MỞ ĐẦU 1. Đặt vấn đề Khoa học kĩ thuật càng phát triển, đời sống con người ngày càng được cải thiện. Tuy nhiên sự phát triển quá nóng đã dẫn đến sự ô nhiễm môi trường; nhiều chứng bệnh nan y mới phát sinh, nhiều loài vi khuẩn mới, nhờn thuốc xuất hiện nguy cơ gây ra những đại dịch đe dọa toàn cầu. Các dược phẩm chữa trị bệnh nan y hiện nay còn rất hạn chế về chủng loại, giá thành cao và thường có các tác động phụ không mong muốn, gây tổn hại cho các tế bào lành Điều này thôi thúc các nhà khoa học không ngừng nghiên cứu tìm ra các dược phẩm mới, hiệu quả hơn, an toàn hơn, trong đó ưu tiên nghiên cứu các hoạt chất từ tự nhiên. Cây Bách Bộ thuộc loại cây bụi, mọc hoang ở các vùng đồng bằng Nam Bộ Việt Nam, Lào, Đông Bắc Thái Lan, là một loài cây thuốc quí. Theo kinh nghiệm dân gian ở Nam bộ Lào, người ta đã sử dụng phần củ của cây Bách Bộ để làm thuốc chữa nhiều loại bệnh có hiệu quả như: các bệnh về da, ung thư gan… ngoài ra củ Bách Bộ còn có khả năng làm thuốc diệt sâu bọ, mối mọt… Việc nghiên cứu về cây Bách Bộ ở Lào còn rất hạn chế: phần lớn chỉ dùng ở mức nghiên cứu phân loài thực vật mà thôi; chưa có bất kỳ công trình nghiên cứu nào về thành phần hóa học, hoạt tính sinh học của cây Bách bộ Lào. Vì những lý do trên đây, trong khuôn khổ Luận án tiến sĩ hóa học này, chúng tôi chọn đề tài: “Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của ba loài thuộc chi Bách Bộ (Stemona) mọc ở Lào”. 2. Các đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu của luận án gồm củ của ba loài thuộc chi Bách Bộ thu hái tại Lào, gồm củ Bách Bộ thân đứng S.cochinchinensis, Bách Bộ lá nhỏ S.pierrei, Bách Bộ thân leo S.tuberosa. 3. Những đóng góp mới của luận án a. Lần đầu tiên từ củ Bách Bộ thân đứng (S. cochinchinensis) thu hái tại tỉnh Savannakhet (Lào), đã phân lập và xác định cấu trúc của 12 hợp chất, trong đó có 1 chất mới là 1-(3-hydroxy-2-metoxyphenyl)-2-(3’- hydroxy-5’-metoxy-2’,4’-đimetylphenyl)etan (K8), còn lại là 11 chất đã biết gồm β-sitosterol (K1), Sesamin (K2), 3 cinnamat (K3, K4, K6), 1 dẫn xuất bibenzyl (K5), 2 stilbenoit (K7, K9), Pinoresinol (K10) và 2 ancaloit (K11, K12). b. Lần đầu tiên từ củ Bách Bộ lá nhỏ (S. pierrei) thu hái tại tỉnh Savannakhet (Lào), đã phân lập và xác định cấu trúc của 7 hợp chất, trong đó có 2 chất mới, Stemobenzofuran A (K13), metyl 1’-hydroxy-1’-(4-hydroxy-3- metoxyphenyl)propylat (K18)., còn lại là 5 hợp chất đã biết là Sesamin 1 (K2), Stemanthren B (K14), Syrigaresinol (K15), 2 Axit thơm (K16, K17). c. Lần đầu tiên từ củ Bách Bộ thân leo (S. tuberosa) thu hái tại tỉnh Attapu (Lào), đã