1 ĐẶT VẤN ĐỀ Rắn độc cắn là một trong những tai nạn nguy hiểm thường gặp ở các nước nhiệt đới, với trên 2,5 triệu người bị rắn độc cắn và khoảng 125.000 người tử vong do rắn độc cắn mỗi năm. Ở nước ta, các chuyên gia ước tính mỗi năm có khoảng 30.000 người bị rắn cắn. Thống kê số liệu của gần hai nghìn bệnh nhân rắn độc cắn nhập viện Chợ Rẫy điều trị cho thấy, một số loài rắn độc thường gây tai nạn rắn cắn nhất ở khu vực Miền Nam nước ta là rắn lục xanh (43,3%), hổ đất (23,8%), chàm quạp (19,4%), hổ mèo (10%) và hổ chúa (1,2%). Ở Việt Nam, đã có 2 loại huyết thanh kháng nọc rắn (HTKNR) thương phẩm đặc hiệu nọc rắn lục xanh và hổ đất đang được sử dụng trên lâm sàng. Tuy nhiên, việc chẩn đoán loài rắn độc cắn để sử dụng HTKNR chủ yếu dựa vào kinh nghiệm lâm sàng và chưa có bộ xét nghiệm phát hiện nọc rắn độc. Trên thế giới, có nhiều kỹ thuật miễn dịch được ứng dụng trong phát hiện nọc rắn độc, trong đó kỹ thuật hấp phụ miễn dịch gắn enzyme (ELISA) là kỹ thuật thường được áp dụng để chế tạo bộ xét nghiệm phát hiện nọc rắn độc. Từ những cơ sở lý luận và thực tiễn nêu trên, đề tài: “Nghiên cứu chế tạo bộ xét nghiệm ELISA phát hiện nọc rắn độc và ứng dụng lâm sàng chẩn đoán rắn độc cắn ở Việt Nam” được tiến hành nhằm mục tiêu: 1. Chế tạo bộ xét nghiệm AB-ELISA phát hiện nọc độc của 4 loài rắn lục xanh, hổ đất, chàm quạp, hổ chúa và phát triển bộ xét nghiệm AbE-ELISA phát hiện nọc độc của 2 loài rắn lục xanh và hổ đất ở Việt Nam. 2. Đánh giá hiệu quả phát hiện nọc và định loài rắn độc của bộ xét nghiệm ELISA trong các bệnh phẩm lâm sàng. 2 Những đóng góp mới của luận án: - Chế tạo thành công bộ xét nghiệm AB-ELISA phát hiện nọc độc của 4 loài rắn lục xanh, hổ đât, chàm quạp và hổ chúa. - Lần đầu tiên tại Việt Nam, nghiên cứu đã sử dụng huyết thanh kháng nọc rắn thương phẩm do Viện vắc xin và Sinh phẩm y tế tại Nha Trang sản xuất (loại đang được sử dụng điều trị rắn độc cắn trên lâm sàng), làm nguyên liệu chế tạo thành công bộ xét nghiệm AbE- ELISA phát hiện nọc độc của 2 loài rắn lục xanh và hổ đất. - Bộ xét nghiệm AB-ELISA và AbE-ELISA có khả năng phát hiện được mẫu nọc rắn chuẩn pha trong các dịch sinh học khác nhau như: máu, huyết tương, nước tiểu và dung dịch đệm ở mức dưới 4 ng/ml, tùy thuộc vào loại nọc rắn và loại mẫu xét nghiệm. Bộ xét nghiệm AbE-ELISA có khả năng phát hiện được nọc rắn lục xanh và hổ đất trong tất cả các loại mẫu xét nghiệm trên lâm sàng bao gồm: máu toàn phần, nước tiểu và dịch vết cắn. Bố cục của luận án: Luận án