Nghiên cứu chuẩn hóa phương pháp phân tích nhóm b agonists bằng kỹ thuật sắc ký lỏng khối phổ tứ cực và ứng dụng để phân tích dư lượng trong thịt lợn ở một số tỉnh miền bắc việt nam

83 862 2
Nghiên cứu chuẩn hóa phương pháp phân tích nhóm b agonists bằng kỹ thuật sắc ký lỏng khối phổ tứ cực  và ứng dụng để phân tích dư lượng trong thịt lợn ở một số tỉnh miền bắc việt nam

Đang tải... (xem toàn văn)

Tài liệu hạn chế xem trước, để xem đầy đủ mời bạn chọn Tải xuống

Thông tin tài liệu

B GIÁO D C VÀ ðÀO T O TRƯ NG ð I H C NÔNG NGHI P HÀ N I PHAN TH HU NGHIÊN C U CHU N HÓA PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH NHĨM β-AGONISTS B NG K THU T S C KÝ L NG KH I PH T C C (LC/MS/MS) VÀ NG D NG ð PHÂN TÍCH DƯ LƯ NG TRONG TH T L N M TS MI N B C VI T NAM CHUYÊN NGÀNH: THÚ Y Mà S : 60.64.01.01 NGƯ I HƯ NG D N KHOA H C 1.GS TS ð U NG C HÀO 2.TS PH M H NG NGÂN HÀ N I, - 2013 T NH L I CAM ðOAN - Tôi xin cam ñoan r ng, s li u k t qu nghiên c u lu n văn trung th c chưa ñư c s d ng ñ b o v m t h c v - Tơi xin cam đoan r ng, m i s giúp ñ cho vi c th c hi n lu n văn đư c c m ơn thơng tin trích d n lu n văn đ u ñư c ch rõ ngu n g c Hà N i, ngày tháng năm 2013 Tác gi lu n văn Phan Th Hu Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… i L I C M ƠN Tôi xin chân thành bày t lịng bi t ơn sâu s c đ i v i: GS.TS ð u Ng c Hào TS Ph m H ng Ngân t n tình giúp đ tơi q trình nghiên c u đ tài hồn thành lu n văn Tơi xin chân thành c m ơn Vi n ðào t o Sau ñ i h c Ban giám hi u Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i ñã t o m i ñi u ki n thu n l i cho tơi su t q trình h c t p nghiên c u Tôi trân tr ng c m ơn lãnh ñ o Trung tâm ki m tra v sinh thú y trung ương - C c thú y - B nông nghi p phát tri n nơng thơn cho phép tri n khai t o ñi u ki n thu n l i nh t cho su t q trình nghiên c u Tơi xin chân thành c m ơn b n ñ ng nghi p c a Trung tâm ki m tra v sinh thú y trung ương 1, ñ c bi t ngư i ch ng thân u c a tơi liên t c ñ ng viên, giúp ñ t o ñi u ki n thu n l i nh t cho tơi su t q trình th c hi n ñ tài Xin chân thành c m ơn Chi c c Thú y t nh Phú Th , H i Phòng, Nam ð nh, Hà Nam, Thái Bình, Qu ng Ninh Hà N i, ngày tháng năm 2013 Phan Th Hu Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… ii M CL C L i cam ñoan i L i c m ơn ii M cl c iii Danh m c b ng vi Danh m c hình bi u ñ viii Danh m c ch vi t t t ix M ð U i M C TIÊU NGHIÊN C U C A ð TÀI 11 Chương T NG QUAN TÀI LI U NGHIÊN C U 12 1.1 S n xu t tiêu th th t l n 12 1.2 Qu n lý s d ng β-agonists s n xu t th c ph m 14 1.2.1 Gi i thi u chung v β-agonists 14 1.2.2 Tình hình qu n lý s d ng β-agonists 18 1.3 T n dư β-agonists s n ph m chăn nuôi nh hư ng c a Vi t Nam chúng ñ i v i s c kh e ngư i 25 1.3.1 Khái ni m v t n dư 25 1.3.2 Tác h i c a t n dư nhóm β-agonists s n ph m chăn nuôi 28 1.4 K thu t phân tích t n dư β-agonists th t l n 28 1.4.1 Phương pháp đ nh tính (phương pháp sàng l c) 29 1.4.2 Phương pháp ñ nh lư ng (phương pháp lý hóa) 30 1.5 Chu n hóa phương pháp th nghi m 31 1.5.1 Chu n hóa phương pháp phân tích đ nh tính β-agonist b ng k thu t ELISA 1.5.2 31 Chu n hóa phương pháp phân tích đ nh lư ng β-agonists (phương pháp LCMSMS) Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 34 iii Chương ð I TƯ NG, N I DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 38 2.1 V t li u nghiên c u 38 2.1.1 ð i tư ng nghiên c u 38 2.1.2 ð a ñi m nghiên c u 38 2.1.3 Th i gian nghiên c u 38 2.1.4 Hóa ch t thu c th : 38 2.1.5 Thi t b d ng c thí nghi m 40 2.2 N i dung nghiên c u 40 2.3 Phương pháp nghiên c u 40 2.3.1 Thí nghi m 1: T o m u th t âm tính dương tính v i β-agonists 40 2.3.2 Thí nghi m Thí nghi m chu n hóa phương pháp ñ nh tính β-agonist th t l n b ng k thu t ELISA 2.3.3 41 Thí nghi m Thí nghi m chu n hóa phương pháp đ nh lư ng βagonists (clenbuterol, salbutamol) th t l n b ng k thu t LC/MS/MS 2.3.4 2.3.5 ng d ng phương pháp chu n hóa đ phân tích m u th c t : Phương pháp phân tích s li u 43 46 48 Chương K T QU