phân lập và xác định được cấu trúc của 6 hợp chất. Tất cả 6 chất này đều là chất mới, bao gồm: Stemophenanthren A-D (K19-K22), Stemostemanthren E (K23) và Stemobenzofuran B (K24). d. Lần đầu tiên từ đã thử nghiệm hoạt tính sinh học của các hợp chất tinh sạch phân lập từ 3 loài Bách Bộ của Lào. Kết quả nghiên cứu cho thấy 3 chất K21, K22 và K23 có hoạt tính kháng sinh, gây độc 4 bốn dòng tế bào ung thư ở mức độ khá (IC 50 từ 4,49 đến 63,65 µg/ml), 5 chất K7, K8, K9, K19 và K20 gây độc tế bào ung thư KB ở mức trung bình (IC 50 = 20,67-82,30 µg/ml). 4. Bố cục của luận án Luận án gồm 140 trang với 31 bảng số liệu, 71 hình, 6 sơ đồ, 101 tài liệu tham khảo (9 tiếng Việt, 92 tiếng Anh). Bố cục luận án: Mở đầu (2 trang), Chương 1: Tổng quan tài liệu (25 trang), Chương 2: Nguyên liệu và các phương pháp nghiên cứu (6 trang), Chương : Thực nghiệm (20 trang), Chương 4: Kết quả và thảo luận (77 trang), Kết luận (2 trang). CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1. Giới thiệu chung về họ Bách Bộ Stemonaceae 1.1.1. Phân loại Bách Bộ Họ Bách Bộ (Stemonaceae) thuộc bộ Dứa dại (Pandanales), lớp thực vật một lá mầm (Monocosts) ngành hạt kín (Angiosperms) [1,3,4, 51]. Bách Bộ được chia thành bốn chi là Croomia Torr., Stemona Lour., Stichoneuron Hook. F và Pentastemona Steenis. Trong đó, chi Stemona là lớn nhất với trên 30 loài, chi Pentastemona có thể là một chi thuộc họ Bách Bộ hoặc có thể xếp thành một họ riêng [7,9]. Các loài Bách Bộ phân bố rải rác khắp các châu lục, nhưng chủ yếu là ở các vùng trung du, miền núi các vùng có khí hậu nhiệt đới, nóng ẩm như Trung Quốc, Việt Nam, Lào, Campuchia, Thái Lan … [16,24]. Dưới đây là một số khóa phân loại thực vật của họ Bách Bộ đã được công bố. Bảng 1.1: Bảng phân loài Thực vật chi Croomia WCSP (Word Checklist of Selected Plant family) đến ngày 1/1/2011 1. Croomia heterosepala (Baker) Okuyama 2. Croomia Japonica Miq. 3. Croomia pauciflora (Nutt.) Torr. Bảng 1.2: Bảng phân loài thực vật chi Stichoneuron Hook. F theo WCSP (Word Checklist of Selected Plant family) đến ngày 1/1/2011 1. Stichoneuron caudatum Ridl. 2 2. Stichoneuron membranaceum Hook.f. Bảng 1.3: Bảng phân loài thực vật chi Pentastemona theo WCSP (Word Checklist of Selected Plant family) đến ngày 1/1/2011 1. Pentastemona egregia (Schott) Steenis 2. Pentastemona sumatrana Steenis Bảng 1.4: Bảng phân loài thực vật chi Stemona.Lour theo WCSP (Word Checklist of Selected Plant family) đến ngày 1/1/2011 1. Stemona angusta I.R.H.Telford 2. Stemona aphylla Craib 3. Stemona australiana (Benth.) C.H.Wright4. Stemona burkillii Prain 5. Stemona cochinchinensis Gagnep. 