Đang tải... (xem toàn văn)
KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC: SẮP XẾP THEO HỆ THỐNG VÀ BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT MỘT SỐ CHẤT ỨC CHẾ PROTEASE MỤC LỤC PHẦN MỘT. MỞ ĐẦU ................................................................................ 1 1. Đặt vấn đề .................................................................................................. 1 2. Mục tiêu và nhiệm vụ nghiên cứu ............................................................... 2 2.1. Mục tiêu của đề tài .................................................................................. 2 2.2. Nhiệm vụ của đề tài ................................................................................. 2 3. Đối tượng nghiên cứu ................................................................................. 2 4. Tổng quan nghiên cứu vấn đề ..................................................................... 2 4.1. Lịch sử nghiên cứu về protease ................................................................ 2 4.2. Lịch sử nghiên cứu về chất ức chế protease ............................................. 4 5. Thời gian, nội dung và địa điểm nghiên cứu ............................................... 6 5.1. Thời gian và nội dung nghiên cứu ........................................................... 6 5.2. Địa điểm nghiên cứu ............................................................................... 7 6. Phương pháp nghiên cứu. ........................................................................... 7 6.1. Phương pháp nghiên cứu lí thuyết ........................................................... 7 6.2. Phương pháp nghiên cứu trong phòng thí nghiệm .................................... 7 6.2.1. Phương pháp quang phổ UV – VIS....................................................... 7 6.2.2. Phương pháp chiết dịch thô bằng dung môi hữu cơ .............................. 8 6.2.3. Phương pháp chuẩn độ foocmol để đánh giá mức độ thủy phân protein ....................................................................................................................... 9 6.2.4. Xác định hoạt độ protase bằng phương pháp Anson ........................... 10 PHẦN HAI. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN .................... 13 Chương 1. Chất ức chế protease và hệ thống phân loại ........................... 13 1.1 Một số chất ức chế protease đã được nghiên cứu .................................... 13 1.2. Hệ thống chất ức chế protease đã được nghiên cứu ............................... 18 Chương 2. Kết quả xác định chất ức chế protease ................................... 22 2.1. Dùng phương pháp chuẩn độ foocmol để đánh giá mức độ thủy phân protein nhằm mục đích phát hiện sự có mặt chất ức chế protease. ................ 22 2.2. Sử dụng phương pháp Anson để xác định sự có mặt của chất ức chế protease. ....................................................................................................... 25 PHẦN BA. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ ................................................. 27 3.1. Kết luận ................................................................................................. 27 3.2. Kiến nghị ............................................................................................... 