Công nghệ tế bào thực vật Nuôi cấy và dung hợp tế bào trần HÀ NỘI 03/2011 1 TRƯỜNG ĐẠI HỌC THÀNH TÂY Khoa công nghệ nông – thực phẩm Thảo luận Nuôi cấy và dung hợp tế bào trần Gv hướng dẫn : ths. BÙI VĂN THẮNG Nhóm sinh viên thực hiện : 1. DƯƠNG TUẤN BẢO 2. NGUYỄN VĂN SINH 3. NGUYỄN ĐÌNH CÔNG 4. HÀ HUY HUÂN 5. QUẢN TRỌNG LÂN 6. LÊ VĂN LÂM 7. PHẠM CÔNG HÀ 8.PHẠM THẾ TÙNG 9.VŨ MẠNH TUẤN 10.TRẦN NGỌC THỊNH 2 Nội Dung 1. Phương pháp tách protoplast 2. Nuôi cấy protoplast 3. Phương pháp Dung hợp protoplast 4.Ứng dụng và các tồn tại của kỹ thuật protoplast 3 1.Phương pháp tách tế bào trần 1.1 nguyên tắc  Sử dụng hỗn hợp enzym: xenlulolaza, emixelulolaza, pectinlaza để phân giải thành tế bào giải phóng các tế bào trần  Tạo môi trường có áp suất thẩm thấu thích hợp tránh nước vào làm vỡ tế bào. 4 1. Phương pháp tách tế bào trần 1.2 các bước tiến hành  Chọn nguyên liệu  Xử lý gây co nguyên sinh chất  Xử lý hỗn hợp enzym  Tách và làm sạch protoplas  Kiểm tra khả năng sống và tạo mật dọ thích hợp 5 6 2. Nuôi cấy protoplast 2.1 phát sinh hình thái • Có 2 con đường :  phát sinh cơ quan (organogenesis)  Phát sinh phôi soma (somatic embryogenesis) 7 2. Nuôi cấy protoplast 2.2 Môi trường nuôi cấy • Ammonium nitrate • Calcium • Chất hữu cơ • Các acid hưu cơ và vitamin • Chất điều tiết sinh trưởng • Đường 8 2. Nuôi cấy protoplast 2.3 Điều kiện nuôi cấy • Cường độ ánh sáng • Chất lượng ánh sáng • Nhiệt độ 9 3.Phương pháp dung hợp protoplast 3.1 Dùng hóa chất • Xử lý bằng NaNO3 • Xỷ lý bằng PEG 10 [...]... 4.Ứng dụng và các tồn tại của kỹ thuật protoplast 19 4.Ứng dụng và các tồn tại của kỹ thuật protoplast 4.1.1 nuôi cấy tế bào protoplast thuốc lá • Tiến hành:  Ngày tứ 5 : chuyển sang  Ngày thứ 1: ngâm lá nuôi cấy ở ánh sáng có trong dung dịch enzym cường độ cao hơn (50-75 tách protoplast µmol/sec/m2)  Ngày thứ 2: lọc, tách tế  Ngày thứ 7: kiểm tra số bào protoplast, nuôi cấy lượng tế bào phân chia,... 3.Phương pháp Dung hợp protoplast 12 3.Phương pháp Dung hợp protoplast 3.2 Dùng xung điện • Nguyên tắc : các protoplast tích điện nên dịch chuyển trong điện trường tạo chuỗi giữa hai thanh điện cực, xung điện làm thủng màng khiến protoplast hòa trộn vào nhau 13 3.Phương pháp Dung hợp protoplast 14 15 3.Phương pháp Dung hợp protoplast 3.3 các khả năng xảy ra khi dung hợp 16 4.Ứng dụng và các tồn tại... thuật protoplast 4.1 ứng dụng :  Dung hợp protoplast (lai soma)  Chọn dòng tế bào  Biến nạp, di truyền : chuyển cơ quan tử , AND ngoại lai vào protoplast 17 4.Ứng dụng và các tồn tại của kỹ thuật protoplast 4.1.1 nuôi cấy tế bào protoplast thuốc lá  Chuẩn bị môi trường : + Onozuka cellulase R10 0,5 % + Onozuka macerozyme R10 0,1 % + Mannitol 13,0 % + pHmôi trường ~ 5,8 Dung dịch này được khử trùng bằng...3.Phương pháp Dung hợp protoplast 3.1.1 xử lý bằng NaNO3 • Power và cs đã dùng NaNO3 (0,25 M) kích thích dung hợp hai protoplast • phương pháp này cho hiệu suất thấp vì NaNO3 không thích hợp với tế bào bị không bào hóa mạnh như protoplast từ nhu mô lá 3.1.2 xử lý bằng PEG • Tác nhân PEG (polyethylen glycol) • PEG... kiểm tra xem có dấu hiệu  Ngày thứ 3 : chuyển sang của sự nhiễm bẩn không nuôi cấy ở ánh sáng yếu (10-20 µmol.sec/m2) 20 4.Ứng dụng và các tồn tại của kỹ thuật protoplast Cây cà chua lai khoai tây (pomato) 21 4.Ứng dụng và các tồn tại của kỹ thuật protoplast 4.2 các tồn tại của kỹ thuật protoplast  Các quy trình nuôi cấy tế bào phức tạp, yêu cầu các thiết bị cao  Nhiều cây trồng khác việc tái sinh... tế bào phức tạp, yêu cầu các thiết bị cao  Nhiều cây trồng khác việc tái sinh protoplast là khó khăn thậm trí không thể xảy ra  Tỷ lệ cây tái sinh bất thụ từ các tế bào lai soma nhiều trường hợp còn cao  Khả năng ứng dụng của lai soma vào lai xa còn han chế do có thất thoát NST của thể tái sinh 22 1 23 . Công nghệ tế bào thực vật Nuôi cấy và dung hợp tế bào trần HÀ NỘI 03/2011 1 TRƯỜNG ĐẠI HỌC THÀNH TÂY Khoa công nghệ nông – thực phẩm Thảo luận Nuôi cấy và dung hợp tế bào trần Gv hướng. TUẤN 10.TRẦN NGỌC THỊNH 2 Nội Dung 1. Phương pháp tách protoplast 2. Nuôi cấy protoplast 3. Phương pháp Dung hợp protoplast 4.Ứng dụng và các tồn tại của kỹ thuật protoplast 3 1.Phương pháp tách tế bào. bào trần 1.1 nguyên tắc  Sử dụng hỗn hợp enzym: xenlulolaza, emixelulolaza, pectinlaza để phân giải thành tế bào giải phóng các tế bào trần  Tạo môi trường có áp suất thẩm thấu thích hợp