ng th nitrofuran trong mt s loi thc ph si b sng khi ph LC/MS/MS Trn Th Hng i hc Khoa hc T  Lu ThS.  ; : 60 44 29 ng dn:  Hng Ho o v: 2012 Abstract. Gii thiu v ng c c ph dnh ng thi 4 cht chuya nitrofuran trong thc ph  ng bng LC-MS/MS. ng d       t chuya nitrofuran trong thc ph         , , u kt qu c. Keywords. ; ; Thc phm Content M U  sinh thc phn  c c c bi  th c hi b n trong thc phm khin lo ngi. c sn xu  cu v c qu dng thung lng s dt b tr  tin. T  li tn phi ngn sc kh ng hc s dng trong th u tr d u tr nh nhim i Escherichim. c s d u tr nhi ng thy si cho sc khc bi  t bin  i     ng cht chuy  a nitrofuran trong s ng lu t gia cng thy sn phm nhp kh mt s khu vc Nam M. T n lnh cm s dng trong sn xut thc phng vt ti nhiu quc gia bao gm M, Canada t lnh ct c i thc phm nhp kh u gii hn nh nht cn thc hin  i vt chuy [29] 2002,  Vit Nam, B nh cm sn xut, nhp kh dng mt s lot trong sn xuh TACN t]. Hin nay vic s d mng nh ng ti sc khng vy vi nhu cu bc thit v v m bo VSATTP hi     nh ng tht s loi thc phng i bng khi ph LC/MS/MS. NG QUAN 1.1. Gii thiu v  t ng h   -nitroc s d ng, ch yi vm, lnng thy sn (, )   u tr  nhilmonella spp, gia cm bnh t u [12].  itrofuran  Furazolidone, furaltadone, furazolidone, nitrofurazone,                   (AOZ, AMOZ, AHD, SEM)          [12]. 1.2. ng ct          1995, 0 ch ra rp cht   tt chuyt trong . V m t chuy  y  th i cht  vi khun. D     sinh sc nng tt vi vi khung th ng c vng vt, mt s cht        [7].    thp, nitrofuran  ng dit khun. Theo nhing rt t       salmonellosis, ng. Trn nitrofuran vi thc  l   ng nhanh. Nitrofuran n sc kht bin [7], khi                 .                   . ,                        [9u gii hn nh nht cn thc hii vt chuy 29].     c phm T    n trong  gia cm n phng thy sn nhp khc EU t c, , Vi25]. y trong sn phm   ki thn phn gc t  t l mc cao nh  (37%), Trung Qu (5%) trong mt lon phm bao gt hp [25]. T n thy sn nhp khu t Trung Quc nhim nitrofuran. Kt qu ln ph thy, 22/89 mu (chim 22%) b t cm nitrofuran trong [11].  .   ,  ,  2007    5            SEM (3   , 1       1     )       ng   0  3,55 ng/g. 2008    1            12,6 ng/g; 2/754                    2  2,2 ng/g [1]. 1.4.                     , :          ,    ( ),  /MS. U 2.ng, mu ng, mu t chuya nitrofuran, bao gm: AOZ, AMOZ,  Vt lin phm thc phng bao gm th gia cm. M u   ng thi 4 cht chuyc phng bng  sng khi ph LC/MS/MS. : -  ng thi 4 cht chuya nitrofuran trong thc phng bng LC-MS/MS. - ng d t chuya nitrofuran trong thc phm ng , , , gan. 2.1.2. Nu   Khm:  u kin v,  u kit   .  Th  Gii hn LOD, gii hng LOQ,  Khong tuy   ch lp li),    thu h chch). 