Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẠ I HỌ C THÁ I NGUYÊN TRƢỜ NG ĐẠ I HỌ C SƢ PHẠ M  V TH NHƢ TRANG XC ĐNH HM LƢNG CHOLESTEROL TRONG TRNG V SO SÁ NH TRÌ NH TƢ̣ VÙ NG ĐIỀ U KHIỂ N D-LOOP DNA TY THỂ CỦ A GÀ RI, G C, G TRE LUẬ N VĂN THẠ C SĨ SINH HỌ C THI NGUYÊN, 2009 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ĐẠ I HỌ C THÁ I NGUYÊN TRƢỜ NG ĐẠ I HỌ C SƢ PHẠ M  V TH NHƢ TRANG XC ĐNH HM LƢNG CHOLESTEROL TRONG TRNG V SO SNH TRNH T VNG ĐIỀU KHIỂN D-LOOP DNA TY THỂ CỦ A G RI, G C, G TRE Chuyên ngà nh: SINH HỌ C THƢ̣ C NGHIỆ M M s: 60.42.30 LUẬ N VĂN THẠ C SĨ SINH HỌ C Ngƣờ i hƣớ ng dẫ n khoa họ c: PGS. TS Nguyễ n Trọ ng lạ ng THI NGUYÊN, 2009 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Lờ i cam đoan Tôi xin cam đoan đây là công trì nh nghiên cứ u củ a tôi . Cc kt qu, số liệ u nêu trong luậ n văn là trung thự c và chưa từ ng đượ c công bố trong bấ t kỳ công trình nà o khá c . Tc giả luận văn V Th Nhƣ Trang Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn LỜ I CẢ M ƠN Tc gi chân thnh cm ơn s hưng dn tn tnh của PGS .TS Nguyễ n Trng Lng trong sut qu trnh hon thnh lun văn ny . Tc gi xin chân thnh cm ơn s gip đ của cc thy cô gio Khoa Sinh trườ ng Đạ i họ c Sư phạ m Thá i Nguyên , phòng thí nghiệm của Khoa Hóa an ton vệ sinh thc phẩm- Viện dinh dưng Việt Nam, phòng thí nghiệm công nghệ DNA ứng dụng - Viện Công nghệ Sinh hc thuộc Viện Khoa hc v Công nghệ Việt Nam và mộ t số gia đì nh ở Cao Thượ ng - Tân Yên- Bắ c Giang đã tạ o điề u kiệ n giú p đỡ tậ n tì nh trong việ c nghiên cứ u t hự c nghiệ m của đ ti. Cuố i cù ng tá c giả xin chân thà nh cả m ơn sự giú p đỡ củ a Ban giá m hiệ u, Khoa Sau đạ i họ c , Ban chủ nhiệ m Khoa Sinh trườ ng Đạ i họ c Sư phạ m Thi Nguyên đ cho php v to điu kiện thun li đ tc gi hon thnh bn luậ n văn nà y. Tc giả V Th Nhƣ Trang Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Nhƣ̃ ng tƣ̀ viế t tắ t DNA Deoxyribonucleotide acid RNA Ribonucleotide acid dNTP Deoxynucleoside triphosphate ddNTP Dideoxynucleoside triphosphate bp Base pair EDTA Ethylene diamine tetra – acetic acid EtBr Ethidium bromide Kb Kilo base PCR Polymerase Chain Reaction RNase Ribonuclease SDS Sodium Dodecyl Sulphate TAE Tris- acetate-EDTA COI Cytochrome oxidase I PBS Phosphate Buffer Saline epp eppendorf Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Danh mụ c cá c bả ng Bảng Tên bả ng Trang 2.1 Kế t quả c hiề u cao và diệ n tí ch peak cholesterol chuẩ n ở cc nng độ khc nhau 20 3.1 Kế t quả chiề u cao và diệ n tích peak cholesterol trong trứ ng của cc mu nghiên cứu 32 3.2 Hm lưng cholesterol trong trứng của cc mẫ u nghiên cứ u 33 3.3 Cc đim nucleotide khc biệt giữa 2 mu g Ác v Tre so vi g Ri 43 3.4 Thng kê cc đim đa hnh ở 3 mu g nghiên cứu so vi g Gallus gallus gallus m s NC 007236 v g Gallus gallus gố c Nhậ t m s AB114078 43 3.5 Hệ số tương đồ ng về tr nh t