Đang tải... (xem toàn văn)
ĐẶT VẤN ĐỀ 1 Chương 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3 1.1. Đại cương về xét nghiệm giải phẫu bệnh vi thể: 3 1.2. Vai trò của kỹ thuật trong chẩn đoán tế bào học 3 1.3. Tổng Quan về Hematoxylin – Eosin. 5 1.4. K
Trang 1ĐẶT VẤN ĐỀ
Cho tới nay chẩn đoán mô bệnh học vẫn được coi là tiêu chuẩn vàngtrong việc xác định bệnh Trong khoảng hai thập niên trở lại đây, với sự pháttriển nhanh của khoa học công nghệ trong lĩnh vực thăm dò chẩn đoán nhưnội soi, siêu âm, chụp cắt lớp vi tính, chụp cộng hưởng từ, nuôi cấy tế bào,bảo quản và ghép mô…đã tạo điều kiện cho sinh thiết chẩn đoán mô bệnh họcphát triển cả về số lượng lẫn quy mô Trong đó, bộ ba chẩn đoán gồm siêu âm– nội soi – sinh thiết đã trở thành mũi nhọn quan trọng Sự phát triển này đãngày càng khẳng định vị thế của lĩnh vực chẩn đoán mô bệnh học, góp phầnchẩn đoán sớm nhiều tổn thương và nó rất hữu ích cho chẩn đoán và điều trịcũng như phòng bệnh Một xét nghiệm mô bệnh học thường được tiến hànhtheo một chuỗi kỹ thuật liên hoàn bao gồm: 1).Lấy bệnh phẩm, cắt lọc; 2).Cốđịnh bệnh phẩm; 3).Gửi xét nghiệm; 4).Vùi bệnh phẩm; 5).Cắt mảnh và dán;6).Nhuộm; 7).Đọc kết quả Mỗi khâu đều có những yêu cầu riêng và liên quanrất mật thiết với nhau, ảnh hưởng trực tiếp đến kết quả chẩn đoán mô bệnhhọc Trong các khâu kể trên thì khâu đầu và cuối được thực hiện bởi các bácsĩ chuyên khoa, các khâu còn lại đều được thực hiện bởi các kỹ thuật viên giảiphẫu bệnh làm việc trong labo Tùy theo mục đích và yêu cầu của xét nghiệmmà việc xử lý kỹ thuật ở từng khâu có những điểm khác nhau và có nhữngquy trình riêng.
Kỹ thuật nhuộm Hematoxylin – Eosin (HE) là kỹ thuật phổ biến nhấttrong các kỹ thuật mô học cũng như mô bệnh học, vì hầu hết các chẩn đoánmô bệnh học đều chỉ cần và (hoặc) phải dựa vào kỹ thuật này Vì vậy nó đượcgọi là kỹ thuật thường quy cho mọi loại xét nghiệm mô bệnh học trong labogiải phẫu bệnh.
Trang 2Hiện nay, xét nghiệm mô bệnh học ở các cơ sở y tế trung ương trung bìnhcó tới gần 50% trường hợp sai sót các loại trong các khâu kỹ thuật và làmgiảm chất lượng chẩn đoán, trong đó khoảng 10% xét nghiệm âm tính hoặcchẩn đoán sai vì lý do kỹ thuật (3) Xuất phát từ tính thực tiễn của kỹ thuậtnhuộm HE nhằm đảm bảo chất lượng trong chẩn đoán mô bệnh học, là mộtsinh viên sắp tốt nghiệp, một Cử nhân Kỹ thuật Y học tương lai nên qua bàikhóa luận này em mong muốn rằng:
1 Thực hiện thành thạo một chuỗi kỹ thuật liên hoàn từ bệnh phẩmra những tiêu bản nhuộm H - E.
2 Bước đầu đánh giá chất lượng vi thể và một số yếu tố ảnh hưởngđến tiêu bản nhuộm H - E.
2
Trang 3Trong bệnh học, đây là một loại xét nghiệm có tính chính xác cao và độtin cậy khá lớn nếu như kỹ thuật tiến hành đúng quy tắc và người đọc cónhững kinh nghiệm nhất định Đã từ lâu, xét nghiệm giải phẫu bệnh vi thể đãtrở thành người trợ thủ đắc lực cho nhà lâm sàng học và càng không thể thiếuđược đối với nhà nghiên cứu y học.
