TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA THỦY SẢN TRẦN THỊ KIỀU PHƯƠNG ẢNH HƯỞNG CỦA THỜI GIAN TIẾP XÚC MALACHITE GREEN LÊN MỘT SỐ CHỈ TIÊU HUYẾT HỌC VÀ TỈ LỆ SỐNG CỦA CÁ TRA (Pangasianodon hypophthalmus) GIỐNG LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN CÁN BỘ HƯỚNG DẪN PGS.TS NGUYỄN THANH PHƯƠNG 2009 LỜI CẢM TẠ Qúa trình thực luận văn tốt nghiệp giúp tơi có kinh nghiệm kỹ bổ ích, thiết thực cho cơng việc sau ðể có kết trên, tơi xin chân thành gởi lời cảm ơn đến: Thầy Nguyễn Thanh Phương, Cơ Đ ỗ Thị Thanh Hương Trong khoảng thời gian làm luận văn dẫn, dạy bảo tận tình Thầy, Cơ giúp tơi nhận thấy khoảng trống kiến thức cần phải củng cố, ñồng thời Thầy, Cơ cịn cho tơi kinh nghiệm q báu để luận văn hồn thành theo muc tiêu Xin chân thành cám ơn tất Thầy, Cô, cán Khoa Thủy Sản ñã giúp ñỡ tạo ñiều kiện tốt cho suốt thời gian học tập thực ñề tài Xin chân thành cám ơn chị Nguyễn Thị Kim Hà chị Nguyễn Hương Thùy giúp đỡ dẫn tơi nhiệt tình thời gian thực luận văn tốt nghiệp Xin chân thành cám ơn anh chị học viên cao học, bạn sinh viên lớp nuôi trồng thủy sản K33, lớp bệnh học K32 ñã ñộng viên,quan tâm, giúp đỡ tơi lúc tơi gặp khó khăn Xin chân thành cám ơn gia đình quan tâm, chăm sóc, tạo điều kiện cho tơi suốt trình học tập thời gian thực đề tài TĨM TẮT Nghiên cứu “Ảnh hưởng thời gian tiếp xúc Malachite Green lên số tiêu huyết học tỉ lệ sống cá Tra (Pangasianodon hypophthalmus)” ñược thực từ tháng 04/2009 ñến 06/2009 nhằm mục tiêu ñánh giá mức ñộ thay ñổi khả phục hồi tiêu huyết học tỉ lệ sống cá Tra theo thời gian tiếp xúc với MG nồng ñộ thời gian khác ñể làm sở cho quản lý sử dụng hợp lý MG trường hợp cần thiết Thí nghiệm gồm nồng ñộ MG gây nhiễm: 0.15 ppm, 0.3 ppm, 0.45 ppm Kết thí nghiệm cho thấy có thay ñổi lên tiêu huyết học: Số lượng hồng cầu (nghiệm thức ñối chứng khoảng 2,5 x106 tế bào/mm3, nghiệm thức có thuốc khoảng 2,5 – 2,9x106 tế bào/mm3), số lượng bạch cầu (nghiệm thức ñối chứng khoảng 1,49x105 tế bào/mm3, nghiệm thức có thuốc khoảng 1,1x105-1,9x106 tế bào/mm3), tỷ lệ huyết cầu ( nghiệm thức ñối chứng khoảng 31,8%, nghiệm thức có thuốc khoảng 29-33%),thể tích hồng cầu (ở nghiệm thức đối chứng khoảng 136 µ 3, nghiệm thức có thuốc khoảng 114 – 149 µ 3) Kết thí nghiệm cho thấy có thay ñổi lên tiêu huyết học: Số lượng hồng cầu (nghiệm thức ñối chứng khoảng 2,2 x106 tế bào/mm3, nghiệm thức có thuốc khoảng 2,2 – 2,3x106 tế bào/mm3), số lượng bạch cầu (nghiệm thức ñối chứng khoảng 1,08x105 tế bào/mm3, nghiệm thức có thuốc khoảng 0,7x106-1,14x105 tế bào/mm3), tỷ lệ huyết cầu ( nghiệm thức ñối chứng khoảng 26,8%, nghiệm thức có thuốc khoảng 25,3-28,6%),thể tích hồng cầu (ở nghiệm thức đối chứng khoảng 124,2 µ 3, nghiệm thức có thuốc khoảng 128,3 – 148,8 µ 3).Tỉ lệ sống cá ñược khảo sát qua thí nghiệm cho thấy thí nghiệm có tỉ lệ sống cao thí nghiệm MỤC LỤC Phần 1: ĐẶT VẤN ðỀ 1.1 Giâi thiệu 1.2 Mục tiêu dề tài 1.3 Nội dung nghiên cứu 1.4 Thai gian dja diểm thực dề tài Phần 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 ðặc diểm sinh học cüa cá Tra (Pangasianodon hypophthalmus) 2.2 Ảnh huang cüa hóa chất lên sinh lý cüa cá 2.3 Ảnh huang cüa hóa chất lên chi tiêu huyết học cüa cá 2.4 Ảnh huang cüa nong duqc lên ti lệ sống cüa cá tom 2.5 Khái quát số chi tiêu sinh lý huyết học 2.5.1 Nguàng Oxy 2.5.2 Tiêu hao Oxy 2.5.3 Các chi tiêu huyết học 2.6 Khái quát Malachite Green (MG) 10 2.6.1 Khái niệm MG 10 2.6.2 ðại cuang MG 11 2.6.3 Ảnh huang cüa MG 11 2.6.4 Ứng dụng cüa MG 13 2.6.5 TInh hInh su dụng MG giâi 13 2.6.6 TInh hInh su dụng thuốc hóa chất nuoi cá tra a ðBSCL 14 2.6.7 Khâ nang tồn luu cüa MG 14 Phần 3: 16 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 Vật liệu nghiên cứu 16 3.2 Bố trI thI nghiệm 18 3.2.1 ThI nghiệm: Xác djnh ânh huang cüa MG lên chi tiêu sinh lý(tiêu hao oxy nguàng oxy) cüa cá