6. Stemona collinsiae Craib 7. Stemona curtisii Hook.f. 8. Stemona griffithiana Kurz 9. Stemona hutanguriana Chuakul 10. Stemona Japonica (blume) Miq. 11. Stemona Javanica (Kunth) Engl. 12. Stemona kerrii Prain 13. Stemona kurzii Prain 14. Stemona lucida (R.Br.) DuyfJes 15. Stemona mairei (H.Lév.) K.Krause 16. Stemona parviflora C.H.Wright 17. Stemona phyllantha Gagnep 18. Stemona pierrei Gagnep 19. Stemona prostrata I.R.H.Telford 20. Stemona sessilifolia (Miq.) Miq. 21. Stemona squamigera Gagnep 22. Stemona tuberosa Lour. 23. Stemona tuberosa var. moluccana (Blume) ined. 24. Stemona tuberosa var. tuberosa 1.1.2. Giới thiệu chi Stemona Như đã giới thiệu, chi Stemona là chi lớn nhất trong họ Bách Bộ với khoảng trên 30 loài. Ở Việt Nam, theo tài liệu [1,6] số lượng loài Bách Bộ trong chi Stemona được tìm thấy là 6 loài. Đó là các loài Stemona cochinchinensis Gagnep. (Bách Bộ Nam Bộ), Stemona collinsiae Craib. (Bách Bộ hoa tím), Stemona pierrei Gagnep. (Bách Bộ lá nhỏ), Stemona phyllantha Gagnep. (Bách Bộ hoa trên lá), Stemona saxorum Gagnep. (Bách Bộ đứng, Bách Bộ đá) và Stemona tuberosa. Lour. (Bách Bộ thân leo) [55,71,75]. Theo các tài liệu [23,24,62] tại Lào hiện có 11 loài thuộc chi Stemona là: S. tuberosa., S. phyllantha Gagnep., S. squamigera Gagnep., S. cochinchinensis Gagnep., S. pierrei Gagnep., S. saxorum Gagnep., S. collinsae Craib., S. aphylla Craib., S. burkillii Prain., S. griffithiana Kurz và S. kerrii Craib. Các loài này phân bố rải rác ở vùng núi miền bắc, đồng bằng miền trung và miền nam nước Lào. 1.1.3. Công dụng Theo y học cổ truyền [2,5,65], Bách Bộ có vị hơi đắng ngọt, tính ôn. Thuốc có khả năng trị ho do hư lao, thường dùng trong trị lao phổi, khí quản viêm mãn tính, ho gà, nhuận phế, sát trùng, trị giun đũa, giun kim. 3 Theo kinh nghiệm dân gian, nhân dân các bộ tộc Lào đã sử dụng toàn bộ cây Bách Bộ làm thuốc giảm sốt, chữa bệnh bại liệt, tê và bệnh sẩy thai cho gia súc, làm tê liệt giun rất có hiểu quả. Ngoài ra còn sử dụng làm thuốc diệt côn trùng để bảo vệ mùa màng, cây trồng. 1.2. Thành phần hóa học của cây Bách Bộ Phần lớn các nghiên cứu về thành phần hóa học của cây Bách Bộ đều tập trung ở phần củ Bách Bộ do phần này chiếm tỷ trọng lớn nhất so với toàn bộ cây và các hoạt chất chính đều tập trung tại đây. Các nghiên cứu trong nước và quốc tế đều chỉ ra rằng, hoạt chất chính trong củ Bách Bộ là các stilbenoit, stemanthren, stemofuran và các ancaloit [32,58,59,67]. 