Bộ quốc phòng học viện quân y Báo cáo tổng kết Đề tài nhánh kc.10-13.04 Nghiên cứu xây dựng quy trình phát số chất độc có khả gây nhiễm độc hàng loạt mẫu sinh học thiết bị phân tích phòng thí nghiệm Chủ nhiệm ĐTN: PGS TSKH Nguyễn Bằng Quyền thuộc đề tài cấp nhà nớc M số kc 10.13 xác định nguyên nhân, xây dựng biện pháp dự phòng xử trí nhiễm độc hàng loạt 6466-4 Hà nội 10-2004 Tài liệu kết thực nhánh nghiên cứu Đề tài cấp Nhà nớc KC10.13 (2001-2004) BKHCN HVQY Bộ khoa học công nghệ Học Viện Quân y Báo cáo tổng kết khoa học kỹ thuật Đề tài nhánh KC.10.13.04 Nghiên cứu xây dựng quy trình phát chất độc có khả gây NĐHL mẫu sinh phẩm thiết bị phòng thí nghiệm phục vụ cho chẩn đoán điều trị nhiễm độc PGS TS Ngun B»ng Qun Hµ néi - 2004 Tµi liệu kết thực nhánh nghiên cứu Đề tài cấp Nhà nớc KC10.13 Lời mở đầu Nớc ta nớc nông nghiệp phát triển, bớc đại hoá công nghiệp hoá Cùng với phát triển kinh tế bất ổn tình hình trị khu vực toàn cầu, nguy xẩy vụ NĐHL dự đoán trớc Việc xử trí nhiễm độc NĐHL đòi hỏi nhiều biện pháp khác nhau, từ việc dự báo phát sớm nguyên nhân đến công tác dự phòng xử trí Các biện pháp cần đợc thực theo quy tắc trình tự định Vì thế, đề tài KC.10.13.04: Nghiên cứu xây dựng quy trình phát chất độc có khả gây nhiễm độc hàng loạt mẫu sinh phẩm thiết bị phòng thí nghiệm phục vụ cho chẩn đoán, điều trị nhiễm độc đợc giao nhiệm vụ thực mục tiêu cụ thể sau đây: Tạo quy trình phát loại chất độc vụ NĐHL mẫu sinh phẩm thiết bị phòng thí nghiệm phục vụ cho chẩn đoán, điều trị nhiễm độc Để hoàn thành nhiệm vụ đặt ra, đề tài tập trung thực nội dụng sau đây: - Xây dựng phơng tiện quy trình lấy mẫu bảo quản mẫu - Xây dựng phơng tiện quy trình phát nhanh chất độc mẫu sinh học Chơng I Tổng quan 1.1 Nguyên nhân vụ NĐHL Nhiễm độc hàng loạt xẩy nguyên nhân sau đây: + Sự cố hoá học Hiện nay, có nhiều loại chất hóa học đợc sản xuất, bảo quản vận chuyển Các chất hoá học sản phẩm hoàn chỉnh nhng tiền chất sử dụng công nghiệp hoá chất Do đó, tai nạn cố trình sản xuất, bảo quản vận chuyển hoá chất xẩy bất ngờ gây tổn hại sinh mạng, môi trờng tài sản Mức độ nguy hiểm loại hoá chất bị rò rỉ phụ thuộc vào yếu tố sau đây: - Phạm vi tác dụng - Độc tính - Lợng hoá chất sản xuất, bảo quản vận chuyển - Độ bền vững ngoại cảnh Số lợng nạn nhân vụ tai nạn hoá chất phụ thuộc vào nhiều yếu tố: tính chất loại hoá chất, phạm vi lan toả khu vực ô nhiễm, thời điểm nạn nhân có mặt nơi xẩy tai nạn, thời gian tiếp xúc dài hay ngắn phơng pháp xử trí điều trị Trong dạng hoá chất gây nguy hiểm vụ tai nạn, chất dạng khí nguy hiểm cả, có chất nh−: clo, sulfua dioxid, oxid cacbon, amoniac, acid clohydric, oxid nitơ Các loại khí có độc tính tong đối cao bị rõ rỉ phát tán, gây nhiễm độc qua đờng hô hấp nên dễ xẩy NĐHL, khối lợng sản xuất, dự trữ vận chuyển lớn + Do khủng bố Các lực khủng bố tìm cách để gây hiệu sát thơng sinh mạng dân thờng sở vật chất lớn Do vậy, phơng tiện sử dụng để khủng bố gồm loại sau đây: - Chất nổ - Chất độc hoá học - Tác nhân sinh học - Chất phóng xạ Trong năm gần đây, đà xẩy vụ khủng bố chất độc hoá học Năm 1970, nhóm khủng bố thân Arập đà có kế hoạch sử dụng chất độc hoá học công sứ quán Mỹ châu Âu Năm 1972, bọn khủng bố sử dụng acid cyanhydric để công hệ thống điều hoà không khí nhà Liên hợp quốc New York Năm 1978, nhóm khủng bố Palestin đà cho thuỷ ngân vào lô cam xuất từ Israen sang châu Âu Chất độc cyanid đà đợc cho vào nho Chilê xuất sang châu Âu Tháng năm 2002, Mỹ bắt đợc nhóm Hồi giáo cực đoan tinh chế ricin phía bắc Irắc Đầu năm 2003, cảnh sát Anh Luân đôn đà bắt đợc nhóm ngời cất giữ chất độc ricin có ý định đầu độc ga tầu điện ngầm Ngoài ra, Nga Pháp thu giữ đợc chứng việc tàng trữ chất độc ricin Ngày 20-02-2002 cảnh sát Italia bắt đợc ngời đàn ông Marốc mang khoảng 4kg chất độc cyanua (kaliferocyanua) có ý định đa vào đòng ống nớc dẫn vào sứ quán Mỹ thủ đô Rom Chất có độc tính không cao nhng có khả tạo thành acid cyanhydric (HCN) Ngày 26 tháng năm 2004, cảnh sát Gioóc-đa-ni bắt đợc nhóm khủng bố thuộc mạng lới An Ke-đa âm mu dùng xe tải chở 20 thuốc nổ hoá chất độc công vào trụ sở quan tình báo nớc Vụ khủng bố chất độc hoá học điển hình giáo phái Aum Nhật Bản