nucleotide vng D -loop ở mẫ u nghiên cứ u vớ i mộ t số mẫ u trên GenBank 45 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Danh mụ c cá c hì nh Hnh Tên hì nh Trang 1.1 Cấu trc ho hc của cholesterol 6 1.2 Bn đ gen mtDNA của g nh Gallus gallus 12 2.1 Đường chuẩn cholesterol da theo diện tích cc peak chuẩn cholesterol 20 2.2 Đường chuẩn cholesterol da theo chiu cao cc peak chuẩn cholesterol 21 3.1 Biu đ hm lưng cholesterol trong trứng của cc mẫ u nghiên cứ u 33 3.2 Kt qu điện di DNA tổng s 35 3.3 Kế t qu điện di sn phẩm PCR 36 3.4 So snh trnh t đon D -loop của 3 mu g Ri, Ác, Tre vi gà Gallus gallus gallus m s NC 007236 v g Gallus gallus gố c Nhậ t m s AB114078 41 3.5 Quan hệ di truyn của một s ging g 46 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn MC LC Lờ i cam đoan Lờ i cả m ơn Danh mụ c cá c bả ng Danh mụ c cá c hì nh Mở đu 1 1.Đặt vấn đ 1 2. Mục tiêu nghiên cứu 2 3. Nội dung nghiên cứu 2 Chương 1. TỔNG QUAN TI LIỆU 1.1 Ngun gc gia cm 3 1.1.1 Gà Á 4 1.1.2 Gà Ri 5 1.1.3 Gà Tre. 6 1.2 Cholesterol 6 1.2.1 Tính trng chất lưng cholesterol của trứng g 6 1.2.2 Nhu cu cholesterol ở người 7 1.2.3 Vai trò cholesterol trong cơ th 7 1.2.4 Tc hi cholesterol trong cơ th khi vưt qu mức bnh thường. 8 1.3 Đặc đim DNA ty th 10 1.3.1 Đặc đim cấu trc v trnh t của DNA ty th 10 1.3.2 Ý nghĩa v mặt tin ho của DNA ty th 11 1.4 Đặc đim cấu trc v di truyn hệ gen ty th g 12 1.5 Tnh hnh nghiên cứu DNA ty th g trên th gii v ở Việt Nam 14 1.5.1 Tnh hnh nghiên cứu DNA ty th g trên th gii 14 1.5.2 Tnh hnh nghiên cứu DNA ty th g ở Việt Nam 16 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Chƣơng 2 VẬT LIỆU V PHƢƠNG PHP NGHIÊN CU 2.1 Vt liệu 18 2.1.1 Ngun gc mu 18 2.1.2 Đị a đim thí nghiệm 18 2.2 Ho chất v thit bị 18 2.2.1 Hóa chất 18 2.2.2 Thit bị sử dụng 18 2.3 Phương php nghiên cứu 19 2.3.1 Phương php ho sinh xc định hm lưng cholesterol 19 2.3.2 Phương php sinh hc phân tử 22 2.3.2.1 Tch chit v tinh sch DNA tổng s từ mu động vt 22 2.3.2.2 Kỹ thut điện di DNA trên gel agarose 25 2.3.2.3 Nhân vng điu khin D- loop bằng kỹ thut PCR 26 2.3.2.4 Tinh sch sn phẩm PCR 29 2.3.2.5 Phương php xc định trnh t DNA. 31 2.3.3 Phương php xử lý s liệu 31 Chương 3. KẾT QUẢ V THẢO LUẬN 3.1 Hm lưng cholesterol trong trứng của cc mu nghiên cứu 33 3.2 Xc định trnh t nucleotide của vng D-loop v đnh gi đa dng di truyn của 3 mu g nghiên cứu 35 3.2.1 Tch chit v tinh sch DNA tổng s từ mu g 35 3.2.2 Nhân vng điu khin D-loop của DNA ty th 36 3.2.3 Xc định trnh t vng điu khin D-loop của DNA ty th 37 KẾ T LUẬ N VÀ ĐỀ NGHỊ 1. Kt lun 48 2. Đ nghị 48 TI LIỆU THAM KHẢO 50 PH LC 54 Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn 1 Mở đầu 1. Đặt vấn đề Hiện nay, ngnh chăn nuôi có những bưc pht trin mnh mẽ vi xu hưng chăn nuôi theo con đường công nghiệp ho. Đặc biệt, ngnh chăn nuôi gia cm đang đưc quan tâm hng đu v nó có kh năng cung