VÀ TH O LU N 50 3.1 K t qu chu n hóa phương pháp phân tích 50 3.1.1 K t qu chu n hóa phương pháp phân tích đ nh tính β-agonists (phương pháp sàng l c ELISA) 3.1.2 K t qu chu n hóa phương pháp phân tích đ nh lư ng β-agonists (phương pháp kh ng ñ nh LCMSMS) 3.2 54 Kh o sát th c hành kinh doanh th t l n áp d ng phương pháp đ phân tích m u th c t 3.2.1 50 64 K t qu ñi u tra y u t liên quan ñ n th c hành kinh doanh th t l n Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 64 iv 3.2.2 K t qu phân tích dư lư ng β-agonists m u th t l n b ng k thu t ELISA 3.2.3 K t qu phân tích dư lư ng β-agonists (salbutamol, clenbuterol) m u th t l n b ng k thu t LCMSMS 3.2.4 67 68 Xác ñ nh y u t nguy liên quan t i t n dư β-agonists th t l n 70 K T LU N VÀ KI N NGH 73 K T LU N 73 KI N NGH 74 TÀI LI U THAM KH O 76 PH L C 81 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… v DANH M C B NG STT Tên b ng Trang 1.1 S n lư ng th t l n c a Vi t Nam 12 1.2 Tiêu th th t bình quân th gi i (Anh Tùng, 2011) 13 1.3 Tiêu th th t bình quân 1.4 Gi i h n t n dư t i thi u cho phép (MRPL) c a PTN tham chi u Vi t Nam 13 CRL c a ð c 27 1.5 Ngư ng MRPL c a β-agonists lo i m u t i vi t Nam (B Nông nghi p PTNT, 2012) 27 1.6 Chương trình ch y gradien 34 1.7 ði u ki n phân m nh MS/MS 35 2.1 Chu n b dung d ch chu n làm vi c 40 2.2 S lư ng s 3.1 N ng ñ ch t chu n giá tr ño [ g/kg 51 3.2 K t qu phân tích 20 m u tr ng 20 m u thêm chu n phân b m u theo t nh 47 n ng ñ ppb 52 3.3 K t qu đánh giá đ xác (AC), ñ ñ c hi u (SP), ñ nh y (SE), ñ l ch dương (PD) ñ l ch âm (ND) c a kit 52 3.4 K t qu xác ñ nh kh phát hi n c a phương pháp (CCβ) c a kít 53 3.5 K t qu xác ñ nh CCα c a phương pháp phân tích clenbuterol salbutamol th t b ng LC/MS/MS 56 3.6 K t qu xác ñ nh CCβ c a phương pháp phân tích clenbuterol salbutamol th t b ng LC/MS/MS 57 3.7 ð thu h i, ñ ch m trung gian c a phương pháp phân tích dư lư ng clenbuterol th t l n 60 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… vi 3.8 ð thu h i, ñ ch m trung gian c a phương pháp phân tích dư lư ng salbutamol th t l n 60 3.9 ð khơng đ m b o đo c a phương pháp phân tích dư lư ng salbutamol clenbuterol th t l n 61 3.10 K t qu ki m tra m u mù 63 3.11 K t qu ñi u tra y u t liên quan ñ n th c hành kinh doanh th t l n 65 3.12 K t qu phân tích dư lư ng β-agonists m u th t l n b ng k thu t ELISA 67 3.13 K t qu phân tích dư lư ng β-agonists (Salbutamol, clenbuterol) m u th t l n b ng k thu t LCMSMS 68 3.14 T l m u dương tính v i salbutamol clenbuterol phân chia theo nơi gi t m 70 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… vii DANH M C HÌNH VÀ BI U ð Hình 1.1 Qu y th t không s d ng β-agonists qu y th t có 15 Hình 1.2 Bao ch t t o n c Super Weight 02 ñư c phát hi n t i ð ng Nai ngày 10/3/2011 Hình 1.3 Mictoplates phân tích t n dư β-agonists b ng k 24 thu t ELISA Hình 3.1 33 ðư ng chu n bi u th m i tương quan gi a n ng ñ chu n β-agonists ñ h p th 50 Hình 3.2 Ph kh i m/z c a clenbuterol, salbutamol n n m u th t 54 Hình 3.3 Hình mơ t t s tín hi u so v i nhi u c a clenbuterol, salbutamol n n m u th t Hình 3.4 55 ðư ng chu n bi u th m i tương quan gi a n ng ñ chu n t s tín hi u chu n/n i chu n 58 Bi u ñ 3.1 T l % m u th t nghi ng nhi m β-agonists b ng K thu t ELISA 67 Bi u ñ T l % m u th t l n b nhi m salbutamol, clenbuterol 69 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… viii DANH M C CÁC CH - ADI: VI T T T Acceptable Daily Intake - BNN PTNN: nông nghi p Phát tri n nông thôn - CCα: Gi i h n quy t ñ nh - CCβ: Kh phát hi n - Cs: ng s - ELISA: Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay - FAO: Food Agricultural Organization - HPLC: High-performance liquid chromatography - ISO : T ch c tiêu chu n th gi i (International Standard Organization) - LOD: Gi i h n phát hi n (Limit of Detection) - LOQ: Gi i h n ñ nh lư ng (Limit of Quantitation) - LC/MS/MS : S c ký l ng kh i ph (Liquid Chromatography/Mass Spectrometer) - MRPL: Minimum Residue Permit Limit - NðTP: Ng ñ c th c ph m - ppm : Ph n tri u (Parts per million) - ppb : Ph n t (Parts per million) - VSTY: V sinh thú y - VSATTP: V sinh an toàn th c ph m - WHO: World Health Organization - WTO: World Trade Organization Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nơng nghi p ……………………… ix ch t đ i di n khung sinh h c có th giao thoa ph n ng kháng nguyên kháng th M c dù có m t h n ch v y, k thu t ELISA v n m t cơng c h u ích đ phân tích nhanh dư lư ng th c ph m có ngu n g c ñ ng v t K t qu phân tích s cung c p thơng tin r t h u ích, kinh t cho cơng vi c phân tích ti p theo 3.2.3 K t qu phân tích dư lư ng β-agonists (salbutamol, clenbuterol) m u th t l n b ng k thu t LCMSMS Sau khi, m u th t ñư c phân tích sàng l c b ng phương pháp Elisa Ti p theo, m u có k t qu dương tính đư c phân tích kh ng đ nh ñ nh lư ng b ng phương pháp s c ký l ng ghép kh i ph (LC/MS/MS) theo quy trình đư c chu n hóa K t qu đư c trình bày b ng 3.13 B ng 3.13 K t qu phân tích dư lư ng β-agonists (Salbutamol, clenbuterol) m u th t l n b ng k thu t LCMSMS STT S m u ki m Salbutamol Clenbuterol tra ± b ng S m u Hàm lư ng S m u Hàm lư ng ELISA (+) ( g/kg) (+) ( g/kg) 15 1,25-5,65 0,25-1,43 K t qu phân tích b ng 3.13 cho th y: s 15 m u th t l n m u th t nghi ng nhi m β-agonists b ng k thu t ELISA, sau đư c phân tích kh ng đ nh b ng k thu t LCMSMS ñã kh ng ñ nh m u th t nhi m Clenbuterol v i hàm lư ng 0,25-1,43 g/kg; m u nhi m Salbutamol v i hàm lư ng 1,25-5,65 g/kg Sau phân tích kh ng ñ nh, ti n hành ñánh giá t l % m u th t nhi m βagonists (salbutamol, clenbuterol) m u th t l n kh o sát K t qu ñư c th hi n bi u ñ Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 68 6.0 5.9 5.0 4.0 3.0 2.0 2.2 1.0 0.0 S1 Salbutamol (%) Clenbuterol (%) Bi u ñ T l % m u th t l n b nhi m salbutamol, clenbuterol K thu t LCMSMS địi h i chi phí đ u tư l n, địi h i chuyên gia có r t nhi u ưu ñi m ñ nh y cao, ñ ñ c hi u cao, có kh kh ng đ nh đ nh lư ng ch t phân tích v i ñ tin c y cao Hi n nay, lĩnh v c hố h c, hố d u, cơng ngh th c ph m, nông nghi p, thu c tr sâu, y h c lâm sàng, công ngh dư c ph m …ñã ñang áp d ng k thu t LCMSMS phân tích B ng phương pháp sàng l c ELISA ñã phát hi n th y 15/135 m u th t l n nhi m nhóm β-agonists ñem kh ng ñ nh ñ nh lư ng b ng phương pháp LCMSMS ch có 08 s 15 m u th t phát hi n th y có ch a clenbuterol 03 m u s 15 m u th t phát hi n th y có ch a salbutamol ði u có th đ đ c thù c a phương pháp ELISA chưa cao (Gentaur, 2007) ho c có th m u th t cịn có ch t khác thu c nhóm β-agonists có ph n ng ñ c hi u K t qu ch p nh n đư c theo protocol c a nhà s n xu t, salbutamol clenbuterol, kit cịn có ph n ng đ c hi u m c cao (≥70%) v i nhi u ch t khác c a nhóm β-agonists bitolterol, carbuterol, colterol Hơn n a, bư c phân tích m u tuân th theo hư ng d n c a nhà s n xu t quy trình c a phịng th nghi m theo tiêu chu n ISO 17025:2005 Phân tích sàng l c ñã ñư c th c hi n theo quy trình c a nhà s n xu t kit Các m u sàng l c có k t qu dương tính ho c nghi ng đư c phân tích kh ng đ nh b i k thu t s c ký l ng kh i ph ba l n t c c v i ñ tin c y cao M c d u ñây phương pháp chi phí đ u tư r t l n, địi h i thi t b tinh vi địi h i nhân viên phịng thí nghi m đư c Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nơng nghi p ……………………… 69 đào t o b n c n có kinh nghi m ñây phương pháp có ñ nh y ñ ñ c thù cao, gi i h n phát hi n th p, th k t qu đ m b o ñ tin c y cao 3.2.4 Xác ñ nh y u t nguy liên quan t i t n dư β-agonists th t l n T l m u dương tính phân chia theo nơi gi t m đư c trình bày b ng 3.14 B ng 3.14 T l m u dương tính v i salbutamol clenbuterol phân chia theo nơi gi t m T ng Clenbuterol Lò t p trung s dương m u Nhân t S m u tính 57 H gia đình Salbutamol 78 Lị t p trung 57 T l (%) 78 p 0,21 0,93 0,1 0,783 7,02 [2,27-17,83] 5,13 [1,66- 13,31] 1,75 [0,09- 10,63] 2,56 H gia đình Χ0.05 [0,45- 9,80] T b ng 3.14 cho th y r ng th t t lò gi t m t p trung h gia đình có t l m u phát hi n clenbuterol tương