2.1.2.2. ng d                nitrofuran c th cht chuyc ph   i. 2.2. u 2.2.1. ng khi ph  u   2.2.3. Thnh      liu ng c u 2.3.1. Dng c t b 2.3.1.1. Thit b - H thng s  ng khi ph khi ph LC/MS/MS bao gm: HPLC 20 AXL ca i ph ABI 5500 QQQ ca Aplied Biosystem: b ph lo phu nhit. - Ct s 18 . - Ct chit pha rn SPE (Oasis HLB). - c vortex VELP. - ng nht mu. -  -   -  c 0,01g). -  2 u nhit. - B u nhit 2.3.1.2 Dng c - C  -  - Pipetman, pipet nha, pipet pasteur 2 -  - Vial loi 1,8 ml. - nh mc lo - ng nghim th t cht chun t s du thuc loi tinh khi 2.3.2.1 Cht chun - AOZ 10 mg/l (Dr.EhrenstorferGmbH) tinh khit 99% - AMOZ 10 mg/l (Dr.EhrenstorferGmbH) tinh khit 99% - AHD.HCl (Dr.EhrenstorferGmbH) tinh khit 99% - SEM.HCl (Dr.EhrenstorferGmbH) tinh khit 99,5% - d 4 -AOZ (Dr.EhrenstorferGmbH) tinh khit 99% - d 5 -AMOZ (Dr.EhrenstorferGmbH) tinh khit 99% - d 2 -AHD.HCl 10 mg/l (USA) tinh khit 99% - 13 C 15 N 2 -SEM.HCl 10 mg/l (USA) tinh khit 98% t - Methanol (Merck ho tinh khit 99,9%) - Amoni acetate (Merck ho tinh khit 98%) - 2-NBA (Merck ho tinh khit 99%) - K 2 HPO 4 .3H 2 O (Merck ho tinh khit 99%) - NaOH (Merck ho tinh khit 99,9%) - HCl 37% (Merck ho tinh khit 99,9%) - nh mnh mn vch bc ct. - 2--nh mng methanol. Dung dch chun b h - K 2 HPO 4  2 HPO 4 .3H 2 nh mng c ct 2 ln. - nh mnh mc 1000 ml bc ct 2 ln. - CH 3 COONH 4  3 COONH 4 nh mnh mc 1000 ml bc ct 2 ln. 2.3.3 Pha ch cht chun - Chunh mc bng nh mc 10 ml. Bo qun  - 20 0        - Chunh mc b nh mc 10 ml. Bo qun  - 20 0        - Chunh mc bng nh mc 10 ml. - Chun SEM 1000 nh mc b nh mc 10 ml. Bo qun  - 20 0        - Hn hp chun 4 cht 1 ml chun AOZ 10 nh mc bng methanol vnh mc 10 ml. Bo qun  - 20 0        - Hn hp chun 4 chn hp chun 4 chnh mc bnh mc 10 ml. Bo qun  - 20 0        - d 4 - 4 -nh mc bnh mc 10 ml. Bo qun  - 20 0        - d 4 - 4 -nh mc bnh mc 10 ml. Bo qun  - 20 0        - d 5 - 5 -nh mc b nh mc 10 ml. Bo qun  - 20 0        - d 5 - 5 -nh mc bnh mc 10 ml. Bo qun  - 20 0        - Hn hp ni chun (d 4 -AOZ, d 5 -AMOZ, d 2 -AHD.HCl, 13 C 15 N 2 -n t 1 ml chun d 4 -AOZ 10 mg/l, d 5 -AMOZ 10 mg/l, d 2 -    13 C 15 N 2 - SEM.nh mc bnh mc 10 ml. Bo qun  - 20 0     - Hn hp ni chun (d 4 -AOZ, d 5 -AMOZ, d 2 -AHD.HCl, 13 C 15 N 2 -n n hp ni chun (d 4 -AOZ, d 5 -AMOZ, d 2 -AHD.HCl, 13 C 15 N 2 -SEM.HCl) 1 mg/l nh mc 10 ml. Bo qun  - 20 0        T QU O LUN 3.1. Khu king LC/MS/MS         d      t chuyt chuy   thu ph nn cao, hiu qu c hiu cho s nh (ch yc, NH 3 , CO 2  nhn MS i thy s dng 2-  dn xut chuy  p cht    (NPAOZ, NPAMOZ, NPAHD, NPSEM) vi