gồm 112 trang với 19 hình, 3 sơ đồ, 10 biểu đồ và 15 bảng, trong đó: đặt vấn đề (2 trang); Tổng quan tài liệu (33 trang); Đối tượng và phương pháp nghiên cứu (22 trang); Kết quả nghiên cứu (27 trang); Bàn luận (25 trang); Kết luận (2 trang); Kiến nghị (1 trang). Tài liệu tham khảo: 122 tài liệu (tiếng Việt 12, tiếng Anh 110). CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1. TAI NẠN RẮN CẮN VÀ CHẨN ĐOÁN RẮN ĐỘC CẮN 1.1.1. Một số loài rắn độc thường gặp gây ra tai nạn rắn cắn ở Việt Nam Theo Trần Kiên và Nguyễn Quốc Thắng (1995), Việt Nam có hơn một trăm loài rắn, trong đó có hàng chục loài rắn độc phân bố cả trên 3 cạn và dưới nước. Trong đó, một số loài rắn độc thường gặp gây ra tai nạn rắn độc cắn ở nước ta đó là: 1.1.1.1. Rắn lục xanh (Trimeresurus albolabris) 1.1.1.2. Rắn hổ đất (Naja naja kaouthia) 1.1.1.3. Rắn chàm quạp (Calloselasma rhodostoma) 1.1.1.4. Rắn hổ mèo (Naja naja siamensis) 1.1.1.5. Rắn hổ mang chúa (Ophiophagus hannah) 1.1.2. Một số đặc điểm lâm sàng rắn độc cắn Các triệu chứng lâm sàng ở bệnh nhân nhiễm độc do rắn cắn rất đa dạng, phong phú, bao gồm các triệu chứng tại chỗ và toàn thân. 1.1.3. Chẩn đoán rắn độc cắn ở Việt Nam Chẩn đoán rắn độc cắn ở Việt Nam chủ yếu vẫn dựa vào triệu chứng lâm sàng là chính và chưa có bộ xét nghiệm phát hiện nọc rắn độc nào được nghiên cứu và ứng dụng trên lâm sàng trong chẩn đoán xác định loài rắn cắn. Vì vậy, chế tạo bộ xét nghiệm phát hiện nọc rắn độc ứng dụng trong chẩn đoán loài rắn độc cắn ở Việt Nam là yêu cầu cần thiết. 1.2. KHÁNG THỂ KHÁNG NỌC RẮN VÀ MỘT SỐ KỸ THUẬT MIỄN DỊCH PHÁT HIỆN NỌC RẮN ĐỘC 1.2.1. Kháng thể kháng nọc rắn 1.2.1.1. Đặc điểm cấu tạo kháng thể kháng nọc rắn 1.2.1.2. Sản xuất kháng thể kháng nọc rắn 1.2.2. Một số kỹ thuật miễn dịch phát hiện nọc rắn độc 1.2.2.1. Kỹ thuật khuếch tán miễn dịch (Immunodiffusion) 1.2.2.2. Kỹ thuật điện di miễn dịch (Immunoelectrophoresis) 1.2.2.3. Kỹ thuật ngưng kết (Haemagglutination) 1.2.2.4. Kỹ thuật miễn dịch phóng xạ (Radioimmunoassay - RIA) 1.2.2.5. Kỹ thuật miễn dịch huỳnh quang (Immunofluoresence) 4 1.2.2.6. Kỹ thuật miễn dịch quang (optical immunoassay) 1.2.2.7. Xét nghiệm nhanh (rapid test) 1.3. XÉT NGHIỆM ELISA 1.3.1. Lựa chọn xét nghiệm ELISA trong chế tạo bộ xét nghiệm phát hiện nọc rắn độc Mặc dù có nhiều kỹ thuật miễn dịch phát hiện nọc rắn độc đã được nghiên cứu và ứng dụng như phân tích ở mục 1.2.2. Tuy nhiên, kỹ thuật miễn dịch được sử dụng phổ biến nhất trong chế tạo bộ xét nghiệm phát hiện nọc rắn độc chính là xét nghiệm ELISA. 