CÁC THỬ NGHIỆM SINH HÓA - Sau khi nuôi cấy trên các môi trường chọn lọc, môi trường phân biệt  thu được các khuẩn lạc đơn thuần khiết bằng các kỹ thuật phân lập. - Chủng thuần là yêu cầu cho việc định danh các vi sinh vật. CÁC THỬ NGHIỆM SINH HÓA Việc định danh: - Các đặc điểm về hình thái - Các phản ứng sinh hóa thực hiện bởi các chủng vi sinh vật.  Kết quả:  Vi khuẩn Gram (+) bắt màu tím  Vi khuẩn Gram (-) bắt màu đỏ. CÁC THỬ NGHIỆM SINH HÓA Có ba cách tiếp cận để thực hiện các thử nghiệm sinh hóa dùng cho mục đích định danh 1) Cách truyền thống 2) Sử dụng các bộ kit 3) Dùng thiết bị tự động. CÁC THỬ NGHIỆM SINH HÓA  Các kết quả thử nghiệm sinh hóa của hàng trăm loài vi sinh vật được tổng hợp thành những Bảng sinh hóa định danh vi sinh vật.  Bảng bao gồm các đặc điểm sinh hóa đặc trưng nhất để phân biệt các loài vi sinh vật gây bệnh thường gặp. Mỗi đặc điểm sinh hóa được biểu thị một trị số là tỷ lệ phần trăm thử nghiệm sinh hóa cho kết quả dương tính theo thống kê ở một loài vi sinh vật. CÁC THỬ NGHIỆM SINH HÓA  Các đặc điểm sinh hóa có trị số dao động ở mức 50% không có giá trị trong việc định danh.  Trong thực tế kiểm nghiệm, các kết quả thử nghiệm sinh hóa biểu thị qui ước bằng các ký hiệu như:  (+) : dương tính  (-) : âm tính  (+/-) : khoảng trên 70% là dương tính  (-/+) : khoảng trên 70% là âm tính.  Trong các thử nghiệm này, để đảm bảo chính xác trong việc đọc kết quả, người ta thường thực hiện thử nghiệm trên các chủng đối chứng. 1.Thử nghiệm bằng phép thử catalase 1.1.Nguyên tắc - Các vi sinh vật hiếu khí và kỵ khí tùy tiện chứa chuỗi truyền điện tử có cytochrome đều có enzyme catalase, có khả năng biến dưỡng năng lượng theo phương thức hô hấp với oxy tạo ra H 2 O 2 . - Catalase thủy phân H 2 O 2 thành H 2 O và O 2 , ngăn cản sự tích tụ phân tử có độc tính cao này trong tế bào. - Sự thủy phân H 2 O 2 sẽ giải phóng O 2 được ghi nhận qua hiện tượng sủi bọt khí. 1.Thử nghiệm bằng phép thử catalase [...]...1 .Thử nghiệm bằng phép thử catalase 1.2.Tiến hành Hóa chất sử dụng: - Dung dịch H2O2 30% được giữ trong tủ lạnh với chai màu nâu tránh ánh sáng - Dung dịch đệm phosphate pH 7,0 Có thể thực hiện thử nghiệm catalase bằng một trong những phương pháp sau: - Thử trên phiến kính (lame) - Thử trong ống thạch nghiêng - Thử bằng ống mao dẫn 1 .Thử nghiệm bằng phép thử catalase 1.2.Tiến hành - Thử trên... - Thử trên phiến kính (lame) - Thử trong ống thạch nghiêng - Thử bằng ống mao dẫn 1 .Thử nghiệm bằng phép thử catalase 1.2.Tiến hành - Thử trên phiến kính (lame): dùng que cấy lấy một ít sinh khối từ khuẩn lạc thuần đặt trên một phiến kính sạch Nhỏ một giọt H2O2 30% lên sinh khối vi sinh vật trên phiến kính Ghi nhận sự sủi bọt nếu có Hoặc có thể bằng cách chuyển một ít sinh khối của khuẩn lạc lên phiến... và lá kính 1 .Thử nghiệm bằng phép thử catalase 1.2.Tiến hành - Thử trong ống thạch nghiêng: nhỏ trực tiếp 1ml H2O2 30% lên sinh khối chủng thuần trên bề mặt thạch nghiêng Ghi nhận nếu có sự sủi bọt quanh sinh khối 1 .Thử nghiệm bằng phép thử catalase 1.2.Tiến hành - Thử bằng ống mao dẫn: dùng ống mao dẫn thu lấy dung dịch H2O2 30%, sau đó chấm đầu ống mao dẫn này vào tâm khuẩn lạc cần thử trên môi... trong môi trường 3 .Thử nghiệm khả năng lên men đường hoặc rượu 3.1 Nguyên tắc -Thử nghiệm khả năng lên men thường được dùng để định