27 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY BẮC NGUYỄN THỊ THẮM SẮP XẾP THEO HỆ THỐNG VÀ BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT MỘT SỐ CHẤT ỨC CHẾ PROTEASE KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC SƠN LA, NĂM 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY BẮC NGUYỄN THỊ THẮM SẮP XẾP THEO HỆ THỐNG VÀ BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT MỘT SỐ CHẤT ỨC CHẾ PROTEASE CHUYÊN NGÀNH: HÓA SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Người hướng dẫn: ThS. Nguyễn Văn Dũng SƠN LA, NĂM 2013 Lời cảm ơn! Em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới thầy giáo - Ths. Nguyễn Văn Dũng người đã hướng dẫn tận tình em trong thời gian thực hiện đề tài. Em xin cảm ơn thầy giáo - Ths. Nguyễn Đình Thoại phụ trách phòng thực hành Hóa phân tích, cô Trần Hồng Xuân, cô Trần Thị Mừng phụ trách phòng thực hành Di truyền - Thực vật, Ban chủ nhiệm Khoa Sinh - Hóa và các cán bộ tại Trung tâm Thông tin Thư viện đã tạo điều kiện tốt nhất cho em thực hiện đề tài. Em xin cảm ơn anh Nguyễn Huy Hùng, các bạn: Hà Trà My, Trương Thị Thương, Cầm Thị Nho, Lường Minh Toàn, Phạm Thị Nương, Đinh Văn Lâm lớp K50 ĐHSP Sinh, Trường Đại học Tây Bắc đã giúp đỡ, ủng hộ nhiệt tình cho em trong suốt thời gian qua. Đề tài của đã hoàn thành nhưng không thể tránh khỏi những thiếu sót. Em rất mong nhận được ý kiến đóng góp của các thầy, cô giáo và các bạn sinh viên để đề tài của em được hoàn thiện hơn. Sơn La , tháng 05 năm 2013 Người thực hiện Nguyễn Thị Thắm MỤC LỤC PHẦN MỘT. MỞ ĐẦU 1 1. Đặt vấn đề 1 2. Mục tiêu và nhiệm vụ nghiên cứu 2 2.1. Mục tiêu của đề tài 2 2.2. Nhiệm vụ của đề tài 2 3. Đối tượng nghiên cứu 2 4. Tổng quan nghiên cứu vấn đề 2 4.1. Lịch sử nghiên cứu về protease 2 4.2. Lịch sử nghiên cứu về chất ức chế protease 4 5. Thời gian, nội dung và địa điểm nghiên cứu 6 5.1. Thời gian và nội dung nghiên cứu 6 5.2. Địa điểm nghiên cứu 7 6. Phương pháp nghiên cứu. 7 6.1. Phương pháp nghiên cứu lí thuyết 7 6.2. Phương pháp nghiên cứu trong phòng thí nghiệm 7 6.2.1. Phương pháp quang phổ UV – VIS 7 6.2.2. Phương pháp chiết dịch thô bằng dung môi hữu cơ 8 6.2.3. Phương pháp chuẩn độ foocmol để đánh giá mức độ thủy phân protein 9 6.2.4. Xác định hoạt độ protase bằng phương pháp Anson 10 PHẦN HAI. KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 13 Chương 1. Chất ức chế protease và hệ thống phân loại 13 1.1 Một số chất ức chế protease đã được nghiên cứu 13 1.2. Hệ thống chất ức chế protease đã được nghiên cứu 18 Chương 2. Kết quả xác định chất ức chế protease 22 2.1. Dùng phương pháp chuẩn độ foocmol để đánh giá mức độ thủy phân protein nhằm mục đích phát hiện sự có mặt chất ức chế protease. 22 2.2. Sử dụng phương pháp Anson để xác định sự có mặt của chất ức chế protease. 25 PHẦN BA. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 27 3.1. Kết luận 27 3.2. Kiến nghị 27 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 1 PHẦN MỘT. MỞ ĐẦU 1. Đặt vấn đề Enzyme là những chất xúc tác sinh học do cơ thể sống tổng hợp nên. Chúng xúc tác cho các phản ứng hóa sinh. Nhờ có enzyme mà các quá trình hóa sinh xảy ra nhạy và với tốc độ rất nhanh trong những điều kiện sinh l í bình thường (nhiệt độ cơ thể và pH môi trường tế bào). Enzyme có ở trong mọi sinh vật và là động lực của mọi quá trình sống. Hay có thể nói enzyme là những chất mà dưới tác dụng của chúng các phản ứng hóa sinh được thực hiện nhanh chóng với nhịp điệu, trình tự rõ ràng và chính xác trong quá trình trao đổi vật chất của cơ thể sống. Lịch sử enzyme đã có từ rất lâu, ngay từ thế kỷ XIX đã có những nghiên cứu