ĐIệN DI PHÂN TíCH AXIT NUCLEIC Gel polyacrylamid ADN 1 1000 bp Gel agarose ADN / ARN 20 bp 20 kb PFGE ADN 10 kb 10 Mb DGGE ADN/ARN Sai khác một vài nucleotit Gradient biến tính 0% 70% 40% Các giếng tra mẫu Điện cực 13 Gradient biến tính 40% 70% Chiều dịch chuyển của ADN Thể đột biến 1 dễ biến tính hơn Thể đột biến 2 khó biến tính hơn ADN kiểu dại DGGE vuông góc DGGE song song Kh¸i niÖm chung ADN t¸i tæ hîp ®−îc thùc hiÖn nh− thÕ nµo? T¸ch chiÕt vµ tinh s¹ch c¸c axit nucleic T¹o vÐct¬ t¸i tæ hîp Néi dung 14 T¹o vÐct¬ t¸i tæ hîp C¸c lo¹i enzym sö dông trong ADN t¸i tæ hîp Nh©n dßng gen vµ x©y dùng ng©n hµng gen Sµng läc c¸c dßng gen trong ng©n hµng gen Về vectơ / thể truyền Vectơ nhân dòng Vectơ biểu hiện 1. Kích thớc càng nhỏ, kích thớc đoạn xen càng lớn. 2. Trình tự nucleotit đợc biết đầy đủ. 15 3. Có khả năng tự sao chép trong tế bào chủ. Các đặc tính chung của véctơ 1. Kích thớc càng nhỏ, kích thớc đoạn xen càng lớn. 2. Trình tự nucleotit đợc biết đầy đủ. 3. Có trình tự khởi đầu sao chép phù hợp tế bào chủ. 4. Nhận biết nhờ các gen chỉ thị Vectơ nhân dòng và Vectơ biểu hiện 16 4. Nhận biết nhờ các gen chỉ thị hoặc gen đánh dấu. 5. Có vị trí gắn phân tử ADN ngoại lai (vị trí đa tách dòng polycloning site / MCS). C¸c ®Æc ®iÓm c¬ b¶n cña vÐct¬ t¸ch dßng 17 vÐct¬ plasmid  KÝch th−íc 1 – 200 kb, sîi kÐp, vßng.  pBR332 do Bolivar vµ Rodiguez 18 pBR332 4363 bp Rodiguez (1977) thiÕt kÕ cho phÐp mang ®o¹n ADN cµi ®Õn 6 kb. . plasmid  KÝch th−íc 1 – 200 kb, sîi kÐp, vßng.  pBR 332 do Bolivar vµ Rodiguez 18 pBR 332 436 3 bp Rodiguez (1977) thiÕt kÕ cho phÐp mang ®o¹n ADN cµi ®Õn 6 kb. . polyacrylamid ADN 1 1000 bp Gel agarose ADN / ARN 20 bp 20 kb PFGE ADN 10 kb 10 Mb DGGE ADN/ ARN Sai khác một vài nucleotit Gradient biến tính 0% 70% 40% Các giếng tra mẫu Điện cực 13 Gradient. 40% 70% Chiều dịch chuyển của ADN Thể đột biến 1 dễ biến tính hơn Thể đột biến 2 khó biến tính hơn ADN kiểu dại DGGE vuông góc DGGE song song Kh¸i niÖm chung ADN t¸i tæ hîp ®−îc thùc