1 MỞ ĐẦU 1. Tính cấp thiết của ñề tài Chitinase là enzyme thủy phân chitin, có vai trò quan trọng trong sản xuất các sản phẩm từ chitin như N-acetyl-D-glucosamine, Oligo N-acetyl-D- glucosamine, glucosamine. Oligo N-acetyl-D-glucosamine ñược biết ñến như một loại thuốc quý, một loại thuốc ña hiệu quan trọng trong y học, là nguyên liệu ñiều chế một số dược phẩm quý chữa trị các bệnh: viêm khớp, bệnh viêm phổi, viêm sưng dạ dày, chống nhiễm trùng … Ngoài ra, Oligo N-acetyl-D- glucosamine còn có khả năng chống khối u, kháng nấm và kháng vi khuẩn. Chính vì vậy, nghiên cứu về chitinase là vấn ñề ñã và ñang ñược quan tâm nhiều của các nhà khoa học từ trước ñến nay. Enzyme chitinase có thể ñược tách chiết từ nhiều nguồn khác nhau như ñộng vật, thực vật và vi sinh vật. Quy trình thu nhận chitinase từ ñộng vật, thực vật khá phức tạp, không thể tiến hành tự ñộng hóa, giá thành chế phẩm cao và cũng không thể ñáp ứng nhu cầu thực tế. Trong khi ñó vi sinh vật có thể nói là nguồn quý giá và vô tận ñể thu nhận enzyme chitinase. Đặc biệt cùng với xu hướng phát triển một nền nông nghiệp sạch, bền vững thì các loại phân bón - thuốc bảo vệ thực vật hữu cơ hoặc có nguồn gốc sinh học ñang ñược ñề cao nghiên cứu và phát triển. Những nhóm vi sinh vật có khả năng tạo chitinase rất ñược quan tâm. Chúng vừa có khả năng phân giải nguồn chitin tự nhiên bổ sung dinh dưỡng cho cây trồng; vừa có tính ñối kháng với các loài nấm gây bệnh cây trồng, gây mục gỗ, nhờ hoạt chất kháng sinh và ñặc biệt là hệ enzyme thủy phân, trong ñó có chitinase. Như vậy, việc nghiên cứu các ñối tượng vi sinh vật có khả năng tạo chitinase có hoạt tính cao là một bước ñi hữu ích trong nghiên cứu, sản xuất và ứng dụng chitinase trong ñời sống. Trên cơ sở ñó, chúng tôi tiến hành nghiên cứu ñề tài “Nghiên cứu phân lập và tuyển chọn các chủng xạ khuẩn có hoạt tính chitinase tại thành phố Buôn Ma Thuột”. 2 2. Mục tiêu ñề tài 1. Tuyển chọn ñược các chủng xạ khuẩn có khả năng tạo chitinase cao. 2. Xác ñịnh các yếu tố ảnh hưởng ñến việc sản sinh và hoạt tính enzyme chitinase từ các chủng xạ khuẩn tuyển chọn. 3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn - Ý nghĩa khoa học + Khai thác và bảo tồn nguồn gen quí của một nhóm vi sinh vật có khả năng phân giải chitin, hợp chất phức tạp thành những chất ñơn giản, dễ sử dụng cho các ñối tượng sinh vật hay phục vụ nghiên cứu khoa học. - Ý nghĩa thực tiễn + Góp phần khai thác tiềm năng ứng dụng của các chủng xạ khuẩn trên hệ thống canh tác ở Đắk Lắk. 3 CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. Enzyme vi sinh vật Enzyme là protein có hoạt tính xúc tác. Các enzyme xúc tác cho hầu hết các phản ứng hóa học xảy ra trong cơ thể sống, ñảm bảo cho các quá trình chuyển hóa các chất trong cơ thể sống tiến hành với tốc ñộ nhịp nhàng cân ñối, theo những hướng xác ñịnh. Như vậy, enzyme