ghi nhận sự hiện diện của chất xúc tác sinh học này trong quá trình tiêu hóa ở nước bọt, dạ dày và ruột. Năm 1850, Pasteur đã nhận định quá trình lên men được một yếu tố xúc tác là ferment. Sau này yếu tố trên được thống nhất gọi là enzyme. Năm 1897, người ta đã chứng minh chính dịch chiết của enzyme chứ không phải toàn bộ tế bào nấm men có khả năng lên men đường thành rượu. Đó là bằng chứng về sự tham gia của bản thân enzyme trong quá trình lên men. Năm 1926, lần đầu tiên Sammer đã thu được tinh thể enzyme Urease. Năm 1930, Northrop thu được tinh thể Pepsin và Trypsin [26]. Ngày nay, cùng với sự phát triển mạnh mẽ của Công nghệ sinh học, các chế phẩm enzyme được sản xuất ngày càng nhiều và được sử dụng hầu hết trong các lĩnh vực như: chế biến thực phẩm, nông nghiệp, chăn nuôi, y tế… Hàng năm, lượng enzyme được sản xuất trên thế giới đạt khoảng trên 300.000 tấn với giá trị trên 500 triệu USD, được phân phối trong các lĩnh vực khác nhau. Khoảng 75% chế phẩm là enzyme thủy phân được sử dụng cho việc thủy phân cơ chất tự nhiên. Protease là enzyme được sử dụng nhiều nhất hiện nay trong một số ngành sản xuất như: chế biến thực phẩm (đông tụ sữa làm fomat, làm mềm thịt, bổ sung để làm tăng chất lượng sản phẩm trong sản xuất bia, xử lý phế phụ phẩm trong chế biến thực phẩm…), sản xuất chất tẩy rửa, thuộc da, y tế, nông nghiệp…[29]. Ở Việt Nam cũng có nhiều công trình công bố về nghiên cứu và sử dụng protease, chủ yếu tập trung vào các protease thực vật và động vật. Hiện nay, công nghệ enzyme ở nước ta còn khá mới mẻ, các đề tài nghiên cứu chủ yếu tập trung vào nghiên cứu việc thu nhận enzyme, sử dụng enzyme vào các công nghệ sản xuất và chế biến thực phẩm. 2 Nhằm phục vụ cho các công tác nghiên cứu chuyên sâu về protease, chúng tôi thực hiện đề tài: “Sắp xếp theo hệ thống và bước đầu nghiên cứu tách chiết một số chất ức chế protease”. 2. Mục tiêu và nhiệm vụ nghiên cứu 2.1. Mục tiêu của đề tài - Sắp hệ thống các chất ức chế protease - Tách chiết và bước đầu nghiên cứu một số chất ức chế protease 2.2. Nhiệm vụ của đề tài - Sưu tập các bài báo trong nước và ngoài nước, các tạp chí, các báo báo có liên quan đến protease và các chất ức chế protease. - Sắp xếp các chất đã công bố theo một quy tắc nhất định. - Thực hiện tách chiết một số chất ức chế protease. - Thử khả năng ức chế enzyme của dịch chiết thu được. 3. Đối tượng nghiên cứu Chất ức chế protease trong dịch chiết protein từ thân cây Tô mộc, quả Mướp đắng và hạt Gấc. 4. Tổng quan nghiên cứu vấn đề 4.1. Lịch sử nghiên cứu về protease Protease là các enzyme xúc tác cho sự thủy phân liên kết peptit (CO-NH) trong phân tử protein, chuỗi polypeptit đến sản phẩm cuối cùng là các acid amin. Ngoài ra, nhiều protease cũng có khả năng thuỷ phân liên kết este và vận chuyển acid amin. Các protease từ động vật Trong các protease, các enzyme của hệ tiêu hóa được nghiên cứu sớm hơn cả. Từ thế kỷ XVIII, nhà tự nhiên học người Pháp là Reaunur đã làm thí nghiệm rất đơn giản và đã phát hiện được rằng dịch dạ dày của chim ăn thịt có khả năng tiêu hóa thịt [11]. Năm 1836, Schwam đã quan sát được hoạt động phân giải protein của dịch vị. Tuy nhiên, mãi đến hơn 30 năm sau người ta mới tách được enzyme này [11]. 