nhin li. 3.1.1. Khu kin  ph    3.1.1.1. Khion m  nh  cc. Qua tham kho mt s u [12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 21, 22, 23, 26]n nh NPAOZ, NPAMOZ, NPAHD, NPSEM bng k thu n t ESI vi ch  b tu kin khi ph   ng chu   c dn xut bng 2-  khn ch  kh i vi tng cht, tng ion mu kin chy ngu bng 3.1. Bảng 3.1: Điều kiện chạy nguồn ion hóa ESI (CUR) 20 psi m (CAD) 8 psi Th  (IS) 5000 V Nhi mao qun (TEM) 400 0 C u phun (GS1) 50 psi t ca lu 40 psi Trong k thun t vi ch  b  dng (MH) +   = (M+1)     : M 0 + H +  + Ti , kt qu c ch ra  bng 3.2 Bảng 3.2: Kết quả bắn phá các ion mẹ Chuy Kh M Ion m (M+H) NPAOZ 235 236 NPAMOZ 334 335 NPSC 208 209 NPAHD 248 249 d 4 -AOZ 239 240 d 5 -AMOZ 339 340 13 C- 15 N 2 SEM.HCl 211 212 D 2 -AHD.HCl 250 251 3.1.1.2. Khu kin b      ion con Detector s d   i ph 2 l  chc la chc ion con t quan trng. Ion con phu g nht 10 ln so vi ion m c mu cao cn phi chc mc ng bng chuc dn xu detector khi ph a chn 2     u cao nh  ng. M ln nh ng, mnh ion con th  th n chi vt ni chun, la chn 1 ion c cao nht. Kt qu c  bng 3.3 Bảng 3.3: Năng lượng bắn phá và các ion con của các chất chuyển hóa nitrofuran Chuy  nitrofuran Ion m (M+H) + Ion con DP (V) CE (eV) CXP (V) NPAOZ 236 134 80 15 10 104 80 27 14 NPAMOZ 335 291 80 15 16 262 80 21 16 NPSEM 209 192 80 11 18 166 80 13 14 NPAHD 249 134 80 15 18 104 80 27 14 d 4 -AOZ 240 134 80 17 16 d 5 -AMOZ 340 296 80 15 16 13 C- 15 N 2 SEM.HCl 212 168 80 13 12 d 2 -AHD.HCl 251 134 80 15 14     : Theo qui     2002/657/EC,       (IP)            LC/MS/M,      1      2 ion con,        (IP)  4.                 [4].  , .           3.1.2. La chn c  ng thi theo khuy sn xut thit b khi ph  ng s di thit b  cn 1%, amoni acetate (0 ts da chn ct o C18           : - Ct C18 : -   150mm, - 2,1mm, -      3.1.3. Kh     cn gi dng ch  ra gipt s  ra gii gradient. Qua tham kho mt s  dng  u kin s - C -  - T  - Mn h  , n: 20 ng/ml.       : a)   Gradient 1,     3.1 : Th 0,01 12,00 14,00 15,00 20,00 % MeOH 20 90 90 20 20 3.1:           1 20 ng/ml b)   nh Gradient 2,     3.2: Th 0,01 5 8 9 12 % MeOH 20 90 90 20 20 3.2:           2 20 ng/ml c)   3,     3.3 : Th 0,01 8 10 13 13,01 % MeOH 20 90 90 20 20  3.3:           3 20 ng/ d)   4,     3.4: Th 0,01 10 12 15 15,01 % MeOH 20 90 90 20 20  3.4:           4 20 ng/ml e)   5,     3.5: Th 0,01 12,00 13,00 13,01 16,00 % MeOH 20 90 90 20 20  3.5:           5 20 ng/ml  : -  MeOH trong khong thi gian ngn (   1, gradient 2, a AOZ rt xu  ch .                 ,              -NH 2  - NH 3 + .   ,            ,         3 COONH 4 -NH 3 + . -                a chu tip theo. 3.1.4. Kht mu Qua tham kho mt s u [12, 13, 14, 16, 17, 18, 19, 21, 22, 23, 26] t s c ng d m : quy  u bng chit lng  l u bng chit pha rn. Do  t mu         . 3.1.4.1. La ch u bng chit lng  lng D ki    -NBA 10mg/ml  n hp ni chun i ng  ch chuu  y ng, l  u nhit 40 0 C  ng 10 ml K 2 HPO 4  NaOH 2M, lc    4500 rpm trong 15       Chit lp 2 ln mi ln by lng N 2  tan cn bng 1 ml H 2 O:MeOH (60:40)  Chuyn m LC/MS/MS 3.1.4.2. La ch u bng chit pha rn     :   -NBA 10mg/ml  l hn hp ni chun i ng  ch chuu  y ng, l  u nhit 40 0 C  u bng 10 ml K 2 HPO 4  NaOH 2M, l [...]... vu ̣ phân tich mẫu vào ́ thực tiễn KẾT LUẬN Trên cơ sở nghiên cứu các điều kiện thực nghiệm, với mục đích ứng dụng kỹ thuâ ̣t sắc ký lỏng khối phổ LC/ MS/ MS để tách và xác định các kháng sinh nhóm nitrofuran trong mẫu thực phẩm tươi sống, chúng tôi đã thu được các kết quả sau: 1 Đã nghiên cứu được các điều kiện chạy sắc ký lỏng khối phổ để xác định 4 chất chuyển hóa nhóm nitrofuran bao gồm: - Khảo... tài Trong bản luận văn này, do điều kiện còn hạn chế nên chúng tôi chỉ xác định được dư lượng kháng sinh nhóm nitrofuran bằng LC/ MS/ MS trong một số mẫu thực phẩm tươi sống (thịt gà, thịt lợn, thịt bò, gan) Phương pháp còn có thể được mở rộng phân tích trong những dạng nền mẫu khác nhau như: thức ăn chăn nuôi, mẫu sinh học, mẫu sữa…Vì vậy rất cần có những nghiên cứu tiếp theo để phát triển phương pháp. .. thấy phương pháp có độ đúng tốt - Độ lệch chuẩn tương đối thấp (RSD% < 13,7%) cho thấy phương pháp có độ lặp lại và chính xác cao 4 Đã ứng dụng phương pháp để phân tích các mẫu thực phẩm tại các chợ trên địa bàn Hà Nội, cho thấy phương pháp có thể ứng dụng để phân tích xác đinh d ẫn xuất nhóm ̣ nitrofuran trong thực phẩm tươi sống References Tiếng Việt 1 Nguyễn Quố c Ân (2009), Sử dụng kháng sinh. .. phép phân tích xác đinh 4 chấ t nhóm nitrofuran ̣ 3.3 Ứng dụng phƣơng pháp trong phân tích thƣc phẩ m ̣ Trên cơ sở phương pháp đã xây dựng và thẩm định, chúng tôi ứng dụng để phân tích một số loại thực phẩm tươi sống trên địa bàn Hà Nội Các kết quả được trình bày ở bảng 3.16 Bảng 3.16: Kết quả phân tích mẫu thực theo phương pháp thêm chuẩn STT Mẫu Nitrofuran AOZ 1 Thịt lợn chợ Nguyễn Cao AMOZ... sinh trong chăn nuôi thú y ở Viê ̣t Nam , Cục thú y 2 Trần Tứ Hiếu, Từ Vọng Nghi, Nguyễn Văn Ri, Nguyễn Xuân Trung (2007), Hóa học phân tích, phần 2: Các phương pháp phân tích công cụ, Nhà xuất bản Khoa học và Kỹ thuật, Hà Nội 3 Nguyễn Đức Huệ (2005), Các phương pháp phân tích Hữu cơ, Nhà