tiến hành Ngày 27-7-1994, thành phố Maxumoto, bọn khủng bố sử dụng chất độc sarin làm ngời chết 114 ngời nhiễm độc Ngày 20-3-1995, bọn khủng bố dùng chất độc sarin tuyến tầu điện ngầm Tokyo làm 5000 ngời nhiễm độc 12 ngời chÕt ë ViƯt Nam ch−a xÈy khđng bè, nhng số kẻ xấu đà sử dụng chất độc Mỹ để lại sau chiến tranh để gây hoảng loạn dân chúng Đắc Lắc năm 2001 làm 911 học sinh giáo viên bị nhiễm độc Sau chất nổ, chất độc hoá học phơng tiện đợc u tiên lựa chọn để khủng bố đặc điểm sau đây: - Có thể gây sát thơng hàng loạt, gây hoang mang, sợ hÃi dân chúng - Có thể sử dụng nhiều phơng pháp nhiều dạng khác nhau, làm cho đối phơng bất ngờ, khó đối phó: gây ô nhiễm nguồn nớc, không khí, lơng thực thực phẩm chất độc dạng lỏng, dạng hơi, dạng khí dung, dạng bột - Chất độc có khả tồn môi trờng thời gian định - Công nghệ nguyên liệu sản xuất chất độc hoá học tơng đối đơn giản, dễ kiếm, sử dụng quy trình sản xuất công nghiệp thông thờng rẻ tiền so với chất phóng xạ chất nổ Có ý kiến cho rằng, nhóm khủng bố khó có khả mặt công nghệ để sản xuất chất độc hoá học Nhng theo báo cáo CIA, việc sản xuất tác nhân hoá học sinh học gây sát thơng nhiều ngời không khó sản xuất heroin chất gây mê - Việc phát hiện, chẩn đoán xử trí NĐHL gặp nhiều khó khăn Tuy nhiên, sử dụng chất độc hóa học để khủng bố có số khó khăn hạn chế: - Khó tạo đợc nồng độ chất độc cao để sát thơng đợc nhiều ngời - Cần phải có phơng tiện phun rải chất độc thích hợp giữ đợc bí mật bất ngờ - Mục tiêu công cần điều kiện định: tập trung đông ngời, địa điểm chất độc không bị phân tán nhanh + Do chiÕn tranh cã sư dơng vị khÝ hoá học (VKHH) VKHH bắt đầu đợc sử dụng nh loại vũ khí sát thơng hàng loạt (Weapon of Mass Destruction-WMD) Đại chiến Thế giới lần thứ Ngày 22-4-1915 quân đội Đức sử dụng khí clor để công liên quân Anh-Pháp làng Ypres (thuộc Bỉ) làm 5000 ngời chết 15000 ngời nhiễm độc Tổng số chết Đại chiến Thế giới lần thứ 92.000 ngời 1,5 triệu ngời nhiễm độc Trong đại chiến Thế giới lần thứ hai có nhiều nớc trang bị vũ khí hoá học xuất loại chất độc mới, chất độc thần kinh Trong thời kì chiến tranh lạnh chạy đua vũ trang hai phe đà làm gia tăng kho vũ khí hoá học tàng trữ giới Trong năm 60 kỉ trớc, Mỹ đẩy mạnh việc nghiên cứu phát triển loại chất độc hoá học míi Trong ®ã cã vơ thư nghiƯm chÊt ®éc VX vùng Dugway (Bang Utah) đà làm 6000 cừu bị chết Năm 1984, quân đội Irắc dùng chất độc sarin yperit công vào thành phố Halabja ngời Cuốc làm 5000 ngời bị nhiễm độc với tØ lƯ tư vong 15% + Do « nhiƠm m«i trờng: Đà xẩy nhiều trờng hợp NĐHL môi trờng bị ô nhiễm, sau số vụ điển hình: - Nguồn nớc Bangladesh bị nhiễm asen nguyên nhân gây NĐHL lớn lịch sử Có khoảng nửa dân số nớc bị nhiễm ®éc asen (35 triƯu sè 77 triƯu d©n) - Năm 1958 vịnh Minamata (Nhật Bản), xuất loại bệnh lạ c dân địa phơng sau nguyên nhân đợc xác định ô nhiễm methyl thuỷ ngân Bệnh sau đợc đặt tên bệnh Minamata -Trong hai năm 1971-1972, việc sử dụng thuốc diệt nấm hại hoa mầu có chứa methyl thuỷ ngân Irắc đà làm 6530 ngời nhiễm độc vµ 500 ng−êi chÕt + Do thùc phÈm, thuèc vµ sản phẩm sinh hoạt đời sống bị nhiễm độc: Lịch sử đà ghi nhận nhiệu vụ NĐHL thực phẩm, thuốc sản phẩm sinh hoạt bị nhiễm chất độc nhiều lý khác Sau số ví dụ: - Vụ nhiễm độc dầu ăn Tây Ban Nha: 1981, 1000 ngời chết 25.000 ngời bị nhiễm độc đợc coi vụ nhiễm độc thực phẩm nghiêm trọng lịch sử châu Âu đại Nguyên nhân dầu ăn bị nhiễm hoá chất trừ sâu - Tháng 10-1992, 49 trỴ em ë mét tr−êng häc thc tiĨu bang New Jersey (Mỹ) xuất biểu nhiễm độc sau bữa ăn tra Xét nghiệm cho thấy hàm lợng MetHb máu trẻ em cao hàm lợng nitrit súp lên tới 459ppm - Năm 1996, Haiti xẩy vụ 76 trẻ em chÕt uèng paracetamol nh−ng cã lÉn diethylenglycol - Năm 2002, số trẻ em thành phố New York (Mỹ) bị nhiễm độc thuốc diệt chuột Trung Quốc 1.2 biện pháp dự phòng xử trí NĐHL Mặc dù đà xẩy nhiều vụ NĐHL nhng việc nghiên cứu kế hoạch sẵn sàng ứng phó với thảm hoạ hàng loạt chất độc hoá học cha đợc nớc quan tâm mức Sau vụ 11-9, nguy khủng bố loại vũ khí sát thơng hàng loạt nói chung, chất độc hoá học nói riêng đà tăng lên rõ rệt Vì vậy, nhiều quốc gia đà tiến hành hoạch định phơng án đối phó NĐHL xẩy Theo ®iÒu tra ë