danh các vi sinh vật đường ruột (Enterobacteriaceae có khả năng lên men glucose, E.coli, Klebsiella, Enterobacter lên men được gluocose và lactose) và phân biệt một số giống vi sinh vật 3 .Thử nghiệm khả năng lên men đường hoặc rượu 3.1 Nguyên tắc -Thử nghiệm khả năng lên... định khả năng của vi sinh vật tổng hợp enzyme urease xúc tác sự thủy phân urea tạo ra 2 nguyên tử NH3 và CO2 làm tăng pH của môi trường và có thể được theo dõi qua sự thay đổi màu của chất chỉ thị pH - Thử nghiệm urease là đặc trưng cho các loài Proteus spp Và thường được dùng để phân biệt các dạng Proteus với các thành viên khác của Enterobacteriaceae 2 .Thử nghiệm bằng urease Thử nghiệm Urease được... ngày ủ hoặc lâu hơn 3 .Thử nghiệm khả năng lên men đường hoặc rượu 3.1 Nguyên tắc -Xác định khả năng của một số vi sinh vật lên men (phân giải) một carbohydrate đặc hiệu có trong môi trường cơ bản để tăng trưởng - Khi sử dụng các nguồn carbohydrate để lên men, tùy theo phương thức lên men các sản phẩm được tạo ra sẽ khác nhau: rượu, các acid hữu cơ, CO2… Trong các trường hợp, các sản phẩm tạo thành... 2 .Thử nghiệm bằng Urease 2.2.Tiến hành Dùng que cấy vòng cấy một lượng sinh khối lớn từ khuẩn lạc của chủng thuần lên bề mặt các ống môi trường thạch nghiêng - - Ủ ở 370C trong 24 giờ 2 .Thử nghiệm bằng Urease 2.3.Đọc kết quả * Môi trường urea lỏng RustigianStuart’s Urease Broth: - Dương tính (+): Màu đỏ tím trong khắp môi trường - Âm tính (-) : Môi trường không có sự đổi màu (màu vàng cam) 2 .Thử nghiệm. .. được dùng để định danh các vi sinh vật đường ruột (Enterobacteriaceae có khả năng lên men glucose, E.coli, Klebsiella, Enterobacter lên men được gluocose và lactose) và phân biệt một số giống vi sinh vật Môi trường Phenol Broth Base có pH 7,4 3 .Thử nghiệm khả năng lên men đường hoặc rượu 3.2.Tiến hành - Cấy vi khuẩn mới hoạt hoá vào các ống nghiệm, đặt ở 36 0C, theo dõi hiện tượng sinh acid sau 1-3 ngày... này có ưu điểm là thử được trên từng khuẩn lạc nên có thể thực hiện trên các khuẩn lạc của chủng chưa làm thuần 1 .Thử nghiệm bằng phép thử catalase 1.3.Đọc kết quả - Dương tính (+) - Âm tính (-) : khi có hiện tượng sủi bọt khí do khí O 2 được tạo ra : khi không có hiện tượng sủi bọt khí Hình1: Phản ứng sủi bọt khi tiếp xúc với dung dịch H 2O2 của vi khuẩn có catalase dương tính 2 .Thử nghiệm bằng Urease... 0,45µm hoặc 0,2µm - Phân phối vào các ống nghiệm Hấp ở 1210C trong 15 phút - Tiến hành cấy chủng vào các ống môi trường bằng que cấy vòng - Ủ các ống môi trường ở 370C trong 18 – 20 giờ Trong trường hợp khẳng định kết quả âm tính, cần dùng paraffin để bịt kín nút bông và theo dõi thời gian ủ có thể kéo dài đến trong 14-30 ngày Nếu vi khuẩn có khả năng lên men đường (sinh acid) thì chất chỉ thị Andrade . CÁC THỬ NGHIỆM SINH HÓA Có ba cách tiếp cận để thực hiện các thử nghiệm sinh hóa dùng cho mục đích định danh 1) Cách truyền thống 2) Sử dụng các bộ kit 3) Dùng thiết bị tự động. CÁC THỬ. CÁC THỬ NGHIỆM SINH HÓA  Các kết quả thử nghiệm sinh hóa của hàng trăm loài vi sinh vật được tổng hợp thành những Bảng sinh hóa định danh vi sinh vật.  Bảng bao gồm các đặc điểm sinh hóa đặc. sinh vật. CÁC THỬ NGHIỆM SINH HÓA  Các đặc điểm sinh hóa có trị số dao động ở mức 50% không có giá trị trong việc định danh.  Trong thực tế kiểm nghiệm, các kết quả thử nghiệm sinh hóa biểu