Tra 18 3.2.2 ThI Nghiệm: : Xác djnh ânh huang cüa MG lên chi tiêu huyết học (hồng cầu, bạch cầu, hematorite, MVC…) 19 3.3 Phuang pháp thu mẫu 20 3.3.1 Theo dõi moi truang 20 3.3.2 Phuang pháp thu mẫu cá 21 3.4 Phuang pháp pha dung djch MG thI nghiệm 21 3.5 Phuang pháp phân tIch mẫu huyết học 21 3.5.1 Phuang pháp dếm hồng cầu 21 3.5.2 Phuang pháp xác djnh tế bào bạch cầu 22 3.5.3 Phuang pháp Hematocrit (ti lệ huyết sắc tố %) 23 3.5.4 Cong thức tInh thể tIch hồng cầu (MCV) 23 3.6 Phuang pháp xu lI số liệu 23 Phần 4: 24 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 24 4.1 ThI nghiệm ânh huang cüa MG lên chi tiêu sinh lý (tiêu hao oxy nguàng oxy) cüa cá Tra 24 4.1.1 Ảnh huang cüa MG lên tiêu hao oxy 24 4.1.2 Ảnh huang cüa MG lên nguàng oxy 25 4.2 ThI Nghiệm: Xác djnh ânh huang cüa MG lên chi tiêu huyết học (hồng cầu, bạch cầu, hematorite, MCV…) 26 4.2.1 ThI nghiệm 1: Cá Tra tiếp xúc vâi MG a nồng dộ thai gian dài 26 4.2.2 ThI nghiệm 2: Cá Tra tiếp xúc vâi MG a nồng dộ thai gian tức thai 31 4.3 Kết quâ so sánh số chi tiêu huyết học thI nghiệm 37 4.3.1 So sánh số luqng hồng cầu (106 tb/mm3) cüa cá sau ngày tiếp xúc thuốc 37 4.3.2 So sánh số luqng bạch cầu (105 tb/mm3) cüa cá sau ngày tiếp xúc thuốc 38 4.3.3 So sánh số luqng ty lệ huyết cầu (%Hct) cüa cá sau ngày tiếp xúc thuốc 38 4.3.4 So sánh thể tIch hồng cầu (µ 3) cüa cá sau ngày tiếp xúc thuốc 39 4.3.5 So sánh số luqng hồng cầu (106 tb/mm3) cüa cá sau tuần tiếp xúc thuốc 39 4.3.6 So sánh số luqng ty lệ huyết cầu (%Hct) cüa cá sau tuần tiếp xúc thuốc 40 4.3.7 So sánh thể tIch hồng cầu (µ 3) cüa cá sau tuần tiếp xúc thuốc 40 4.4 Kết quâ so sánh ty lệ sống thI nghiệm 41 Phần 5: 42 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 42 5.1 Kết luận 42 5.2 ðề xuất 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO 43 DANH SÁCH BẢNG Bảng 2.1: Giá trj LC50 cüa MG dối vâi số loài cá a nhiệt dộ pH khác 12 Bảng 4.1: Biến dộng nhiệt dộ, pH cüa bể thI nghiệm 26 Bảng 4.2: Số luqng hồng cầu (106 tb/mm3) cüa cá trInh thI nghiệm 29 Bảng 4.3: Số luqng bạch cầu (105 tb/mm3) cüa cá trInh thI nghiệm 30 Bảng 4.4: Sự biến dộng ty lệ huyết cầu (%Hct) cüa cá trInh thI nghiệm 31 Bảng 4.5: Thể tIch hồng cầu (MCV) (µ 3) cüa cá trInh thI nghiệm 31 Bảng 4.6: Biến dộng nhiệt dộ, pH cüa bể thI nghiệm 32 Bảng 4.7: Số luqng hồng cầu (106 tb/mm3) cüa cá trInh thI nghiệm 34 Bảng 4.8: Số luqng bạch cầu (105 tb/mm3) cüa cá trInh thI nghiệm 35 Bảng 4.9: Sự biến dộng ty lệ huyết cầu (%Hct) cüa cá trInh thI nghiệm 36 Bảng 4.10: Thể tIch hồng cầu (MCV) (µ 3) cüa cá trInh thI nghiệm 36 Bảng 4.11: Số luqng hồng cầu (106 tb/mm3) cüa cá sau ngày tiếp xúc thuốc 37 Bảng 4.12:Số luqng bạch cầu (105 tb/mm3) cüa cá sau ngày tiếp xúc thuốc 38 Bảng 4.13: Số luqng ty lệ huyết cầu (%Hct) cüa cá sau ngày tiếp xúc thuốc 38 Bảng 4.14: Thể tIch hồng cầu (µ 3) cüa cá sau ngày tiếp xúc thuốc 39 Bảng 4.15: Số luqng hồng cầu (106 tb/mm3) cüa cá sau tuần tiếp xúc thuốc 39 Bảng 4.16: Số luqng bạch cầu (105 tb/mm3) cüa cá sau tuần tiếp xúc thuốc 40 Bảng 4.17: Số luqng ty lệ huyết cầu (%Hct) cüa cá sau tuần tiếp xúc thuốc 40 Bảng 4.18: Thể tIch hồng cầu (106 tb/mm3) cüa cá sau tuần tiếp xúc thuốc 41 DANH SÁCH HÌNH HInh 2.1: Bạch cầu HInh 2.3: Ti lệ huyết cầu 10 HInh 3.1: Cá Tra giống (Pangasianodon hypophthalmus) 17 HInh 3.2: Hệ thống thI nghiệm 17 HInh 3.3: Hệ thống thI nghiệm tiêu hao oxy nguàng oxy 18 HInh 3.4: Vj trI dếm hồng cầu 21 HInh 4.1: Tiêu hao oxy (mgO2/kg/gia) cüa cá trInh thI nghiệm 24 HInh 4.2: Nguàng oxy (mg/L) cüa cá trInh thI nghiệm 25 HInh 4.3: Biến dộng hàm luqng TAN a nghiệm thức theo lần thu 27 HInh 4.4: Biến dộng hàm luqng nitrite a nghiệm thức theo lần thu 28 HInh 4.5: Biến dộng hàm luqng nitrate a nghiêm thức theo lần thu 28 HInh 4.7: biến dộng hàm luqng TAN a nghiệm thức theo lần thu 33 HInh 4.8: Biến dộng hàm