ñảm bảo cho sự trao ñổi thường xuyên giữa cơ thể sống và môi trường ngoài, nghĩa là bảo ñảm ñiều kiện tiên quyết cho sự tồn tại của cơ thể sống. Enzyme có trong tất cả các cơ thể ñộng vật, thực vật và vi sinh vật. Sau khi ñược tổng hợp enzyme có thể ñược tiết ra ngoài tế bào tồn tại trong các dịch của cơ thể, dịch môi trường ñược gọi là enzyme ngoại bào (extracellular enzyme) hoặc giữ lại bên trong tế bào gọi là enzyme nội bào (intracellular enzyme). Sự phân bố enzyme không ñồng ñều giữa các loài, các tế bào mô và cơ quan khác nhau. Trong các nguồn nguyên liệu ñể tách enzyme, vi sinh vật là nguồn nguyên liệu thích hợp nhất ñể sản xuất enzyme ở quy mô lớn dùng trong công nghiệp. Dùng vi sinh vật ñể thu nhận enzyme có những lợi ích chính như sau: - Có thể chủ ñộng về nguồn nguyên liệu. - Chu kỳ sinh trưởng của vi sinh vật ngắn, khoảng 16 - 100 giờ. Do ñó có thể thu hoạch hàng trăm lần trong một năm. - Điều khiển sự tổng hợp enzyme ñể tăng lượng enzyme ñược tổng hợp hoặc tổng hợp ñịnh hướng enzyme dễ dàng hơn các nguồn nguyên liệu khác. - Giá thành thấp vì môi trường nuôi cấy vi sinh vật tương ñối ñơn giản rẻ tiền. Tuy nhiên, ñiều ñáng lưu ý là một số vi sinh vật có khả năng sinh ñộc tố, vì vậy cần có biện pháp xử lý thích hợp. Khả năng tổng hợp enzyme của vi sinh vật chịu sự tác ñộng của nhiều yếu tố khác nhau, trong ñó ñặc ñiểm chủng giống có tính quyết ñịnh. Ngoài ra, ñiều kiện môi trường, trước hết là thành phần môi trường nuôi cấy cũng có vai trò ñáng kể. 4 Để lựa chọn vi sinh vật có khả năng sinh tổng hợp enzyme mạnh có thể tiến hành phân lập từ môi trường tự nhiên, gây ñột biến các chủng ñã ñược lựa chọn hoặc cấy chuyển gen ñể nâng cao khả năng thu nhận enzyme hoặc tổng hợp enzyme có ñịnh hướng. Môi trường dinh dưỡng phải ñảm bảo những nhu cầu tối thiểu cho sự sinh trưởng của vi sinh vật và sinh tổng hợp enzyme. Trong môi trường cần có các chất chứa C, N, H, O và các chất vô cơ khác như mangan, canxi, fotfo, lưu huỳnh, sắt, kali và một số chất khác [2], [16]. 1.2. Đại cương về chitinase Chitinase hay poly β-1,4 (2-acetamido-2-deoxy) - D - glucozid glucanohydrolase, thuộc nhóm enzyme thủy phân (hydrolase), là enzyme thủy phân chitin thành chitobiose hay chitotriose qua việc xúc tác sự thủy giải liên kết 1,4 β-glucoside trong chitin. Mã số của chitinase EC 3.2.1.14 [23]. Chitinase thuộc lớp 3 tổ 2 nhóm 1 số thứ tự là 14. 1.2.1. Phân loại chitinase 1.2.1.1. Phân loại theo phản ứng cắt Chitinase ñược chia làm 2 phân nhóm chính: - Endochitinase (EC 3.2.1.14) là nhóm enzyme phân cắt nội mạch chitin một cách ngẫu nhiên tạo các ñoạn oligosaccharide. - Exo chitinase ñược chia làm 2 phân nhóm: + Chitobiosidase = chitobiase (EC 3.2.1.29) xúc tác sự tạo thành liên tục Diacetylchitibiose của sợi chitin. + β-1,4-N-acetylglucosaminidase (EC 3.2.1.30) tiếp tục phân cắt các oligomer trên thành N-acetyl-D-glucosamine [24]. 