Bộ khoa học và công nghệ Công ty Vaccin pasteur Đà lạt Báo cáo kết quả đề tài nhánh KC 10-10/ 06-10/04 Nghiên cứu quy trình tách chiết và điều chế dị nguyên mạt bụi nhà Acarien D.pteronyssinus Tại Việt NAm Chủ nhiệm đề tài nhánh: PGS.TS.Nguyễn Hoài An TS Nguyễn Thị Ngọc Dung Thời gian thực hiện: 01/07/2007 - 30/03/2009 7598-4 20/01/2010 Hà nội, 05 2009 Bộ khoa học và công nghệ Công ty Vaccin pasteur Đà lạt Báo cáo kết quả đề tài nhánh KC 10-10/ 06-10/04 Nghiên cứu quy trình tách chiết và điều chế dị nguyên mạt bụi nhà Acarien D.pteronyssinus Tại Việt NAm Chủ nhiệm đề tài nhánh: PGS.TS.Nguyễn Hoài An TS Nguyễn Thị Ngọc Dung Cỏn b tham gia : Ths. Hunh Quang Thun GS.TSKH. V Minh Thc. PGS.TS.Nguyn Tn Phong BSCKII. Phm Th Ngc. Ks.inh Vn Minh Hà nội, 05 - 2009 1 T VN Trong mấy chục năm qua, số ngời mắc bệnh dị ứng có xu hớng tăng nhanh, ở nhiều nớc tỷ lệ mắc bệnh dị ứng ở vị trí thứ ba, sau các bệnh tim mạch và ung th, ở một vài nớc nó còn chiếm vị trí hàng đầu, phổ biến nhất là dị ứng do phấn hoa, bụi nhà, bụi bông và lông vũ. Theo thống kê của Tổ chức Y tế thế giới (WHO) tại các nớc công nghiệp phát triển, chỉ riêng các thể hen phế quản dị ứng có tới 4-5% viêm mũi dị ứng 15-20% và tổng tần số các trờng hợp dị ứng đạt tới 10-15% dân số thế giới. Ngày nay không còn ai nghi ngờ rằng nhiều bệnh dị ứng ( nh Hen phế quản atopy, Viêm mũi dị ứng, mày đay, eczema atopy, và nhiều bệnh khác) do tác động của bụi nhà là một trong những nguyên nhân thông thờng nhất (Helk et al, 1986; Berardino et al,1987; Plátt-Mills et al, 1987; Bousquet et al, 1988; Saint-Remy et al, 1988). Để chẩn đoán một bệnh dị ứng, trớc hết cần phải xác định nguyên nhân gây dị ứng (một hoặc nhiều DN đặc hiệu). Vì vậy tiến hành test mẫn cảm (sensitivity testing) với các DN điều chế đợc vẫn là phơng pháp chủ yếu để tìm nguyên nhân của bệnh. Mặt khác, phơng pháp điều trị bằng DN còn gọi là phơng pháp giảm mẫn cảm đặc hiệu hoặc liệu pháp miễn dịch là phơng pháp điều trị hiệu quả, nhất là khi ngời bệnh phải thờng xuyên tiếp xúc với DN. Phơng pháp này chính là đa DN vào cơ thể đã mẫn cảm với nó nhằm làm cho cơ thể thay đổi cách đáp ứng miễn dịch : thay đổi cân bằng giữa các quần thể lympho bào T : Th 1/Th2 nghiêng về Th1, làm giảm dòng Th 2/Tho đặc hiệu dị nguyên, dẫn tới sự giảm mẫn cảm các tế bào đích (tế bào dị ứng) mastocyte, basophille làm giảm sự giải phóng các chất trung gian và do đó hạn chế đợc các triệu chứng dị ứng. Đó cũng là cơ sở của biện pháp tiêm chủng vaccin chống dị ứng. 2 Hiện nay, việc điều chế cũng nh ứng dụng DN nói chung và DN D.pteronyssinus nói riêng đã đợc tiến hành ở nhiều trung tâm dị ứng của nhiều nớc trên thế giới với nhiều loại DN sản xuất ra mỗi năm, cung cấp cho nhiều nớc nh allergam, allergen, allerglobulin. ở Việt Nam, trong