ñ i gi ng nhau, v i t l phát hi n th t t lò gi t m t p trung 7,02%, t h gia đình 5,13% ð xác đ nh có hay khơng có m i liên h gi a y u t nơi gi t m s t n dư β-agonists th t, th c hi n phép th Khibình phương ð t gi thi t: H0: khơng có m i liên h gi a nơi gi t m s t n dư clenbuterol th t H1: có m i liên h gi a nơi gi t m s t n dư clenbuterol th t K t qu phân tích cho th y giá tr Chi- square χ 2tính tốn = 0,21 B c t DF=1, xác su t P- value = 0,93 Chi- square χ 2Lý Thuy t = 3,84 Như v y Chi- square χ 2tính tốn Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 70 = 0,21 < Chi- square χ 2Lý Thuy t = 3,84 V y gi thi t H0 ñư c ch p nh n ( P> 0,05), khơng có m i liên h gi a nơi gi t m s t n dư clenbuterol th t Tương t , khơng có m i liên h gi a nơi gi t m s t n dư salbutamol th t Qua k t qu phân tích m i liên h gi a y u t ngu n g c th t nơi gi t m v i tình hình nhi m dư lư ng salbutamol, clenbuterol th t, bư c đ u k t lu n khơng có m i liên h gi a nơi gi t m s t n dư clenbuterol, salbutamol th t T n dư clenbuterol, salbutamol th t có th nguyên nhân khác Theo nhà nghiên c u, t n dư ch t c m clenbuterol, salbutamol có th sai l m s d ng ho c s d ng b t h p pháp ch t c m T l hàm lư ng β-agonists th t l n : Trong ngành công nghi p chăn nuôi th gi i Vi t Nam, nhóm β-agonists c m s d ng chăn ni đ ng v t s n xu t th c ph m (BNN PTNN, 2012) Tuy nhiên, nghiên c u ñã cho th y v n s l m d ng ch t c m β-agonists s n xu t th t l n K t qu nghiên c u phù h p v i k t qu nghiên c u c a Nguy n Th Thu Th y (2011), v i k t qu Chương trình kh o sát nhanh s l m d ng ch t c m βagonists trong nuôi c a B Nông nghi p PTNT (2012) M u th t l n ñã phát hi n th y salbutamol ho c clenbuterol có 01 m u ñã phát hi n th y c salbutamol clenbuterol c hàm lư ng c a c lo i m u th t ñ u r t th p V y có ph i ñây s ph i h p salbutamol ho c clenbuterol thông thư ng c a nhà chăn nuôi l m d ng ch t c m b t h p pháp ho c th trư ng có bán s n ph m h n h p v y? Nói chung, phương pháp áp d ng phân tích m u, c đ nh tính đ nh lư ng h p l theo quy ñ nh c a quy t ñ nh 657/2002/EC c a Văn phịng cơng nh n ch t lư ng VILAS (2005) Tuy nhiên, phương pháp phân tích sàng l c v n có th b sót m t t l nh m u th t ô nhi m v i β-agonists ngư ng “cut off” chu n hóa c a nghiên c u v n cao ngư ng ‘cut off” protocol c a nhà s n xu t kit Hơn n a, phương pháp phân tích kh ng đ nh ñ nh lư ng β-agonists nghiên c u ch t p trung vào 02 ch t nhóm salbutamol clenbuterol ch khơng phân tích đư c t t c ch t có th có c a Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nơng nghi p ……………………… 71 nhóm β-agonists bitolterol, carbuterol, colterol, ractopamine…Như th , t l m u phát hi n th y β-agonists m u th t nghiên c u t l m u phát hi n th y salbutamol clenbuterol; t l m u th t l n nhi m nhi m β-agonists nói chung có th cao m t chút T l hàm lư ng salbutamol clenbuterol m u th t l n ch có gi i h n ñ i v i m u th t l y tr c ti p t i s gi t m c a m t s t nh mi n B c ti n hành ñi u tra K t qu không ñ i di n cho t l hàm lư ng βagonists th t l n toàn b mi n B c Vi t Nam K t qu nghiên c u này, m t ch ng m c ph n ánh đư c v n đ cịn s l m d ng ch t c m β-agonists s n xu t th t l n C n ph i có nh ng nghiên c u tương t ñ có s nh n th c ñ y ñ v v n ñ Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 72 K T LU N VÀ KI N NGH K T LU N - ðã chu n hóa đư c b kit ELISA β-agonists (MaxSignalTM, hãng BIOOSCIENTIFIC, mã 1009) phù h p đ phân tích sàng l c dư lư ng β-agonists th t l n, ñ t yêu c u theo quy ñ nh c a EU (quy t ñ nh 657/2002/EC); K t qu phân tích cung c p thơng tin r t h u ích, kinh t cho cơng vi c phân tích ti p theo V i: ð xác (AC): 92,5% (AC ≥ 90%) ð ñ c hi u (SP): 90% (SP ≥ 90%) ð nh y (SE) : 95% (SE ≥ 90%) ð l ch dương (PD) : 9,5% (PD ≤ 10%) ð l ch âm (ND) : 5,3% (ND ≤ 10%) - ðã chu n hóa đư c phương pháp phân tích dư lư ng nhóm β-agonists b ng k thu t LC/MS/MS ph n th c nghi m (m u tr ng, m u âm, m u dương) t th t l n cho k t qu xác, đ tin c y cao