Trên thực tế, đối tượng xét nghiệm giải phẫu bệnh vi thể rất phong phú,phạm vi áp dụng ngày càng được mở rộng, ở các nước cũng như ở Việt Nam,đặc biệt trong lĩnh vực phát hiện bệnh Ngày nay, hầu như mọi chuyên khoalâm sàng và phần lớn những chuyên khoa cận lâm sàng đều có sử dụng nhữngkết quả xét nghiệm giải phẫu bệnh vi thể vào công tác giảng dạy, nghiên cứukhoa học hoặc phục vụ bệnh nhân.
1.2 Tổng Quan về Hematoxylin – Eosin
Hematoxylin: là một phẩm nhuộm tự nhiên, chiết xuất bằng ete từ lõi
cây Haematoxylon campechianum mọc trong vùng nhiệt đới Campeche ởMexico.
Bản thân Hematoxylin không có đặc tính nhuộm, mà nó phải trải quaquá trình oxy hóa để biến thành Hematein mới nhuộm được: đó là hiện tượng
Trang 4“Hematoxylin đã chín” Sự oxy hóa này xảy ra do để dung dịch nhuộm từ 6ngày đến 3 tuần để mở dưới ánh sáng mặt trời hoặc bằng các tác nhân gây oxyhóa như: iodat sodium, permanganat, potassium, oxytmereua Trong quá trìnhchín Hematoxylin (C16H14O6) mất 2 nguyên tử H để trở thành Hematein(C16H12O6) có sự sắp xếp kiểu quinoit trong vòng dưới đây:
H×nh 1.C«ng thøc cña HematoxylinH×nh 2.C«ng thøc cña Hematin
Sự oxy hóa liên tục của Hematein sẽ có hình thành một hợp chất khôngmàu, chính vì vậy mà một số người cho rằng quá trình oxy hóa chậm một cáchtự nhiên tốt hơn là sự oxy hóa bằng chất hóa học Phản ứng do chất hóa học sẽgây nên sự oxy hóa Hematein tức khắc và quá trình oxy hóa cứ tiếp tục nênhình thành một hợp chất không màu, làm cho dung dịch nhuộm không lâu bền.
Hematein bản thân ít ưa các tổ chức, vì vậy nên phải dùng một chất gắnmàu thường là aluminium dưới thể alun (alun ammoniac, potassium hay sắt):chất sơn được hình thành có tích điện dương mạnh và như vậy giống nhưnhững phẩm nhuộm bazơ mạnh nên cố định trên các acid nucleic, đặc biệtacid nucleic của nhân Các sự khác nhau về đặc tính nhuộm phụ thuộc vàocách pha chế dung dịch Hematoxylin và thành phần gắn màu.
Bảng dưới đây nêu lên ái tính của Hematoxylin tùy theo chất gắn màu:
Nhân Vỏ myelin
Aluminium, sắt, tungsten Chromium, đồng, sắt
4
Trang 5 Sợi chun Dây keo
Sợi thần kinh đệm, sợi biểu mô Trục thần kinh
Mucin Tơ huyết Mitochondri
Sắt, Iốt Molybden Tungsten Chì
Aluminium Tungsten Sắt
Thuốc nhuộm hay dùng để nhuộm bào tương là Eosin Nó có đặc tính dễtan trong nước và có màu huỳnh quang vàng - xanh lá cây nhạt [2], [3]
Hình 3 Công thức của Eosin
Với nguồn gốc và đặc tính đặc biệt như vậy nên kỹ thuật nhuộmHematoxylin được tiến hành như sau:
1.3 Kỹ thuật cố định, pha, vùi bệnh phẩm, đúc bloc, cắt và dán mảnh,nhuộm tiêu bản H&E:
1.3.1 Kỹ thuật cố định
Cố định là làm bất động những cấu trúc của tổ chức cũng như của tế bàonhưng vẫn tồn tại tới mức tối đa hình thái của chúng Nói khác đi, cố địnhmột tổ chức là giết chết những thành phần của tổ chức đó nhưng vẫn bảo quảnchúng trong một tình trạng gần với lúc sống nhất Trừ một số trường hợp cần
Trang 6bệnh phẩm cần cố định ngay sau khi lấy ra khỏi cơ thể Nếu như ta cố địnhbệnh phẩm không tốt thì sẽ làm giảm chất lượng xét nghiệm còn cố định hỏngthì không thể sửa chữa được.
