Nghiên cứu tác dụng chống viêm của cốt toái bổ (Drynaria fortunei) trên động vật thực nghiệm Nguyễn Trần Giáng Hơng 1 , Phạm Xuân Sinh 2 1 Đại học Y Hà Nội, 2 Đại học Dợc Hà Nội Tác dụng chống viêm của cốt toái bổ đợc thực hiện trên chuột cống trắng theo phơng pháp gây phù lòng bàn chân chuột bằng carrageenin Kết quả cho thấy cao lỏng cốt toái bổ (Drynaria fortunei) có tác dụng chống viêm cấp và mạn tính ở liều 4g/ kg. Tác dụng chống viêm cấp của cốt toái bổ đợc thể hiện qua việc làm giảm lợng dịch rỉ viêm và lợng bạch cầu trong dịch rỉ viêm. i. Đặt vấn đề Nớc ta có nguồn dợc liệu phong phú và nền y học cổ truyển lâu đời, nhiều vị thuốc, bài thuốc có tác dụng tốt trên lâm sàng, nhng cha đợc nghiên cứu sâu về tác dụng dợc lý và độc tính. Trong những cây thuốc dân gian cốt toái bổ (Drynaria fortunei) đợc dùng để chữa viêm khớp, đau lng, đau nhức gân xơng [3]. Theo y học cổ truyền, cốt toái bổ đã đợc dùng để chữa chứng phong thấp, nhng cha có nghiên cứu chi tiết nào về hóa học, tác dụng dợc lý, cơ chế tác dụng, độc tính của loại thảo dợc này. Để góp phần khẳng định tác dụng của vị thuốc và làm tiền đề cho những ứng dụng trên lâm sàng, chúng tôi tiến hành đề tài này với mục đích: 1. Đánh giá tác dụng chống viêm cấp của cốt toái bổ qua hai phơng pháp gây phù lòng bàn chân chuột cống trắng bằng carrageenin và gây tràn dịch màng bụng. 2. Nghiên cứu tác dụng chống viêm mạn của cốt toái bổ trên động vật thực nghiệm. ii. Đối tợng và phơng pháp nghiên cứu 1. Thuốc Chúng tôi sử dụng cao lỏng cốt toái bổ (tỉ lệ 1:1, 1ml = 1g dợc liệu) do Bộ môn Dợc học cổ truyền trờng Đại học Dợc Hà Nội bào chế. Cốt toái bổ đợc thu hái vào tháng 9, tại Tây Bắc Lào Cai. Dung môi dùng làm chứng: nớc muối sinh lý 0,9%. 2. Đối tợng nghiên cứu Chuột cống trắng khoẻ mạnh, cả hai giống, trọng lợng 170-190g, và chuột cống non trọng lợng 60 - 70g đợc nuôi trong điều kiện đầy đủ thức ăn và nớc uống tại phòng thí nghiệm của Bộ môn Dợc lý, trờng Đại học Y Hà Nội. 3. Ph ơng pháp nghiên cứu 3.1. Nghiên cứu tác dụng chống viêm cấp 3.1.1. Phơng pháp gây phù lòng bàn chân chuột cống trắng bằng carrageenin [6] Chuột cống trắng cả hai giống đợc chia thành 3 lô, mỗi lô 10 con: - Lô 1: uống NaCl 0,9% - Lô 2: uống aspegic (lysin acetyl salicylat) 0,09g/ kg tơng đơng aspirin 0,05g/ kg - Lô 3: uống cốt toái bổ 4g/ kg Một giờ sau khi chuột uống thuốc thử (uống 1 lần), gây viêm bằng cách tiêm vào dới da gan bàn chân sau bên phải của chuột carrageenin 1% - 0,05ml/ chuột, thể tích chân chuột đợc đo bằng dụng cụ chuyên biệt plethysmometer UGO BASILE loại N 0 7140 trớc và sau khi gây viêm bằng carrageenin ở các thời điểm sau gây viêm 2-4-6-24 và 48 giờ. Mức độ phù đợc tính nh sau: V t - V 