3 Năm 1857, Corvisart tách được trypsine từ dịch tụy. Đây là protease đầu tiên thu nhận được ở dạng chế phẩm, trong chế phẩm vẫn còn lẫn nhiều protein khác [11]. Năm 1862, Danilevxki dùng phương pháp hấp phụ trên colondion đã tách được trypsine với amylase tụy tạng. Phương pháp này có ý nghĩa rất lớn trong nghiên cứu tinh chế enzyme và protein. Năm 1872, Hommarsten đã tách được chế phẩm chymotrypsine (renin). Ngoài những enzyme của hệ tiêu hóa, các nhà khoa học cũng có những nghiên cứu đầu tiên về protease trong máu. Schidt đã nêu giả thiết rằng trong máu có enzyme fibrin (ngày nay gọi là trombin) tham gia trong quá trình đông máu. Ông đã tiến hành việc tách chiết enzyme này và kết tủa bằng cồn, chế phẩm nhận được có tác dụng làm cho dung dịch fibrinogen đông lại nhanh chóng. Các protease từ thực vật So với các protease từ động vật, các protease từ thực vật được phát hiện muộn hơn. Năm 1874, Group – Besanez công bố đã nhận được protease từ hạt của một loại đậu. Họ cũng nhận thấy dịch chiết từ hạt đại mạch, bông, lanh đều có hoạt động phân giải protein. Ý kiến này dựa trên cơ sở thực nghiệm là sau khi cho dịch chiết từ các nguyên liệu trên tác dụng với fibrin, nuớc lọc của hỗn hợp cho phản ứng màu Biure. Bằng chứng này không thật sự vững chắc nên Group – Besanez không tiếp tục nghiên cứu. Vì vậy Wurtz được xem như là người đầu tiên tách chiết thành công protease từ thực vật (1879). Ông nêu lên rằng các phần khác nhau của cây đu đủ có chứa protease, khi dùng cồn để kết tủa sẽ thu nhận được một chế phẩm enzyme không tinh khiết (100g/1 cây) gọi là papain. Các protease từ vi sinh vật Các protease của vi sinh vật mới được chú ý nghiên cứu nhiều từ năm 1950, mặc dầu từ năm 1918 – 1919 Waksman đã phát hiện được khả năng phân giải protein của xạ khuẩn. Trong hơn 10 năm nay, số công trình nghiên cứu protease vi vinh vật tăng lên đáng kể, nhiều hơn các công trình nghiên cứu protease của động vật và thực vật. Những kết quả đạt được trong lĩnh vực nghiên cứu protease vi sinh vật đã góp phần mở rộng quy mô sản xuất chế phẩm enzyme và ứng dụng enzyme trong thực tế. 4 Trong thời gian gần đây người ta cũng đã có những phương pháp thích hợp để thu nhận chế phẩm không tan của protesae. Kết quả này mở ra triển vọng to lớn trong nghiên cứu và các ứng dụng của các protease. 4.2. Lịch sử nghiên cứu về chất ức chế protease Trên thế giới Các chất ức chế protease trong tự nhiên được báo cáo lần đầu tiên năm 1894 bởi Fermi và Pernossi khi hai nhà khoa học này phát hiện hoạt tính chống trypsine trong huyết thanh người. Tuy nhiên, những thành tựu trong nghiên cứu các chất ức chế chỉ thực sự được bắt đầu với những công trình nghiên cứu của Kunitz và Nothrop về chất ức chế trypsin tụy bò. Cùng với trypsin, sau này nhiều protease khác đã được sử dụng để phát hiện các chất ức chế protease như: chymotrypsin, elastase, subtilisin và các protease tinh chế từ nấm [25]. Gần 40 năm, chất ức chế protease được xem như chất không tốt về dinh dưỡng. Mãi đến năm 1980, Dr Walter Troll thuộc trường đại học y khoa (New York University Medical Center) đã khám phá rằng đậu nành nguyên sơ có khả năng ngăn cản không cho bệnh ung thư phát triển ở các loài động vật do tác dụng của chất ức chế protease. Tiếp sau đó nhiều nhà khoa học đã khảo sát và thử nghiệm chất ức chế protease từ đậu nành trong phòng thí nghiệm và thấy rằng nó có tác dụng chống lại sự phát triển mầm ung thư kết tràng (colon), ung thư phổi, ung thư tuyến tụy và ung thư miệng [25]. Năm 1987, Viện Ung Thư Quốc Gia Hoa Kỳ (National Cancer Institute) đã nhận thấy vai trò quan trọng của chất ức chế protease như một loại thuốc chữa bệnh ung thư. Chúng ngăn cản sự tác động của một số genes di truyền gây nên chứng ung thư. Ngoài ra chúng còn có tác dụng bảo vệ các tế bào cơ thể không cho hư hại, gây nên bởi môi trường xung quanh như tia nắng phóng xạ, các gốc tự do, chất có thể tấn công ADN [11]. 