Bệnh phẩm sau khi lấy ra khỏi cơ thể sẽ gây ra thoái hóa, hoại tử giả tạokhi nhận định, các tế bào sẽ bị tiêu hủy bởi men nội bào, hình thái của chúngtrở nên méo mó và sẽ sinh ra những hình ảnh giả tạo gây nhầm lẫn trongchuẩn đoán Mặt khác, việc cố định chậm sẽ gây tiêu hủy các bào quan,không có lợi cho các nghiên cứu về men học đồng thời cũng không đảm bảocho việc gắn màu tốt khi nhuộm.
Một bệnh phẩm được cố định tốt phải đảm bảo những nguyên tắc sau:1 Mọi bệnh phẩm phải được cố định ngay sau khi lấy.
2 Không được làm dập nát bệnh phẩm.3 Bệnh phẩm không cắt quá dày.
4 Đủ lượng dung dịch cố định cần thiết.5 Thời gian cố định dung dịch thích hợp.6 Không để bệnh phẩm dính vào thành lọ.7 Chú ý những trường hợp cố định đặc biệt:
- Glycogen: cố định bằng dung dịch Grendre.
- Mỡ: cố định bằng dung dịch formol 10%, cắt lạnh và nhuộmSoudan.
Một số dung dịch cố định thông dụng:
Dung dịch formol đệm trung tính 10%:
Formaldehyde 37% - 40% 100mlNước cất 900mlSodium phosphate monobasic (NaH2PO4) 4g
6
Trang 7Sodium phosphate dibasic anhydrous (NaH2PO4 khan) 6.5g Dung dịch formol 10%:
Formandehyde 37% - 40% 100mlNước cất hai lần 900ml
Dung dịch cố định Bouin:
Dung dịch nước bão hòa acid picic 75mlFormaldehyde 37% - 40% 20mlAcid acetic lạnh, nguyên chất 5ml
Dung dịch Grende:
Cồn 95% bão hòa acid picric 80mlFormandehyde 37% - 40% 15mlAcid acetic lạnh, nguyên chất 5ml
1.3.2 Pha
Không được làm giập nát bệnh phẩm: khi pha không được dùng kẹp cómấu, lưỡi dao pha phải sắc, mỏng và dài, cắt một chiều không được ray đi raylại trên một vị trí của bệnh phẩm và bệnh phẩm khi pha phải được đặt trênmột miếng lie, gỗ hoặc plastic.
Các mẫu bệnh phẩm dùng trong kỹ thuật mô học thường được cắt dày từ3 - 5 mm Với bệnh phẩm mềm (não,…) có thể cố định vài giờ cho cứng sauđó mới pha lại Trong trường hợp chuyển đúc bằng máy, bệnh phẩm khôngđược cắt dày hơn chiều cao của lòng khuôn nhựa.
1.3.3 Vùi bệnh phẩm
Cấu trúc tế bào hoặc mô chỉ nhìn thấy được dưới kính hiển vi khi chúngđược cắt thành những lát mỏng cỡ micromet để cho ánh sáng đi qua Khi đóta mới quan sát được chi tiết của tế bào, hình dạng hay cách sắp xếp của
Trang 8chúng Cố định mới chỉ giết chết tế bào và giữ cho các thành phần của chúngđược bất động ở trạng thái tĩnh Nếu đem cắt ngay thành các lát cắt mỏng,mối liên quan giữa các tế bào cũng như cấu trúc mô bị biến đổi, thậm chí bịđảo lộn do tác động cơ học Muốn vậy người ta phải tạo khuôn cho bệnhphẩm, nghĩa là phải làm cho một chất nào đó ngấm sâu vào tế bào hoặc mômà khi cắt không làm biến dạng cấu trúc của chúng.
