Đề tài: Nghiên cứu tối ưu môi trường thay rẻ tiền nuôi Lactobacillus plantarum phục vụ sản xuất chế phẩm probiotic LỜI MỞ ĐẦU Probiotic ngày ứng dụng rộng rãi nhiều lĩnh vực Có nhiều lồi vi sinh vật dùng sản xuất probiotic, có vi khuẩn Lactobacillus plantarum Để ni cấy Lactobacillus plantarum mơi trường chuẩn chế phẩm MRS Tuy nhiên, chế phẩm MRS đắt tiền làm cho chi phí sản xuất giá thành sản phẩm cao Do đó, em chọn đề tài “Nghiên cứu tối ưu môi trường thay rẻ tiền nuôi Lactobacillus plantarum để phục vụ sản xuất chế phẩm probiotic” NỘI DUNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ TỔNG QUAN TÀI LIỆU  Đặc điểm chung Lactobacillus plantarum - Là vi khuẩn Gram (+), không gây bệnh, khơng có khả di động, khơng sinh bào tử, kỵ khí tùy tiện - Khuẩn lạc trịn, trơn, màu trắng sữa - Nhiệt độ nuôi cấy : 30°C , pH = 6,2 - Có hoạt tính probiotic, thường sử dụng trình lên men thực phẩm 2.1 QUY TRÌNH THỰC HIỆN ĐỀ TÀI Hoạt hóa giống vi khuẩn mơi trường MRS đĩa petri Cấy chuyển vi khuẩn từ đĩa Petri sang môi trường MRS lỏng Nuôi cấy giống vào môi trường thử nghiệm rẻ tiền So sánh kết thu từ mơi trường để tìm mơi trường thích hợp thay cho MRS Tối ưu hóa mơi trường vừa tìm đươc phương pháp quy hoạch thực nghiệm Nuôi cấy giống môi trường tối ưu so sánh với môi trường MRS 2.1.1.Đối tượng nghiên cứu Giống vi khuẩn Lactobacillus plantarum bảo quản phịng thí nghiệm khoa Hóa 2.1.2 Mơi trường ni cấy  Mơi trường nhân giống cấp 1: môi trường chế phẩm MRS có thành phần sau: Pepton từ Casein 10g/l Cao nấm men 5g/l Cao thịt bò Glucose 10g/l 20g/l Natri – acetate 5g/l Tween 80 Diamon citrate 2g/l MgSO 7H O 0,2gl MgSO 0,2g/l Agar 1ml/l 2%  Môi trường thử nghiệm: gồm môi trường MT1 MT2 Môi trường : Môi trường1: (1000ml) Cải xanh 100g/l MT3 Môi trường 3: (1000ml) Cà chua 100g/l (1000ml) Cà chua 10% 10% Đường kính 20g/l Đường kính 20g/l Nước dừa K2HPO4 1g/l K2HPO4 1g/l Cao nấm men 10g/l MgSO4 0,5g/l MgSO4 0,5g/l Cao nấm men 5g/l 2.2 Phương pháp nghiên cứu  Phương pháp hoạt hóa giống vi khuẩn  Các phương pháp xác định mật độ tế bào - Phương pháp trải đĩa đếm khuẩn lạc - Phương pháp đo mật độ quang  Phương pháp tối ưu hóa mơi trường quy hoạch thực nghiệm KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 3.1 Kết hoạt hóa chủng L.plantarum 3.2.Quan sát hình thái vi khuẩn L.plantarum kính hiển vi KIẾN NGHỊ - Qua kết nghiên cứu em có kiến nghị nên đưa môi trường rẻ tiền vừa - Nên kiểm tra lại hoạt tính probiotic L.plantarum sau ni mơi trường tìm để thay cho MRS thay 3.4.Tối ưu hóa mơi trường quy hoạch thực nghiệm Chọn quy hoạch trực giao cấp 1, yếu tố ảnh hưởng: nồng độ cà chua, nồng độ nước dừa, nồng độ cao nấm men Tiến hành khảo