1.2.1.2. Phân loại theo cấu trúc phân tử Chitinase ñược xếp vào hai họ Glycohydrolase: - Họ Glycohydrolase 18 5 Là họ chitinase lớn nhất với khoảng 180 chi ñược tìm thấy ở hầu hết các loài thuộc Eukaryote, Prokaryote và Virus. Họ này bao gồm chủ yếu là chitinase, ngoài ra còn có các enzyme khác như chitodextrinase, chitobiase và N- acetylglucosaminidase. Các chitinase thuộc họ glycohydrolase 18 ñược tổng hợp từ Aeromonas hydrophila, Bacillus circularis, Tricoderma harzianum, Aphanocladium album, Serratia marcescens… Chitinase họ glycohdrolase 18 giữ nguyên cấu hình anomer tại vị trí phân cắt nhờ cơ chế nghịch chuyển ñôi. Đến nay cấu trúc không gian ba chiều của một vài enzyme thuộc họ này ñã ñược xác ñịnh như chitinase A của Serratia marcescens, chitinase của Hevea brasiliensis, β-N-acetylglucosaminidase của Flavobacterium menigoseptium và Streptomyces plicatus. Mặc dù ba protein này ít tương ñồng với nhau về trình tự axit amin nhưng chúng ñều có cấu trúc xác ñịnh gồm 8 sợi xoắn α và β cuộn tròn. - Họ Glycohydrolase 19 Họ này gồm hơn 130 chi, thường thấy chủ yếu ở thực vật, ngoài ra còn có ở các xạ khuẩn như Streptomyces griceus, vi khuẩn như Haemophilus influenzae… Họ Glycohydrolase 19 bao gồm những chitinase thuộc nhóm I, II, IV,… Chitnase thuộc họ 19 có cấu trúc hình cầu với các vòng α thông qua cơ chế nghịch chuyển cấu hình anomer tại vị trí phân cắt. Đây là ñiểm khác biệt chính so với họ Glycohydrolase 18 [24]. 1.2.1.3. Phân loại theo trình tự amino axit Dựa vào trình tự ñầu amin, sự ñịnh vị của enzyme, ñiểm ñẳng ñiện, peptit nhận biết và vùng cảm ứng, người ta phân loại chitinase thành 5 nhóm: - Nhóm I: gồm những ñồng phân trong phân tử có ñầu N giàu cystein nối với tâm xúc tác thông qua một ñoạn giàu glycin hoặc prolin ở ñầu cacboxyl C (peptit nhận biết). Vùng giàu cystein có vai trò quan trọng ñối với sự gắn kết enzyme và cơ chất chitin nhưng không cần cho hoạt tính xúc tác. Nhóm 1 còn có 6 thể chia thành 2 nhóm: Ia hoặc Ib tùy thuộc vào enzyme thuộc tính axit hay bazơ. Chitinase có ở thực vật thường ñịnh vị ở vị trí không bào. - Nhóm II: gồm những ñồng phân trong phân tử chỉ có tâm xúc tác thiếu ñầu cystein ở ñầu N và peptit nhận biết ở ñầu C, có trình tự amino axit tương tự như trình tự chitinase nhóm I. Chitinase nhóm II có ở xạ khuẩn, vi khuẩn, nấm, thực vật và chúng ñược cảm ứng bởi các tác nhân bên ngoài. - Nhóm III: có trình tự amino axit hoàn toàn khác với trình tự amino axit ở nhóm I và nhóm II. - Nhóm IV: gồm những ñồng phân chitinase, 41% - 47% trình tự amino axit có ở tâm xúc tác của chúng giống với trình tự chủ yếu có ở cây 2 lá mầm, amino axit ở nhóm I. Phân tử cũng có ñoạn giàu cystein nhưng kích thước phân tử nhỏ hơn ñáng kể so với chitinase ở nhóm I. - Nhóm V: Dựa trên cơ sở dữ liệu về trình tự người ta nhận