Qui trình đ t tiêu chu n phân tích theo yêu c u c a EU (quy t ñ nh 657/2002/EC), v i giá tr ñ t ñư c sau: Thông s Clenbuterol Salbutamol CCα 0,19 0,20 CCβ 0,34 0,35 ð thu h i (%) 70,6 – 98,1 55,5 – 100,1 ð ch m trung gian (%) 21,6 – 28,1 20,9 – 27,8 ð khơng đ m b o ño (%) 51,8 47,1 -Áp d ng k thu t ELISA LC/MS/MS ñã ñư c chu n hóa đ phân tích 135 m u th t t s kinh doanh th t t nh mi n B c, xác đ nh có 3/135 m u có t n dư salbutamol v i hàm lư ng 1,25 – 5,65 g/kg 8/135 m u có t n dư clenbuterol v i hàm lư ng 0,25 – 1,43 g/kg 4- Khơng có s khác bi t v t l th t b nhi m clenbuterol salbutamol theo nơi gi t m h gia đình hay lị t p trung Khơng có y u t nguy gây nhi m hai hóa ch t trình gi t m th t l n Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 73 KI N NGH - C n có chương trình thư ng xun giám sát ch t kích thích sinh trư ng nói chung nhóm β-agonists nói riêng ph m vi tồn qu c đ c nh báo ngư i s n xu t, ngư i tiêu dùng nhà qu n lý v th c tr ng - ð phòng ng a s l m d ng β-agonists ñ ng v t s n xu t th c ph m, c n tăng cư ng công tác qu n lý, ki m soát nguyên li u làm th c ăn chăn nuôi, th c ăn gia súc, thu c thú y…; tăng cư ng công tác giám sát β-agonists t i tr i chăn ni đ ng v t làm th c ph m - B sung ñ phương pháp phân tích có th phân tích đư c nhi u ch t thu c nhóm β-agonists, bao g m ractopamine , m r ng ñ i tư ng n n m u th t gia súc, gia c m khác ñ m t l n chu n b m u có th phân tích đư c nhi u ch t thu c nhóm β-agonists - Xây d ng m t s phịng phân tích đ u ki n theo vùng đ giám sát hóa ch t Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 74 DANH M C CÁC CƠNG TRÌNH ðà CƠNG B Nghiên c u phương pháp xác ñ nh bư c đ u kh o sát tình hình nhi m sudan tr ng gia c m tiêu th th trư ng (T p chí Nơng nghi p Phát tri n nông thôn – s – Tháng 3/2008) Chương trình giám sát ch t t n dư s n xu t, thu gom, ch bi n m t ong xu t kh u c a Vi t Nam (H i ngh Khoa h c toàn qu c v ki m nghi m an toàn th c ph m l n th – xu t b n tháng 12/2010 – nhà xu t b n y h c) Xác ñ nh dư lư ng Chloramphenicol s a b ng k thu t s c ký l ng hai l n kh i ph LC/MS/MS (T p chí Khoa h c k thu t Thú y- T p XIX s 6/ 2012) Xác ñ nh dư lư ng ch t chuy n hóa c a Nitrofuran (AOZ, AMOZ, AHD, SEM) b ng k thu t s c ký l ng hai l n kh i ph LC/MS/MS (T p chí Khoa h c k thu t Thú y- T p XX s 2/ 2013) Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 75 TÀI LI U THAM KH O Ti ng Vi t Võ Th Trà An (2001), Tình hình s d ng kháng sinh dư lư ng kháng sinh th t gà t i s chăn nuôi gà cơng nghi p c a thành ph H Chí Minh, Lu n Văn th c sĩ Khoa H c Nông Nghi p, ð i H c Nông Lâm, Thành ph H Chí Minh Lê T n Lam Anh (2012) Kinh hoàng th t l n t o n c b ng clenbuterol, Truy c p ngày 13/12/2012 t http://vnexpress.net/gl/ban-doc-viet/2012/03/kinh-hoang-thit-lon-taonac-bang-clenbuterol/ B Y t (2002) Tin ng n, T p chí thu c s c kh e, (210) ngày 15/4/2002 B Nông nghi p Phát tri n nơng thơn (2002) Quy t đ nh s 54/2002 Qð-BNN ngày 20 tháng 06 năm 2002 v vi c c m s n xu t, nh p kh u, lưu thông s d ng m t s lo i kháng sinh hóa ch t s n xuát kinh doanh th c ăn chăn nuôi B Nông nghi p Phát tri n nông thôn (2012) Thông tư s 57/2012/TT-BNNPTNT ngày 07 tháng 11 năm 2012 c a B Nông nghi p Phát tri n nông thơn v quy đ nh vi c ki m tra, giám sát ch t thu c nhóm β-agonists chăn nuôi Nguy n ð c Cư ng (2011) 17% m u TAWCN heo ch a salbutamol, Báo Nông nghi p Vi t Nam, 23/06/2011 Lê Thanh Hà (2006), Dùng clenbuterol đ tăng tr ng heo, bị, gà: Th t chín, thu c v n cịn, Truy c p ngày 22/4/2013 t http://www.vcn.vnn.vn/PrintPreview.aspx?ID=2755 Lã văn Kính, Tác h i c a hocmone kích thích tăng trư ng h β-agonists ñ i v i s c kh e ðoàn Th Khang, Phan Thanh ð m, Dương Th Thu Anh ðào ð c H o (2008) ng d ng k thu t ELISA ñ xác ñ nh clenbuterol salbutamol th c ăn chăn ni, T p chí Khoa h c Cơng ngh Chăn nuôi s 13, tháng 8/2008 10 Ng c Lê (2012) ðã ki m sốt đư c ch t t o n c, Truy c p ngày 22/3/2013 t http://vietbao.vn/Kinh-te/Da-kiem-soat-duoc-chat-tao-nac/55447631/88/ 