cấp một lưng ln sn phẩm trứng, thịt giu chất dinh dưng, dễ ch bin v ph hp vi nhu cu của tuyệt đi đa s người dân. S pht trin nhanh chó ng của ngnh chăn nuôi gia cm trên th gii đ tc động đn ngnh chăn nuôi gia cm ở nưc ta v cơ cấu, quy mô, loi hnh chăn nuôi. S đn gia cm có s lưng ln v cơ sở chăn nuôi tp trung vi quy mô ln tăng lên. Một s ging g nưc ta có nhiu ưu đim như phẩm chất thịt, trứng thơm ngon, gi trị dinh dưng cao, có kh năng thích nghi cao vi nhiu điu kiện sng của địa phương, chng chịu tt vi điu kiện khí hu khắc nghiệt. Trong những năm gn đây, x hội ngy cng pht trin, đời sng vt chất v tinh thn của con người đưc nâng cao. Chất lưng bữa ăn trong gia đnh đ đưc ci thiện rất nhiu. Cũng chính v lí do đó, hiện nay con người đ mắc rất nhiu bệnh khc nhau. Trong đó, một trong những bệnh đin hnh khi chất lưng bữa ăn nâng cao đó l bệnh v tim mch, xơ v động mch, huyt p cao, thiu năng mch vnh, nhi mu cơ tim, tai bin mch mu no Những bệnh đó chim khong 25% tổng s nguyên nhân tử vong ở cc nưc pht trin thuộc th gii tây phương. Có nhiu nguyên nhân k hc nhau dn ti nhưng căn bệ nh như trên , nhưng một nguyên nhân rất quan trng đó l do hm lưng cholesterol trong cơ th cao. Khi ch độ ăn ung thay đổi th hm lưng cholesterol cũng thay đổi theo. Những ngun thc phẩm giu cholesterol đó l những loi thức ăn có ngun gc động vt nhất l bu dục, no, tim, lòng đỏ trứng Do sở thích v tnh hnh kinh t, nhiu người rất [...]... Ác, gà Tre - Xác đ nh và so sa nh tri nh tự vùng điều khiển D-loop ty th ̉ của ga Ri, ga Ác, gà Tre + Tách DNA tổng số từ máu của các giống ga trên + Nh n vùng D-loop bằng kĩ thuật PCR + Xác đ nh tri nh tự vùng D-loop và so sa nh tri nh tự đó giữa 3 giống ga trên - Xác đ nh mối quan hệ di truyền giữa các giống ga nghiên cứu với một số giống ga đã được công bố tri nh. .. tr nh tự vùng điều khiển Dloop DNA ty thể của gà Ri, gà Tre, gà Ác nuôi tại Bắc Giang” 2 Mục tiêu nghiên cứu - Xác đ nh hàm lượng cholesterol trong trứng của 3 giống ga - Xác đ nh và so sa nh tri nh tự vùng điều khiển D-loop DNA ty th ̉ của 3 giống ga - Đa nh giá quan hệ di truyền giữa các giống ga 3 Nội dung nghiên cứu - Xác đ nh hàm lượng cholesterol trong trứng ga Ri, ga Ác,. .. tiên là ở nước Anh, sau đó là Mỹ, các giống ga này được lai tạo tha nh nhiều giống ga có năng suất cao hơn Ở nước ta, ga rừng được thuần hoá và nuôi sớm nh t ở vùng V nh Phú, Hà Bắc, Hà Tây… Từ giống ga nuôi ban đầu là tiền thân của ga Ri hiện nay nh n dân ta đã tạo được nhiều giống ga : ga Mía, ga Ác, ga Ri, gà Tre, gà Đông Tảo, ga Vàng … 1.1.1 Gà Ác Gà Ác có... là ga nhà có nhiều đặc điểm giống ga rừng v ̀ đặc điểm hi nh thái đến cấu tạo giải phẫu các bộ phận bên trong cơ th ̉, tiếng ga y, tập t nh hoạt động Theo loại hi nh ga có th ̉ chia tha nh 3 kiểu: Kiểu Bakira (ga nguyên thuỷ): nhiều lông, mào và dái tai lớn, mỏ hơi cong và nhọn Kiểu Malaysia (ga