, tử cung và tinh hoàn) 53 4.3.5. Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của các hóa chất phối hợp tới biến ñổi mô học các cơ quan sinh sản của chuột cái F1 trưởng thành (buồng trứng, tử cung) 56 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp v PHẦN 5: KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 62 5.1.Kết luận: 62 5.2.ðề nghị 63 TÀI LIỆU THAM KHẢO………………………………………… …65 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp vi DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT AND : Acid deoxyribonucleic APEs : Alkylphenolethoxylate BPA : Bisphenol A DES : Diethylstilbesterol EC : Ủy ban châu Âu EDCs : Endocrine disrupting chemicals (các chất gây rối loạn nội tiết) EE : 17α-ethynylestradiol OP : 4-tert-octylphenol PHBA : Acid p-hydroxybenzoic NP : 4-nonylphenol NPEs : Nonylphenol ethoxylate Nomenclature : Danh pháp IBP : Isobutylparaben m,,,,,, IUPAC : International Union of Pure and Applied Chemistry TS : Tiến sĩ VE : Dung dịch Natri Saline 9% 0 S.E.M : Standard error of the mean (sai số chuẩn của giá trị trung bình) Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp vii DANH MỤC BẢNG Bảng 4.1. Ảnh hưởng của các hóa chất phối hợp tới thời gian mang thai của chuột mẹ 27 Bảng 4.2. Ảnh hưởng của các hóa chất phối hợp (BPA+ NP, BPA+OP, BPA+IBP) tới tổng số chuột con F1, tỷ lệ sống sót, và tỷ lệ cái/ ñực của chuột thế hệ F1 29 Bảng 4.3: trọng lượng của chuột cái F1giai ñoạn21ngày tuổi và 41 ngày tuổi ……………………………………………………………………… …………… 34 Bảng 4.3.(Tiếp theo): trọng lượng của chuột cái F1giai ñoạn21ngày tuổi và 41 ngày tuổi … 35 Bảng 4.4:Ảnh hưởng của các hóa chất phối hợp: BPA+ NP, BPA+OP, BPA+IBP tới thời gian phát dục (thời gian mở âm ñạo -Vaginal open day) của chuột cái F1 42 Bảng 4.5: .Ảnh hưởng của các hóa chất phối hợp tới trọng lượng các cơ quan sản sinh hormone (Tuyến yên, tuyến giáp, tuyến thượng thận, gan, lá lách, tử cung, buồng trứng) của chuột cái F1trước tuổi dậy thì vào ngày PND 41 44 Bảng 4.6: Ảnh hưởng của các hóa chất phối hợp tới trọng lượng các cơ quan sản sinh nội tiết (Tuyến yên, tuyến giáp, tuyến thượng thận, gan, lá lách, tử cung, buồng trứng) của chuột ñực F1 trước tuổi dậy thì vào ngày PND 41 49 Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ khoa học nông nghiệp viii DANH MỤC HÌNH Hình 1.1:Ảnh hưởng của các hoạt chất ñến cơ thể. 6 Hình 3.1: Nguyên liệu và ñối tượng nghiên cứu 18 Hình 3.2: Các hoạt chất kết hợp và ñối chứng 21 Hình 3.3: Các mẫu bệnh phẩm ñược ngâm formol 10% 23 Hình3.4:Sơ ñồ bố trí thí nghiệm và các chỉ tiêu kiểm tra 24 Hình 4.1. Kết quả kiểm tra trọng lượng chuột ñực và chuột cái F1 ở giai ñoạn 1ngày tuổi 32 Hình 4.2: Ảnh hưởng của các hóa chất phối hợp tới trọng lượng chuột cái F1 ở 2 giai ñoạn 21 và 41 ngày tuổi. a p < 0.05 so với ñối chứng âm (VE)37 Hình 4.3. Ảnh hưởng của các hóa chất phối hợp tới trọng lượng chuột ñực F1 ở 2 giai ñoạn 21 và 41 ngày tuổi. a p < 0.05 so với ñối chứng âm (VE)39 Hình 4.4. Bệnh phẩm các tổ chức sản sinh hormone: tuyến yên, tuyến giáp trạng, lách, gan, tuyến thượng thận; các cơ quan sinh sản ñực cái: buồng trứng, tử cung, tinh hoàn 43 Hình 4.5.