Đang tải... (xem toàn văn)
tinh sạch sản phẩm PCR .PCR là một kỹ thuật phổ biến trong sinh học phân tử nhằm khuyếch đại (tạo ra nhiều bản sao) một đoạn DNA mà không cần sử dụng các sinh vật sống như E. coli hay nấm men. PCR được sử dụng trong các nghiên cứu sinh học và y học phục vụ nhiều mục đích khác nhau, như phát hiện cácbệnh di truyền, nhận dạng, chẩn đoán những bệnh nhiễm trùng,tách dòng gene, và xác định huyết thống.
PCR là một kỹ thuật phổ biến trong sinh học phân tử nhằm khuyếch đại (tạo ra nhiều bản sao) một đoạn DNA mà không cần sử dụng các sinh vật sống như E. coli hay nấm men. PCR được sử dụng trong các nghiên cứu sinh học và y học phục vụ nhiều mục đích khác nhau, như phát hiện cácbệnh di truyền, nhận dạng, chẩn đoán những bệnh nhiễm trùng,tách dòng gene, và xác định huyết thống. nguyên liệu: Các thành phần phản ửng của PCR: Theo Too H. P. (2001) các thành phần cơ bản của một phản ứng PCR bao gồm: - Khuôn mẫu (template): ADN đích - Primer - Bốn dNTP (2’– deoxynucleoside – 5’ – triphosphate): dATP, dTTP, dGTP, dCTP - Taq polymerase - Dung dịch đệm - Mg2+ - Chất phụ trợ (additive): được sử dụng để tăng hiệu quả khuếch đại Thông thường sau khi chạy PCR, trong trường hợp tốt nhất là chỉ có 1 sản phẩm duy nhất (đặc hiệu) thì mẫu vẫn còn bị lẫn tạp với 1 lượng primer, dNTP dư và enzyme DNA polymerase. II TINH SẠCH 1 nguyên lý chung của tinh sạch Trong quá trình tinh sạch có sử dụng dung dịch đệm rửa giải phải đúng yêu cầu và liều lượng Cột tinh sạch phải được điều chỉnh mức chinh xác Thao tác đúng trình tự và cẩn thận trong quá trình thực hiện 2 các phương pháp tinh sạch Phương pháp Sepharose CL-6B Phương pháp Sephacryỉ S-3Q0/S-500 Phương pháp Sephadex 74 Phương pháp Sephadex G-50 Phương pháp Micron- ỉ 00 Phương pháp guanidine-HCỈ Phương pháp điện đi agarose. Phương pháp SPRIR Phương pháp kết tủa Trong đó ta chọn phương pháp điện di agarose. !"# $%&'()*+, %.%/) �%+!12"#00."03 -+ 4567"#03-+8-59-50#:/ 457;+0.<<&="#>010+ =-59.)."&&"+.?6@%#A-B' C#595D 457.0&"1E")."&&"+.F>0"#:G##H%"#I6JK#0&"1E" 457L*<&#MNOJP.-Q300."0QA@R6@&SD 45@7T1UVWX8-Y)."&&"+.F5Z>/%T=45O7[03M8 -"%#'%-\*&%TN-("&&"+.F 457]SQ%T03#'%.).(V-BT1UN:8MN-V&^6&S 45_7L"%#'%6JJJJ^`&S.J'NP (#'%0)a#)%.%b-590Z8(&,a-59#.1c8d -VN.#)/,-\3e25N-Q%b=&'f 45g7.:%).V#59h01E"5Z>Ai#67@".\f%bD8#'% 6JJJJ^`&S.J'NP [03%b-59#'%j-b3(&,8-\k:%-V5l01m).e %V#59-%h01E"n>ko02%bi#67@0Q)#'%-\o0 2)&=%3e%.%/bd:-V#).-\3e25N-Q%b&' f 456J7p,V0)-Y)."&&"+.?6@%#% p,V.%b-0=03c%b)-Y).%V"&&"+.?3(n\f68@%#% -'#)%b3\%>-\-/>%b=&'f 45667]S@JKq#"#.1E"c).VWX ]S@Jq#++U-%"#.1E"-\c).VWX%)0%.)."&&"+.F%Z#)%b3\% >%r-s#)-\o02%b)T1U-"%-#'% 4567MN-V&^6&S [03-59V++U-%0:MN-V&^-\m-U++U83e25N -Qf,M0%b3\%> 4567p'%6JJJJ^`&S.6&SNP8#,V08-*<&# tQ)#'%.6&S-\#)%%b)bd:N-V.-\-2%12..%b 3e3e1Uu% 4567L+2&T%2&T%50:"#00."J_v8-Q 6JJw.J&S-\3\%03Qx2 [03#'%2%b&'f)3\%>0Q)-+:"#00."-\q"%3Qx2-V d0%b3\%>)%b&'f yQ#* L+00."#)&5Z&(&+u#)%).3Qx25%.%/ (a-"%#2&T%/5o+r..+^ [2&T%03-593e^#b&, . chạy PCR, trong trường hợp tốt nhất là chỉ có 1 sản phẩm duy nhất (đặc hiệu) thì mẫu vẫn còn bị lẫn tạp với 1 lượng primer, dNTP dư và enzyme DNA polymerase. II TINH SẠCH 1 nguyên lý chung của tinh. polymerase. II TINH SẠCH 1 nguyên lý chung của tinh sạch Trong quá trình tinh sạch có sử dụng dung dịch đệm rửa giải phải đúng yêu cầu và liều lượng Cột tinh sạch phải được điều chỉnh mức chinh xác Thao. PCR là một kỹ thuật phổ biến trong sinh học phân tử nhằm khuyếch đại (tạo ra nhiều bản sao) một đoạn DNA mà không cần sử dụng các sinh vật sống như E. coli hay nấm men. PCR được sử