nhiều năm gần đây việc điều chế và đa vào ứng dụng các dị nguyên bụi nhà, bụi bông, lông vũ đã đợc các tác giả Nguyễn Năng An, Nguyễn Văn Hớng, Nguyễn Văn Sửu, Vũ Minh Thục, Phan Quang Đoàn, v.v thực hiện thành công. Các tác giả đã đi sâu nghiên cứu các đặc tính sinh học, hóa sinh, miễn dịch của các dị nguyên nói trên, sử dụng các dị nguyên này trong chẩn đoán và điều trị các bệnh dị ứng đã mang lại hiệu quả tích cực. Song các tác giả cha đi sâu nghiên cứu thành phần chính có khả năng tạo nên hoạt tính của dị nguyên bụi nhà, đó là các loài mạt có trong bụi nhà và các sản phẩm thải của chúng. Bụi nhà chỉ là môi trờng sống của mạt. Mặt khác, một số kết quả nghiên cứu gần đây cho thấy sử dụng dị nguyên bụi nhà để điều trị cho bệnh nhân hen phế quản và viêm mũi dị ứng cho kết quả thấp hơn so với dùng dị nguyên mạt bụi nhà để điều trị. Việt Nam là nớc có khí hậu nhiệt đới gió mùa, nắng, nóng, có độ ẩm cao. Đây là điều kiện thuận lợi cho mạt bụi nhà phát triển, đặc biệt đối với loài phổ biến nh D. pteronyssinus. Do đó việc nghiên cứu tách chiết d nguyên mạt bụi nhà D. pteronyssinus để có thể ứng dụng vào thực tế y học nớc ta là một yêu cầu cấp thiết và có ý nghĩa khoa học. Chúng tôi tiến hành đề tài : Nghiờn cu quy trỡnh tỏch chit v iu ch D nguyờn mt bi nh Acarien D.pteronyssinus ti Vit nam . Với mục tiêu: - So sánh các phơng pháp điều chế dị nguyên tại Việt nam. - Xây dựng một quy trình điều chế dị nguyên có hiệu quả cao. 3 Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1. TÌNH HÌNH CÁC BỆNH DỊ ỨNG VÀ VAI TRÒ CỦA CÁC DỊ NGUYÊN Ngày nay, dị ứng học đã trở thành một lĩnh vực quan trọng của y học không chỉ bởi người ta ngày càng tìm ra nhiều bệnh có cơ chế dị ứng: hen phế quản, viêm mũi dị ứng, mày đay, phù Quinke, dị ứng thuốc, xơ cứng bì mà còn do tỷ lệ người mắc bệnh dị ứng ngày càng gia tăng [1], [8]. Các thống kê dịch tễ học gần đây ở trong và ngoài nước cho thấy, các bệnh dị ứng đường hô hấp trên - chủ yếu là VMDƯ và hen phế quản (HPQ) chiếm tỷ lệ từ 10-15% dân số, tương ứng với 2,5% - 3,5% tổng số người bệnh đến khám bệnh ở mọi chuyên khoa và chiếm một phần đáng kể trong kinh phí dành cho y tế . - Thụy Điển: 25,87% VMDƯ; 8,1% HPQ. - Na Uy: 24,95% VMDƯ; 8,51% HPQ. - Việt nam : 15 - 20% VMDƯ; 5 - 7 % HPQ. - Một số nước Đông Nam Á: VMDƯ ở Thái Lan: 38,63%; Singapore: 39,58%; Indonexia: 41,45% [9], [11], [14], [28], [32], [41], [44]. Giống như phần lớn các môn hóa sinh, lịch sử thuật ngữ dị nguyên quay trở về thời gian khi các dị nguyên phân lập được bằng cách sử dụng một số kỹ thuật tách sinh hóa "kinh điển", và phần hoạt tính (phần lớn có tính dị nguyên) thường được đặt tên theo ý nghĩ chợt nảy ra của nhà nghiên cứu. Đã có những cố gắng sớm để tinh lọc dị nguyên phấn hoa và dị nguyên mạt bụi nhà, sử dụng