Ảnh hưởng của các hóa chất phối hợp tới trọng lượng các cơ quan sản sinh hormone của chuột cái F1 trưởng thành (tuyến yên, tuyến giáp, tuyến thượng thận, gan, lách, thận). a p < 0.05 so với ñối chứng âm (VE) 47 Hình 4.6.Ảnh hưởng của các hóa chất phối hợp tới trọng lượng các cơ quan sản sinh nội tiết của chuột ñực F1 trưởng thành (Tuyến yên, tuyến giáp, tuyến thượng thận, gan, lách, thận). a p < 0.05 so với ñối chứng âm (VE) 52 Hình 4.7. Ảnh hưởng của các hóa chất phối hợp tới trọng lượng các cơ quan sinh sản của chuột F1(tử cung, buồng trứng, tinh hoàn). a p < 0.05 so với ñối chứng âm (VE) 54 Hình 4.8.Ảnh hưởng các hóa chất phối hợp trên phân tích mô bệnh học tử cung ở chuột cái F1trưởng thành. Sự rối loạn tổ chức trong tuyến nội mạc [...]... nh ng tác ñ ng ñ i v i cá th mang thai và s sinh trư ng phát tri n c a th h con sinh ra t nh ng ñ i tư ng b phơi nhi m b i các hóa ch t môi trư ng có ho t tính sinh h c này, ñây là m t câu h i m Do v y, chúng tôi ti n hành nghiên c u ñ tài: Nghiên c u nh hư ng ph i h p c a m t s lo i hóa ch t có ho t tính estrogen ñ n kh năng sinh s n c a chu t cái Swiss -Albino Trư ng ð i H c Nông Nghi p Hà N i –... thai thông qua các ch tiêu + Th i gian mang thai + Tri u ch ng, b nh tích (n u có) + T l s y thai 3.2.2 Nghiên c u nh hư ng c a các hóa ch t ñ n kh năng sinh s n và nuôi con c a chu t cái + T ng s chu t con ñư c sinh ra + T l ñ c /cái + T l s ng + Kh i lư ng chu t sơ sinh 3.2.3 Nghiên c u nh hư ng c a các hóa ch t ñ n s sinh trư ng và phát tri n c a chu t con F1 + Kh i lư ng cai s a và tách m (21 ngày... gian mang thai 1.3.Ý nghĩa khoa h c - Là tài li u khoa h c xác ñ nh ñư c nh hư ng sinh h c c a m t s ch t gây r i lo n n i ti t ( BPA, NP, OP, và IBP) ñ n kh năng sinh s n c a chu t cái Swiss- Albino; - K t qu nghiên c u s cung c p thêm các s li u ñ minh ch ng nh ng nh hư ng b t l i c a các hóa ch t môi trư ng có ho t tính sinh h c khi ñư c s d ng v i li u quá cao trong th i gian ng n, ho c dùng li u... u lu t v hóa ch t và an toàn th c ph m t trư c ñ n nay thư ng nói ñ n v n ñ v ñ c tính, phát sinh ung thư, nh hư ng x u ñ n h sinh s n và bi n ñ i b t thư ng liên quan ñ n nhi m s c th mà chưa nghiên c u sâu ñ n các tác ñ ng theo cơ ch sinh h c trong t bào, ñ c bi t là tác ñ ng ñ i v i h th ng các cơ quan s n sinh hormone, cơ quan sinh s n, và trên th c t vì l i nhu n trong kinh doanh nên có r t ít... m chí qua con ñư ng tình d c, nhưng nh ng hóa ch t môi trư ng này khi xâm nh p vào cơ th có th làm gi m kh năng sinh s n nam gi i, suy gi m s lư ng cá th ñ c ñư c sinh ra, gây b t thư ng trong cơ quan sinh s n nam