1.3.2. Một số thiết kế xét nghiệm ELISA được ứng dụng trong chế tạo bộ xét nghiệm phát hiện nọc rắn - Nguyên lý chung của xét nghiệm ELISA: là dùng kháng nguyên hoặc kháng thể đánh dấu để phát hiện phức hợp kháng nguyên kháng thể qua chất chỉ thị màu. - Thiết kế xét nghiệm ELISA sandwich sử dụng mô hình 2 kháng thể Thiết kế xét nghiệm ELISA sandwich avidin-biotin (AB- ELISA): bao gồm một kháng thể gắn bản, một kháng thể phát hiện gắn biotin, cộng hợp HRP gắn avidin (horseradish peroxidase - avidin) và cơ chất phát hiện phức hợp kháng nguyên kháng thể. - Thiết kế xét nghiệm ELISA sandwich sử dụng mô hình 3 kháng thể Thiết kế xét nghiệm AbE-ELISA sandwich sử dụng mô hình 3 kháng thể bao gồm: một kháng thể gắn bản, kháng thể phát hiện là kháng thể đặc hiệu kháng nguyên nhưng có nguồn gốc sản xuất khác với kháng thể gắn bản. Cộng hợp HRP-kháng thể kháng lại kháng thể phát hiện và cơ chất dùng để phát hiện phức hợp kháng nguyên kháng thể. Đây là thiết kế xét nghiệm trong đó kháng thể phát hiện không phải xử lý gắn enzyme hay gắn biotin nên sẽ có độ ổn định và hiệu giá tốt hơn so với kháng thể phát hiện sử dụng trong thiết kế 5 nghiên cứu nói trên. Cộng hợp HRP-kháng thể kháng kháng thể phát hiện có thể được cung cấp dưới dạng thương phẩm nên có tính đặc hiệu và độ ổn định cao hơn. 1.3.3. Một số chỉ tiêu đánh giá xét nghiệm ELISA Trong phát triển xét nghiệm ELISA phát hiện nọc rắn, một số chỉ tiêu đánh giá thường được quan tâm là độ đặc hiệu, độ nhạy, độ ổn định và thời gian xét nghiệm. 1.3.4. Bộ xét nghiệm ELISA thương phẩm phát hiện nọc rắn độc Cho đến nay, mới có hai bộ xét nghiệm chẩn đoán rắn độc cắn được phát triển ở Úc và Ấn Độ. Tuy nhiên, những bộ xét nghiệm này không phù hợp cho việc phát hiện nọc rắn độc ở Việt Nam. CHƯƠNG 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1. ĐỐI TƯỢNG VÀ VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 2.1.1. Đối tượng nghiên cứu - Nghiên cứu chế tạo huyết thanh thỏ đơn đặc hiệu kháng nọc rắn Thỏ đực xám khoẻ mạnh, trọng lượng từ 2 – 2,5 kg, số lượng 12 con. Thỏ được chia làm 4 lô, mỗi lô 3 con. - Nghiên cứu đánh giá hiệu quả phát hiện nọc rắn độc của bộ xét nghiệm ELISA trên lâm sàng Mẫu bệnh phẩm xét nghiệm phát hiện nọc rắn gồm: 115 mẫu máu toàn phần, 119 mẫu nước tiểu và 4 mẫu dịch vết cắn được lấy từ 122 bệnh nhân bị rắn độc cắn điều trị tại khoa Bệnh nhiệt đới, Bệnh viện Chợ Rẫy Tp. Hồ Chí Minh. 2.1.2. Vật liệu nghiên cứu Nọc tổng số của 4 loài rắn độc (lục xanh, hổ đất, chàm quạp và hổ chúa) ở dạng đông khô, là sản phẩm nghiên cứu thuộc đề tài 6 KCB.04.06.01 đã nghiệm thu năm 2009. Các hóa chất, sinh phẩm và thiết bị nghiên cứu đạt tiêu chuẩn phân tích do các hãng sản xuất có uy tín cung cấp. 2.