chiết phenol, kết tủa muối và các kỹ thuật điện di trong những năm 1940-1950. Trong những năm 1960, sự trao đổi ion và môi trường lọc trong gel đã được đưa vào sử dụng, và dị nguyên đầu tiên được tinh lọc là "kháng 4 nguyên E" của cỏ phấn hương. Dị nguyên này được King và Norman đặt tên vì nó ở một trong năm phân đoạn kết tủa (đánh dấu từ A đến E). Đỉnh cao phát triển đầu những năm 1970 là những nghiên cứu về các kháng nguyên của Marsh, mô tả các tính chất phân tử của các dị nguyên, các yếu tố ảnh hưởng đến tính dị nguyên, đáp ứng miễn dịch với dị nguyên, và các nghiên cứu miễn dịch di truy ền của đáp ứng IgE với các dị nguyên phấn hoa tinh lọc. Những nghiên cứu đầu tiên của Marsh định nghĩa rõ ràng về một dị nguyên "chính" là một dị nguyên tinh khiết cao gây đáp ứng test da tức thì ở > 90% bệnh nhân có đáp ứng test da. Hiện nay, nói chung một dị nguyên chính là dị nguyên mà hơn 50% bệnh nhân dị ứng phản ứng với nó. Một dị nguyên chính thường có các tiêu chuẩn sau: 1. Tỷ lệ mẫn cảm > 80% (>2 ng IgE đặ c hiệu dị nguyên/mL) ở một quần thể lớn bệnh nhân dị ứng. 2. Một tỷ lệ đáng kể IgE toàn phần (>10%) có thể là đặc hiệu dị nguyên. 3. Sự hấp thu dị nguyên từ nguyên liệu nguồn làm giảm đáng kể hiệu năng chiết xuất. 4. Sự hấp thu huyết thanh bằng dị nguyên tinh khiết làm giảm đáng kể IgE đặc hiệu với chiết xuất d ị nguyên. 5. Dị nguyên chiếm một tỷ lệ đáng kể protein có thể chiết xuất được trong chất liệu nguồn. 6. Có thể sử dụng dị nguyên làm một dấu hiệu đánh giá tiếp xúc môi trường. 7. Có thể đo được cả đáp ứng kháng thể và đáp ứng tế bào với dị nguyên trong một tỷ lệ cao bệnh nhân dị ứng. 8. Dị nguyên đã chứng tỏ hi ệu quả như một phần của một vacxin dị ứng. Tài liệu trên thế giới thường xuyên được bổ sung bởi các sách hướng dẫn xem xét toàn diện các vấn đề về dị ứng học. Người ta đang thảo luận các điều kiện hình thành các loại tăng độ mẫn cảm khác nhau, các cách chẩn đoán, 5 điều trị và phòng các trạng thái dị ứng. Việc giải quyết những nhiệm vụ này phụ thuộc đáng kể vào danh mục và chất lượng của các DN. Số lượng các tập chuyên khảo nói về DN như một loại sinh phẩm không nhiều. Tuy nhiên, những tiến bộ của dị ứng học ứng dụng, hóa miễn dịch và công nghệ sinh học thường xuyên mở ra những triển vọ ng mới đối với việc tạo nên các chế phẩm DN. Việc nghiên cứu sâu các thành phần DN phối hợp với những kết quả nghiên cứu lâm sàng cho phép tách các thành phần ít hoạt tính và để lại các phân đoạn chính của DN [23], [25], [32], [41]. Thực tiễn y học đã sử dụng rộng rãi các chế phẩm DN được chiết xuất bởi nước - muối để chẩn đoán xác định tác nhân gây bệnh dị ứng và đặc trị bằng MDĐH. Việc mở rộng danh mục các DN đã dẫn tới sự cần thiết phải tiến hành một số lượng lớn các mẫu thử nghiệm chẩn đoán trên da, kết hợp với việc