11 Dương Thanh Liêm, Bùi Như Phúc Dương Duy ð ng (2002) Th c ăn dinh dư ng v t nuôi, NXB ð i h c Nông Lâm, TP HCM, tr 146-179 12 Ph m Th Ki u Nga (2008) Bư c ñ u kh o sát dư lư ng dexamethasone clenbuterol th t bò, heo gà t i TP.HCM, Lu n văn, ð i h c Nông lâm TP.HCM 13 Tr n Bá Nhân (2013).T ng k t tình hình chăn ni heo 2012 d đốn năm 2013, Truy c p ngày 22/3/2013 t http://www.heo.com.vn/?x/=newsdetail&n=4206&/c/=70&/g/=4&/2/1/2013/tong-kettinh-h 14 Ph m Nho Huỳnh H ng Quang (2012) β-agonist: ng d ng nguy nh hư ng ñ n s c kh e ngư i, Truy c p ngày 22/3/2013 t http://www.impeqn.org.vn/impe-qn/vn/portal/InfoDetail.jsp?area=58&cat=1092&ID=5756 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 76 15 Nguy n Tâm (2012) Ba t nh phát hi n có m u th t ch a ch t t o n c, Truy c p ngày 20/3/2013 t http://vtc.vn/321-328138/suc-khoe/ba-tinh-phat-hien-co-mau-thit-chuachat-tao-nac.htm 16 Lê Qu c Th nh (2012), Hi u thêm v thu c b c m chăn nuôi, Truy c p ngày 20/1/2013 t http://suckhoedoisong.vn/201232192119243p44c116/hieu-them-vethuoc-bi-cam-trong-chan nuoi.htm 17 Tr n Quang Th y, ðào T Quyên, Hà Th Anh ðào, Nguy n Chung Th y, Tr n Th ng Nguy n Th Lê Hịa (2012) Chu n hóa thư ng qui đ nh lư ng clenbuterol th t l n, th t gà b ng phương pháp s c ký l ng hi u cao (HPLC/UV), T p chí DD & TP t p (4) tháng 11 năm 2012 18 Nguy n Th Thu Th y (2011) ðánh giá hàm lư ng ch t β-agonist (clenbuterol salbutamol) th c ăn gia súc dư lư ng th t gia súc b ng k thu t s c ký l ng ghép kh i ph , Lu n án ti n sĩ hóa h c, ð i h c khoa h c t nhiên, Thành Ph H Chí Minh 19 Anh Tùng (2011) Th t heo nhu c u tiêu dùng, Truy c p ngày 10/1/2013 t http://www.cesti.gov.vn/th-gi-i-d-li-u/th-t-heo-va-nhu-c-u-ti-u-d-ng.html 20 VTC News (2012) Hà N i: Phát hi n th t l n nhi m ch t t o n c, Truy c p ngày 10/1/2013 t http://vtc.vn/649-331252/suc-khoe/an-toan-thuc-pham/ha-noi-phat-hienthit-lon-nhiem-chat-tao-nac.htm 21 Vương Xuân (2012) Nhi u m u th t l n TP HCM nhi m ch t ñ c, Truy c p ngày 20/12/2012 t http://giadinh.vnexpress.net/tin-tuc/to-am/nhieu-mau-thit-lon-tp-hcmnhiem-chat-doc-2278188.html Ti ng Anh 22 Anders Blomgren, Christine Berggren, Anna Holmberg ,Fredrik Larsson, Borje Sellergren and Kees Ensing (2002) E xtraction of clenbuterol from calf urine using a molecularly imprinted polymer followed by quantitation by high-performance liquid chromatography with UVdetection, Journal of Chromatography A, 975 :157–164 23 Andrzej Posyniak, Jan Zmudzki and Jolanta Niedzielska (2003) Screening procedures for clenbuterol residue determination in bovine urine and liver matrices using enzyme – linked immunosorbent assay and liquid chromatography, Analytica Chimica Acta 483: 61–67 24 Adian C E Fesser, Leslie C Dickson, James D Macneil, John R Patterson, Stephenlee, and Ronald Gedir (2005) Determinationof β-Agonists in Liver and Retina by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry, Journal of AOAC International vol 88, No.1 25 BANRC (Board on Agriculture National Research Council) and Food and Nutrition Board Institude of Medicine (1999) The use of drug in food animal benefits and risks, National academy press, Washington DC: 253 26 Barbosa J, Cruz C, Martin J, Siva JM, and Neves C (2005) Food poisoning by clenbuterol in Portugal, Laboratorio Nacional de Investigacao Veterinaria, Lisboa, Portugal, 563: Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 77 27 Beermann, D H (1984) β-adrenergic agonists and growth In M P Shreibman, C G Scanes and P K T Pang The Endocrinology of Growth, Development and Metabolism in Vertebrates: 345-366 28 Bioo Scientific (2013) Β-agonists ELISA Tets Kit Manual, Bioo food and feed safety, Truy c p ngày 10/2/2013 t http://www.biooscientific.com 29 Boyd D, Shearan P, Hopkms J P and O’Keeffe M (1992) Application of matrix solid phase dispersion for the determination of clenbuterol in liver samples, Anaiynca Chwuca Acta, 275: 221-226 30 Black R.E, Lanata