0 X% = ì 100 V 0 V t : Thể tích chân chuột sau khi gây viêm V 0 : Thể tích chân chuột trớc khi gây viêm 8 So sánh độ tăng thể tích trung bình giữa chân chuột thử thuốc với chân chuột đối chứng và giữa các lô thuốc thử với nhau. Tác dụng chống viêm đợc biểu thị bằng tỷ lệ % ức chế phản ứng viêm. 3.1.2. Phơng pháp gây tràn dịch màng bụng Chuột cống trắng đợc chia thành 3 lô nh trên. Một giờ sau khi uống thuốc thử, chuột đợc tiêm màng bụng dung dịch (carrageenin 0,05g + formaldehyd 1,5 ml + nớc cất vừa đủ 100 ml) với thể tích 2 ml/ chuột. Sau khi tiêm carrageenin 24 giờ, mở khoang màng bụng để hút dịch và đếm số lợng tế bào máu trong dịch tiết. Tác dụng chống xuất tiết đợc đánh giá thông qua thể tích dịch rỉ viêm và số lợng tế bào trong dịch rỉ viêm. 3.2. Nghiên cứu tác dụng chống viêm mạn Gây u hạt thực nghiệm theo phơng pháp của Ducrot, Julon và cộng sự [4]. Chuột đợc chia thành các lô nh trên. Cho chuột uống thuốc thử vào mỗi buổi sáng, trong 5 ngày liền. Lần thứ nhất uống ngay trớc khi cấy sợi amiant (30 mg) đã đợc tiệt khuẩn ở 160 0 C trong 2 giờ vào dới da lng chuột. Chiều ngày thứ 5 giết chuột, bóc tách khối u, đặt vào tủ sấy 36 0 C trong 18 giờ, sau đó cân trọng lợng các khối u. Trọng lợng trung bình các khối u (đã trừ sợi amiant của chuột thử thuốc đợc so với chuột đối chứng. Tác dụng chống viêm đợc biểu thị bằng tỉ lệ % giảm trọng lợng khối u. 3.3. Đánh giá tác dụng chống viêm thông qua vỏ thợng thận Đánh giá ảnh hởng của thuốc lên tuyến ức chuột cống non theo phơng pháp của P.Lechat và cộng sự [5]. Chuột cống non (nặng 60- 70g) đợc uống thuốc trong 2 ngày liền, chiều ngày thứ 3 giết chuột, bóc tách tuyến ức và cân ngay. Theo dõi sự ảnh hởng của thuốc lên tuyến ức thông qua trọng lợng tơng đối tuyến ức so với lô uống dung môi và uống prednisolon. Tất cả số liệu nghiên cứu đợc xử lý bằng thuật toán thống kê t- test Student. III. Kết quả 1. Tác dụng chống viêm cấp 1.1. Gây phù lòng bàn chân chuột cống trắng bằng carrageenin Bảng 1: Tác dụng chống viêm cấp của cốt toái bổ Thể tích chân chuột sau tiêm carrageenin (ml) Lô thử n Thuốc thử liều dùng Thể tích chân chuột ban đầu V 0 (ml) Sau 2h Sau 4h Sau 6h Sau 24h Sau 48h V TB (ml) Độ tăng thể tích TB A v Tỷ lệ % viêm Độ ức chế viêm % p so với chứng 1 10 NaCl 0,9% 1,05 0,11 1,91 0,24 1,85 0,23 1,78 0,23 1,37 0,12 1,24 0,10 1,53 58 100 2 10 Aspegic 0,09g/kg 1,10 0,12 1,45 0,12 1,44 0,12 1,57 0,13 1,34 0,10 1,22 0,48 1,37 32 56,55 43,45 <0,05 3 10 Cốt toái bổ 4g/kg 1,03 0,09 1,61 0,12 1,62 0,11 1,18 0,06 1,18 0,05 1,14 0,08 1,36 40 68,27 31,37 <0,05 9 Kết quả thực nghiệm đợc ghi lại trên bảng 1 cho thấy cao lỏng cốt toái bổ có tác dụng làm giảm phù thực nghiệm chân chuột, biểu thị