luqng nitrite a nghiệm thức theo lần thu 33 HInh 4.9: Biến dộng hàm luqng nitrate a nghiêm thức theo lần thu 34 HInh 4.10: Ty lệ sống thI nghiệm 42 CÁC TỪ VIẾT TẮT Malachite green: MG Leuco Malachite green: LMG Đồng Bằng Song Cuu Long: ĐBSCL Thể tIch hồng cầu: MCV PHẦN I ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 Giới thiệu Hiện ngành thủy sản ngành kinh tế mũi nhọn quốc gia Theo Cooksey (2008) Việt Nam (VN) nước giới có tiềm phát triển nhanh sản lượng thủy sản “VN có nhiều nguồn nước tốt như: nguồn nước ngọt, nước lợ, nước mặn, ñiều cung cấp cho VN nhiều thuận lợi ñể phát triển thủy sản” Theo Hiệp hội Chế biến xuất thủy sản VN (VASEP), 10 tháng ñầu năm (2008) xuất tra, ba sa loại ñạt 1,24 tỉ USD, vượt qua mức dự kiến giá trị xuất năm 2008 ðồng Bằng Sông Cửu Long (ðBSCL) vùng trọng ñiểm sản xuất thủy sản VN Theo thống kê Bộ Nông Nghiệp Phát Triển Nơng Thơn (10/06/08) tổng diện tích có khả nuôi trồng thủy sản (NTTS) ðBSCL 1.200.000 chiếm gần 60% diện tích ni trồng thủy sản nước Trong diện tích có khả ni thủy sản nước khỏang 600.000 xác ñịnh có ñiều kiện thuận lợi phân bố chủ yếu tỉnh: Tiền Giang, Long An, Bến Tre, Trà Vinh, Sóc Trăng, Bạc Liêu, Cà Mau, Kiên Giang, An Giang, ðồng Tháp, Cần Thơ Vĩnh Long Vì ðBSCL có nhiều đối tượng ni khác như: Cá tra, Cá Basa, Cá Hú, Cá Vồ ðém…ðặc biệt năm gần ñây Cá Tra đối tượng ni quan trọng ðBSCL số lồi cá nước ni phổ biến nước ta với hình thức ni bè, ni đăng quầng, ni ao…Mỗi năm diện tích ni Cá Tra tăng, theo số liệu thống kê Bộ Nông Nghiệp Phát Triển Nông Thơn (2008) tính đến tháng 8/07 tất tỉnh ðBSCL có tổng diện tích ni cá tra 5.600 so với năm 2000 diện tích tăng 10 lần, sản lượng ñạt khỏang 1.200.000 kim ngạch xuất gần tỷ USD Với thuận lợi điều kiện sinh thái mơi trường, kỹ thuật ni,…nghề ni Cá Tra phát triển nhanh Người nuôi cá muốn gia tăng suất sản lượng nên tăng mật độ thả ni từ 20-30 lên đến 50-70 con/m2 ni ao (Vietlinh) trình độ kỹ thuật biện pháp quản lý cịn hạn chế nên vấn đề nhiễm mơi trường vấn đề dịch bệnh xảy ñiều tất yếu Bệnh Cá Tra ñang vấn ñề lớn, bệnh xảy ngày nhiều ảnh hưởng ñến tăng trưởng, tỉ lệ sống gây thiệt hại lớn Vì việc sử dụng thuốc hóa chất để kiểm sóat dịch bệnh ngày trở nên phổ biến sử dụng sai liều, lọai thuốc hóa chất phổ biến nên ñã gây thiệt hại kinh tế lớn cho người ni cá Mặc dù MG bị cấm sử dụng giới từ năm 1992 (thanhnien) MG bị cấm sử dụng VN theo ñịnh số 07/2005/Qð-BTS ngày 24 tháng 02 năm 2005 Bộ trưởng Bộ Thủy Sản Tuy nhiên, MG đơi cịn sử dụng nhiều nơi giới giá thành thấp hiệu cao (Schnick, 1988) Vì gây băng khoăn tác hại MG dẫn xuất MG (LMG) ñối với hệ sinh thái cạn nước, chất ñược xem chất gây ô nhiễm (Burchmore and Wilkinson, 1993) mối nguy lớn sức khỏe người Vì vậy, tìm hiểu “Ảnh hưởng thời gian tiếp xúc Malachite Green lên số tiêu huyết học tỉ lệ sống cá Tra (Pangasianodon hypophthalmus)” ñược ñề xuất thực 1.2 Mục tiêu ñề tài Nhằm ñánh giá mức ñộ thay ñổi khả phục hồi tiêu huyết học tỉ lệ sống cá Tra theo thời gian tiếp xúc với MG nồng ñộ thời gian khác ñể làm sở cho quản lý sử dụng hợp lý MG trường hợp cần thiết 1.3 Nội dung nghiên cứu - ðánh giá ảnh hưởng nồng ñộ MG khác lên tiêu sinh lý (tiêu hao oxy, ngưỡng oxy) cá tra - ðánh giá thay ñổi tiêu huyết học, phục hồi tỉ lệ sống cá Tra tiếp xúc với MG nồng ñộ thời gian tức thời (ngắn) - ðánh giá thay ñổi tiêu huyết học, phục hồi tỉ lệ sống cá Tra tiếp xúc với MG nồng ñộ thời gian dài 1.4 Thời gian ñịa ñiểm thực ñề tài - Thời gian: từ tháng 04 ñến tháng 06/2009 - ðịa ñiểm: khoa thủy sản trường ðHCT Trước thuốc 150,64±13,05Aa 119,37±21,27Aa 136,35±13,51Aa 140,75±11,49Aa ngày tx thuốc 152,71±30,40Aa 133,94±14,27Aa 178,1±34,81Aa 158,13±14,30Aa 16 ngày tx thuốc 106,84±5,55Aa 105,22±3,35Aa 107,75±10,09Aa 32 4.2.2.1 Các tiêu mơi trường a) Nhiệt độ, pH Các yếu mơi trường nhiệt độ, pH bể thí nghiệm