bang Georgia (Mü) Richard B tiÕn hành cho thấy 73% bệnh viện phơng án chuẩn bị xử trí thảm họa hàng loạt chất độc hoá học phóng xạ, 73% số bệnh viện có bố trí vị trí dành cho việc xử lý vÖ sinh, chØ cã 13% sè bÖnh viÖn cã quy tr×nh xư lý vƯ sinh, 3% bƯnh viƯn cã kho thuốc dự trữ thuốc chống độc, 25% số bệnh viƯn” thØnh tho¶ng” cã tËp hn vỊ xư trÝ sù cố hàng loạt Bản điều tra kết luận: tất bệnh viện không sẵn sàng để xử trí cố hàng loạt Nguyên nhân tình hình ®ã cã thĨ lµ do: quan niƯm cho r»ng ®iỊu xẩy ra, thiếu hiểu bíêt cố hàng loạt, kinh phí thiếu phơng tiện, trang bị 1.3 Phát chất độc vụ NĐHL Phát xác định chất độc gây NĐHL mẫu sinh học nhiệm vụ quan trọng Mục đích công việc nhằm phát sớm tác nhân gây ngộ độc để sử dụng thuốc chống độc đặc hiệu biện pháp thích hợp cấp cứu cứu sống nhanh nạn nhân Công việc bao gồm vấn đề: - Phát sớm dấu hiệu vụ NĐHL thông báo kịp thời - Sử dụng phơng pháp phát nhanh, có tính chất định tính - Lấy mẫu, vận chuyển, bảo quản - Xử lý mẫu - Tiến hành kỹ thuật phân tích - Xử lý báo cáo kết Để thông báo kịp thời thông tin việc sử dụng VKHH đối phơng, phơng pháp phát phải cho kết nhanh với độ nhậy cao Ví dụ, với nồng ®é 0,0005mg/lÝt sarin cã thĨ g©y nhiƠm ®éc sau phút tiếp xúc Nh vậy, chất độc cần đợc phát khoảng 2-3 phút để thông báo kịp thời Tuy nhiên, vụ NĐHL, yêu cầu khó thực đợc Trong vụ khủng bố Tokyo năm 1995, phải giờ, có kết phân tích xác định sarin Trong khí đó, vào dấu hiệu lâm sàng, nhân viên y tế ngời khẳng định nguyên nhân định sử dụng thuốc chống độc đặc hiệu Phơng pháp phát phải có khả xác định đợc chất độc nồng độ thấp mức gây nhiễm độc (nồng độ ngỡng) Ví dụ, nồng độ ngỡng sarin 0,0025 mg/lít/phút, độ nhạy phơng pháp phát phải đạt 1.10-6 mg/lít Các tiêu chuẩn để lựa chọn phơng pháp phân tích gồm: + Độ nhậy + Thời gian tiến hành + Độ đặc hiệu + Chi phí Ngoài ra, cần u tiên chọn phơng pháp phát chất độc nguy hiểm, có độc tính cao gây nhiễm độc nhanh 1.3.1 Phơng pháp lấy mẫu: + Lấy mÉu sinh häc LÊy mÉu sinh häc ph©n tÝch độc chất phải tuân theo bốn nguyên tắc sau đây: - Thời gian: phải lấy thời gian thích hợp - Khối lợng mẫu: Phải đủ lợng mẫu cần thiết để phân tích - Bảo quản mẫu: Mẫu phải đợc bảo quản cách, tránh phân huỷ nhiễm bẩn mẫu - Vị trí lấy: Lấy vị trí tiếp xúc trực tiếp với chất độc (da, niêm mạc, dịch dày) Lấy mẫu phận hấp thu, chuyển hoá thải trừ chất độc (máu, nớc tiểu, dầy, gan, thận) phận tích luỹ chất độc (nÃo, mô mỡ, xơng) 1.3.2 Các phơng pháp xử lý mẫu Việc phân tích chất độc trong mẫu sinh học (máu, nớc tiểu, mô, dịch dày) khó chúng có nồng độ bé mẫu phức tạp Vì vậy, trình xử lý mẫu cần thiết nhằm làm giầu mẫu vợt qua ngỡng giới hạn thiết bị phát loại bỏ thành phần ảnh hởng mẫu Quá trình xử lý mẫu thể tích lớn thờng phức tạp bị ảnh nhiều yếu tố Các phơng pháp xử lý mẫu gồm chiết pha lỏng chiÕt pha r¾n 1.3.2.1 ChiÕt pha láng + ChiÕt láng lỏng Chiết lỏng-lỏng thờng đợc sử dụng để làm tách loại cấu tử khỏi mẫu mẹ Do độ phân cực dung môi nằm khoảng rộng nên thuận lợi cho việc tách Điểm bất lợi việc sử dụng thể tích lớn dung môi hữu độc hại ®¾t tiỊn, dơng cång kỊnh, hiƯu st thu håi Theo I.H Suffet, để đạt hiệu suất cỡ 90% tỷ lệ dung môi mẫu phải có tỷ lệ 1:5 + Chiết lỏng - rắn Chiết lỏng rắn đợc áp dụng để tách chất phân tích rắn khỏi mẫu vật rắn dung môi thích hợp Chất phân tích mẫu rắn thờng nằm thành nang nhỏ phân tán chất rắn cần phải nghiền nhỏ để tăng diện tích tiếp xúc dung môi chất phân tích Tuỳ thuộc vào độ phân cực chất cần tách mà ta lựa chọn dung môi chiết Phơng pháp chủ yếu đợc áp dụng cho mẫu rắn nh đất, thực vật 1.3.2 Chiết pha rắn (SPE) Ra đời từ năm 1970, phơng pháp chiết pha rắn đà dần thay cho phơng pháp chiết pha lỏng đợc sử dụng nhiều lĩnh vực phân tích Chiết pha rắn phơng pháp chuẩn bị mẫu để làm giàu làm chất phân tích từ dung dịch cách hấp thụ lên cột đĩa pha rắn, sau chất phân tích đợc giải hấp hệ dung môi thích hợp Đề tài KC10-13.04 đà xây dựng quy trình xét nghiệm phòng thí nghiệm số loại chất độc nguy hiểm, có khả gây NĐHL mẫu sinh học gồm: - Quy trình phân tích asen mẫu cơm, mẫu chất nôn máy quang phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) - Quy trình xác định