7/11/2002, tại New York, Theo một nghiên cứu gần đây thì chất ức chế protease do bạch cầu chế tiết (Secretory leukocyte protease inhibitor, SLPI) một protein được tìm thấy trong nước bọt và nơi khác có thể đóng một vai trò quan trọng trong việc phòng ngừa sự lây truyền HIV/AIDS qua sữa mẹ [11]. Các báo cáo trước đây cho thấy SLPI có khả năng bảo vệ tế bào không bị nhiễm HIV trong phòng thí nghiệm. Tuy nhiên, nồng độ SLPI trong nước bọt ở trẻ nhũ nhi có ảnh hưởng đến nguy cơ lây truyền HIV-1 từ mẹ sang con hay không thì chưa được rõ. 5 Tiến sĩ Carey Farquhar, thuộc Trường Đại học Washington ở Seattle và cộng sự đang tiến hành nghiên cứu đo lường nồng độ của SLPI trong các mẫu nước bọt từ 188 trẻ nhũ nhi của các bà mẹ bị nhiễm HIV. Các mẫu nước bọt này được lấy lúc sinh và lúc 1, 3, 6 tháng tuổi. Ngày 20 tháng 1 năm 2006, các nhà khoa học Coralie E. Halls, Sally W. Rogers, Mohammed Oufattole, Ole Ostergard, Birte Svenssonb, John C. Rogersa làm việc tại Viện Hóa học Sinh học, Đại học bang Washington, Mỹ đã công bố đề tài nghiên cứu về Kunitz – một chất ức chế cysteine protease tinh chế từ Cauli ower và Arabidopsis. Đề tài này đã nghiên cứu về trình tự gen tổng hợp chất ức chế Kunitz và kiểm tra hoạt động của chúng trong một số môi trường khác nhau [11]. Đến nay, các chất ức chế protease đã được tìm thấy rộng rãi trong tự nhiên từ nguồn thực vật, động vật, vi khuẩn. Có thể nói không ở tổ chức sống nào là không tồn tại các chất ức chế protease và nhiều chất ức chế protease đã được tổng hợp nhân tạo. Một số công trình nghiên cứu ứng dụng của chất ức chế protease vào các lĩnh vực nghiên cứu khác nhau như: “Sử dụng các chất ức chế protease trong xét nghiệm hiện kháng nguyên” của Thurgau, Viện Công nghệ sinh học tại Đại học Constance, Kreuzlingen, Thụy Sĩ [29] “Kháng virus hoạt động của các chất ức chế protease chống lại Toxoplasma gondii”. Bộ môn Ký sinh trùng, Viện Y học Nhiệt đới, Pedro Kouri, Havana, Cuba. “Phân lập chất ức chế Pepsin từ rễ của cây Anchusa strigosa” của Sở Khoa học sinh học, Khoa Khoa học, Đại học Jordan, Amman, Jordan [14]. “Nghiên cứu về một số chất ức chế protease aspartic: quy định tổng hợp protease nội sinh trong giai đoạn vận động nảy mầm trong hạt giống Vigna radiate” của Phòng khoa học Sinh hóa, phòng thí nghiệm và hóa chất quốc gia, Ấn Độ do Aarohi Kulkarni, Mala Rao thực hiện [18]. Ở Việt Nam Một số luận văn, đề tài, báo cáo khoa học cũng nghiên cứu về chất ức chế protease trên khía cạnh điều trị căn bệnh ung thư hoặc phương pháp tách chiết và sử dụng các thực phẩm chứa các chất ức chế protease vào đời sống như: [...]... – Nghiên cứu tài liệu và sắp xếp Đưa ra được hệ thống các tháng 2 /2013 các chất ức chế protease chất ức chế protease Tháng 3 – tháng 4 Thực hiện tách chiết một số Tách chiết thành công một /2013 chất ức chế protease số chất ức chế protease Tháng 5/2013 Viết báo cáo đề tài 6 Đề tài hoàn chỉnh 5.2 Địa điểm nghiên cứu Phòng thực hành Bộ môn Thực vật – Di truyền – Hóa sinh – Phương pháp 6 Phương pháp nghiên. .. chúng có khả năng gắn kết chặt chẽ và không liên kết hóa trị để pepsin và tạo thành một phức hệ đẳng phân tử tác dụng ức chế của hai chất ức chế enzyme trên P.roqueforti dường như là yếu hơn so với trên pepsin 1.2 Hệ thống chất ức chế protease đã được nghiên cứu Dựa vào thành phần cấu tạo