C.F (1995) Epidepiology of diarrhoeal diseases in developing countries, In Blazer M.J, Smith P.D, Ravdin J.I, Greenberg H.B, Guerrant R.L, infection of the gastrointestinal tract, New York, Raven Press: 13-36 31 Bucknall S D, MacKenzie AL, Sauer M J, Everest D J, Newman R and Jackman R (1993) Determination of clenbuterol in bovine liver by enzyme immunoassay, Analytica Chimica Acta, 275: 227-230 32 Crescenzi C., Bayoudh S., Cormack P A G , Klein T., and Ensing K (2001) Determination of Clenbuterol in Bovine Liver by Combining Matrix Solid-Phase Dispersion and Molecularly Imprinted Solid-Phase Extraction Followed by Liquid Chromatography/Electrospray Ion Trap Multiple –Stage Mass Spectrometry, Anal, Chem 73: 2171- 2177 33 Decision 657/EC (2002) Commission Decision of 12 August 2002 implementing Council Directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and the interpretation of results 34 DeWaal C S and Robert N (2005b) North American Region, Food Safety Around the World, Washington, D.C: 53- 65 35 DeWaal C S and Robert N (2005c) European Region, Food Safety Around the World, Washington, D.C: 30-44 36 DeWaal C S and Robert N (2005d) South East Asian Region, Food Safety Around the World, Washington, D.C: 14-16 37 EU (2002): EU regulation, European commission decision 2002/657/EC 38 European Commission (2003) Commission Decision 2003/181/CE, 13 March 2003 Official Journal of the European Communities., L71, pp 17–18 39 Gentaur (2007) Food safety test kits, Antibiotics ELISA 40 Gianfranco Brambilla, Telemaco Cenci and Flavia Franconi (2000) Clinical and pharmacological profile in a clenbuterol epidemic poisoning of contaminated beef meat in Italy, Toxicology Letters 114: 47-53 41 Gianfranco Brambilla, Maurizio Fiori, Barbara Rizzo,Vittorio Crescenzi, and Giancarlo Masci (2001), Use of molecularly imprinted polymers in the solid-phase extraction of clenbuterol from animal feeds and biological matrices, Journal of Chromatography B 759, pp 27–32 42 Girault J and Fourtillan J B (1990) Determination of clenbuterol in bovine plasma and tissues by gas chromatography-negative-ion chemical ionization mass spectrometry, Journal of Chromatography, 518: 41-52 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 78 43 Guy Degand and Anne Bernes-Duyckaerts (1993) Determination of β-agonists in urine by an enzyme immunoassay based on the use of an anti-salbutamol antiserum, Analytica Chimica Acta, 275: 241-247 44 James F Lawrence and Cathie Menard (1997) Determination of clenbuterol in beef liver and muscle tissue using immunoaffinity chromatographic cleanup and liquid chromatography with ultraviolet absorbance detection, Journal of Chromatography B, 696: 291-297 45 Jing-Fang Huang, Hui-Juan Zhang,BoLin, Qiong-Wei Yu and Yu-Qi Feng (2007) Multiresidue analysis of β-agonists in pork by coupling polymer monolith microextraction to electrospray quadrupole time -of-flight mass spectrometry, rapid communications in mass spectrometry 21 : 2895 – 2904 46 Jose Blanca, Patricia Mu noz, Miguel Morgado, Nely M endez, Angela Aranda, Thea Reuvers and Henny Hooghuis (2005) Determination of clenbuterol, ractopamine and zilpaterol in liver and urine by liquid chromatography tandem mass spectrometry, Analytica Chimica Acta 529: 199–205 47 Koole A , Bosman, Franke J P And Zeeuw R A de (1999) Multiresidue analysis of β-agonists in human and calf urine using multimodal solid-phase extraction and high-performance liquid Chromatography with electrochemical detection, Journal of Chromatography B, 726 (1999): 149–156 48 Kootstra P R., Kuijpers C.J.P.F., Wubs K.L, Doorn D.van, Sterk S.S., van Ginkel L.A and Stephany R.W (2005) The analysis of β-agonists in bovine muscle using molecular imprinted polymers with ion trap LCMSs creening, Analytica Chimica Acta 529: 75–81 49 Kuiper, H A., Noordam, M.Y and Schlit, R., (1998) Illegal use of β-adrenergic agonists: European community-State Institute for