BÀI 1: PROTEIN I) PHẢN ỨNG NINHYDRIN 1,Nguyên tắc : Aminoacid + Ninhydrin _to _> phức màu tím xanh _Cu2+ >phức màu hồng 2,Kết thảo luận : - Hiện tượng : Khi cho a.a vào sắc kí giấy đem hơ khơ Sau cho Ninhydrin vào hơ khơ xuất màu xanh tím.Sau đó,cho Cu2+ vào sắc kí giấy chuyển thành màu hồng -Giải thích: +Các a.a peptid phản ứng với Ninhydrin bị dezamin hóa ,oxyhóa decacboxy hóa tạo thành NH3,CO2,và andehit tương ứng +Màu hợp chất bền đẹp hơn,khi có mặt Ion Cu2+, màu hồng nhạt phức có cấu tạo chelat II)PHẢN ỨNG XANTHOPROTEIN 1,Nguyên tắc : Aminoacid (nhân thơm)  phức màu vàng  phức màu da cam 2,Kết thảo luận : - Hiện tượng : Khi đun dung dịch có màu vàng dẫn xuất Nitro.Khi kiềm sản phẩm chuyển thành muối có màu vàng da cam đặc trưng - Giải thích: +Khi cho HNO3 vào Protein a.a nhân thơm có chung Protein bị nitro hóa nhân thơm tạo thành dẫn xuất nitro có màu vàng +Sản phẩm nitro hóa tác dụng với kiềm tạo muối có màu vàng da cam đặc trưng - Kết luận: Phản ứng Xanto protein phản ứng đặc trưng để phát a.a nhân thơm III)PHẢN ỨNG BIURE 1,Nguyên tắc: Protein  phức chất màu xanh tím 2,Kết thảo luận : - Hiện tượng: dd có màu xanh tím - Giải thích: - Kết luận: +Phản ứng Biure phản ứng màu đặc trưng để phát liên kết peptid +Độ tím phản ứng khác tùy theo độ dài lien kết peptid lượng muối CuSO4 VI)ĐỊNH LƯỢNG PROTEIN BẰNG PHƯƠNG PHÁP BIURE 1,Nguyên tắc :Protein + CuSO4 + NaOH > phức chất màu xanh tím 2,Kết thảo luận: - Kết thí nghiệm KẾT QUẢ THÍ NGHIỆM STT Protein 0.1% (ml) 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 Nước cất (ml) 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 Biure (ml) 4 4 4 Độ hấp thụ quang học 0.5584 0.6884 0.6615 0.8065 0.9404 0.7676 ống nghiệm thứ cho 1(ml) dd Protein chưa biết nồng độ cho (ml) Biure  độ hấp thụ quang học đo :0.889 Kết thí nghiệm biểu diễn qua đồ thị: Kết luận : dựa vào đồ thị ta thấy độ hấp thụ quang học lượng protein 540nm : 0.889 (A) có nồng độ protein là: 0.625% Ta thấy số liệu ống sai q trình làm thực hành nên ta khơng vẽ vào đồ thị BÀI 2: ĐƯỜNG I)PHẢN ỨNG TROMMER 1) Nguyên tắc Đường khử +Cu2+ _NaOH > Cu2O Đỏ gạch 2) Kết thảo luận a, Hiện tượng Ống 1: tạo dung dịch xanh thẫm, kết tủa đen xuất Ống 2: tạo dung dịch xanh, xuất kết tủa dỏ gạch Ống 3: tạo dung dịch xanh, xuất kết tủa đỏ gạch nhạt ống b, Giải thích Ống 1: phân tử saccarozơ khơng cịn nhóm OH hemiaxetal nên khơng có dạng mạch hở Do khơng có tính chất