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2.1. Chế tạo kháng nguyên và gây miễn dịch tạo huyết thanh thỏ kháng nọc rắn 2.2.1.1. Chế tạo kháng nguyên nọc rắn Từ 4 loại nọc rắn đông khô chế tạo 4 loại kháng nguyên nọc rắn theo quy trình của Selvanayagam và CS (1999). 2.2.1.2. Gây miễn dịch tạo huyết thanh thỏ kháng nọc rắn Thỏ được chia làm 4 nhóm, mỗi nhóm 3 con: Gây miễn dịch theo quy trình của Chotwiwatthanakun và CS (2001), đó là sử dụng liều thấp, thể tích nhỏ, tiêm dưới da nhiều mũi dọc hai bên sống lưng và tiêm nhắc lại. 2.2.2. Xét nghiệm ELISA gián tiếp (indirect ELISA) - Xác định hiệu giá kháng thể đặc hiệu kháng nọc rắn - Đánh giá phản ứng chéo giữa huyết thanh kháng nọc rắn đơn đặc hiệu với nọc độc của các loài rắn khác 2.2.3. Tinh chế kháng thể Kháng thể đặc hiệu với nọc rắn của từng loài rắn được tách chiết và tinh sạch theo qui trình tinh chế 3 bước: * Bước 1: Tách chiết IgG từ huyết thanh thỏ bằng sắc ký ái lực với cột protein G. * Bước 2: Tách chiết IgG đặc hiệu nọc rắn từ chế phẩm IgG tổng số bằng sắc ký miễn dịch với cột chứa kháng nguyên nọc rắn đặc hiệu. * Bước 3: Loại bỏ các phân tử kháng thể phản ứng chéo giữa các loài rắn bằng phương pháp hấp phụ miễn dịch với cột KNNR dị loài. 7 2.2.4. Gắn Biotin vào kháng thể 2.2.5. Chuẩn bị huyết thanh ngựa đặc hiệu nọc rắn lục xanh và hổ đất do IVAC cung cấp 2.2.6. Bộ xét nghiệm AB-ELISA phát hiện nọc rắn độc 2.2.6.1. Thiết kế xét nghiệm AB-ELISA Xét nghiệm được xây dựng theo nguyên lý ELISA sandwich với phức hợp Avidin – Biotin. 2.2.6.2. Chế tạo bộ xét nghiệm AB-ELISA 2.2.6.3. Qui trình xét nghiệm AB-ELISA - Bước 1: bộ xét nghiệm AB-ELISA được gắn trên giá đỡ. - Bước 2: cho 100 µl mẫu thử (máu toàn phần, huyết tương, huyết thanh, nước tiểu, dịch vết cắn ). - Bước 3: cho thêm 100 µl kháng thể phát hiện gắn biotin. - Bước 4: cho thêm 100 µl cộng hợp HRP-avidin vào mối giếng. - Bước 5: cho thêm vào mỗi giếng 100 µl cơ chất OPD nồng độ 0,5 mg/ml có bổ xung thêm 0,006 % H 2 O 2 . Đọc kết quả sau 5 phút. Nhận định kết quả: - Xét nghiệm dương tính khi: OD mẫu > X OD chứng âm + 3SD - Xét nghiệm âm tính khi: OD mẫu ≤ X OD chứng âm + 3SD 2.2.6.4. Đánh giá độ ổn định và hiệu quả phát hiện nọc rắn độc của bộ xét nghiệm AB-ELISA trong phòng