Quality Control of Agricultural Products, P.O Box 230, 6700 AE Wageningen, The Nethelands: 195-207 50 Limin He,Yijuan Su , Zhenling Zeng,Yahong Liu and Xianhui Huang (2006) Determination of ractopamine and Clenbuterol in feeds by gas chromatography– massspectrometry, Animal Feed Science and Technology 132: 316 – 323 51 Lucia Damasceno, Rosa Ventura, Jordi Ortu no and Jordi Segura (2000) Derivatization procedures for the detection of β2-agonists by gas chromatographic/mass Spectrometric analysis, Journal of mass spectrometry 35: 1285 – 1294 52 Maurizio Fiori, Claudia Cartoni, Beatrice Bocca, and Gianfranco Brambilla (2002) The Use of Nonendcapped C18 Columns in the Cleanup of Clenbuterol and a New Adrenergic Agonist from Bovine Liver by Gas Chromatography –Tandem Mass Spectrometry Analysis, Journal of Chromatographic Science, Vol 40 53 Michael and O’Keeffe (1999) Methods for veterinary drug residue analysis in food, The National Food Centre, Dunsinea, Castle nock, Dublin 15: – 25 54 Peter Batjoens, Dirk Courtheyn, Hubert F De Brabander, Jan Vercam men, Katia De Wasch and Maureen Logghe (1996) Gas chromatography _ tandem mass spectrometry analysis of clenbuterol residue in faeces, Journal of chromatography A: 133 -139 55 Taylor and Francis Issue (2005) Food Additives & Contaminants, Publisher, 22(6): 563 – 566 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 79 56 Van Vyncht G., Preece S., Gaspar P., Maghuin-Rogister G and Depauw E (1996) Gas and liquid chromatography coupledto tandem mass spectrometry for the multiresidue analysis of β-agonist in biological matrices, Journal of chromatography A: 43 -49 57 WHO (2004) “Food Safety in Developing Countries-Building Capacity”, Weekly Epidemiological Record 18,79: 173-180 58 WHO/SEARO, (2008) ''Nutrition and Food Safety in the South-East Asia Region'', Report and Documentation of the Technical Discussions, New Delhi Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 80 PH L C Ph l c H th ng máy LC/MSMS B Kít ELISA Max SignalTM (M ) Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 81 Ph l c PHI U CÂU H I ðI U TRA ð I V I CÁC C A HÀNG KINH DOANH TH T VÀ CƠ S GI T M GIA SÚC, GIA C M Ghi chú: B n câu h i ñi u tra dùng ñ ñi u tra y u t r i ro ti m tàng liên quan t i tình hình t n dư m t s lo i hoá ch t t n dư th t gia súc, gia c m th trư ng Ch dùng cho m c đích nghiên c u Các s li u thơng tin thu th p đư c thơng qua cu c ñi u tra ñ m b o tính bí m t Ch tr l i nh ng câu h i phù h p n u ngo i l khác Phi u u tra s : Ngày l y m u: …………………… Nơi l y m u (t nh/thành): ………………………… Tên ch c a hàng, s gi t m : Tu i: Gi i tính: S năm kinh nghi m kinh doanh gi t m : Có qua l p t p hu n v kinh doanh gi t m : Có: Khơng : Ngu n g c c a th t: N i t nh Ngo i t nh: Không rõ: 10 Nơi gi t m : Lò m t p trung ði m gi t m : Khác: 11 Th t có đư c ki m d ch: Có: Khơng: C M ƠN! Ngư i ñi u tra (Ký tên) Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ……………………… 82 ... chu n hóa phương pháp phân tích 50 3.1.1 K t qu chu n hóa phương pháp phân tích đ nh tính β -agonists (phương pháp sàng l c ELISA) 3.1.2 K t qu chu n hóa phương pháp phân tích đ nh lư ng β -agonists. .. nh lư ng (phương pháp lý hóa) 30 1.5 Chu n hóa phương pháp th nghi m 31 1.5.1 Chu n hóa phương pháp phân tích đ nh tính β-agonist b ng k thu t ELISA 1.5.2 31 Chu n hóa phương pháp phân tích ñ nh... tài: ? ?Nghiên c u chu n hóa phương pháp phân tích nhóm β -agonists b ng k thu t s c ký l ng kh i ph t c c (LCMSMS) ng d ng ñ phân tích dư lư ng th t l n m t s t nh mi n B c Vi t Nam? ?? M C TIÊU NGHIÊN

Ngày đăng: 04/10/2014, 17:21

Từ khóa liên quan

Mục lục

  • Trang bìa

    • Mục lục

    • Mở đầu

    • Chương 1. Tổng quan tài liệu nghiên cứu

    • Chương 2. Đối tượng, nội dung và phương pháp nghiên cứu

    • Chương 3. Kết quả và thảo luận

    • Kết luận và kiến nghị

    • Tài liệu tham khảo

    • Phụ lục

Tài liệu cùng người dùng

  • Đang cập nhật ...

Tài liệu liên quan