bằng tỉ lệ % giảm thể tích chân chuột thử thuốc so với chân chuột đối chứng. Tác dụng chống viêm của cốt toái bổ 4g/ kg so với aspirin 0,05g/ kg có phần kém hơn, nhng sự khác biệt này cha có ý nghĩa thống kê. Phơng pháp gây tràn dịch màng bụng Bảng 2: Tác dụng chống viêm của cốt toái bổ qua phơng pháp gây tràn dịch màng bụng Lô thử n Thuốc dùng và liều lợng Số lợng dịch trung bình (ml) % giá trị TB làm giảm thể tích dịch so với chứng p so với chứng p so với aspegic 1 10 NaCl 0,9% 4,78 1,10 2 10 Aspegic 0,09g/ kg 1,53 0,70 67,99 < 0,01 3 10 Cốt toái bổ 4g/ kg 2,40 0,96 49,79 > 0,05 TB: trung bình Bảng 3: ảnh hởng của cốt toái bổ trên số lợng tế bào trong dịch rỉ viêm Lô thử n Thuốc dùng và liều lợng Số lợng bạch cầu (nghìn/ mm 3 ) Số lợng bạch cầu trung tính (%) Số lợng bạch cầu lympho (%) p so với aspegic 1 10 NaCl 0,9% 10,7 0,5 62,2 4,3 36,0 3,9 2 10 Aspegic 0,09g/ kg 7,8 0,4 (p< 0,05) 59,7 3,9 (p > 0,05) 38,5 1,5 (p> 0,05) 3 10 Cốt toái bổ 4g/ kg 7,9 0,5 (p < 0,05) 61,5 2,8 (p > o,o5) 37,5 1,6 (p> 0,05) > 0,05 Kết quả thực nghiệm đợc trình bày trên bảng 2 và 3 cho thấy cốt toái bổ liều 4g/ kg có tác dụng chống viêm cấp rõ rệt, làm giảm lợng dịch rỉ viêm 26,20% so với lô chứng (p< 0,05). Tác dụng này của cốt toái bổ (4g/ kg) gần bằng với aspirin (0,05g/ kg). Ngoài ra, cốt toái bổ và aspirin còn làm giảm số lợng bạch cầu trong dịch rỉ viêm (p< 0,05). Tuy vậy, công thức bạch cầu không có sự thay đổi đáng kể sau thời gian thử nghiệm. 3.2. Tác dụng chống viêm mạn tính Bảng 4: Trọng lợng trung bình u hạt của các nhóm nghiên cứu Lô thử n Thuốc dùng và liều lợng Trọng lợng trung bình của u hạt (mg) Tỉ lệ % giảm trọng lợng u p so với lô chứng p so với aspegic 1 10 NaCl 0,9% 149,5 57,5 2 10 Aspegic 0,09g/ kg 69,0 20,8 53,85 < 0,01 3 10 Cốt toái bổ 4g/ kg 66,3 2,7 55,65 < 0,001 > 0,05 Qua nghiên cứu chúng tôi thấy cao lỏng cốt toái bổ có tác dụng chống viêm mạn tính rõ rệt, với liều 4g/ kg cốt toái bổ đã ức chế sự phát triển của các u hạt thực nghiệm, làm giảm 55,65% trọng lợng u hạt so với lô chứng (p< 0,001). Tác dụng này của cốt toái bổ 4g/ kg tơng đơng với aspirin 0,05g/ kg. (Bảng 4). 10 3.3. Tác dụng chống viêm thông qua vỏ thợng thận Bảng 5: ảnh hởng của cốt toái bổ trên tuyến ức chuột cống non Lô thử n Thuốc dùng và liều lợng Trọng lợng trung bình tuyến ức (mg/ 100g chuột) Tỉ lệ % giảm trọng lợng tuyến ức so với chứng p so với lô chứng 1 10 NaCl 0,9% 224 19,7 2 10 Cốt toái bổ 4g/ kg 223 15,0 0 > 0,05 3 10 Prednisolon 0,006g/ kg 169 13,2 24,55 < 0,05 Kết quả thực nghiệm (bảng 5) cho thấy cao lỏng cốt toái bổ 4g/ kg không có tác dụng làm thu teo tuyến ức so với lô chứng (p> 0,05), trong khi đó prednisolon 0,006g/ kg có tác dụng làm