HCBVTV lân hữu GC-MS mẫu sinh học - Quy trình xác định HCBVTV lân hữu REMIDi HS mẫu nớc tiểu - Quy trình xác định HCBVTV lân hữu REMIDi HS mẫu huyết - Quy trình xác định chất độc cyanua (CN-) mÉu n−íc tiĨu b»ng quang phỉ kÕ - Quy trình xác định chất độc có chứa asen biosensor mẫu nớc sinh hoạt - Quy trình xác ®Þnh chÊt ®éc cã chøa asen b»ng biosensor mÉu nớc tiểu - Xét nghiệm hoạt độ cholinesterase huyết Đề tài đà ứng dụng thành công kỹ thuật biosensor, công nghệ phân tích mới, để xét nghiệm asen Đề tài đà thu đợc kết bớc đầu kinh nghiệm định việc phát triển kỹ thuật điều kiện nớc ta So với phơng pháp phân tích truyền thống, công nghệ biosensor, công việc phân tích từ xử lý mẫu đến vệc ghi thu kết nghiên cứu đà trở nên đơn giản, thuận tiện nhng có độ nhậy độ đặc hiệu cao Trong khoảng hai thập kỉ gần đây, với tiến công nghệ sinh học, thiết bị phân tích với biosensor đợc quan tâm phát triển để phát chất độc phục vụ công tác bảo vệ môi trờng chẩn đoán nhiễm độc Kỹ thuật biosensor dựa vào phát sáng vi sinh vật đà biến đổi mặt di truyền học môi trờng thích hợp để định lợng kim loại nặng đà ứng dụng số nớc Kit phát kim loại nặng dựa nguyên lý biosensor Phần Lan sản xuất lần đợc đề tài KC 10-13 nhập sử dụng nớc ta Giới hạn phát kỹ thuật thấp: với asen 2-4ppb, thuỷ ngân 0,05-2ppb Kỹ 112 thuật có độ xác cao, sử dụng xử lý mẫu đơn giản, nhanh, tiến hành hàng trăm xét nghiệm ngày Giá thành xét nghiệm trang thiết bị rẻ phơng pháp khác Đề tài đà sử dụng kit xét nghiệm asen b»ng biosensor cđa h·ng Aboatox ®Ĩ xÐt nghiƯm asen nớc sinh hoạt tỉnh Sơn Tây; Thanh trì - Hà Nội nớc tiểu động vật thí nghiệm Đà khảo sát, xây dựng quy trình phân tích đa d lợng HCBVTV môi trờng nớc sử dụng phơng pháp chiết pha rắn với cột chiết C18, kết hợp với hệ thống sắc ký khí khối phổ phân tích đồng thời 10 HCBVTV khác (monitor, wofatox, endosulfan, dimethoat, fenitrothion, diazinon, lindan, isothiolane, endosulfan, fenobucarb, atrazin) Tèi −u hoá điều kiện phân tích hệ thống GC-MS, điều kiện chiết xuất xử lý mẫu, chọn đợc dung môi, hệ dung môi tối u cho trình rửa giải HCBVTV khỏi cột chiết Phơng pháp cho độ xác cao (sai số 4,5%), có độ thu hồi cao từ 72,46 đến 94,82 % HCBVTV nghiên cứu Cho đến nay, nớc ta, việc phân tích độc chất mẫu sinh học cha đợc quan tâm nghiên cứu Xác định chất độc mẫu sinh học (biological monitoring) bao gồm phơng pháp phân tích chất độc máu, nớc tiểu, dịch dầy, mô quan Nhiệm vụ phòng thí nghiệm phân tích độc chất mẫu sinh học phải trả lời hai câu hỏi sau đây: - Bệnh nhân nhiễm độc chất gì? - Nồng độ chất độc bao nhiêu? Nghĩa là, phân tích độc chất mẫu sinh học cần phải tiến hành phơng pháp định tính định lợng chất độc Kết phân tích thông báo loại chất độc giúp bác sĩ điều trị sử dụng thuốc chống độc đặc hiệu xác Ví dụ, nhiễm độc lân hữu sư dơng atropin vµ thc håi phơc enzym (vÝ dơ nh pralidoxim), xác định nhiễm độc cacbamat sử dụng atropin Xét nghiệm định lợng đợc nồng độ chất độc thời điểm định giúp nhà lâm sàng nhận định mức độ nhiễm độc định phơng pháp điều trị thích hợp Phân tích chất độc mẫu sinh học có điểm khác với mẫu môi trờng: 113 ã Nhiều loại chất độc tìm đợc mẫu môi trờng (nớc, đất, không khí, lơng thực thực phẩm ) nhng số lợng chất độc xác định đợc mẫu sinh học tơng đối hạn chế ã Sau xâm nhập vào thể sống, chất độc đợc hấp thu, chuyển hoá, phân bố thải trừ khỏi thể Nồng độ chất độc thể máu, nớc tiểu, mô quan, dịch dầy thay đổi theo thời gian phụ thuộc nhiều yếu tố: + Liều lợng đờng xâm nhập chất độc vào thể + Tính chất chất độc: Dạng sử dụng, cấu trúc hoá học, khả hoà tan nớc, lipid, tính chất hoá học + Trạng thái thể: Tình trạng chức hệ tim mạch, hô hÊp, thËn, gan, ti, giíi + Chun ho¸ cđa chất độc thể: Chất độc bị chuyển hoá nhanh chậm thành sản phẩm khác Nhiều trờng hợp khó phân tích trực tiếp chất độc thể mà phải thông qua sản phẩm chuyển hoá Ví dụ: Các hợp chất chứa cyanua (CN-) chuyển hoá thải trừ qua nớc tiểu dạng thiocyanat (SCN-) đà sử dụng phơng pháp xác định sản phẩm chuyển hoá nớc tiểu để xác định nhiễm độc hợp chất chứa cyanua Hoặc nhiễm độc parathion xác định có mặt chất chuyển hoá paranitrophenol nớc tiểu Quá trình tác dụng chất độc thể