1.2.1. Tình hình nghiên cứu ở Lào Với cây Bách bộ, hầu hết các nghiên cứu ở Lào mới chỉ dừng lại ở mức đánh giá hoạt tính sinh học của các cặn chiết, chưa có tài liệu khoa học nào công bố về thành phần hóa học của cây Bách Bộ mọc ở Lào. 1.2.2. Tình hình nghiên cứu ở Việt Nam Ở Việt Nam năm 1996 TS. Vũ Ngọc Kim là người đầu tiên nghiên cứu thành phần hóa học của 3 loài S. tuberosa, S. saxorum, S. peirrei và đã chiết tách, xác định cấu trúc của một alcaloit có công thức cấu phân tử là C 22 H 33 NO 4 và đặt tên chất này là Tuberostemonine L-G [9]. Trong những năm 2000, PGS.TS. Phạm Hữu Điển và các cộng sự đã tập trung nghiên cứu thành phần hóa học của 4 loài Bách Bộ của Việt Nam: S.tuberosa, S.collinsae, S.saxorum và S.cochinchinensis và đã phân lập được trên 30 ancaloit, [47,49,51,60,62,79]. Trong đó, từ loài S.cochinchinensis, các tác giả đã phân lập được một ancaloit có cấu trúc khung mới, đặt tên là cochinchistemonine [79]. 1.2.3. Tình hình nghiên cứu trên thế giới Cho đến nay, ngoài một số hợp chất tự nhiên khác như gluxit (chiếm 2,3% trọng lượng khô), lipit (0,83%), protit (9%), các axit hữu cơ [17,39,61] từ củ Bách Bộ người ta đã phân lập và xác định được cấu trúc của trên 100 ancaloit [26, 45,46]. Các ancaloit từ Bách Bộ thường rất đa dạng về cấu trúc là do tính đa dạng về loài, phần khác – do điều kiện thổ nhưỡng, khí hậu ảnh hưởng rất lớn đến sự đa dạng về cấu trúc khung. CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1. Đối tượng và các phương pháp nghiên cứu 2.1.1. Mẫu thực vật Tên khoa học của các mẫu thực vật được Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thế Anh, Viện Hóa học – Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam giúp xác định. Các mẫu tiêu bản được lưu giữ tại Phòng Hóa học hợp 4 chất thiên nhiên, Bộ môn Hóa hữu cơ, Khoa hóa học, Trường ĐHSP Hà Nội. Mẫu cây Bách Bộ thân đứng Stemona cochinchinensis được thu hái tại tỉnh Savannakhet (CHDCND Lào) vào tháng 10 năm 2010, số tiêu bản là KPN-01.2010. Hình 2.1: Bách Bộ thân đứng Stemona cochinchinensis Mẫu cây Bách Bộ lá nhỏ Stemona pierrei được thu hái tại tỉnh Savannakhet, CHDCND Lào vào tháng 6 năm 2011, mẫu tiêu bản số KPN-02.2011. Tên khoa học của mẫu cây được Thạc sĩ sinh học Nguyễn Thế Anh, Viện Hóa học – Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam xác định. 5 Hình 2.2: Bách Bộ lá nhỏ Stemona pierrei Hình 2.3: Bách Bộ thân leo Stemona tuberosa Mẫu cây Bách Bộ thân leo Stemona tuberosa được thu hái tại tỉnh Attapu, CHDCND Lào vào tháng 7 năm 2011, mẫu tiêu bản số KPN- 03.2011 (tên khoa học của mẫu cây được TS. Sinh học Nguyễn Thị Liên. Khoa Sinh học Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Việt Nam giúp định tên). 