thấy vùng gắn với chitin (vùng giàu cystein) có thể ñã giảm ñi nhiều lần trong quá trình tiến hóa gặp ở thực vật bậc cao. 1.2.2. Cấu trúc của chitinase 1.2.2.1. Cấu trúc phân tử Nhiều enzyme phân cắt carbonhydrat ñược phát hiện có cấu trúc chia vùng tương tự nhau. Blaak và cộng sự [21] tiến hành phân tích chitinase của thực vật, nấm, vi khuẩn, xạ khuẩn và ñã xác ñịnh ñược những vùng riêng biệt trong cấu trúc của chitinase. Các chitinase của thực vật như: cây thuốc lá, ñậu, củ cải ñường chỉ chứa duy nhất một trung tâm xúc tác. Chitinase của nấm men bao gồm 4 vùng: trình tự báo hiệu, trung tâm xúc tác, vùng giàu serin/ threonin và trung tâm gắn chitin ở ñầu C. Vùng giàu serin/ threonin hoạt tính như một chất nhận tham gia trong sự glycosyl hóa nguyên tử oxy. Bên cạnh ñó Wantanabe và cộng sự [20] ghi nhận loài Bacillus circulans có chitinase A1 chứa tâm gắn chitin ở ñầu C, tâm xúc tác ở ñầu N và một vùng chức năng thứ ba là vùng fipronectin kiểu III, nếu loại bỏ vùng này thì không 7 ảnh hưởng ñến sự gắn kết enzyme và cơ chất nhưng khả năng xúc tác của enzyme thì bị giảm ñi. 1.2.2.2. Cấu trúc không gian của chitinase - Cấu trúc không gian của chitinase thuộc họ Glycohydrolase 18 Tâm của chitinase thuộc họ này tạo thành từ 8 thùy tròn α và β. Thùy số 8 cuộn vào bên trong cấu hình nhộng với vòng xoắn thể hiện như một chiếc nhẫn hướng ra ngoài. Hình 1.1. Mô hình cấu trúc không gian của chitinase ở cây cao su Hevea brasiliensis - Cấu trúc không gian của chitinase thuộc họ Glycohydrolase 19 Cấu trúc không gian của chitinase thuộc họ này là phức hợp của cấu trúc bậc 2, bao gồm 10 ñoạn helical và 1 phiến β ba sợi. Phân tích protein cho thấy có nhiều nhóm tương tác kỵ nước bảo vệ tâm protein của cấu trúc bậc 3 [24]. 1.2.3. Cơ chế tác dụng của chitinase Chitinase xúc tác cho phản ứng thuỷ phân liên kết 1,4-β-glycozid trong phân tử chitin, phân cắt dọc theo mạch carbon và sản phẩm chủ yếu là chitibiose và chitotriose. Những chất này sau ñó lại tiếp tục bị phân cắt thành những monomer là các N -acetyl -D -glucosamine [29]. Quá trình phân cắt tóm tắt như sau: Chitinase Chitobiase Chitin  chitobiose,chitotriose  N-acetyl-D glucosamin 8 Có hai cơ chế cho sự thuỷ phân: cơ chế giữ lại cấu tử β anomer trong sản phẩm và cơ chế nghịch chuyển từ dạng β sang dạng α. Ngoài ra ñể khảo sát sự phân cắt người ta sử dụng N-acetyl chitoolygosaccharide thường ñược thuỷ phân bên trong trên một vài vị trí xác ñịnh hoặc một cách ngẫu nhiên. 