tăng số lượng bệnh nhân đã làm phức tạp công việc của ngành dị ứng học. Ngoài ra đi đôi với việc dùng các chiết xuất nước - muối để ch ữa bệnh đôi khi gây nên các phản ứng quá mẫn tại chỗ, từng vùng và từng hệ thống ở những người mẫn cảm cao, đặc biệt là khi sử dụng các mũi tiêm DN có nồng độ lớn. Thời gian của đợt điều trị cũng là một vấn đề rất quan trọng đối với bệnh nhân, đòi hỏi các bác sĩ lâm sàng phải mất nhiều thời gian chăm sóc. Chính vì vậy mà trong th ời gian vừa qua đã có nhiều đề xuất về cấu trúc các dạng DN mới. Ví dụ, với mục đích chẩn đoán, người ta đã áp dụng các hệ thống hấp thu DN bằng phóng xạ RAST (Radio Allergosorbent Test) và ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay). Trong nghiên cứu các thể DN điều trị, một trong những xu hướng được chú ý là biến đổi những KN làm mất đi khả năng phản ứng với những kháng thể đặc hiệu loạ i IgE mà vẫn duy trì hoạt tính miễn dịch (hình thành trong cơ thể các kháng thể bao vây loại IgG). Đã có dự tính sử dụng các kháng nguyên với nồng độ nhỏ nhất để chữa bệnh bằng cách nối chúng với các chất kích thích miễn dịch không đặc hiệu [48], [53], [54], [55], [63], [64], [65]. 6 Việc sử dụng an toàn và có hiệu quả các seri DN khác nhau ở một mức độ đáng kể tùy thuộc vào việc tiêu chuẩn hóa chúng và phương pháp kiểm tra chất lượng. Trong các công trình điều chế và tiêu chuẩn hóa DN của Việt Nam, chúng tôi sử dụng phương pháp điều chế DN theo dạng nước - muối. Chúng tôi cố gắng phản ánh đầy đủ tình hình hiện nay trong lĩnh vực nghiên cứu và điều chế DN nói chung, đặc biệt là DN D.pteronyssinus, phát hiện các đặc điểm lý-hóa, miễn dịch và ứng dụng trong chẩn đoán và điều trị GMCĐH [9], [11], [15], [39], [40], [63], [83], [93]. 1.2. MẠT BỤI NHÀ DERMATOPHAGOIDES PTERONYSSINUS 1.2.1. DỊ NGUYÊN MẠT BỤI NHÀ D.PTERONYSSINUS Mạt bụi nhà (tiếng Anh - house dust mites, tiếng Pháp - les acariens) được nhà da liễu Scheremetevsky (Nga) phát hiện năm 1876, Bogdanov (Nga 1894) mô tả dưới tên Dermatophagoides scheremetewskji. Sau đó, các nhà nghiên cứu ở châu Âu thấy Dermatophagoides pteronyssinus mà đôi khi gọi chúng là những con mạt nhỏ (Microacariens) ở trên giường, mặc dù chúng sống cả ở trong vải bọc gỗ mềm, tấm thảm và các đồ đạc có vải bọc khác [9], [22], [25], [43], [47], [68]. Tình hình nghiên cứu nước ngoài Kern (1921), Cooke, Storm van Leeuven (1922) phát hiện phản ứng da dương tính với dịch chiế t bụi nhà có mạt trong đó ở các bệnh nhân dị ứng. Năm 1925, Varekamp đã thu nhận được chế phẩm từ dịch chiết mạt và thử nghiệm trong lâm sàng dị ứng. Tác giả đã chỉ ra vai trò của MBN trong việc gây bệnh dị ứng nhưng chưa khẳng định được tính KN chủ yếu của chúng trong thành phần của bụi nhà. Tuy nhiên, mối quan tâm rộng rãi tới nguồn DN gây cảm ứng bệnh chỉ được