2.1.2. Phương pháp xử lý và chiết mẫu Mẫu củ cây Bách Bộ được làm sạch, thái nhỏ, phơi trong bóng mát, sấy khô ở nhiệt độ 40 0 C, sau đó được nghiền mịn. Bột mẫu củ được ngâm chiết bằng hỗn hợp dung môi Me OH: H 2 O (80:20) ở nhiệt độ phòng (3 lần, 24 giờ/lần) và chiết siêu âm nhiều lần (6-8 lần, 45 phút/lần). Dịch chiết sau đó được cất loại dung môi dưới áp suất giảm, thu được cặn chiết metanol. Sau đó cặn chiết metanol đem chiết lần lượt với các dung môi có độ phân cực tăng dần n-hexan, etyl axetat, n- butanol, cất loại dung môi áp suất giảm, thu được các cặn chiết tương ứng. 6 2.1.3. Phương pháp phân tích, chiết tách, phân lập các chất Việc phân tích, phân tách các phần dịch chiết của cây cũng như các phân đoạn chiết được thực hiện bằng các phương pháp sắc kí khác nhau như phương pháp sắc kí lớp mỏng (TLC), phương pháp sắc kí cột thường (CC), sắc kí cột đảo pha, sắc kí lỏng điều chế (prep. HPLC). 2.1.4. Phương pháp xác định cấu trúc các hợp chất Độ quay cực: đo trên máy Polartronic D (Haensch, Jasco P-2000 series), điểm nóng chảy: đo trên thiết bị Boetis B-545. Các phương pháp phổ: IR JASCO FT/IR-5300, NMR (1D, 2D) Brucker Avance 500 MHz, MS, Fourier FT-ICR-MS Variance 320-MS Các thiết bị này hiện có ở Trường ĐHSP Hà Nội và Viện Hàn Lâm KHCN Việt Nam. Ngoài ra trong luận án có sử dụng đến thiết bị Phổ khối lượng phân giải cao biến đổi Furie ghi trên máy Brucker Apex III (FT-ICR-MS) đặt tại Viện Hóa sinh thực vật Leibniz, Halle, CHLB Đức. Phổ tử ngoại khả kiến (Uv-vis) được đo trên thiết bị Shimadzu UV-1650PC Instrument trong MeOH đặt tại Bộ môn Hóa lý, khoa Hóa học, Trường ĐHSP Hà Nội. 2.1.5. Phương pháp thử nghiệm hoạt tính sinh học * Phương pháp thử hoạt tính gây độc tế bào: Được tiến hành trên 4 dòng tế bào u ng thư người, gồm tế bào ung thư biểu mô KB, tế bào ung thư phổi Lu, tế bào ung thư vú MCF-7 và tế bào ung thư cơ vân tim RD. Phép thử gây độc tế bào được tiến hành trên khay 96 giếng; mẫu thử (cao chiết hay các hợp chất phân lập được từ Bách Bộ) được pha loãng ở các nồng độ khác nhau là 128µg/ml; 32 µg/ml; 8 µg/ml; 0,5 µg/ml. * Phương pháp thử hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn: được tiến hành tại Viện Hàn lâm Khoa học và công nghệ Việt Nam theo các phương pháp sau: Phương pháp định lượng chất kháng sinh (CKS) bằng vi sinh vật (VSV). Phương pháp xác định hoạt tính kháng sinh: phương pháp đục lỗ (hay còn gọi là khuyếch tán trên đĩa thạch) hoặc phương pháp MIC như đã trình bày ở trên. CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM 3.1. Củ Bách Bộ thân đứng (S. cochinchinensis) 3.1.1. Chiết và phân lập các chất từ củ Bách Bộ thân đứng 3,0 Kg bột khô từ củ Bách Bộ thân đứng (Stemona cochinchinensis) được chiết trong các dung môi hữu cơ như sơ đồ 3.1. Sơ đồ 3.1. Ngâm chiết củ Bách Bộ thân đứng Stemona cochinchinensis 7 3,0kg củ BB khô MeOH:H 2 O (80:20) Cặn tổng Cặn EtOAc Cặn n-hexan Cặn n-butanol n-hexane, EtOAc và n-buthanol Chạy cột sắc ký để phân lập các chất tinh sạch theo sơ đồ 3.2 sau: Sơ đồ 3.2. Chiết tách các chất từ cặn n-hexane củ Bách Bộ thân đứng S. cochinchinensis Sơ đồ 3.3. Chiết tách các hợp chất từ cặn EtOAc củ Bách Bộ of S. cochinchinensis 8 SKC / n:E /8:1 Cặn n-hexan (CH: 5,76g) CH1(K1) 1,05g CH2B3(K4) 7mg CH2B2(K3) 4mg CH2B1(K2) 9mg CH2 1,3g SKC / n: E/4:1 CH2B 78mg CH2C 63mg CH2C2(K5) 9mg HPLC/ n:E /1:1HPLC/ n:E /2:1 CE2 165mg SKC / n: E/1:1 CE2B 77mg CE2B1 (K10) 7mg CE2B2 (K11) 9mg CE2B3 (K12) 5mg HPLC / n: E/3:7 Cặn EtOAc (CE:7.67g) SKC/n:E/4:1 CE1 0,61g CE1D1 (K9) 17mg CE1C1 (K8) 4mg SPD /C:M/1:1 HPLC/ n: E/3:2:1 SKC / n: E/ 3:1 CE1A (K6) 88mg CE1B (K7) 83mg CE1C 181mg CE1D 72mg 3.2. Củ Bách Bộ lá nhỏ ( S. Pierrei) Qui trình ngâm chiết, phân lập các chất từ củ Bách Bộ lá nhỏ (S.pierrei) giống như mục 3.1. Sơ đồ 3.4. Phân lập các chất từ cặn n-hexan củ Bách Bộ lá nhỏ (S. pierrei) Sơ đồ 3.5. Phân lập các hợp chất từ cặn EtOAc củ Bách Bộ lá nhỏ (S. pierrei) 3.3. Củ Bách Bộ thân leo ( S. tuberosa) Sơ đồ 3.6. Phân lập các hợp chất từ cặn n-hexan củ Bách Bộ thân leo (S.tuberosa) 9 SKC/ n: E/4:1 SKC/ n:E /8:1 Cặn n-hexan PH (3.17g) PH3C 66mg SKC/ n: E/3:1 PH3 322mg PH3C1 (K13) 4mg HPLC n: E/3:2 PH1 414mg PH1B1 (K2) 5mg PH1B 56mg HPLC/ n: E/3:1 PE1 657mg PE3 325mg PE4 233mg SKC n:E/5:1 SKC/n:E/3:1 SKC/n:E/2:1 HPLC/n:E/1:1 HPLC/n:E/1:1 HPLC/n:E/2:1 HPLC/n:E/3:2 PE4A 43mg PE3B 53mg PE1B 83mg PE1D 69mg PE4A2 (K18) 5mg PE3B2 (K17) 5mg PE3B1 (K16) 3mg PE1D2 (K12) 6mg PE1D3 (K15) 7mg PE1D1 (K11) 7mg PE1B1 (K14) 7mg PE1B2 (K7) 5mg Cặn EtOAc (PE: 6.67g) SKC n:E/ 6:1 TH5 0.78g SKC/n:E/3:2 HPLC/n:E/1:1 TH5B 57mg TH5B4 (K24) 9mg TH5B1 3mg TH2 1.27g SKC/ n:E/2:1 HPLC/n:E/3:2 TH2C1 (K19) 4mg TH2C2 (K20) 8mg TH2C 97mg TH2C4 (K22) 12mg TH2C5 (K23) 5mg TH2C3 (K21) 6mg Cặn n-hexan (TH:14.76g) SKC/ n:E/ 10:1 3.4. Thử nghiệm hoạt tính sinh học 21 Chất được thử hoạt tính kháng nấm, kháng khuẩn; 8 chất được thử khả năng gây độc 4 dòng tế bào ung thư. Kết quả được chỉ ra ở Bảng 4.18. CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1. XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC HỢP CHẤT PHÂN LẬP TỪ CỦ BÁCH BỘ THÂN ĐỨNG S. COCHICHINENSIS Từ củ Bách Bộ thân đứng S.cochinchinensis đã phân lập được 12 hợp chất. Cấu trúc của chúng được xác định như sau:  K1 (β-sitosterol): K1 là chất kết tinh màu trắng, hình kim, tan tốt trong clorofom, n- hexan. Dựa vào phổ 1 H NMR (hình 4.1) chúng tôi xác định được K1 là β- sitosterol,một trong số các sterol rất phổ biến trong giới thực vật. 10 [...]