sát đơn biến yếu tố ảnh hưởng, kết sau: Khảo sát đơn biến nồng độ cà chua Chọn khoảng biến thiên từ 6% đến 10%  Khảo sát đơn biến nồng độ nước dừa Chọn khoảng biến thiên từ nồng độ 10% đến 16% Khảo sát đơn biến nồng độ cao nấm men Chọn khoảng biến thiên từ nồng độ 7g/l đến 13g/l Bảng mức, khoảng biến thiên yếu tố ảnh hưởng Các yếu tố ảnh hưởng Mức yếu tố Mức Mức cao Mức thấp Khoảng biến thiên Z1 (%) 10 Z2 (%) Trong đó: 13 16 10 Z3 (g/l) 10 13 Z1: nồng độ yếu tố cà chua Z2: nồng độ yếu tố nước dừa Z3: nồng độ yếu tố cao nấm men Ma trận thực nghiệm TYT23 kết số lượng khuẩn lạc thí nghiệm Phương trình hồi quy:  Sử dụng phần mềm Excel solve để tìm nghiệm tối ưu, kết sau: y max = 10,589 ; x = x = x = 1 - Nồng độ cà chua : 8% - Nồng độ nước dừa :16% - Nồng độ cao nấm men :13%  Tiến hành lặp lại thí nghiệm với nồng độ tối ưu vừa tìm được, thu kết sau: Thí nghiệm TN1 TN2 TN3 Số khuẩn lạc/µl 10,499 10,499 10,624 Kết trung bình thí nghiệm 10,541 Tuy kết có lệch với lý thuyết khơng đáng kể, chứng tỏ kết tính tốn phù hợp 3.5 Đánh giá hiệu môi trường tối ưu so với môi trường MRS: 52 (36h) Môi trường thay 75 (48h) Môi trường MRS Chênh lệch hiệu suất tạo sinh khối : 75/52 = 1,4 lần  So sánh hiệu kinh tế - Chi phí cần thiết để pha lít mơi trường MRS lỏng là: 68,2 x 3028 = 206 600 đồng - Giá thành mơi trường thay vừa tìm được: Cà chua : 10.000 đồng/kg , Nước dừa : 12.000 đồng/quả/600ml Cao nấm men :1g cao nấm men có giá 6000đ Tổng chi phí để pha lít mơi trường thay : 000 + 200 + 78 000 = 82 200 (đồng) Chênh lệch giá thành: 206 600 / 82 200 = 2,5 lần  Mặt khác, thời gian ni cấy MRS 48h, cịn môi trường thay 36h KẾT LUẬN Từ kết em rút kết luận sau: - Chủng Lactobacillus plantarum mà em khảo sát giữ đặc tính vốn có - Mơi trường dinh dưỡng rẻ tiền thay mơi trường MRS có thành phần sau: • • • Cà chua 8% Nước dừa 16% Cao nấm men 13% - Môi trường rẻ tiền sử dụng để thay MRS KIẾN NGHỊ - Qua kết nghiên cứu em có kiến nghị nên đưa mơi trường rẻ tiền vừa - Nên kiểm tra lại hoạt tính probiotic L.plantarum sau ni mơi trường tìm để thay cho MRS thay ... nhiên, chế phẩm MRS đắt tiền làm cho chi phí sản xuất giá thành sản phẩm cao Do đó, em chọn đề tài ? ?Nghiên cứu tối ưu môi trường thay rẻ tiền nuôi Lactobacillus plantarum để phục vụ sản xuất chế phẩm. .. từ đĩa Petri sang môi trường MRS lỏng Nuôi cấy giống vào môi trường thử nghiệm rẻ tiền So sánh kết thu từ môi trường để tìm mơi trường thích hợp thay cho MRS Tối ưu hóa mơi trường vừa tìm đươc... nghiệm Nuôi cấy giống môi trường tối ưu so sánh với môi trường MRS 2.1.1.Đối tượng nghiên cứu Giống vi khuẩn Lactobacillus plantarum bảo quản phịng thí nghiệm khoa Hóa 2.1.2 Môi trường nuôi cấy  Môi