nhóm cacbonyl nên khơng khử Cu(OH)2 mà hịa tan Cu(OH)2 tạo dung dịch xanh thẫm Sau đun nóng Cu(OH)2 bị nhiệt phân tạo CuO (màu đen) PƯ: Cu(OH)2 to > CuO +H2O Ống 2: phân tử glucozo có nhóm OH hemiaxetal nên ln có chuyển hóa mạch vịng mạch thắng Vì ln có tái tạo lại nhóm CHO từ nhóm OH C5 mạch vịng nên có tính chất nhóm CHO Vì có khả khử Cu(OH)2 thành Cu2O ( kết tủa đỏ gạch) PƯ: HO-CH2-(CHOH)4-CHO + Cu(OH)2 + NaOH to_> HO-CH2-(CHOH)4COONa + Cu2O + H2 O Ống 3: cấu tạo từ gốc α- glucozo liên kết qua liên kết glucozit C1-O-C4 nên gốc α- glucozo thứ cịn nhóm OH hemiaxetal tự chuyển mạch hở chứa nhóm CHO nên mantozo khử Cu(OH)2 tạo kết tủa đỏ gạch khả khử mantozo glucozo nên màu ống nhạt ống Kết luận : đường glucozo đường mantozo đường khử cịn đường saccarozo khơng phải đường khử II) ĐỊNH LƯỢNG ĐƯỜNG KHỬ BẰNG PHƯƠNG PHÁP IXEKUTZ 1) Nguyên tắc Đường khử khử ion Fe3+ K3Fe(CN)6 thành ion Fe2+ K4Fe(CN)6 Đường khử + K3Fe(CN)6 > SP OXH + K4Fe(CN)6 Dùng ZnSO4 để tạo chất kết tủa với K4Fe(CN)6 ZnSO4 + K4Fe(CN)6 > phức kết tủa Lượng K3Fe(CN)6 dư phản ứng với KI để giải phóng I2 K3Fe(CN)6 dư + KI > I2 I2 giải phóng chuẩn độ Na2S2O3 Khi dung dịch bình đối chứng ( 10 ml nước cất) đổi màu hoàn tồn( từ màu xanh tím sang màu trắng sữa) ta đọc lượng Na2S2O3 0.05 N tiêu tốn buret 10.6 ml Ta có: VK3Fe(CN)6 10 _ = _ (1) VNa2S2O3 10.6 Khi dung dịch bình thí nghiệm ( 2ml dịch chiết đường + 8ml nước cất) đổi màu hồn tồn (từ màu xanh tím sang màu trắng sữa) ta đọc lượng Na2S2O3 0.05 N tiêu tốn buret 7.6ml dung dịch ban đầu có chứa dịch chiết đường nên K3Fe(CN)6 phản ứng với đường khử Ta có: VK3Fe(CN)6 X _ = _ (2) VNa2S2O3 7.6 Từ(1) (2) ta có X=7.2(ml) Vậy lượng K3Fe(CN)6 phản ứng với đường khử : 10 – 7.2 = 2.8 (ml) Kết luận: dựa vào phương pháp kết tính tốn khơng dựa vào phương trình lý thuyết mà dựa vào cơng thức thực nghiệm Độ xác kết phụ thuộc vào nhiều yếu tố trình tự tiến hành thao tác quan trọng III) ĐỊNH LƯỢNG ĐƯỜNG TỔNG SỐ 1)Nguyên tắc Để định lượng dường có mẫu cần tiến hành thủy phân đường không khử thành đường khử định lượng theo phương pháp ixekutz 2) Kết thảo luận Khi chuẩn độ dung dịch Na2S2O3 0.05 N Dung dịch đổi màu từ màu xanh tím sang màu trắng sữa Lúc bắt đầu đổi màu hoàn tồn ta dừng chuẩn độ thể tích Na2S2O3 0.05 N tiêu tốn buret 9.6 ml Ta có VK3Fe(CN)6 X1 _ = _ VNa2S2O3 9.6 Dựa vào kết bình đối chứng thí nghiệm ta có X1= 9.06 (ml) Vậy VK3Fe(CN)6 pư =10 – 9.06 = 