... online:http://www.tandfonline.com/doi/full/10.1080/14786419 2013.832677#.Ujh35Mamhpk) 29 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC SƯ PHẠM HÀ NỘI oOo - VONGANATHA KHAMKO NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA BA LOÀI THUỘC CHI BÁCH BỘ (STEMONA) MỌC Ở LÀO Chuyên ngành: Hóa học hữu cơ Mã số: 62.44.27.01 Tóm tắt LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Cán bộ hướng dẫn: 1 PGS.TS Phạm Hữu Điển 2 PGS.TS Đặng Ngọc Quang 30... 16.66 KẾT LUẬN 1 Lần đầu tiên củ Bách Bộ thân đứng (S cochinchinensis), củ Bách Bộ lá nhỏ (S pierrei) thu hái tại tỉnh Savannakhet và củ Bách Bộ thân leo (S tuberosa) thu hái tại tỉnh Attapu nước (CHDCND Lào) được tiến hành nghiên cứu về thành phần hóa học và hoạt tính sinh học 2 Từ củ Bách Bộ thân đứng (S cochinchinensis) thu hái tại tỉnh Savannakhet (CHDCND Lào) , đã phân lập và xác định cấu trúc của 12... (CHDCND Lào) , đã phân lập và xác định được cấu trúc của 6 hợp chất Tất cả 6 chất này đều là chất mới, bao gồm: Stemophenanthren A-D (K19-K22), Stemostemanthren E (K23) và Stemobenzofuran B (K24) 5 Đã thử nghiệm hoạt tính sinh học của 13 hợp chất tinh sạch phân lập từ 3 loài Bách Bộ Kết quả nghiên cứu cho thấy 3 chất K21, K22 và K23 có hoạt tính kháng sinh, gây độc 4 bốn dòng tế bào ung thư ở mức độ... K7 (Stemanthrene C) và K9 (Stemanthrene A) Phổ NMR của K7 được chỉ ra ở hình 4.7 và bảng 4.4 H 3CO 2 1" 2" CH 3 1' 1 2' HO OH 4 H 3CO 4' CH 3 Hình 4.7 Phổ 1H và 13C NMR của K7 đo trong CDCl3 13 Phổ NMR của K9 được chỉ ra trên hình 4.8 .và bảng 4.4 H3CO 1" 2" 2 1 HO 4 1' 6' 5 H3CO OH 4' CH3 Hình 4.8 Phổ 1H và 13C NMR của K9 đo trong CDCl3 Bảng 4.4 Các giá trị phổ 1H và 13C NMR của K7 và K9 1 13 H NMR δ... 2’,5’ 1” 6.87, s 101.9 1,1’,2’ 2” 136.8 4-OMe 3.96, s 61.0 2’-OMe 3.84, s 55.6 4’-Me 2.42, s 19.7 3’-OH 5’-OH 4.4 HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÁC CHẤT 8 Chất đã được thử hoạt tính kháng 4 dòng tế bào ung thư Kết quả được chỉ ra ở bảng 4.18 Bảng 4.18 Kết quả thử hoạt tính gây độc tế bào ung thư của các chất Giá trị IC50 (µg/ml) STT Mẫu thử 1 2 3 4 5 6 7 8 K7 K8 K9 K11 K20 K21 K22 K23 82.3 59.90 KB 67.37 >128... 