xuất bản Đại học Quốc Gia Hà Nội, Hà Nội 4 Phạm Luận (2000), Cơ sở lý thuyết sắc ký lỏng hiệu năng cao(HPLC),Nhà... Đại học Quốc Gia Hà Nội 5 Nguyễn Đình Thành (2011), Giáo trình Các phương pháp tách, khoa Hóa học trường Đại học Khoa học Tự Nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội 6 Tạ Thị Thảo (2010), Giáo trình Thống kê trong Hóa học phân tích, khoa Hóa học trường Đại học Khoa học Tự Nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội 7 Bùi Thị Tho (2003), Thuốc kháng sinh và nguyên tắc sử dụng trong chăn nuôi, Nhà xuất bản Hà Nội 8 Nguyễn Văn... hiện < LOD của phương pháp, R %: Phần trăm độ thu hồi Bàn luận: Qua quá trình phân tích một số mẫu thực trên địa bàn Hà Nội, không phát hiện mẫu nào có chứa các chất nhóm nitrofuran Độ thu hồi hầu hết các chất từ 67 – 112% đáp ứng đươ ̣c qui đinh của Châu Âu ̣ 2002/657/EC Từ kế t quả đô ̣ thu hồ i này cho thấ y có thể mở rô ̣ng phương pháp cho các sản phẩ m thực phẩ m tươi số ng khác... Các phương pháp tách, khoa Hóa học trường Đại học Khoa học Tự Nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội 9 Số 54/2002/QĐ-BNN, ngày 20 tháng 06 năm 2002 về việc cấm sản xuất, nhập khẩu, lưu thông và sử dụng một số loại kháng sinh hóa chất trong sản xuất và kinh doanh thức ăn chăn nuôi của Bộ Nông nghiệp và Phát triển nông thôn 10 28 TCN 194:2004,Các chất chuyển hóa thuộc nhóm nitrofuran trong thủy sản và sản phẩm. .. nhóm nitrofuran trong thủy sản và sản phẩm thủy sản – Phương pháp định lượng bằng sắc ký lỏng khối phổ - khối phổ, Bộ Thủy Sản 11 Trang web (2008), http//vietbao.vn/Kinh-te/My-kiem-tra-thuy-san-nuoi-Trung-QuocViet-Nam-lo-ngai/55154852/93 Việt Báo Tiếng Anh 12 Alexander Leitner, Peter Zollner, Wolfgang Lindner (2001),“Determination of the metabolites of nitrofuran antibiotics in animal tissue by high-performance... SEM 0,9995 0,9984 Nhận xét: tỉ lệ diện tích pic nitrofuran/ diện tích pic nội chuẩn (IS) trong khoảng 0,5 – 5 ng/ml có hệ số tương quan R2 > 0,99 3.2.1.2 Đường chuẩn của các chất nhóm nitrofuran không sử dụng nội chuẩn (để đánh giá hiệu suất thu hồi) Bảng 3.8: Phương trình hồi quy của 4 nitrofuran không sử dụng nội chuẩn TT Chất Phƣơng trình hồi qui Hệ số R 1 AOZ y = (14569 ± 32560) + (307751 ± 13990)x . chất chuyển hóa thuộc nhóm nitrofuran trong thủy sản và sản phẩm thủy sản – Phương pháp định lượng bằng sắc ký lỏng khối phổ - khối phổ, B Thy Sn. 11 chuẩn của các chất nhóm nitrofuran sử dụng nội chuẩn (để phân tích mẫu thực) Bảng 3.7: Phương trình hồi quy 4 nitrofuran sử dụng nội chuẩn TT Cht