thể hiện trong nửa sau của thế kỷ XX. Năm 1964, Voorhorst và cộng sự nhận thấy rằng mạt Dermatophagoides (Bogdanov, 1894) có mặt trong bụi nhà là nguyên nhân gây HPQ; Voorhorst và cộng sự (1969) kết luận rằng Dermatophagoides pteronyssinus 7 (Trouessart, 1897) l ngun DN ch yu gõy bnh c a d ng do bi nh. Cỏc tỏc gi ó chng minh s ph thuc trc tip ca tn s phn ng vi ch phm bi nh cỏc bnh nhõn vo bóo hũa mt trong bi nh. Trong nghiờn cu ny, ngi ta ó x lý c bit mt trong cỏc phn bi c thu thp vựng nỳi cao Thy S vi s l ng mt khụng ỏng k, sau ú lm cho tt c mt u cht. Tip theo chia nguyờn liu lm 2 phn, ri a mt lng nh mt sng vo 1 trong 2 phn ú. C 2 phn nguyờn liu gi trong iu kin ti u cho mt sinh sn trong 3 thỏng. Sau ú tỏch chit DN theo cựng mt k thut. Kt qu cho thy ch phm tỏch chit t phn cú mt bi nh s ng cú hot tớnh KN mnh gp 100 ln. Nghiờn cu ny ó khng nh c s tỏc dng gõy d ng ca bi nh l D. pteronyssinus. T ú cỏc nh nghiờn cu hng vn d ng vo MBN [9], [10], [11], [16], [18], [25], [47]. Hng lot cỏc cụng trỡnh nghiờn cu ca cỏc tỏc gi khỏc trờn th gii ó chng minh chớnh MBN, c bit l loi D. pteronyssinus - thnh phn quan trng nht ca bi nh quyt nh hot tớnh KN ca nú v cho rng DNBN ch mang tớnh KN khi cú m t trong bi [9], [11], [25], [43], [79]. Hỡnh 1.1. Mt D. pteronyssinus Tỡnh hỡnh nghiờn cu trong nc Nhận thức đợc vai trò quan trọng của dị nguyên trong chẩn đoán và điều trị, ở Việt nam ngay từ những năm 1982 các nghiên cứu của Nguyễn Năng An, Nguyễn Văn Hớng và Vũ Minh Thục về việc điều chế dị nguyên là mục 8 tiêu quan trọng hàng đầu giúp cho việc chẩn đoán và điều trị miễn dịch đặc hiệu bằng dị nguyên nhằm giảm thiểu sự gia tăng các bệnh dị ứng: HPQ, VMDƯ, Viêm kết mạc Trong nớc, các nghiên cứu từ năm 1980 đến năm 2003 của nhiều nhóm tác giả [2, 6, 8] mới chỉ dừng lại ở dị nguyên bụi nhà toàn phần, dị nguyên lông vũ, dị nguyên bụi bông. Sự khẳng định của các công trình khoa học trên thế giới: thủ phạm chính gây nên HPQ, VMDƯ, Viêm kết mạc do bụi nhà chính là Acarien D. pteronyssinus, hoạt tính kháng nguyên của dị nguyên bụi nhà phụ thuộc chặt chẽ vào số lợng Acarien D. pteronyssinus có trong bụi nhà. Bởi vậy, ngay từ những năm 90 các nhóm nghiên cứu trong nớc đã hớng tới việc phân lập, nuôi cấy mạt bụi nhà D. pteronyssinus nhng cha thành công do cha nghiên cứu đợc các môi trờng nghiên cứu cho mạt bụi nhà D. pteronyssinus tồn tại và phát triển. Đến năm 2003, nhóm nghiên cứu của Labo Miễn dịch dị nguyên thuộc Bệnh viện Tai Mũi Họng TW bớc đầu đã nghiên cứu thành công một số môi trờng nuôi cấy đã điều chế dị nguyên D. pteronyssinus từ các môi trờng này và bớc đầu thử nghiệm trong chẩn đoán và điều trị miễn dịch đặc hiệu trong VMDƯ đã cho kết quả hết sức khả quan từ 75-85%. Trên cơ sở những kết quả nghiên cứu ban đầu rất đáng khích