gi i, b nh sinh s n c a n bao g m c v n ñ sinh Trư ng ð i H c Nông Nghi p Hà N i – Lu n văn th c sĩ khoa h c nông nghi p 1 s n, d y thì s m, lão hóa s m, ung thư bu ng tr ng và tuy n ti n... th c ph m có th có NPEs, NP Th m chí, trong các nhà máy ch bi n th c ph m NP có th lây nhi m vào th c ph m t các thu c t y r a, máy móc và xư ng s n xu t Sông, bi n là nơi thu nh n nư c th i công nghi p và có ch a hàm lư ng NP r t cao Trong nư c sông có kho ng 0,1 – 1 g/ lít, tr m tích dư i ñáy sông có kho ng 200 – 2000 g/ kg, nư c bi n có kho ng 0.32 g/ lít, trong nư c ngu n, ñ t, không khí có ñ n 1600... các lo i kem dư ng và kem ñánh răng), có th bi n ñ i thành ch t ñ c khi ti p xúc v i ánh sáng m t tr i, gây lão hóa da s m và làm tăng nguy cơ ung thư da M t s nghiên c u cũng ñã ch ra r ng parabens có th tác ñ ng như estrogen trong cơ th và ti p xúc nhi u có th nh hư ng tr c ti p ñ n h th ng n i ti t, gây r i lo n hormone, bi n ñ i cơ quan sinh d c ñ c và cũng có th là nguyên nhân gây nên ung thư vú... ñ c gây ung thư t rư u các mô ñ ng v t, có th gây bi n d vi khu n và các t bào ñ ng v t có vú Ngư i nghi n rư u mãn tính, n ng ñ Aa trong máu tăng cao, có th gây ung thư gan và các b ph n khác trong cơ th Khói thu c lá có thành ph n r t ph c t p, v i hơn 4.000 h p ch t, trong ñó 200 lo i có 7 Ch t ñ c gây ung thư t h i cho s c kh e, ñ c bi t có t i 40 ch t có thu c lá th gây ung thư cho ngư i Nguy... h c nông nghi p 2 1.2.M c tiêu c a ñ tài ð tài này nghiên c u nh hư ng ph i h p c a BPA và các ch t OP, NP và IBP ñ n chu t cái mang thai Và m c ñ nh hư ng ph i h p c a các h n h p hóa ch t này ñ n s sinh trư ng, phát tri n, bi n ñ i c a h th ng sinh s n và n i ti t c a th h chu t ñ c, chu t cái ñư c sinh ra t nh ng con chu t m phơi nhi m các lo i hóa ch t trên trong th i gian mang thai 1.3.Ý nghĩa... nh ng lo i hóa ch t này ñ i v i s c kh e con ngư i (Golden và cs., 2005) Do v y, vi c nghiên c u nh ng tác ñ ng c a chúng ñ n cu c s ng con ngư i và ñ ng v t c n ñư c ti n hành ñ ng b , chuyên sâu, s d ng các nghiên c u trong d ch t h c, mi n d ch h c, b nh lý h c và sinh h c phân t , ñ t ñó có các ñ nh hư ng trong vi c s d ng các ch t hóa h c trong ñ i s ng T i Vi t Nam, th c tr ng ô nhi m hóa ch t . NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG PHỐI HỢP CỦA MỘT SỐ LOẠI HÓA CHẤT CÓ HOẠT TÍNH ESTROGEN ðẾN KHẢ NĂNG SINH SẢN CỦA CHUỘT CÁI SWISS-ALBINO LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành : Thú y Mã số. HÀ NỘI NGUYỄN THỊ KIỀU LY NGHIÊN CỨU ẢNH HƯỞNG PHỐI HỢP CỦA MỘT SỐ LOẠI HÓA CHẤT CÓ HOẠT TÍNH ESTROGEN ðẾN KHẢ NĂNG SINH SẢN CỦA CHUỘT CÁI SWISS-ALBINO LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG. PHÁP NGHIÊN CỨU 18 3.1. ðối tượng nghiên cứu 18 3.2. Nội dung nghiên cứu 19 3.2.1. Nghiên cứu ảnh hưởng của hoạt chất ñến khả năng mang thai của chuột mẹ 19 3.2.2. Nghiên cứu ảnh hưởng của