sống đợc đánh giá số sau đây: - Khả dụng sinh học (Bioavailability): Là mức độ tốc độ (tính theo %) chất độc vào đợc đại tuần hoàn so với liều lợng ban đầu xâm nhập vào thể - Hệ số thải (Clearance): Biểu thị khả quan (thờng gan, thận) lọc chất độc khỏi huyết tơng máu tuần hoàn qua quan - Nửa đời thải trừ (Half-life): Là thời gian cần thiết để nồng độ chất độc huyết tơng giảm xuống nửa (50%) Nh vậy, lấy mẫu sinh học để xét nghiệm cần phải tính đến yếu tố 114 Nếu lấy mẫu máu muộn, chất độc đà thải trừ không tìm đợc chất độc Thông thờng, phòng thí nghiệm phân tích sử dụng thiết bị chung cho mẫu môi trờng mẫu sinh học (sắc ký khí, sắc ký lỏng hiệu cao có ghÐp khèi phỉ, quang phỉ kÕ, quang phỉ hÊp thơ nguyên tử), khâu xử lý mẫu khác Từ yêu cầu thực tế xét nghiệm mẫu sinh học, hÃng Biorad (Mỹ) đà sản xuất loại thiết bị giành riêng cho phân tích độc chất mẫu sinh học, thiết bị Remedi HS (Rapid Emergency Drug identification High Sensitivity) REMIDi HS thiết bị kết hợp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) víi mét hƯ thèng xư lý mÉu tù ®éng cã thể tách, chiết lợng vết chất phân tích từ mẫu sinh học (máu, nớc tiểu) Bên cạnh đó, hệ thống REMEDi HS đợc trang bị sẵn phần mềm tự động nhận dạng chất dựa vào th viện gần 1000 chất độc thờng gặp bổ xung chất vào th viện nhận dạng REMIDi HS đợc chế tạo với chức sàng lọc (screening) nhiều trờng hợp ngộ độc nhiều loại chất độc kết hợp không dự đoán trớc đợc chất gây ngộ độc Trung tâm Phòng chống nhiễm độc, Học viện Quân y sở Việt Nam đợc trang bị hệ thống Remedi HS Trên sở đó, đà tiến hành xây dựng quy trình xét nghiệm 26 loại HCBVTV thiết bị Remedi HS Nhờ vậy, tiến hành phân tích HCBVTV khác 50 mÉu sinh häc cïng mét lóc víi thêi gian ngắn (khoảng 30 phút) độ xác cao Kỹ thuật phục vụ việc xác định nguyên nhân vụ NĐHL HCBVTV cách nhanh chóng, xác Nếu nh việc xác định chất cã chøa cyanua (CN-) mÉu m«i tr−êng cã thĨ đợc thực cách trực tiếp mẫu sinh học, việc phân tích loại chất độc phải gián tiếp cách xác định chất chuyển hoá Do phần lớn lợng cyanua xâm nhập vào thể nhanh chóng chuyển sang dạng thiocyanat (SCN-), nên việc định lợng thiocyanat kiểm soát đợc hàm lợng cyanua xâm nhập vào thể Nguyên tắc phơng pháp oxi hoá thiocyanat để giải phóng acid cyanhydric định lợng phản ứng mầu, nên cách đồng thời xác định đợc lợng cyanid không bị chuyển hoá đào thải nớc tiểu Lợng HCN giải phóng đợc tác dụng với picrat tẩm 115 giấy, sau đợc rửa giải nớc cất đà loại bỏ tác nhân gây nhiễu mầu có mẫu nớc tiểu Phơng pháp tiến hành nhanh, hóa chất thiết bị dễ trang bị áp dụng sở y tế Trong thể, hợp chất lân hữu nhanh chóng bị phân huỷ nên xác định sản phẩm chuyển hoá chúng nớc tiểu Sự có mặt p-nitrophenol nớc tiểu cho phép khẳng định nhiễm độc parathion methyl parathion Đây hoạt chất nhiều loại thuốc trừ sâu lu thông thị trờng nớc ta nh wofatox, ofatox Chúng đà tiến hành nghiên cứu xác định hàm lợng p-nitrophenol sắc kí lỏng hiệu cao (HPLC) để phát đợc sản phẩm nớc tiểu hàm lợng nhỏ (10 -6g) để chẩn đoán đánh giá mức độ nhiễm độc methyl parathion parathion 116 Kết luận + Xây dựng quy trình phân tích chất độc phòng thí nghiệm: - Quy trình phân tích asen mẫu cơm, mẫu chất nôn máy quang phỉ hÊp thơ nguyªn tư (AAS), sai sè cđa phơng pháp khoảng 1,68%, ngỡng phát 0,3 ppb - Quy trình xác định HCBVTV GC-MS mẫu sinh học - Quy trình xác định HCBVTV REMIDi HS mÉu n−íc tiĨu, ng−ìng ph¸t hiƯn 0,1-0,3ppm - Quy trình xác định HCBVTV REMIDi HS mẫu huyết ngỡng phát 0,1-0,3ppm - Quy trình xác ®Þnh chÊt ®éc cyanua (CN-) mÉu n−íc b»ng quang phổ kế - Quy trình xác định chất độc cyanua (CN-) mÉu n−íc tiĨu b»ng quang phỉ kÕ - Quy trình xác định chất độc có chứa asen biosensor mẫu nớc sinh hoạt - Quy trình xác ®Þnh chÊt ®éc cã chøa asen b»ng biosensor mÉu nớc tiểu - Xét nghiệm hoạt độ cholinesterase huyết 117 Tài liệu tham khảo Chu Xuân Anh, Đỗ Quang Trung, Nguyễn Xuân Trung, Yuta Yasaka, Masamori Fujta, Minoru Tanaka (2002) - Nghiên cứu điều kiện hấp phụ lợng vết hợp chất As(III), As(V) monomethylarsonic axit La(OH)3 ứng dụng phân tích môi trờng T¹p chÝ hãa häc, T.40, N0.2, tr 99-102 Chu Xuân Anh, Đỗ Quang Trung, Nguyễn Xuân Trung, Yuta Yasaka, Masamori