thí nghiệm Mức độ ổn định của bộ xét nghiệm AB-ELISA được kiểm tra định kỳ mỗi tháng một lần trong 6 tháng đầu sau khi sản xuất. Hiệu quả phát hiện nọc rắn độc của bộ xét nghiệm AB-ELISA trong phòng thí nghiệm được đánh giá dựa trên khả năng phát hiện mẫu nọc rắn chuẩn pha trong các dung dịch PBS-T, huyết thanh hoặc huyết tương, máu toàn phần và nước tiểu ở các nồng độ khác nhau: 8 32 ng/ml; 16 ng/ml; 8 ng/ml; 4 ng/ml; 2 ng/ml; 1 ng/ml; 0,5 ng/ml và 0,25 ng/ml. 2.2.7. Bộ xét nghiệm AbE-ELISA phát hiện nọc rắn độc 2.2.7.1. Thiết kế xét nghiệm AbE-ELISA Xét nghiệm được xây dựng theo nguyên lý ELISA sandwich với 3 kháng thể đặc hiệu (kháng thể ngựa, kháng thể IgG thỏ và cộng hợp HRP-kháng thể chuột kháng IgG thỏ). 2.2.7.2. Chế tạo bộ xét nghiệm AbE-ELISA 2.2.7.3. Qui trình xét nghiệm AbE-ELISA Gồm 5 bước tương tự như ở mục 2.2.6.3 Nhận định kết quả: - Xét nghiệm dương tính khi: OD mẫu > X OD chứng âm + 3SD - Xét nghiệm âm tính khi: OD mẫu ≤ X OD chứng âm + 3SD 2.2.7.4. Tối ưu hóa xét nghiệm AbE-ELISA 2.2.7.5. Đánh giá phản ứng chéo của xét nghiệm AbE-ELISA với nọc độc của một số loài rắn độc khác ở Việt Nam 2.2.7.6. Đánh giá độ ổn định và hiệu quả phát hiện nọc rắn độc của bộ xét nghiệm AbE-ELISA trong phòng thí nghiệm Tương tự như phương pháp trình bày ở mục 2.2.6.4 2.2.8. Đánh giá hiệu quả phát hiện nọc và định loài rắn độc của bộ xét nghiệm ELISA trong các bệnh phẩm lâm sàng * Bước 1: Hoàn thiện bệnh án nghiên cứu thử nghiệm lâm sàng và thu thập mẫu xét nghiệm từ các bệnh nhân nhiễm độc do rắn cắn. * Bước 2: Đánh giá hiệu quả phát hiện nọc rắn độc bằng cách tiến hành xét nghiệm AbE-ELISA phát hiện nọc rắn độc theo quy trình mô tả tại mục 2.2.7.3 với tất cả các mẫu bệnh phẩm thu được. 9 * Bước 3: Đánh giá độ phù hợp chẩn đoán xác định loài rắn cắn của bộ xét nghiệm ELISA với chẩn đoán xác định loài rắn cắn trên lâm sàng bằng hệ số KAPPA. 2.3. XỬ LÝ SỐ LIỆU Số liệu nghiên cứu được xử lý theo phương pháp thống kê y sinh học Sơ đồ 2.1. Mô hình nghiên cứu 10 CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1. BỘ XÉT NGHIỆM AB-ELISA PHÁT HIỆN NỌC ĐỘC CỦA 4 LOÀI RẮN: LỤC XANH, HỔ ĐẤT, CHÀM QUẠP VÀ HỔ CHÚA 3.1.1. Bốn loại kháng thể thỏ đặc hiệu loài rắn dùng trong bộ xét nghiệm AB-ELISA Biểu đồ 3.4. Kết quả xét nghiệm ELISA gián tiếp đánh giá tính đặc hiệu loài rắn của các chế phẩm kháng thể kháng nọc rắn Nhận xét: các chế phẩm kháng thể IgG thỏ đặc hiệu loài rắn thu được sau tinh chế phản ứng rất mạnh với nọc độc tương ứng, có thể coi các chế phẩm kháng thể thu được là kháng thể đặc hiệu loài rắn. 3.1.2. Bộ xét nghiệm AB-ELISA phát hiện nọc rắn độc Tổng số 1050 xét nghiệm đã được chế tạo phục vụ cho thử nghiệm độ nhạy, khảo sát độ ổn định của bộ xét nghiệm và thử nghiệm lâm sàng. [...]