lệ này, nhóm nghiên cứu chúng tôi hy vọng rằng đợc thực hiện đề tài này nhằm xây dựng và hoàn thiện quy trình công nghệ sản xuất vắc xin dị nguyên D. pteronyssinus để phục vụ công tác dự phòng chẩn đoán và điều trị bệnh dị ứng: HPQ,VMDƯ, Viêm kết mạc do dị nguyên D. pteronyssinus tại Việt Nam. 1982 : Nguyễn Năng An, Nguyễn Văn Hớng, Vũ Minh Thục v.v nghiên cứu về bụi nhà toàn phần. 1987 : Vũ Minh Thục, Nguyễn Năng An, Nguyễn Chí Phi : Nghiên cứu về thành phần hóa sinh miễn dịch của dị nguyên bụi nhà. 1990 : Vũ Minh Thục : Nghiên cứu về vai trò của mạt bụi nhà trong bệnh dị ứng (Luận văn PTS). 1993 : Nguyễn Văn Hớng và CS nghiên cứu về : Điều chế, tiêu chuẩn hóa và ứng dụng trong lâm sàng của dị nguyên bụi nhà toàn phần. 1996 : Nguyễn Năng An, Vũ Minh Thục, Phan Quang Đoàn, Lê Văn Khang, nghiên cứu độ mẫn cảm của dị nguyên bụi nhà và hiệu quả điều trị của chúng. [...]... Mu nghiên cứu điều tra 2 loài mạt bụi nhà gây bệnh d ứng: D. pteronyssinus và G domesticus ở Hà Nội và các vùng phụ cận 2002 : Vũ Minh Thục, Phạm Quang Chinh, Đái Duy Ban : Nuôi cấy mạt bụi nhà D. pteronyssinus tạo nguồn d nguyên góp phần chẩn đoán và điều trị bệnh d ứng do mạt bụi nhà ở nớc ta, theo công trình nghiên cứu của Vũ Minh Thục (1990) thấy rằng Glycyphacus domesticus và Dermatophagoides pteronyssinus. .. vacxin chống d ứng (sản phẩm công nghệ sinh học) để ứng d ng trong chẩn đoán và điều trị cho bệnh nhân d ứng do mạt bụi nhà D. pteronyssinus Việt nam Việc sử d ng an toàn và có hiệu quả các seri d nguyên khác nhau ở một mức độ đáng kể tùy thuộc vào việc tiêu chuẩn hóa chúng và phơng pháp kiểm tra chất lợng Trong các công trình điều chế và tiêu chuẩn hóa d nguyên của Việt Nam, chúng tôi sử d ng phơng... ngựa) để nuôi mạt Từ những nguyên liệu d nguyên gốc d ch chiết d nguyên đợc điều chế d i d ng dung d ch mẹ, từ đó chế ra dung d ch nớc để phục vụ cho chẩn đoán và điều trị thể hiện bằng sơ đồ sau: 21 + Cú 2 s sn xut d s dng mt hoc vi nguyờn liu DN: - Hoc sn xut cỏc dung dch m ụng khụ t ú ch ra dung dch nc v dung dch tỏc dng chm c hp ph trờn photphat canxi - Hoc sn xut cỏc dung dch m tỏc dng chm c... d ch chiết từ hỗn hợp nuôi cấy mạt chứa DN nhóm 1 nhiều hơn DN nhóm 2 (hơn 10 lần) Tuy nhiên, các thử nghiệm lâm sàng so sánh các d ch chiết d a trên hỗn hợp nuôi cấy và mạt thuần khiết cho thấy cả 2 kiểu d ch chiết có tác d ng tơng tự trên hệ MD trong quá trình LPMD [25] 1.3.2 Tách chiết d nguyên Khi tách chiết d ch chiết DN phải chú ý d ch chiết không phải là một dung d ch, trong đó có một lợng chất... tôi sử d ng phơng pháp điều chế d nguyên theo d ng muối nớc Chúng tôi cố gắng phản ánh đầy đủ tình hình hiện nay trong lĩnh vực nghiên cứu và điều chế các d nguyên nói chung, đặc biệt là d nguyên D pteronyssinus phát hiện các đặc điểm