1.2.4. Đặc tính cơ bản của hệ chitinase - Khối lượng phân tử Chitinase ñược tìm thấy ở thực vật bậc cao hoặc tảo biển có trọng lượng phân tử khoảng 30 kDa. Ở các loài thân mềm, ñộng vật có xương, trọng lượng phân tử của chitinase khoảng 40-90 kDa, hoặc cao hơn khoảng 120 kDa. Trọng lượng phân tử của chitinase thu nhận từ xạ khuẩn và vi khuẩn có khoảng biến ñộng từ 30-120 kDa [24]. - Điểm ñẳng ñiện Chitinase ở thực vật bậc cao và tảo có giá trị ñiểm ñẳng ñiện pI thay ñổi từ 3,0-10,0. Ở côn trùng, giáp xác, thân mềm và cá pI từ 4.7-9.3 và ở vi sinh vật từ 3,5-8,8 [29]. - Ảnh hưởng của nhiệt ñộ Nhiệt ñộ tối ưu cho hệ chitinase ở hầu hết vi sinh vật là 40 0 C. Ngoại trừ Aspergilus niger có khả năng tổng hợp chitinase hoạt ñộng trên cơ chất glycochitin có nhiệt ñộ tối ưu là 50 0 C [29]. Tuy nhiên, tùy theo nguồn gốc thu nhận mà chitinase có thể có những giá trị nhiệt ñộ tối ưu khác nhau. - Ảnh hưởng của pH Giá trị pH tối ưu (pH opt ) ở thực vật bậc cao và tảo ñạt giá trị từ 4-9 của các chitinase. Hệ chitinase ở ñộng vật là 4,8 – 7,5; ở vi sinh vật là 3,5 – 8,0. 9 pH opt của chitinase có thể phụ thuộc vào cơ chất ñược sử dụng. Chitinase ñã ñược nghiên cứu có pH opt khoảng 5,0 khi cơ chất là chitin; pH opt của chitinase khi cơ chất này là glycolchitin nằm trong khoảng pH kiềm yếu. Hoạt tính của chitinase sẽ nhanh chóng bị ức chế bởi pH < 4,5 [24]. - Chất hoạt hóa và chất ức chế + Allosamidin Allosamidin ức chế cạnh tranh với chitinase. Chất này có cấu tạo tương tự dạng trung gian của cơ chất, có vòng oxazoline. Vòng này có thể ở giữa carbonyl oxygen của nhóm N-acetyl và C 1 của N-acetylglucosamine trong quá trình thủy phân. | Hình 1.2. Cấu trúc hóa học của allosamidin và dẫn xuất của allosamidin (demethylallosamidin và dimethylallosamidin) Allosamidin và những dẫn xuất của nó chỉ ức chế chitinase ñược tổng hợp từ tằm, tôm he và một số vi sinh vật như Piromyces communis, Streptomyces sp. và Streptomyces olivaceoviridis. Gần ñây Allosamidin ñược phát hiện có khả năng gắn kết và ức chế các chitinase thực vật (ña số thuộc họ Glycohydrolase 18). Allosamidin ức chế chitinase H ở cây củ cải với ID 50 (liều lượng 50% chất ức chế) là 44.7µm. Chitinase ñược tạo ra bởi Streptomyces sp. có khả năng tổng hợp hai loại chitinase, một loại nhạy cảm Allosamidin và loại có tính ñề kháng. Như vậy, Allosamidin và dẫn xuất của nó chỉ ức chế các chitinase thuộc họ Glycohydrolase 18, không ức chế các enzyme thuộc họ Glycohydrolase 19 [13]. + Styloguanidin 10 Styloguanidin là chất ức chế chitinase ñược tách chế từ loài hải miên Stylotella aurantium. Tính ñặc hiệu, tính bền vững trong tự nhiên của những hợp chất này vẫn chưa ñược biết rõ [24]. + Các ion kim loại Các ion kim loại Hg 2+ , Ag + là những chất ức chế ñối với chitinase. Các ion Cu 2+ , có hai dạng chitinase, một bị ức chế và một ñược tăng cường nhờ Cu 2+ ñược tìm thấy ở một số loài cá và vi sinh vật. + Các chất khác Dipeptit CI-4[cyclo-(L-Arg-D-Pro)] là một sản phẩm tự nhiên ñược tổng hợp từ vi khuẩn nước mặn Pseudomonas IZ208. CI-4 ức chế việc phân tách tế bào Sacchromyces cerevisiae. Về cơ chế, CI-4 ức chế chitinase họ 18 và có cấu trúc giống chất trung gian phản ứng. Chất ức chế chitinase họ 18 có ảnh hưởng ñến