Fujta, Minoru Tanaka (2002) - Khảo sát điều kiện chiết pha rắn để làm giàu lợng vết asen hữu dung dịch có nồng độ muối cao Tạp chí hóa học, T.40, N0.3, tr 84-87 Đào Trọng ánh (1997) , " Tình hình lu thông , sử dụng thuốc bảo vệ thực vật nay", Thông tin b¶o vƯ thùc vËt , sè(2) , tr.40 - 43 Bài giảng kiểm nghiệm độc chất(1984) NXB Y häc, HN, 1984, tr 112 Ngun Duy B¶o, Nguyễn Huy Đản , Bùi Văn Chung cs (1996), " Điều tra đánh giá tình hình ô nhiễm môi trờng không khí ảnh hởng tới sức khoẻ ng−êi sư dơng hãa chÊt b¶o vƯ thùc vật nông nghiệp", Tập san Y học lao động vệ sinh môi trờng , số(9), tr 21 -25 Ng« Qc B−u, Bïi Minh Lý, (2002) - Sư dụng chất cải tiến hóa học nâng cao độ nhạy độ xác phơng pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử - lò graphit để phân tích Pb, Cd, Se As Tạp chí Phân tích hóa, lí Sinh học, T.7, N0.2, tr 14-17,9 Phạm Ngọc Cảnh, Phùng Thị Thanh Tú , Trần Thị Ngọc An Cs (1992), " Bớc đầu tìm hiểu ô nhiễm số vùng sản xuất , bảo quản, sủ dụng hoá chất bảo vệ thực vật miỊn trung " , TËp san Y häc lao ®éng Vệ sinh môi trờng , số (4), tr.62- 65 118 Võ văn Chi (1996), Từ điển thuốc Việt Nam, Nhà xuất Y học, Tr 807-815 Phạm Tử Dơng (1998) Cấp cứu nội khoa NXB Quân đội nhân dân Hà Nội Trang 165 - 174 10 Phạm Duệ (2002), Nghiên cứu mối quan hệ cholinesterase huyết tơng với đặc điểm lâm sàng ngộ độc cấp phospho hữu cơ, Nghiên cứu Y học, ĐHY Hµ Néi, Bé Y tÕ, Vol 19, No 3, 2002: T 52 57 11 Nguyễn Thị Dụ (2000) "Tình hình ngộ độc cấp Việt Nam khoa Chống độc bệnh viện Bạch Mai", Hội thảo chiến lợc giám sát phòng chống hành vi tự sát Trờng Đại học Y Hà nội 15/12/2000 12 Nguyễn Thị Dụ (2002) "Tình hình ngộ độc cấp Việt Nam, định hớng phát triển chuyên ngành Chống độc: Hội nghị tập huấn Chống độc toàn quốc lần thứ 9/2002, Thành phố Hạ Long 13 Nguyễn Thị Dụ (2003) Dự án thành lập Trung tâm Chống độc hệ thống mạng lới Chống độc Việt Nam 14 Nguyễn Thị Dụ (2003) Hớng dẫn điều trị ngộ độc cấp, NXB Y học Hà Nội 15 Nguyễn Thị Dụ (2003), "Định hớng chẩn đoán trớc trờng hợp ngộ ®éc”, CÈm nang cÊp cøu, Nxb Y häc tr 56-69 16 Nguyễn Thị Dụ (2004) T vấn chẩn đoán xư trÝ nhanh ngé ®éc cÊp TËp NXB Y học - Hà Nội 17 Nguyễn Thị Dụ (2004), Arsenic, T vấn chẩn đoán xử trí nhanh ngộ độc cấp, Nhà xuất Y học 2004, trang 180 192 18 Ngun ThÞ Dơ (2004), BAL (British Anti Lewisite), T vấn chẩn đoán xử trí nhanh ngộ độc cấp, Nhà xuất Y học 2004, trang 30 35 119 19 Ngô Tiến Dũng (1988) , Nghiên cứu ảnh hởng Sarin Clorophos lên số chức hệ thần kinh trung ơng hàm lợng catecholamin trờng hợp không có sử dụng Datura fastuosa tetrahydro - palmatin Luận án PTS Y học , Hà Nội 20 Ngô Tiến Dũng (2002) Độc học Phóng xạ Quân NXB Quân độc nhân dân - Hà Nội Trang 103-111 21 Vũ Văn Đính cs (2001), Thuỷ ngân, Cấp cứu ngộ độc, Nhà xuất b¶n Y häc 2001, trang 155 - 156 22 Vị Văn Đính, Nguyễn Thị Dụ (1992), " Các khí gây kích thích gây ngạt", Xử trí cấp cứu Nội khoa, tập II, Nhà xuất Y học Hà Nội 1992, trang 66 23 Phạm Công Hội (1993) , " Sử dụng hoá chất bảo vệ thực vật Việt Nam" , Tập san Y học lao động Vệ sinh môi trờng, số(5), tr 15 -18 24 Trần Quang Hïng (1995) , Thc b¶o vƯ thùc vËt , NXB Nông nghiệp, Hà Nội 25 Vũ Mạnh Hùng (1996) Nghiên cứu tác dụng kháng khuẩn chống viêm bạch hoa xà tác dụng số tiêu động vật thực nghiệm nhiễm độc Diclordiethylsulfid" Luận án PTS Hà Nội Trang 69-88 26 Nguyễn Ngọc Hùng (1996) Nghiên cứu ảnh hởng Diclorethylsunphua động vật thực nghiệm tác dụng số thuốc điều trị" Luận án PTS Hà Nội Trang 76-100 27 Lê Quang Hoạt (1999) Đối mặt với chủ nghĩa khủng bố, hính thức chiến tranh Tạp chí quân nớc Trang 110-117 28 Nguyễn Đức Huệ, Nguyễn Nhị Hà (2003) - Nghiên cứu phơng pháp phân tích đa d lợng hóa chất bảo vệ thực vật nớc sử dụng cột 120 chiết pha rắn than hoạt tính oxy hóa kết hợp với sắc kí khí - khối phổ Tạp chí phân tích hóa, lí sinh học, tập 8, số 1, tr 27-33 29 Vũ Văn Khanh (1997) , Nghiên cứu ảnh hởng độc hoá chất bảo vệ thực vật Monitor động vật thực nghiệm tác dụng điều trị DÃi yến, Luận án thạc sỹ Y khoa , Hà Nội 30 Trần Bảo Khánh (2004) "Nghiên cứu biến đổi nồng độ methyl parathion máu nớc tiểu động vật thực nghiệm", Tập san báo cáo Hội nghị Khoa học sống