lý-hóa, miễn d ch của chúng để ứng d ng chúng trong chẩn đoán và điều trị miễn d ch đặc hiệu bằng d nguyên 1.2.2 VAI TRề CA MT BI NH TRONG BNH D NG Khi bn hỳt bi, quột,... trũ ca d nguyờn MBN trong c ch bnh lý 1.3 QUY TRèNH IU CH D NGUYấN Nhận thức đợc vai trò quan trọng của các loại d nguyên đối với bệnh d ứng, nhiều tác giả đã tiến hành nghiên cứu và công bố các kết quả trong việc điều chế d nguyên 1.3.1 Nguyên liệu Nguyên liệu cho chiết xuất DN mạt có thể là cơ thể mạt thuần khiết hoặc hỗn hợp nuôi cấy Lần đầu tiên, Chapman đã tinh chế d nguyên từ mạt D pteronyssinus. .. Lind đã tinh chế và mô tả đặc điểm của hai d nguyên chính từ phân mạt D pteronyssinus và từ hỗn hợp nuôi cấy chúng Các tác giả khác cũng tách chiết d nguyên từ hỗn hợp mạt nuôi cấy [29] Theo Ipsen và cộng sự, lợi thế của d ch chiết hỗn hợp nuôi cấy là chứa tất cả những nguyên liệu mà bệnh nhân d ứng với mạt gặp phải trong môi trờng tự nhiên, trong khi lợi thế của d ch chiết mạt thuần khiết (mạt. .. đa ra một quy trình chung để tách chiết các loại DN Theo tác giả, nguyên liệu để tách chiết DN đợc làm nhỏ và loại chất béo trớc giai đoạn chiết để nâng cao hiệu quả chiết xuất Để loại chất béo tác giả đã sử d ng một số dung môi hữu cơ nh: ete, toluen, xylen Tác giả đã sử d ng các dung d ch đệm có pH 8 để làm dung môi chiết Sau khi đợc tinh chế, điều chỉnh tới nồng độ thích hợp, d ch chiết đợc diệt... d nguyên Hơn 90 năm làm chúng ta xa d n các công trình cổ điển của Noon L (1911) và Freeman I (1911) về thu nhận các d nguyên từ phấn hoa thực vật để chẩn đoán và điều trị bệnh nhân bị sốt cỏ khô Đây là thời kỳ khi mà cha một nhà lý thuyết và lâm sàng nào biết bản chất cơ sở hoạt tính của những chế phẩm họ sử d ng Các nghiên cứu của Coca A (1925) đã góp phần vào việc vạch ra phơng pháp thu nhận d . .. tế phổ biến, các kết quả nghiên cứu của Kauffman H và CS (1985) thật thú vị Sau khi đánh giá điều kiện chiết xuất mạt bụi nhà trong dung d ch đệm nhẹ, các tác giả đi đến kết luận liệu pháp chiết phải nhanh chóng, không quá 1 giờ, bởi vì trong thời gian tiếp theo, mặc d lợng sản phẩm phong bế IgE tăng nhng hoạt tính của chúng giảm và lúc đó các chất vô ích sẽ tích lũy 3 Thẩm tách d ch chiết Giai đoạn . hoàn thiện quy trình công nghệ sản xuất vắc xin d nguyên D. pteronyssinus để phục vụ công tác d phòng chẩn đoán và điều trị bệnh d ứng: HPQ,VMDƯ, Viêm kết mạc do d nguyên D. pteronyssinus. trờng sống của mạt. Mặt khác, một số kết quả nghiên cứu gần đây cho thấy sử d ng d nguyên bụi nhà để điều trị cho bệnh nhân hen phế quản và viêm mũi d ứng cho kết quả thấp hơn so với d ng d . nhiều bệnh có cơ chế d ứng: hen phế quản, viêm mũi d ứng, mày đay, phù Quinke, d ứng thuốc, xơ cứng bì mà còn do tỷ lệ người mắc bệnh d ứng ngày càng gia tăng [1], [8]. Các thống kê d ch