... phát hiện nọc độc tương tự như kết quả nghiên cứu của chúng tôi và đều ở mức ng/ml 4.1.4 Độ ổn định của bộ xét nghiệm AB -ELISA Một hạn chế lớn nhất mà chúng tôi gặp phải khi chế tạo bộ xét nghiệm AB -ELISA phát hiện nọc rắn độc đó là thời gian ổn định của bộ xét nghiệm dưới 3 tháng 4.2 BỘ XÉT NGHIỆM AbE -ELISA PHÁT HIỆN NỌC ĐỘC CỦA 2 LOÀI RẮN LỤC XANH VÀ HỔ ĐẤT 4.2.1 Bộ xét nghiệm AbE -ELISA phát hiện nọc. .. thể phát hiện nọc độc trong tất cả các mẫu thử và độ nhạy của xét nghiệm là khác nhau ở mỗi loại dịch xét nghiệm và loại nọc rắn, tuy nhiên xét nghiệm này có thể phát hiện nọc độc ở mức < 3,2 ng/ml 3.1.4 Độ ổn định của xét nghiệm AB -ELISA Biểu đồ 3.6 Độ ổn định của bộ xét nghiệm AB -ELISA bảo quản ở 4 C Nhận xét: Bộ xét nghiệm ổn định được dưới 3 tháng 12 3.2 BỘ XÉT NGHIỆM AbE -ELISA PHÁT HIỆN NỌC ĐỘC... BÀN LUẬN 4.1 BỘ XÉT NGHIỆM AB -ELISA PHÁT HIỆN NỌC ĐỘC CỦA 4 LOÀI RẮN LỤC XANH, HỔ ĐẤT, CHÀM QUẠP VÀ HỔ CHÚA 4.1.2 Bộ xét nghiệm AB -ELISA phát hiện nọc độc của 4 loài rắn lục xanh, hổ đất, chàm quạp và hổ chúa Bộ xét nghiệm AB -ELISA do chúng tôi chế tạo cũng sử dụng các thanh loại 8 giếng đáy phẳng như mô tả trong bộ xét nghiệm của Cox, bộ xét nghiệm có khả năng phát hiện đồng thời nọc của 4 loại rắn độc. .. các loại mẫu xét nghiệm: máu, nước tiểu và dịch vết cắn Xét nghiệm AbE -ELISA trong nghiên cứu này đã phát hiện được nọc rắn độc có trong tất cả các loại mẫu bệnh phẩm lâm sàng là máu toàn phần, nước tiểu và dịch vết cắn - Kết quả xét nghiệm AbE -ELISA phát hiện nọc rắn lục xanh Kết quả xét nghiệm ELISA phát hiện nọc rắn lục xanh dương tính ở bệnh nhân có chẩn đoán lâm sàng: rắn lục xanh cắn đạt tỷ lệ... dương của bộ xét nghiệm AbE -ELISA sau bảo quản ở 4oC thời gian 3 tháng so với 6 14 tháng Bộ xét nghiệm có độ ổn định trong 6 tháng kể từ ngày sản xuất 3.3 HIỆU QUẢ PHÁT HIỆN NỌC VÀ ĐỊNH LOÀI RẮN ĐỘC CỦA BỘ XÉT NGHIỆM ELISA TRONG CÁC BỆNH PHẨM LÂM SÀNG 3.3.1 Đặc điểm đối tượng nghiên cứu 3.3.2 Kết quả xét nghiệm phát hiện nọc và định loài rắn độc của xét nghiệm AbE -ELISA trong các bệnh phẩm lâm sàng Bảng... chẩn đoán lâm sàng rắn lục xanh cắn là 62,5% Tỷ lệ này cao hơn ở nhóm bệnh nhân rắn lục xanh cắn có nhiễm độc toàn thân và có sử dụng huyết thanh kháng nọc rắn lục