giảm trọng lợng truyến ức rõ rệt (p < 0,05). iv. Bàn luận Cốt toái bổ là một vị thuốc đã đợc dùng từ lâu trong dân gian, qua nghiên cứu trên thực nghiệm chúng tôi thất cốt toái bổ có tác dụng chống viêm rất rõ. 1. Tác dụng chống viêm cấp Theo phơng pháp gây phù bàn chân chuột cống trắng bằng carrageenin, cao cốt toái bổ 4g/ kg đã thể hiện tác dụng chống viêm cấp rõ ở các thời điểm sau gây viêm 2h, 4h, 6h và 24h (bảng 1). Tác dụng ức chế phản ứng viêm của cao cốt toái bổ trung bình khoảng 31,71% so với chứng. Theo kết quả nghiên cứu của Lơng Trần Khuê và Đào Văn Phan [2] hoè hoa tán 4g/ kg có tác dụng chống viêm cấp rõ ở các thời điểm sau gây viêm 4h, 6h và 30h. Tơng tự theo Nguyễn Trần Giáng Hơng [1] alkaloid toàn phần Trinh nữ và phân tằm cũng có tác dụng chống viêm cấp, làm giảm phù chân chuột khi gây viêm bằng kaolin từ 27%- 50%. Nh vậy, tác dụng chống viêm cấp của cao cốt toái bổ 4g/ kg so với các thuốc nam đã nghiên cứu cũng ở mức trung bình và tơng đơng nhau. Để nghiên cứu tác dụng chống tiết dịch rỉ viêm của các thuốc chống viêm có nhiều phơng pháp, trong đề tài này chúng tôi chọn phơng pháp gây tràn dịch màng bụng. Kết quả thực nghiệm (bảng 2, 3) cho thấy cốt toái bổ có tác dụng chống viêm cấp rõ rệt, làm giảm lợng dịch rỉ viêm 49,79% so với chứng (p< 0,05), tác dụng này của aspirin 0,05g/ kg là 67,99%. Cốt toái bổ còn làm giảm số lợng bạch cầu trong dịch rỉ viêm, tác dụng này của cao lỏng cốt toái bổ tơng đơng với thuốc làm đối chứng (aspirin) trong thực nghiệm. Qua kết quả thực nghiệm, chúng tôi nghĩ cơ chế chống viêm của cốt toái bổ có thể do làm giảm tính thấm thành mạch tại vị trí viêm dẫn tới làm giảm lợng dịch rỉ viêm đồng thời đã ức chế một phần khả năng xuyên mạch của bạch cầu đa nhân trung tính vào ổ viêm. Trong dịch rỉ viêm, lợng lympho bào và các tế bào khác cha có sự thay đổi là phù hợp. Vì chúng ta đã biết, trong phản ứng viêm cấp ở những giờ đầu, dới ảnh hởng của nhiều yếu tố, trong quá trình viêm cơ thể mới tập trung chủ yếu là bạch cầu trung tính đến làm nhiệm vụ tại ổ viêm. 2. Tác dụng chống viêm mạn tính Trên mô hình thí nghiệm của phơng pháp này với nguyên tắc gây u hạt bằng carrageenin và amiant. Nghiên cứu nhằm đánh giá tác dụng của thuốc trên quá trinh tăng sinh tổ chức thông qua việc tạo thành u hạt. Amiant là một vật lạ không có khả năng tiêu, carrageenin có bản chất là một polysaccharid đóng vai trò quan trọng trong cơ chế viêm. U hạt tạo thành là do có phản ứng viêm gây ra với carrageenin cùng với sự tồn tại của vật lạ không tiêu đ ợc là amiant. Cơ thể sẽ phản ứng bằng cách tập trung nhiều tế bào tạo ra mô bào lới, nguyên bào sợi vây quanh vật lạ tạo nên hình ảnh của mô hình viêm mạn thực