9’ 3.87, m, 4.23, m 71.7 10, 10’ 5.95, s 101.1 K3 và K4 (Metyl cis- và trans-4-hydroxycinnamat) Phổ của 2 chất K3 và K4 được chỉ ra ở các hình 4.3., 4.4 và bảng 4.2 1 H3COOC H HO 1' 4' 2' 3 H Hình 3.3 Phổ 1H NMR của K3 đo trong CDCl3 11 H 2' HO 4' 2 1' 1 COOCH3 3 H Hình 4.4 Phổ 1H NMR của K4 đo trong CDCl3 Bảng 4.2 Các giá trị phổ 1H và 13C NMRcủa K3 và K4 13 C NMR (δ HMBC 1 H NMR δ (ppm), J (Hz) ppm)... 3.98, s 56.0 K11 (Maistemonin) và K12 (Isomaistemonin) Phổ NMR của hai hợp chất K11 và K12 được chỉ ra ở hình 4.11 và bảng 4.7 Hai chất được xác định là maistemonin và isomaistemonin, hai ancaloit đồng phân, cùng công thức phân tử là C23H29NO6 Hai chất này trước đây đã được Yang Ye và các cộng sự phân lập được từ củ Bách Bộ (Stemona mairei)  Hình 4.11 Phổ 1H NMR của K11 và K12 đo trong CDCl3 16 O CH3... K5[5’-Metoxy-4’-hydroxy-1’-(1-metoxyprop-2-enyl)benzen] Phổ NMR của K5 được chỉ ra ở hình 4.5 và bảng 4.3 5' 1' HO 3' H3CO 12 3 1 2 COOCH3 Hình 4.5 Phổ 1H NMR của K5 đo trong CDCl3  K6 (Metyl 4’-hydroxy-3’-metoxycinnamat) Phổ NMR của K6 được chỉ ra ở hình 4.6 và bảng 4.3 H3CO 5' 3 1' HO 1 3' CH2 OCH3 2 Hình 4.6 Phổ 1H và 13C NMR của K6 đo trong CDCl3 Bảng 4.3: Các giá trị phổ NMR của K5 và K6 1 13 H NMR δ (ppm), J (Hz) C NMR... ĐỊNH CẤU TRÚC CÁC HỢP CHẤT TỪ CỦ BÁCH BỘ THÂN LEO S.TUBEROSA  K19 (Stemophenanthren A) Phổ NMR của K19 được chỉ ra ở hình 4.18 và bảng 4.13 OH Me 1" 2" 1 1' 5 5' 3 3' O O Hình 4.18 Phổ 1H và 13C NMR của K19 đo trong CDCl3 Phân tích phổ 1D, 2D NMR và FT-ICR-MS cho thấy K19 là hợp chất mới Chúng tôi đặt tên là stemophenantren A 22 Bảng 4.13 Các giá trị phổ 1H và 13C NMR của K19 Vụ trí 1H NMR δ (ppm),... và K22 (Stemophenanthren D) Phổ NMR của K21 được chỉ ra ở hình 4.20 và bảng 4.15 K2 được xác định là stemophenanthren C, một hợp chất mới, lần đầu tiên được phân lập từ S tuberosa Phổ NMR của K22 được chỉ ra ở hình 4.21 và bảng 4.15 K22 được xác định là stemophenanthren D, một stilbenoit mới, lần đầu tiên được phân lập từ S Tuberosa OH 1" 2" 1 1' 5 5' 3' 3 Me HO OMe HO Hình 4.20 Phổ 1H và 13C NMR của . thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của ba loài thuộc chi Bách Bộ (Stemona) mọc ở Lào . 2. Các đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu của luận án gồm củ của ba loài thuộc chi Bách Bộ. trồng. 1.2. Thành phần hóa học của cây Bách Bộ Phần lớn các nghiên cứu về thành phần hóa học của cây Bách Bộ đều tập trung ở phần củ Bách Bộ do phần này chi m tỷ trọng lớn nhất so với toàn bộ cây và. hình nghiên cứu ở Lào Với cây Bách bộ, hầu hết các nghiên cứu ở Lào mới chỉ dừng lại ở mức đánh giá hoạt tính sinh học của các cặn chi t, chưa có tài liệu khoa học nào công bố về thành phần hóa