khơng biến động lớn nằm giới hạn thích hợp cho cá tra (bảng 4.6) Nhiệt độ tương đối ổn định, nhiệt độ trung bình nghiệm thức ñợt dao ñộng từ 25,54-27,050C ñợt dao ñộng từ 27,08-27,340C ñối với buổi sáng ðối với buổi chiều, ñợt dao ñộng từ 26,66-28,270C ñợt dao ñộng từ 28,76-28,780C pH nhìn chung khơng có khác biệt lớn, nằm khoảng thích hợp cá Ở đợt dao ñộng từ 7,56-7,66 ñợt dao ñộng từ 7,59-7,65 ñối với buổi sáng ðối với buổi chiều ñợt pH dao ñộng từ 7,63-7,69 ñợt dao ñộng từ 7,59-7,65 Sự dao ñộng yếu tố mơi trường khơng lớn thí nghiệm đặt nhà có mái che sục khí liên tục Bảng 4.6: Biến ñộng nhiệt ñộ, pH bể thí nghiệm Nhiệt độ Nghiệm thức pH Tuần Sáng Chiều Sáng Chiều 27,05 ± 1,39 28,13 ± 1,49 7,6 ± 0,16 7,63 ± 0,17 27,08 ± 0,79 28,76 ± 0,95 7,59 ± 0,13 7,6 ± 0,11 26,98 ± 1,37 28,23 ± 1,58 7,58 ± 0,09 7,6 ± 0,07 27,18 ± 0,73 28,77 ± 1,02 7,61 ± 0,16 7,59 ± 0,11 27,04 ± 1,38 28,27 ± 1,59 7,66 ± 0,21 7,69 ± 0,17 27,34 ± 0,79 28,78 ± 1,08 7,65 ± 0,16 7,65 ± 0,13 25,54 ± 0,52 26,66 ± 1,14 7,56 ± 0,11 7,64 ± 0,16 0ppm 0,15ppm 0,3ppm 0,45ppm 32 b) ðạm TAN Kết hình 4.7 cho thấy hàm lượng TAN trung bình theo nghiệm thức qua lần thu dao ñộng khoảng 0.08-2.11 ppm Theo Lê Bảo Ngọc (2004) hàm lượng TAN nồng độ từ 0,6-2,0 ảnh hưởng ñến sinh trưởng cá tra Tuy nhiên nồng6ñộ 0,45 ppm lần thu khơng có số liệu cá chết TAN(mg/l) Lần Lần Lần 0 0,15 0,3 Nồng độ MG (ppm) 0,45 Hình 4.7: biến ñộng hàm lượng TAN nghiệm thức theo lần thu (lần 1: ngày thứ 7, lần ngày thứ 14 lần ngày thứ 21 Nitrite Kết hình 4.8 cho thấy hàm lượng N-NO2 trung bình theo nghiệm thức qua lần thu dao ñộng khoảng 0,22-1,1 ppm Hàm lượng ñạm nitrite tăng dần qua lần thu Theo Xuân ctv hàm lượng N-NO2 cho phép khoảng 0,01-1 ppm (trích ðỗ Thị Bích Ly, 2004) Tuy nhiên nồng độ 0,45 ppm lần thu khơng có số liệu cá chết Nitrite (mg/l) 2.5 Lần 1.5 Lần Lần 0.5 0 0,15 0,3 0,45 Nồng độ MG (ppm) Hình 4.8: Biến ñộng hàm lượng nitrite nghiệm thức theo lần thu(lần 1: ngày thứ 7, lần ngày thứ 14 lần ngày thứ 21 33 Nitrate Kết hình 4.9 cho thấy hàm lượng N-NO3 trung bình theo nghiệm thức qua lần thu dao ñộng khoảng 0,77-4,02 ppm.Theo Trương Quốc Phú (2006) hàm lượng nitrate thích hợp cho ao ni từ 0,1-10 ppm Như hàm lượng nitrate nghiệm thức qua lần thu nằm giới hạn cho phép Tuy nhiên nồng ñộ 0,45 ppm lần thu khơng có số liệu cá chết Nitrate(mg/l) Lần Lần Lần 0 0,15 0,3 Nồng độ MG (ppm) 0,45 Hình 4.9: Biến động hàm lượng nitrate nghiêm thức theo lần thu (lần 1: ngày thứ 7, lần ngày thứ 14 lần ngày thứ 21 4.2.2.2 Sự biến ñổi tiêu huyết học cá trình thí nghiệm a) Biến động số lượng hồng cầu Qua bảng 4.7 cho thấy số lượng hồng cầu nghiệm thức lần thu có xu hướng tăng so với nghiệm thức ñối chứng khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Tuy nhiên lần thu thứ nghiệm thức 0,3 ppm khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức 0,45 ppm Theo ðỗ Thị Thanh Hương (1997) hồng cầu tăng tiếp xúc với thuốc ðiều có nghĩa số lượng hồng cầu chịu ảnh hưởng MG Ở nghiệm thức 0,45 ppm khơng có số liệu lần thu thứ cá chết 34 Bảng 4.7: Số lượng hồng cầu (106 tb/mm3) cá trình thí nghiệm Nghiệm thức Lần thu ppm 0,15 ppm 0,3 ppm 0,45 ppm 2,37±0,54Aa 2,73±0,85Aa 2,56±0,73Ba 2,04±0,89Aa ngày tx thuốc 1,9±0,43Aab 2,13±0,66Aab 1,59±0,65Aa 2,44±0,65Ab 16 ngày tx thuốc 2,37±0,5Aa 1,99±0,71Aa 2,36±1ABa Trước thuốc Số liệu trình bày trung bình ± độ lệch chuẩn Các giá trị hàng theo chữ (a, b, c, d) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p> 0,05) Các giá trị cột theo chữ (A, B, C, D) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p> 0,05) b) Biến ñộng số lượng bạch cầu Qua bảng 4.8 cho thấy số lượng bạch cầu nghiệm thức lần thu có xu hướng giãm dần theo gia tăng nồng ñộ khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức ñối chứng Tuy nhiên lần thu mẫu thứ nghiệm thức 0,15 ppm tăng so vơi nghiệm