chu trình sống của nhiều loại nấm và ngăn cản sự truyền kí sinh trùng sốt rét (Plasmodium falciparum) từ vật chủ ñến côn trùng. Argifin và argadin là 2-peptid ức chế glycosidehydrolase, có thể ức chế chitinase từ nồng ñộ nM - µM. Các peptide này gắn trực tiếp lên các gốc ở tâm của enzyme và chiếm các vị trí -1, +1, +2. Mặc dù những chất ức chế này là peptit nhưng chúng có nhiều nhánh bên bất thường như acetyl hay vòng thơm. Huyết thanh Allbumin, ngược lại có vai trò làm tăng hoạt ñộng của chitinase nhưng sự ảnh hưởng này chỉ rõ ràng sau 2-3 giờ ñầu của phản ứng. 1.2.5. Nguồn thu nhận chitinase Chitinase hiện diện ở hầu hết các giới sinh vật. Đến nay ñã có nhiều nghiên cứu của các nha khoa học trên thế giới về chitinase ở vi sinh vật, thực vật, ñộng vật. - Vi sinh vật Vi khuẩn sản sinh chitinase nhằm ñáp ứng nhu cầu dinh dưỡng. Chúng thường tổng hợp nhiều loại chitinase ñể có thể phân cắt ñược nhiều loại chitin ña dạng trong sinh giới. [...]... c u tách chi t và xác nh tính ch t c a chitinase t các ngu n khác nhau nghiên c u chitinase t vi sinh v t, chúng tôi góp ph n tham gia vào vi c xu t tài Nghiên c u và tuy n ch n các ch ng x khu n có ho t tính chitinase t i thành ph Buôn Ma Thu t” 23 CHƯƠNG 2 N I DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U 2.1 N i dung nghiên c u 1 Phân l p, tuy n ch n các ch ng x khu n có ho t tính chitinase 2 Nghiên c u nh hư... m chitinase tinh s ch t m cao su có nhi t cao su Hevea brasiliensis (2008), t i ưu 550C, pH t i ưu 4,5 [10] ng Trung Thành nghiên c u thu nh n chitinase t cây khoai lang (2008), chitinase thu nh n t lá có ho t tính cao nh t và gi m d n n cu ng lá 22 và dây khoai, chitinase trong lá khoai lang b t thương có ho t tính cao hơn trong lá không b t n thương [12] Nhìn chung các công trình u t p trung vào nghiên. .. c a i u ki n nuôi c y n ho t tính chitinase c a các ch ng x khu n tuy n ch n 3 Nghiên c u nh hư ng c a m t s y u t n ho t tính chitinase c a các ch ng x khu n tuy n ch n trong ph n ng xúc tác 4 nh danh ch ng x khu n tuy n ch n 2.2 V t li u và a i m nghiên c u 2.2.1 V t li u i tư ng nghiên c u - Các ch ng x khu n ư c phân l p t các m u t thu ư c trên i bàn thành ph Buôn Ma Thu t Hóa ch t Hóa ch t s... là ngu n dinh dư ng carbon, v a là ch t c m ng x khu n s n sinh chitinase Như v y x khu n sinh trư ng ư c trên môi trư ng c hi u này có kh năng t ng h p enzyme chitinase ây là cơ s phân l p các ch ng x khu n có ho t tính chitinase T các m u t thu ư c t i Buôn Ma thu t, thí nghi m phân l p và làm thu n ư c 31 ch ng x khu n có ho t tính chitinase, ký hi u là : E1, E2, E3, E4, E5, E6, E7, E8, E9, E10,... trên ph n m m SPSS a ch 31 CHƯƠNG 3 K T QU VÀ TH O LU N 3.1 K t qu phân l p các ch ng x khu n có ho t tính chitinase t i Buôn Ma Thu t Gause là môi trư ng nuôi c y x khu n Môi trư ng Gause c i biên s d ng chitin huy