để chia các chất ức chế protease thành các nhóm khác nhau Nhóm 1: Các chất ức chế protease có bổ sung thêm thành phần... để ức chế protease aspartic (protease từ nấm A saitoi và protease aspartic ), protease cystein (papain nội sinh) và protease serine (trypsin nội sinh) Đã quan sát thấy rằng các chất ức chế đã được cụ thể trong ức chế protease chỉ aspartic trong khi nó đã không thể hiện bất kỳ hoạt động ức chế với các protease cysteine hoặc các protease serine 1.1.4 Trong đề tài: "Kunitz-cycteine, một loại thuốc ức chế. .. protease Ức chế trypsin, yếu tố Xa, plasmin và plasma kallikrein 8 (Alpha)1 – antitrypsin: tham gia vào kiểm soát hoạt động elastase bạch cầu trung tính Ức chế serine protease động vật có vú khác ở hàm lượng thấp 9 Arphamenine B: Ức chế - aminopeptidase metallo protease 10 Calpain ức chế I: Ức chế các protease cysteine Ca2+ phụ thuộc vào calpain I, calpain B và L 11 Calpain ức chế II: Ức chế các protease. .. Mướp đắng và hạt Gấc có mặt chất có bản chất là protein có tác dụng ức chế protease - Các chất ức chế không làm ngừng hoạt động của enzyme mà chúng chỉ làm giảm hoạt độ của enzyme 3.2 Kiến nghị - Tiếp tục triển khai nghiên cứu chuyên sâu về chất ức chế protease từ các đối tượng nghiên cứu trong khóa luận: Tô mộc, Mướp đắng, Gấc để phục vụ cho các hoạt động khác của đời sống và các ngành công nghiệp -... [27] Tại Sơn La Hiện nay chưa có công trình khoa học nào nghiên cứu về chất ức chế protease Bên cạnh đó đã có ứng dụng thuốc ức chế trong điều trị bệnh HIV và một số bệnh khác tại các bệnh viện [25] 5 Thời gian, nội dung và địa điểm nghiên cứu 5.1 Thời gian và nội dung nghiên cứu Thời gian Nội dung nghiên cứu Tháng 9 – tháng Chọn đối tượng nghiên cứu 10 /2012 Kết quả dự kiến Chọn được đối tượng thích... hơn hoạt độ của protease khi được bổ sung dịch chiết protein từ hạt Gấc trung bình là 26,389% Như vậy: Trong dịch chiết protein từ hạt Gấc có chứa chất ức chế protease 26 PHẦN BA KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 3.1 Kết luận - Có 5 dạng cấu tạo của chất ức chế protease: + Dạng chất ức chế protease có bổ sung thêm các thành phần các thành phần vô cơ trong khi sử dụng như: HCl, H2SO4,… + Dạng chất ức chế là axit hữu... 11 Lắc và để yên 10 phút, đem đo mật độ quang học ở 720nm Tính kết quả: ĐVHĐ = x.V/t.v x: số ml suy ra từ đường chuẩn tyrosine v: thể tích lọc đem phân tích V: tổng thể tích hỗn hợp phản ứng t: thời gian phản ứng (10 phút) ĐVHĐ: đơn vị hoạt độ (UI/ml) 12 PHẦN HAI KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN Chương 1 Chất ức chế protease và hệ thống phân loại 1.1 Một số chất ức chế protease đã được nghiên cứu 1.1.1... Arphamenine A: Ức chế - aminopeptidase metallo protease 3 Chymostatin: có nguồn gốc từ aldehyde Chất ức chế thuận nghịch như chymotrypsin serin và một số protease cysteine 4 E – 64: Không cạnh tranh, không thể đảo ngược chất ức chế protease cysteine papain Hình thành mối liên kết thioether với nhóm sulfhydryl trong trung tâm hoạt động của enzyme 5 Elastatinal: Chất ức chế elastase 6 Pepstatin A: Ức chế protease. .. bề mặt Một đơn vị của các chất ức chế được định nghĩa là số lượng chất ức chế cần thiết để ngăn 15 chặn một đơn vị protease aspartic trong điều kiện thử nghiệm tiêu chuẩn Xét nghiệm được thực hiện trong ba lần và giá trị trung bình được xem là kết quả - Lọc và thu đặc tính cấu trúc của VrAPI - Kiểm tra tính ức chế protease - Xác định pH tối ưu, nhiệt độ và sự ổn định của tinh khiết chất ức chế protease