thức đối chứng khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức ñối chứng mà khác biệt có ý nghĩa thống so với nghiệm thức 0,45 ppm thời gian nồng độ thuốc cao nên số lượng bạch cầu giãm nhiều chúng có khác biệt nhiều so với nồng ñộ thấp Ở nghiệm thức 0,45 ppm khơng có số liệu lần thu thứ cá chết Bảng 4.8: Số lượng bạch cầu (105 tb/mm3) cá q trình thí nghiệm Lần thu Nghiệm thức ppm 0,15 ppm 0,3 ppm 0,45 ppm Trước thuốc 1,2±0,27Aa 1,07±0,43Aa 1,16±0,43Aa 0,87±0,44Aa ngày tx thuốc 0,94±0,37Aab 0,86±0,57Aab 0,52±0,37Aa tuần tx thuốc 1,11±0,5Aa 1,39±0,77Ab 0,97±0,28 Aa 1,17±0,45Aa Số liệu trình bày trung bình ± độ lệch chuẩn Các giá trị hàng theo chữ (a, b, c, d) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p> 0,05) Các giá trị cột theo chữ (A, B, C, D) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p> 0,05) 35 c) Biến ñộng tỷ lệ huyết cầu (%Hct) Qua bảng 4.9 cho thấy tỷ lệ huyết cầu nghiệm thức lần thu có xu hướng giãm so với nghiệm thức đối chứng khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Song, lần thu mẫu thứ nghiệm thức 0,45 ppm tỷ lệ huyết cầu tăng so với nghiệm thức ñối chứng khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê so với đối chứng mà khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức 0,3 ppm Nhìn chung tỷ lệ huyết cầu lần thu nghiệm thức có xu hướng giãm so vơi nghiệm thức ñối chứng khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Tuy nhiên nghiệm thức 0,3 ppm 0,45 ppm khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức đối chứng Theo Lương Thị Diễm Trang (2009) tỷ lệ huyết cầu tăng lần thu mẫu ñầu lần thu ngày tỷ lệ giãm mạnh Ở nghiệm thức 0,45 ppm khơng có số liệu lần thu thứ cá chết Bảng 4.9: Sự biến ñộng tỷ lệ huyết cầu (%Hct) cá q trình thí nghiệm Lần thu Nghiệm thức ppm Trước thuốc 0,15 ppm 0,3 ppm 0,45 ppm 27,2±2,6Aa 29,12±1,54Aa 27,71±1,65Ba 24,09±2,69Aa 26,61±3,34Aab 22,07±1,1Aa 33,04±2,09Bb 26,9±2,87Aa 26,24±2,47Aba ngày tx thuốc 24,84±1,22Aa tuần tx thuốc 28,29±2,08Aa Số liệu trình bày trung bình ± độ lệch chuẩn Các giá trị hàng theo chữ (a, b, c, d) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p> 0,05) Các giá trị cột theo chữ (A, B, C, D) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p> 0,05) d) Biến động thể tích hồng cầu (MCV) Qua bảng 4.10 cho thấy thể tích hồng cầu nghiệm thức lần thu lần thu nghiệm thức ñều có chiều hướng tăng so với nghiệm thức đối chứng khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Ở nghiệm thức 0,45 ppm khơng có số liệu lần thu thứ cá chết 36 Bảng 4.10: Thể tích hồng cầu (MCV) (µ 3) cá q trình thí nghiệm Lần thu Nghiệm thức ppm 0,15 ppm 0,3 ppm 0,45 ppm Trước thuốc 115,93±6,32Aa 112,88±8,06Aa 111,45±6,01Aa 158,21±45,15Aa ngày tx thuốc 135,98±15,07Aa 132,7±16,8Aa 165,85±31,33Aa 139,51±7,44Aa tuần tx thuốc 120,62±5,88Aa 139,34±9,19Aa 117,77±7,54Aa Số liệu trình bày trung bình ± độ lệch chuẩn Các giá trị hàng theo chữ (a, b, c, d) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p> 0,05) Các giá trị cột theo chữ (A, B, C, D) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p> 0,05) 4.3 Kết so sánh số tiêu huyết học thí nghiệm 4.3.1 So sánh số lượng hồng cầu (106 tb/mm3) cá sau ngày tiếp xúc thuốc Qua bảng 4.11 cho thấy số lượng hồng cầu thí nghiệm có xu hướng gĩm theo nồng độ khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê, song nghiệm thức 0.45 ppm thí nghiệm tăng so với thí nghiệm khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Như số lượng hồng cầu tăng đột ngột nghiệm thức có nồng độ thuốc cao Vì MG cản trở hơ hấp cá nên hồng cầu từ kho dự trữ huy ñộng ñến mang ñể lấy ñủ oxy cung cấp cho tế bào thể Bảng 4.11: Số lượng hồng cầu (106 tb/mm3) cá sau ngày tiếp xúc thuốc Nghiệm thức TN 0,15 ppm 0,3 ppm 0,45 ppm Tiếp xúc tức thời 2,3±0,82a 2,2±0,61a 2,2±0,99a Tiếp xúc dài hạn 2,13±0,66a 