n phù 1% làm ngu n carbon duy nh t phân l p các ch ng x khu n có kh năng sinh chitinase X khu n s ti t enzyme ngo i bào chitinase phân gi i chitin thành nh ng ti u ph n nh s d ng trong quá... m i chitinase và các dư c ch t kháng n m Hi n nay các nhà khoa h c ngh s d ng chitinase v i các tác nhân kháng n m có th ch p nh n khác nh m b tr cho ho t tính n i sinh c a chitnase Các tác nhân bao g m: - Amphotericin b và nh ng ph c ch t có c u trúc tư ng t nystatin và pyramicin - 5-flourocytosin và các d n xu t azol như fluconazol, ketoconazol, itraconazol, miconazol… - Allylamine–thiocarbamate... Scheltinga (1995) nghiên c u s th y phân chitin b ng chitinase th c v t, ch ng minh chitinase có vai trò quan tr ng trong h th ng b o v ch ng l i s xâm nhi m c a n m b nh và stress [18] Năm 1998, Wen-Chi Hou và c ng s nghiên c u ho t thu nh n t khoai lang có pH t i ưu là 5, nhi t ng c a chitinase t i ưu là 250C [31] Năm 2002, Kyoung Ja Kim và c ng s nghiên c u tách chi t và tinh s ch chitinase t Streptomyces... Ngoài ra, ki m tra và i ch ng, thí nghi m s d ng 4 ch ng x khu n ch u nhi t có kh năng sinh cellulase thu t i Buôn Ma Thu t, ó là các ch ng C3, C4, C6, C7 [3] c i m hình thái c a các ch ng x khu n ư c mô t B ng 3.1: b ng 3.1 c i m khu n l c c a các ch ng x khu n phân l p T i Buôn Ma Thu t c i m khu n l c STT Kí hi u ch ng 1 E1 Tròn 2 E2 Không 3 E3 ng tâm 4 E4 Tròn, có vành 5 E5 Tròn, có vành Hình d ng... Ghi chú : Các giá tr trung bình có các m u t gi ng nhau trong b ng thì khác bi t không có ý nghĩa 5% theo phép th Ducan 35 B ng 3.2 cho th y, ho t tính chitinase t các ch ng x khu n bi n l n t 0,159 n 1,224 UI/ml S sai khác v ho t tính chitinase c a các ch ng x khu n có ý nghĩa th ng kê S khác bi t này là do qui ng r t c i m c a ch ng gi ng nh Trong 35 ch ng x khu n phân l p, 4 ch ng có ho t tính vư... t và c u trúc màng bào t là nh ng tính tr ng tương n nh và là i c i m quan tr ng dùng trong phân lo i x khu n Ngoài ra, x khu n còn sinh s n b ng khu n ty Các o n khu n ty gãy ra môi trư ng phát tri n thành h khu n ty [5], [17] Hình 1.3 M t s d ng bào t x khu n 1.4 Tình hình nghiên c u chitinase trong và ngoài nư c 1.4.1 Ngoài nư c Trên th gi i có r t nhi u công trình nghiên c u v chitinase Anke và . Nghiên cứu phân lập và tuyển chọn các chủng xạ khuẩn có hoạt tính chitinase tại thành phố Buôn Ma Thuột . 2 2. Mục tiêu ñề tài 1. Tuyển chọn ñược các chủng xạ khuẩn có khả năng tạo chitinase. 2. Xác ñịnh các yếu tố ảnh hưởng ñến việc sản sinh và hoạt tính enzyme chitinase từ các chủng xạ khuẩn tuyển chọn. 3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn - Ý nghĩa khoa học + Khai thác và bảo tồn. 19, xạ khuẩn ñược xếp vào nhóm nấm. Tuy nhiên, ñến nay, khi ñã nghiên cứu sâu hơn người ta ñã tìm ra các bằng chứng về mối liên hệ giữa xạ khuẩn và vi khuẩn như: - Một số xạ khuẩn như các