nghiệm. Dựa theo 11 nguyên tắc: thuốc chống viêm mạn sẽ ức chế tạo thành u hạt, việc đánh giá tác dụng này thông qua việc xác định đo trọng lợng u hạt giữa các lô chuột dùng các thuốc khác nhau. Kết quả thực nghiệm (bảng 4) cho thấy cốt toái bổ 4g/kg có tác dụng ức chế sự phát triển của u hạt, làm giảm 55,65% trọng lợng u hạt so với chứng. Với những kết quả trên, chúng tôi cho rằng cốt toái bổ có tác dụng chống viêm cấp và mạn, mức độ tác dụng vừa phải, tơng đơng với aspirin 0,05g/ kg nhng tác dụng này không thông qua vỏ thợng thân (bảng 5). Điều này rất phù hợp với lâm sàng vì trong y học cổ truyền, cốt toái bổ thờng đợc dùng để điều trị các bệnh viêm mạn tính nh phong thấp, viêm khớp V. Kết luận Qua nghiên cứu chúng tôi rút ra một số kết luận: - Cốt toái bổ với liều 4g/ kg có tác dụng chống viêm cấp. Tác dụng chống viêm cấp của cốt toái bổ đợc thể hiện qua việc làm giảm lợng dịch rỉ viêm và lợng bạch cầu trong dịch rỉ viêm. - Với liều 4g/ kg cốt toái bổ còn có tác dụng chống viêm mạn tính . Tài liệu tham khảo 1. Nguyễn Trần Giáng Hơng (1983). Nghiên cứu tác dụng dợc lý, độc tính của alkaloid toàn phần trong cây Trinh nữ. Luận văn bác sỹ nội trú, Trờng Đại học Y Hà Nội. 2. Lơng Trần Khuê, Đào Văn Phan (1998). Đánh giá tác dụng của bài thuốc chữa trĩ hoè hoa tán trên thực nghiệm. Tạp chí Nghiên cứu Y học, Trờng Đại học Y Hà Nội, 4, 39- 44. 3. Đỗ Tất Lợi (1999). Những cây thuốc và vị thuốc Việt Nam. Nhà xuất bản Khoa học kỹ thuật. 4. Ducrot, R; Julon, L et al (1965). Turner, screening methodes in pharmacology. Academic press, 114- 115. 5. Lechat (P); Fontagne' (J) (1967). Action des anti- inflammatoire non- steroidiques sur le thymus. Therapie, 22, 1221- 1230. 6. Winter, C.A; Ristey, E. A and Nuss, G.W (1962). Carrageenin induced edema in hind paw of the rat as an assay for anti inflammatory drug. Proc, exp. Biol. N.J, 111, 544- 574. Summary Study on the anti inflammatory effect of cot toai bo in experimental animals The anti inflammatory effect of cot toai bo was studied on rat's hind paw oedema induced by carrageenin. The experimental results showed that: - The aqueous extract of cot toai bo (Drynarice fortunei) in dosage of 4g/ kg of body weight exerts the anti inflammatory effect. - The anti- acute inflammatory effect of cot toai bo is exhibited through the decrease quantity of exudation and the number of leucocyte in exudation. 12 . cứu tác dụng chống viêm mạn của cốt toái bổ trên động vật thực nghiệm. ii. Đối tợng và phơng pháp nghiên cứu 1. Thuốc Chúng tôi sử dụng cao lỏng cốt. thấy cao lỏng cốt toái bổ (Drynaria fortunei) có tác dụng chống viêm cấp và mạn tính ở liều 4g/ kg. Tác dụng chống viêm cấp của cốt toái bổ đợc thể hiện