chọi): ít lông và cứng, mào và dái tai nh , đầu nh , mắt lõm vào... gen COI (cytochrome oxidase I) có mã mở đầu là GTG thay vì ATG Tri nh tự đầy đủ này của hệ gene ty th ̉ ga nhà là cơ sở cho nhiều công tr nh nghiên cứu v ̀ DNA ty th ̉ của các giống, các loài thuộc bộ ga (Galliormes) Toàn bộ DNA ty th ̉ ga nhà được lập tha nh sơ đ ̀ nh sau: H nh 1.2 Bản đồ gen mtDNA của gà nh Gallus gallus (Desjadins và Morais, 1990) ND: NADH đehidrogenaza CO:... t nh Nam Bộ ở Việt Nam Kích thước của ga nh con, ga trống có lông màu trắng, đuôi và cổ đen Ga mái màu vàng, thấp chân Ga trống và ga mái nh hơn ga Ri Ga Tre có tập t nh là hay bay và đậu trên hàng rào Người nuôi chủ yếu là nuôi làm ca nh Trong nh ng năm gần đây, nhà nước có nhiều dự án nh m gìn giữ và bảo tồn quỹ gen của các loại gia cầm của nước ta 1.2 Cholesterol. .. của DNA ty th ̉ nhanh hơn nhiều so với DNA trong nh n, có th ̉ là do ty th ̉ thiếu hụt cơ chế sửa chữa DNA Tốc độ đột biến cao dẫn đến nhiều biến dị trong ty th ̉ Đặc biệt là vùng điều khiển D-loop của mtDNA là vùng tiến hoá nhanh nh t của mtDNA: chúng tích luỹ các đột biến với tỷ lệ cao hơn gấp 5–10 lần so với các gen khác của mtDNA Tri nh tự nucleotit của vùng điều khiển... ăn trứng ga và coi đó là nguồn thực phẩm ch nh trong gia đi nh Trong trứng, đặc biệt là lòng đỏ có hàm lượng cholesterol rất cao Có nhiều loại trứng khác nhau nh trứng ga , trứng chim, trứng vịt Mỗi giống ga khác nhau thì trứng có hàm lượng cholesterol cũng khác nhau Nh vậy việc lựa chọn loại trứng vừa đảm bảo dinh dưỡng vừa đáp ứng nhu cầu, sở thích của mỗi cá nh n mà... bảo vệ sức khoẻ là rất quan trọng Đồng thời cùng với sự phát triển của kĩ thuật sinh học phân tử, chúng tôi muốn xác đ nh sự đa dạng di truyền ở mức phân tử của các giống ga qua nghiên cứu tri nh tự vùng điều khiển D-loop ty th ̉ của các giống ga đó Xuất phát từ nh ng lý do trên chúng tôi đã tiến ha nh đ ̀ tài : “ Xác đ nh hàm lượng cholesterol trong trứng và so s nh tr nh. .. thay đổi ngay cả ở bậc phân loại họ Thông thường, vùng biến đổi nhiều nh t trong D-loop là đoạn III Ch nh điều này đã làm cho vùng điều khiển của mtDNA có tốc độ tiến hóa nhanh gấp 5-10 lần so với các gen khác của ty th ̉ Vì vậy mà tri nh tự nucleotid của vùng D-loop là công cụ rất hữu hiệu đ ̉ đa nh giá t nh đa dạng di truyền và sự phân hóa bên trong loài cũng nh giữa . h nh đ ti : “ Xác đ nh hàm lượng cholesterol trong trứng và so s nh tr nh tự vng điều khiển D- loop DNA ty thể của gà Ri, gà Tre, gà Ác nuôi tại Bắc Giang”. 2. Mục tiêu nghiên cứu - Xc đ nh. nghiên cứu - Xc đ nh hm lưng cholesterol trong trứng g Ri, g Ác, gà Tre. - Xc đ nh v so s nh tr nh t vng điu khin D-loop ty th của g Ri, g Ác, gà Tre. + Tách DNA tổng s từ mu. TRƢ ̀ NG ĐẠ I HỌ C SƢ PHẠ M  V TH NH TRANG XC Đ NH HM LƢNG CHOLESTEROL TRONG TRNG V SO SÁ NH TRÌ NH TƢ̣ VÙ NG ĐI ̀ U KHI ̉ N D-LOOP DNA TY TH ̉ CỦ