xanh trong điều trị là 81,1% Tỷ lệ phát hiện được nọc rắn hổ (hổ đất và hổ mèo) ở nhóm bệnh nhân có chẩn đoán lâm sàng rắn hổ cắn là 68,4% - Chẩn đoán xác định loài rắn lục xanh bằng xét nghiệm AbEELISA khi vào viện phù hợp với chẩn đoán lâm. .. xét nghiệm AB -ELISA Độ nhạy phát hiện nọc rắn độc của bộ xét nghiệm AB -ELISA được trình bày ở bảng 3.1 cho thấy xét nghiệm có thể phát hiện nọc 18 độc ở tất cả các mẫu thử là máu toàn phần, huyết tương, huyết thanh, nước tiểu và dung dịch đệm với độ nhạy phát hiện nọc rắn trong dung dịch đệm là 0,4 – 0,8 ng/ml Các xét nghiệm AB -ELISA phát hiện nọc rắn độc do các tác giả khác nghiên cứu có độ nhạy phát. .. 23 KẾT LUẬN Từ các kết quả thu được và những phân tích nêu trên, đề tài rút ra các kết luận sau: 1 Đã chế tạo được bộ xét nghiệm AB -ELISA phát hiện nọc độc của 4 loài rắn lục xanh, hổ đất, chàm quạp, hổ chúa và phát triển thành công bộ xét nghiệm AbE -ELISA phát hiện nọc độc của 2 loài rắn lục xanh và hổ đất ở Việt Nam với các thông số kỹ thuật sau: - Bộ xét nghiệm AB -ELISA có khả năng phát hiện và phân... Nhận xét: xét nghiệm có thể phát hiện nọc rắn độc trong tất cả các loại mẫu thử và độ nhạy của xét nghiệm là khác nhau ở mỗi loại dịch thể và loại nọc rắn Tuy nhiên, xét nghiệm này có thể phát hiện nọc độc ở mức nanogram trong máu toàn phần, huyết tương và nước tiểu 13 3.2.4 Phản ứng chéo của xét nghiệm AbE -ELISA với nọc của một số loài rắn độc khác ở Việt Nam Biểu đồ 3.8 Phản ứng chéo của xét nghiệm. .. hiệu quả phát hiện nọc và định loài rắn độc của bộ xét nghiệm ELISA trong các bệnh phẩm lâm sàng như sau: - Bộ xét nghiệm AbE -ELISA có khả năng phát hiện được nọc rắn lục xanh và hổ đất trong tất cả các loại mẫu xét nghiệm trên lâm sàng bao gồm: máu toàn phần, nước tiểu và dịch vết cắn với tỷ lệ xét 24 nghiệm dương tính lần lượt là: 25,2%; 44,5% và 50 % Tỷ lệ phát hiện được nọc rắn lục xanh ở nhóm bệnh . Nghiên cứu chế tạo bộ xét nghiệm ELISA phát hiện nọc rắn độc và ứng dụng lâm sàng chẩn đoán rắn độc cắn ở Việt Nam được tiến hành nhằm mục tiêu: 1. Chế tạo bộ xét nghiệm AB -ELISA phát hiện nọc. dựa vào triệu chứng lâm sàng là chính và chưa có bộ xét nghiệm phát hiện nọc rắn độc nào được nghiên cứu và ứng dụng trên lâm sàng trong chẩn đoán xác định loài rắn cắn. Vì vậy, chế tạo bộ xét nghiệm. nghiệm phát hiện nọc rắn độc ứng dụng trong chẩn đoán loài rắn độc cắn ở Việt Nam là yêu cầu cần thiết. 1.2. KHÁNG THỂ KHÁNG NỌC RẮN VÀ MỘT SỐ KỸ THUẬT MIỄN DỊCH PHÁT HIỆN NỌC RẮN ĐỘC 1.2.1. Kháng