1,59±0,65a 2,44±0,65a Số liệu trình bày trung bình ± độ lệch chuẩn Các giá trị hàng, cột theo chữ (a, b, c, d) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p> 0,05) 37 4.3.2 So sánh số lượng bạch cầu (105 tb/mm3) cá sau ngày tiếp xúc thuốc Qua bảng 4.12 cho thấy số lượng bạch cầu thí nghiệm có xu hướng giãm dần theo nồng ñộ Tuy nhiên khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Kết cho thấy số lượng bạch cầu thí nghiệm ln thấp thí nghiệm điều chứng tỏ số lượng bạch cầu giãm cá bắt ñầu tiếp xúc thuốc (MG) Kết nghiên cứu có tương ñồng với kết nghiên cứu Lê Nguyễn Hạnh ðoan (2008) Bảng 4.12: Số lượng bạch cầu (105 tb/mm3) cá sau ngày tiếp xúc thuốc Nghiệm thức TN 0,15 ppm 0,3 ppm 0,45 ppm Tiếp xúc dài hạn 1,37±0,62a 1,22±0,53a 0,66±0,45a Tiếp xúc tức thời 1,39±0,77a 0,86±0,57a 0,52±0,37a Số liệu trình bày trung bình ± ñộ lệch chuẩn Các giá trị hàng, cột theo chữ (a, b, c, d) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p> 0,05) 4.3.3 So sánh số lượng tỷ lệ huyết cầu (%Hct) cá sau ngày tiếp xúc thuốc Qua bảng 4.13 cho thấy tỷ lệ huyết cầu thí nghiệm có xu hướng tăng theo nồng độ khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Song thí nghiệm tỷ lệ huyết cầu lại có xu hướng giãm theo gia tăng nồng ñộ nghiệm thức 0,3 ppm khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nghiệm thức 0.15 ppm 0.45 ppm Bảng 4.13: Số lượng tỷ lệ huyết cầu (%Hct) cá sau ngày tiếp xúc thuốc Nghiệm thức TN 0,15 ppm 0,3 ppm 0,45 ppm Tiếp xúc dài hạn 28,38±1,91a 34,84±1,91a 32,40±3,41a Tiếp xúc tức thời 26,61±3,34a 22,07±1,1b 38 33,04±2,09a Số liệu trình bày trung bình ± độ lệch chuẩn Các giá trị hàng, cột theo chữ (a, b, c, d) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p> 0,05) 4.3.4 So sánh thể tích hồng cầu (µ3) cá sau ngày tiếp xúc thuốc Qua bảng 4.14 cho thấy thể tích hồng cầu thí nghiệm nghiệm thức 0,3 ppm tăng nhanh so với nghiệm thức 0,45 ppm khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Bảng 4.14: Thể tích hồng cầu (µ 3) cá sau ngày tiếp xúc thuốc Nghiệm thức TN 0.15 ppm 0.3 ppm 0.45 ppm Tiếp xúc dài hạn 133,94±14,27a 178,11±34,81a 158,13±14,3a Tiếp xúc tức thời 132,70±16,8a 165,85±31,33a 139,51±7,44a Số liệu trình bày trung bình ± độ lệch chuẩn Các giá trị hàng theo chữ (a, b, c, d) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p> 0,05) 4.3.5 So sánh số lượng hồng cầu (106 tb/mm3) cá sau tuần tiếp xúc thuốc Qua bảng 4.15 4.16 cho thấy số lượng hồng cầu bạch cầu thí nghiệm có xu hướng giãm theo nồng ñộ.Tuy nhiên số lượng hồng cầu bạch cầu thí nghiệm nghiệm thức 0,3 ppm khác biệt có ý nghĩa thống kê so với thí nghiệm Ở nghiệm thức 0,45 ppm khơng có số liệu thí nghiệm cá chết Bảng 4.15: Số (106 tb/mm3) tuần tiếp xúc Nghiệm thức TN 0,15 ppm 0,3 ppm Tiếp xúc dài hạn 3,0±0,58a 2,98±0,33a Tiếp xúc tức thời 1,99±0,71b lượng hồng cầu cá sau thuốc 2,36±1,0a Số liệu trình bày trung bình ± độ lệch chuẩn Các giá trị hàng, cột theo chữ (a, b, c, d) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p> 0,05) 39 Bảng 4.16: Số lượng bạch cầu (105 tb/mm3) cá sau tuần tiếp xúc thuốc Nghiệm thức TN 0,15 ppm 0,3 ppm Tiếp xúc dài hạn 1,7±0,69a 0,63±0,2a Tiếp xúc tức thời 0,97±0,28b 1,17±0,45a Số liệu trình bày trung bình ± độ lệch chuẩn Các giá trị hàng, cột theo chữ (a, b, c, d) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p> 0,05) 4.3.6 So sánh số lượng tỷ lệ huyết cầu (%Hct) cá sau tuần tiếp xúc thuốc Qua bảng 4.17 cho thấy tỷ lệ huyết cầu thí nghiệm có xu hướng tăng dần khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Ở nghiệm thức 0,45 ppm khơng có số liệu thí nghiệm cá chết Bảng 4.17: Số lượng tỷ lệ huyết cầu (%Hct) cá sau tuần tiếp xúc thuốc Nghiệm thức TN 0.15 ppm 0.3 ppm Tiếp xúc dài hạn 31,2±1,38a 32,04±3,35a Tiếp xúc tức thời 26,9±2,87a 26,24±2,47a Số liệu trình bày trung bình ± độ lệch chuẩn