toàn quốc năm 2004, Học viện Quân y 31 Trần Bảo Khánh, Lê Văn Đông (2003) "Nghiên cứu tách chiết bảo quản Tetrodotoxin từ mẫu cá tơi", Tóm tắt báo cáo khoa học Hội nghị nghiên cứu giảng dạy miễn dịch học toàn quốc năm 2003, Hà Nội 32 Trần Bá Khoa (2000) Tìm hiểu thay đổi lớn chiến lợc quân Mỹ NXB Chính trị Quốc gia- Hà Nội 33 Nguyễn Liễu (1989) Bài giảng nội khoa dà chiến Học viƯn Qu©n y Trang 73-145 34 Ngun D− Loan (1996), Nghiên cứu ảnh hởng hỗn hợp hóa chất bảo vƯ thùc vËt(Wofatox, Carbaryl, Padan ) ®èi víi ®éng vËt thực nghiệm Luận án PTS Y khoa , Hà Nội 35 Nguyễn Đình MÃo, Nguyễn Văn Nguyên, Hoàng Anh cs (1994) , " Nghiên cứu giải phẫu bệnh tổn thơng gan , thận , tuyến ức nhiễm độc wofatox, padan, lindan ë ®éng vËt thùc nghiƯm" , Tãm tắt báo cáo khoa học , HVQY , tr.17 36 Hoàng Công Minh (2000) Nghiên cứu ảnh hởng hỗn hợp Yperit (diclordiethyl sulfid) với Lewisit (clorvinyl dicloasin) lên số tiêu độc học, hóa sinh, huyết học động vật thực nghiệm tác dụng thuốc điều trị Luận án TS y học Hà Nội Trang 4-34 121 37 Trần Hằng Nga (1998) Tình hình xu h−íng ph¸t triĨn vị khÝ hủ diƯt lín cđa quân đội số nớc Thông tin đội hóa häc Bä t− lƯnh hãa häc Trang 48-54 38 Ngun Văn Nguyên (1983), " Những rối loạn chức nhiễm độc Lân - hữu cơ" Công trình nghiên cøu Y häc qu©n sù - HVQY, tËp 14 1983 tr.38 - 41 39 Nguyễn Văn NhÃn , Hồ Giảng cs (1991), " Nhận định trúng độc nặng cấp tính thuốc trừ sâu gốc phospho hữu so sánh kết điều trị năm 1986 -1990 t¹i khoa håi søc cÊp cøu bƯnh viƯn trung ơng Huế" , Tập san thông tin nghiên cứu Y häc , sè (2) , tr 139 - 143 40 Trần Đức Phấn (1998) , Nghiên cứu hậu di truyền nhiễm độc hoá chất bảo vệ thực vật nhóm phốt hữu Thăm dò biện pháp khắc phục Tóm tắt luận án tiến sỹ Y học ,Hà Néi 41 Ngun H−ng Phóc (1993 ), Tỉn th−¬ng vũ khí hóa học , vũ khí hạt nhân biện pháp phòng chống ,HVQY , tr 38 - 56 42 Ngun H−ng Phóc (1993) Tỉn th−¬ng vị khí hóa học, vũ khí hạt nhân biện pháp phòng chống Học viện Quân y Trang 5-131 43 Nguyễn B»ng Qun (1993) Tỉn th−¬ng vị khÝ hãa häc, vũ khí hạt nhân biện pháp phòng chống Học viƯn Qu©n y Trang 100-103 44 Ngun B»ng Qun (2001), "Chất độc thần kinh", Tổn thơng vũ khí hóa học, vũ khí hạt nhân biện pháp phòng chống, HVQY, tr2430 45 Nguyễn Bằng Quyền (2002) Độc học Phóng xạ Quân Sự NXB Quân đội nhân dân Trang 34-69 46 Nguyễn Bằng Quyền, Hoàng Quang (1995) Nghiên cứu tác dụng chống suy mòn tảo Spirulina nhiễm độc Yperit động vật 122 thực nghiệm Báo cáo nghiên cứu khoa học hóa sinh học Trờng Đại häc Y khoa Hµ Néi Trang 14-16 47 Ngun B»ng Quyền, Nguyễn Ngọc Thìn, Nguyễn Văn Nguyên (1995) , "Nghiên cứu thay đổi hoạt tính men Cholinesterase huyết hàm lợng paranitrofenol nớc tiểu ngời tiếp xúc với thuốc trừ sâu", Công trình nghiên cứu Y häc qu©n sù HVQY, sè (1) ,tr 38 - 41 48 Nguyễn Bằng Quyền, Trần Bảo Khánh (2004) " Biến đổi nồng độ methyl parathion máu nớc tiểu động vật thực nghiệm nhiễm độc Wofatox", Công trình nghiên cứu Hội nghị khoa học toàn quốc 2004, HVQY, số (1), tr 54-57 49 Trần Hồng Sơn (1996) Nghiên cứu tổn thơng dới mức tế bào Yperit gây tác dụng điều trị natrithiosulfat động vật thực nghiệm Luận án PTS Hà Nội Trang 68-84 50 Trần Hồng Sơn , Nguyễn Thị D Loan (1995), " Biến đổi chức siêu cấu trúc tổ chức gan, thận dới ảnh hởng hỗn hợp thuốc trừ sâu", Tạp chí sinh lý học , số (2), tr 59 - 62 51 Ngun Minh T©m (2002), Đánh giá mức độ nặng ngộ độc cấp bảng PSS IPCS Luận văn tốt nghiệp bác sĩ chuyên khoa II, Trờng đại học Y Hà Nội 52 Nguyễn Công Tấn (2002), " Nhận xét tình hình ngộ độc thức ăn nghi thuốc trừ sâu qua đờng rau năm 1997 - 1998 ", Kỷ yếu tóm tắt công trình nghiên cứu khoa học chuyên ngành chống ®éc H¹ Long 9/ 2002, tr 84 - 86 53 TCVN (1986) - Chất lợng nớc-xác định xyanua tổng Tiªu chn ViƯt Nam 6181 54 TCVN (2000) - ChÊt lợng nớc-xác định asen-phơng pháp đo phổ hấp thụ nguyên tư (kü tht hydrua) TCVN 6626 123 55 Ngun Ngäc Thìn (1993) Tổn thơng vũ khí hóa học, vũ khí hạt nhân biện pháp phòng chống Học viện Quân y Trang 147-151 56 Nguyễn Xuân Thản, Nguyễn Văn Nguyên (1995), " Hội chứng suy nhợc thần kinh rối loạn thần kinh thực vật ngời tiếp xúc với thuốc trừ sâu", Công trình nghiên cứu y häc qu©n sù - HVQY , sè (2),tr 40 - 43 57 Nguyễn Văn Thởng (2002)," Nghiên cứu thực trạng quản lý, sử dụng hoá chất bảo vệ thực vật sức khoẻ ngời lao động", Tạp chí Y học thực hành, số(7), tr 31.33 58 Lê Xuân Thục (1998) Cấp cứu nội khoa NXB Quân đội nhân dân Hà Nội Trang 241-255; 359-392 59 Nguyến Công Thuật (1996), Phòng trừ tổng hợp sâu bệnh hại trồng, nghiên cứu ứng dụng , NXB Nông Nghiệp, Hà Nội 60 Lê Bích Thuỷ (1999), " Tình hình chung quản lý chất thải hoá chất nông nghiệp ë ViƯt Nam" , TËp san Y häc lao ®éng Vệ sinh môi trờng, số (13), tr.105 - 112 61 Nguyễn Xuân Thuỷ, Phạm Công Hội (1996 )," Kết nghiên cứu tình trạng nhiễm độc phốt hữu cacamat nghề nghiệp ngời tiếp xúc ", Tập san Y học lao động Vệ sinh môi tr−êng , sè (10) , tr 57 - 62 62 Nguyễn Lĩnh Toàn, Nguyễn Văn Nguyên (1997), " Nghiên cứu xác định hàm lợng men Cholinesterase quân nhân khoẻ mạnh phơng pháp test - kit", Công trình nghiên cøu Y häc qu©n sù, Häc ViƯn Qu©n Y sè (1) , tr 3-5 63 Vũ Thị Trâm (1996), Tìm hiểu độc tính ảnh hởng Trebon số tiêu sinh lý, sinh hoá động vËt thùc nghiƯm Thư t¸c dơng cđa Cafeinbenzoat, stricnin sulfat Trebon Luận án PTS Y khoa , Hà Néi 124 64 A FOA (1992) “Briefing book on chemical weapons, an overview of chemical weapon and protection against them” Stockholm 65 Akiko Tanabe, Hideko Mitobe, Kuniaki Kawata, Akio Yasuhara, and Takayuki Shibamoto (2001) - Seasonal and spatial studies on pesticide residues in surface water of the Shinano river in Japan J Agric Food Chem., vol 49, p 3847-3852 66 Alan L weiner, Marc J Bayer (2001), “Inhalation: gas with immediate toxicity”, Clinical toxicology, WB Saunder Company, pp 679-682 67 Alireza Ghassempour, Ali Mohammadkhah, Fazel Najafi and Mohammad Rajabzadeh (2002) - Monitoring of the pesticide diazinon in soil, stem and surface water of rice fields Analytical sciences, vol 18, p 779-783 68 Almudena Colume, Soledad Cardenas, Mercedes Gallego, and Miguel Valcarcel (2001) - Multiresidue screening of pesticides in fruits using an automatic solid-phase extraction system J Agric Food Chem., vol 49, p 1109-1116 69 Alvin C, Bronstein (2003): Important properties of Hazardous Materials, advanced Hazmat Life Support for Toxic Terrorism; Editor: Frank G Walter (pp 3-22) 70 Alvin C, Bronstein (2003): Medical Management of Hazmat Victims advanced Hazmat Life Support for Toxic Terrorism; Editor: Frank G Walter (pp 23-41) 71 Angel Antonio Carbonell-Barrachina, Pedro Aracil, Elena Garcia, Francisco Burlo, and Francisco Martines-Sanchez (2003) Source of arsenic in licorice confectionery products Journal of agricultural and food chemistry, vol.51, p 1749-1752 125 72 Ardran GM (1964) “Phosgene poisoning [letter]” Br Med J, 1(5379):375 73 Arnold E.Greenberg et al(1985), Standard methods, American Public Heath Association 74 Atta.P.J, Kolioliou.M (1998) “An in vitro evaluation of fluoxetine adsorption by activated charcoal and desorption upon addition of polyethylene glycol-electrolyte lavage solution”J-Toxicol-Clin-Toxicol University of Athens, Greece, 36(1-2): 117-24 ISSN: 0731-3810 75 Australian Emergency Aspects of Manuals Series(2000): Manual 3, Health Chemical, Biological and Radiological Hazards,Provisional Edition 76 Autorenkollektiv (1976) “Militar medizin” Militarverlag der Militarverlag der Deutschen Demokratischen Republik S.68-172 77 Autorenkollektiv (1981) “Militar medizin” Deutschen Demokratischen Republik S.176-179 78 Barbara C E Martin Caravati (2001),"Insecticides: organochlorines", Clinical Toxicology , first Edition, W.B Saunders company, pp 829833 126 ... đề tài KC.10.13.04: Nghiên cứu xây dựng quy trình phát chất độc có khả gây nhiễm độc hàng loạt mẫu sinh phẩm thiết bị phòng thí nghiệm phục vụ cho chẩn đoán, điều trị nhiễm độc đợc giao nhiƯm... phổ trình nghiên cứu phân tích, xác định xây dựng qui trình phát mẫu sinh học - p-nitrophenol: Sử dụng phơng pháp HPLC trình nghiên cứu phân tích xác định xây dựng qui trình phát mẫu sinh học. .. khoa học công nghệ Học Viện Quân y Báo cáo tổng kết khoa học kỹ thuật Đề tài nhánh KC.10.13.04 Nghiên cứu xây dựng quy trình phát chất độc có khả gây NĐHL mẫu sinh phẩm thiết bị phòng thí nghiệm