0.94 (ml) BÀI 3: VITAMIN VÀ ACID HỮU CƠ I)ĐỊNH TÍNH VITAMIN C (ASCORBIC ACID) 1) Nguyên tắc Vitamin c hay ascorbic acid khử I2 từ dạng có màu thành dạng không màu Vitamin c (ascorbic acid ) + I2 > HI + dehidroascorbic acid 2)Kết thảo luận Hiện tượng: Ống 1: cho I2 0.01N vào màu I2 bị màu Ống 2: cho I2 0.01N vào màu I2 bị pha lỗng màu khơng thay đổi Giải thích: Vitamin c trường hợp tồn dạng khử(ascorbic acid), cho I2 vào ascorbic acid bị oxi hóa chuyển thành dehydroascorbic acid cịn I0 bị khử xuống thành I- nên dung dịch bị màu II)ĐỊNH LƯỢNG VITAMIN C THEO PHƯƠNG PHÁP CHUẨN ĐỘ BẰNG IÔT 1) Nguyên tắc Dựa vào lượng I2 bị khử để tính hàm lượng vitamin C mẫu 2) Kết thảo luận Hiện tượng: cho tinh bột 0.5% vào dịch lọc khơng có tượng Khi chuẩn độ Iơt dung dịch xuất màu xanh tím Kết quả: Chuẩn độ Iôt đến xuất màu xanh thể tích Iơt buret tiêu tốn 0.3(ml) I2 Hàm lượng vitamin C mẫu tính theo công thức: 0.00088 a V 1000 _ X= 100 v.c Trong đó: X : số (mg) vitamin C có mẫu 0.00088 : số quang vitamin C tương ứng với 1( ml) I2 a : thể tích I2 chuẩn độ V: tổng thể tích dung dịch chiết v: thể tích lấy để chuẩn độ c: khối lượng mẫu 0.00088 0.3 50 1000 _ X= 100 = 26.4% 10 III) ĐỊNH LƯỢNG ACID HỮU CƠ TỔNG SỐ 1) Nguyên tắc Acid hữu hòa tan nước Nước chiết rút chuẩn độ NaOH 0.1 N từ tính hàm lượng acid hữu có mẫu 2) Kết thảo luận Hiện tượng: cho phenolphthalein vào dung dịch khơng có tượng Khi chuẩn độ NaOH 0.1 N dung dịch chuyển thành màu hồng Kết quả: chuẩn độ NaOH 0,1 N đến xuất màu hồng thể tích NaOH tiêu tốn buret 0.1(ml) Hàm lượng acid hữu có mẫu tính theo cơng thức: 0.0067 a V 100 X = _ v.c Với : X: hàm lượng acid hữu có mẫu a: thể tích NaOH cần dùng để chuẩn độ V: Tổng tích dung dịch chiết v: thể tích lấy để chuẩn độ c : khối lượng mẫu Vậy: 0.0067 0.1 250 100 X= = 0.28 % 20 _  ... chuyển thành muối có màu vàng da cam đặc trưng - Giải thích: +Khi cho HNO3 vào Protein a.a nhân thơm có chung Protein bị nitro hóa nhân thơm tạo thành dẫn xuất nitro có màu vàng +Sản phẩm nitro hóa. .. vào cơng thức thực nghiệm Độ xác kết phụ thuộc vào nhiều yếu tố trình tự tiến hành thao tác quan trọng III) ĐỊNH LƯỢNG ĐƯỜNG TỔNG SỐ 1)Nguyên tắc Để định lượng dường có mẫu cần tiến hành thủy phân... trường hợp tồn dạng khử(ascorbic acid), cho I2 vào ascorbic acid bị oxi hóa chuyển thành dehydroascorbic acid I0 bị khử xuống thành I- nên dung dịch bị màu II)ĐỊNH LƯỢNG VITAMIN C THEO PHƯƠNG PHÁP