Các giá trị hàng, cột theo chữ (a, b, c, d) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p> 0,05) 4.3.7 So sánh thể tích hồng cầu (µ3) cá sau tuần tiếp xúc thuốc Qua bảng 4.18 cho thấy thể tích hồng cầu thí nghiệm có xu hướng giãm theo gia tăng nồng độ Tuy nhiên thí nghiệm nghiệm thức 0,15 ppm khác biệt có ý nghĩa thống kê so với thí nghiệm nghiệm thức Ở nghiệm thức 0,45 ppm khơng có số liệu thí nghiệm cá chết 40 Bảng 4.18: Thể tích hồng cầu (106 tb/mm3) cá sau tuần tiếp xúc thuốc Nghiệm thức TN 0,15 ppm 0,3 ppm Tiếp xúc dài hạn 105,22±3,35a 107,75±10,09a Tiếp xúc tức thời 139,35±9,2b 117,77±7,5a Số liệu trình bày trung bình ± độ lệch chuẩn Các giá trị hàng, cột theo chữ (a, b, c, d) khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê (p> 0,05) 4.4 Kết so sánh tỷ lệ sống thí nghiệm Qua kết Hình 4.10 cho thấy tỷ lệ sống thí nghiệm giãm dần theo nồng độ, tỷ lệ sống thí nghiệm ln thấp thí nghiệm Tuy nhiện tỷ lệ sống thí nghiệm thí nghiệm khác biệt khơng có ý nghĩa thống kê Như nồng ñộ MG thời gian tiếp xúc với MG tỉ lệ nghịch với tỷ lệ sống cá Nồng ñộ cao, thời gian tiếp xúc lâu tỷ lệ sống cá thấp Ở nghiệm thức 0,45 ppm khơng có số liệu thí nghiệm cá chết TỶ LỆ SỐNG 120.00 a a a a a P h ầ n tr ă m ( % ) 100.00 80.00 TN 60.00 TN a 40.00 20.00 0.00 0,15 0,3 Nồng ñộ MG (ppm) 41 HInh 4.10: Ty lệ sống thI nghiệm(TN1: tiếp xúc dài hạn; TN: tiếp xúc tức thời) Phần 5: KẾT LUẬN VÀ ðỀ XUẤT 5.1 Kết luận + MG làm giãm cuang dộ ho hấp nhung làm tang nguàng oxy cüa cá, nồng dộ cao thI ânh huang tang + Số luqng hồng cầu tang dần theo nồng dộ a câ thI nghiệm + Khi cá tiếp xúc vâi MG thai gian tức thai (6 gia) hay thai gian dài (2 ngày) thI số luqng bạch cầu, ti lệ huyết cầu dều có xu huâng giãm theo gia tang nồng dộ + Khi cá tiếp xúc vâi MG thai gian dài (2 gia) thI thể tIch hồng cầu có xu huâng giãm theo nồng dộ Nhung cá tiếp xúc vâi MG thai gian tức thai (2 tuần) thI thể tIch hồng cầu lại có xu huâng tang theo nồng dộ + Ty lệ sống cüa cá ti lệ nghjch vâi nồng dộ MG thai gian tiếp xúc vâi MG + Tiếp xúc MG thai gian tức thai së có lqi han cho cá phâi su dụng MG 5.2 ðề xuất + Tiến hành thI nghiệm vâi thai gian dài han dể biết duqc khâ nang ânh huang cüa MG dến tang truang cüa cá Tra + Phân tIch khâ nang tồn luu cüa MG a nồng dộ thI nghiệm dể biết duqc thai gian thâi hồn tồn cüa MG LMG Từ dó khuyến cáo nồng dộ thai gian su dụng hqp lý 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO Alderman, D.J., Polglase, J.L., 1984 A comparative investigation of the effects of fungicides on Saprolegnia parasitica and Aphanomyces astaci Trans Br Mycol Soc 83, 313–318 Amlacher, E., 1961 The effects ò MG ò fish, fish pấites (Ichthyophthirius, Trichondina), small crustaceans and uater plant Deutsche Fisher Zeitung 8, 1215 Burchmore, S., Ưilkinson, M., 1993 Proposed enviromenttal quality standards for MG in water (DWE 9026) Department ò the inveroment, report no 3167/2 Water Rếarch Center, Marlow, Buckinghamshire, UK ðỗ Thj BIch Ly (2004) Khâo sát tuang quan yếu tố moi truang nuâc ao nuoi cá tra thâm canh Luận van tốt nghiệp dại học ðỗ Thj Thanh Huang (1997) Ảnh huang cüa Basudin 40 EC lên thay dổi chi tiêu sinh lý huyết học cá chép, ro phi mè vinh Luận van thạc sĩ ðỗ Thj Thanh Huang Châu Tài Tâo (2004) Khâo sat dự thay dổi số chi tiêu sinh lý cüa tom sú (penaeus monodon)trong moi truang nuoi có dộ mặn thấp Tạp chI khoa học ðại Học Cần Tha, chuyên ngành thüy sân Trang 91-95 ðỗ Thj Thanh Huang Trần Thj Thanh Hiền (2000) Bài giâng Sinh lI dộng vật thüy sinh ðòan Nhật Phuang Bài giâng Một số vấn dề huyết học cá Duang Hâi Toàn (2006) Nghiên cứu ânh huang cüa Malachite Green lên biến dổi số chi tiêu sinh hóa tồn luu cá tra a giai doạn giống Luận van tốt nghiệp dại học 10 Duang Nhật Long (2003) Giáo tInh Kỹ thuật nuoi thüy sân nuâc 11 Hồ Thj Thanh Tuyến (2008) Ảnh huang cüa mật dộ khang sinh dến số chi tiêu sinh lý, sinh hóa cüa cá tra (pangasianodon hypophthalmus) nuoi ao Luận van tốt nghiệp cao học 43 12 Hrubec, T.C., Cardinale, J.L., and Smith, S.A., 2000 Hematology and plasma chemistry reference intervals for cultured tilapia (Oreochromis Hybrid) Vet Clin Pathol., 29(1): 7-12 13 Lê Bâo Ngọc (2004) ðánh giá chất luqng moi truang ao nuoi cá tra thâm canh a xã Tân Lộc huyện Thốt Nốt Thành phố Cần Tha Luận van cao học 14 Lê Nguyễn Hạnh ðoan (2008) Nghiên cứu ânh huang cüa Malachite Green lên huyết học tang truang cüa cá tra giống nuoi bể Luận van tốt nghiệp dại học 15 Lê Thj Kim Liên, Nguyễn Quốc Thjnh (2004) Bài giâng Thuốc hóa chất nuoi trồng thüy sân 16 Lê Van Cát & ctv (2006) Nuâc nuoi thüy sân chất luqng & giâi pháp câi thiện chất luqng Nhà xuất bân khoa học kỹ thuật (Hà Nội) 17 Leteus, F and Meyer, F.P., 1972 Mixture of MG and formaline for controlling Ichthyphthrius and other protozoan parasites of fish Prog Fish Cult 34 (1), 2126 18 Luang Thj Diễm Trang (2009) Ảnh Huang cüa Malachite Green lên sinh lý, sinh hóa tồn luu cá Tra Luận van tốt nghiệp cao học 19 Nguyễn ChInh (2005) ðánh giá tInh hInh su dụng thuốc thú y thüy sân nuoi cá Tra (Pangasius hypophthalmus Sauvage, 1878) thâm canh a An Giang Cần Tha Luận van cao học 20 Nguyễn Thj Kim Liên (1998) Ảnh huang cüa thuốc diệt cỏ Basudin 40 ND lên chi tiêu sinh lý, huyết học hoạt tInh cüa men Acetylchlirinesterase cüa cá ro phi cá mè vinh Luận van tốt nghiệp ðại học 21 Nguyễn Van Cong (2000) Giáo trInh dộc chất học thüy vực 22 Nguyễn Van Kiểm (2004) Giáo trInh sân xuất giống 23 Phạm Thanh Tuấn (2004) Khâo sát buâc dầu tInh hInh su dụng thuốc thú y thüy sân nghề nuoi cá Tra thâm canh a tinh ðồng Tháp Luận van tốt nghiệp dại học 24 Phạm Van Khánh (1996) Sinh sân nhân tạo cá tra a ðồng Bằng Song Cuu Long Luận án phó tiến sĩ khoa học nong nghiệp 45 44 25 Phan Thj Hừng ( 2004) Nghiên cứu cấu trúc mo biến dộng số luqng tế bào hồng cấu cá Tra (Pangasius hypophthalmus) bj bệnh vàng da Luận van ðại học 26 Schnick, R.A.,1988 The impetus to register new therapeutants for aquaculture Prog Fish Cult 50, 190-196 27 Srivastava, S.J., Singh, N.D., Srivastava, A.K., Sinha, R., 1995a Acute toxicity of MG anh its effects on certain blood parameters of a catfish, Heteropneustes fossilis Aquat Toxicol 31, 241-247 28 Steffens, W., Leider, U., Wehring, D., Hattop, W.H., 1961 Moglichkeiten und Gefahrn derr Anwendung von Malachitgrun in der fischerei Zeitshrift fur Fisherie 10, 745-771 29 Truang Quốc Phú ctv (2006) Giáo trInh quân lý chất luqng nuâc nuoi trồng thüy sân 30 Waiwood, K.G and P.H Johansen 1974 Oxygen Consumption and Activity White Sucker (Catostomus commersoni), in Lethal anh Nonlethals Organochlorine Insecticide, Methoxychlor Water Res.,8,401 31 Werth, G., 1958 Die erzeugung von storungen im erbgefuge und von tumoren durch experimenttelle gewebsanoxie Arzn Forsch 8, 725-744 32 Website: http://agriviet.com 33 Website: http://en.wikpedia.org/wiki/Malachite-green Cập nhật ngày 25/05/07 34 Website: http://fistenet.gov.vn Cập nhật ngày 19/11/08 35 Website: http://www.khoa học.net 36 Website: http://www.khoahocthuysan.org 37 Website: www.google.com.vn 45 11 ... người Vì vậy, tìm hiểu ? ?Ảnh hưởng thời gian tiếp xúc Malachite Green lên số tiêu huyết học tỉ lệ sống cá Tra (Pangasianodon hypophthalmus)? ?? ñược ñề xuất thực 1.2 Mục tiêu ñề tài Nhằm ñánh giá... khác lên tiêu sinh lý (tiêu hao oxy, ngưỡng oxy) cá tra - ðánh giá thay ñổi tiêu huyết học, phục hồi tỉ lệ sống cá Tra tiếp xúc với MG nồng ñộ thời gian tức thời (ngắn) - ðánh giá thay ñổi tiêu huyết. .. lệ sống cá Tra (Pangasianodon hypophthalmus)? ?? ñược thực từ tháng 04/2009 ñến 06/2009 nhằm mục tiêu ñánh giá mức ñộ thay ñổi khả phục hồi tiêu huyết học tỉ lệ sống cá Tra theo thời gian tiếp xúc