Có nhiều chất được dùng cho phương pháp này nhưng chất hay đượcdùng hơn cả là parafin Hiện có nhiều loại parafin với các điểm nóng chảykhác nhau nhưng loại thích hợp nhất dùng trong kỹ thuật mô học là parafin cónhiệt độ nóng chảy từ 56 - 58oC Nếu dùng nhiệt độ nóng chảy của parafincao hơn bắt buộc người ta phải chỉnh nhiệt độ của tủ parafin lên nữa, hậu quảlàm cho bệnh phẩm chín, khó cắt và bắt mầu tồi Ngoài ra, parafin còn đượcpha thêm một số chất phụ gia để làm tăng chất lượng của nó như: histoplas,paraplas… Song parafin không tan trong nước (bệnh phẩm lại có nhiều nước)và cồn nên bệnh phẩm phải được khử nước bằng cồn có nồng độ thấp (80o)đến cao (cồn tuyệt đối) rồi khử cồn bằng xylen Tuy nhiên, với những máychuyển bệnh phẩm vừa lắc, vừa ly tâm thì việc loại hết nước, cồn và xylentrong bệnh phẩm thường đạt kết quả tốt khi bệnh phẩm được chuyển qua từ 2- 3 lần parafin Việc tẩm parafin cho bệnh phẩm còn được đặt trong các bìnhhút chân không (có trong máy chuyển) càng làm cho parafin ngấm vào bệnhphẩm nhanh và tốt hơn.
Do các cơ sở giải phẫu bệnh chưa có đủ máy chuyển nên chúng tôi giớithiệu cả hai quy trình vùi bệnh phẩm bằng tay và bằng máy chuyển:
1.3.4 Quy trình chuyển tay:
Áp dụng cho các bệnh phẩm có chiều dày dưới 2 mm
Cồn 90o - 15 phút
8
Trang 9Cồn 95o - 15 phútCồn 100o I - 15 phútCồn 100o II - 15 phútCồn 100o III - 15 phútXylen I - 15 phútXylen II - 30 phútXylen III - 30 phútParafin I - 30 phútParafin II - 1 giờParafin III - 1 giờ
Áp dụng cho bệnh phẩm có chiều dày từ 5 mm đến dưới 8 mm
Cồn 80o - 2 giờCồn 90o - 6 giờCồn 95o - 8 giờCồn 100o I - 4 giờCồn 100o II - 6 giờCồn 100o III - 8 giờXylen I - 4 giờXylen II - 8 giờXylen III - 10 giờParafin I - 4 giờParafin II - 6 giờParafin III - 10 giờ
1.3.5 Quy trình chuyển máy:
Áp dụng cho các mảnh sinh thiết và các mảnh mô nhỏ
Thời gian cố định tối thiểu là 3 giờ.1) Rửa nhẹ trong nước chảy.
Trang 102) Cồn 80o - 10 phút.
3) Cồn 95o x 3 lần x 15 - 20 phút4) Cồn 100o x 3 lần x 15 phút/ lần5) Cồn 100o/ xylen tỉ lệ 1:1 - 15 phút6) Xylen x 2 lần x 15 phút/ lần7) Parafin x 3 lần x 15 lần/ phút
8) Parafin hút chân không từ 15 - 20 phút Nếu không có hút chânkhông thì ở (7) tăng thêm mỗi lần 5 phút.
9) Đúc bloc
Áp dụng cho các mô thông thường
1) Cồn 80o - 1 giờ
2) Cồn 95o x 3 lần x 1 giờ/ lần3) Cồn 100o x 3 lần x 1 giờ/ lần4) Xylen x 3 lần x 1 giờ/ lần5) Parafin x 3 lần x 1 giờ/ lần6) Parafin hút chân không 1 giờ7) Đúc bloc
1.3.6 Đúc bloc
Bệnh phẩm sau khi qua quá trình đúc bloc đạt yêu cầu thì có thể giữ vôthời hạn Muốn đúc bloc phải làm cho parafin ở xung quanh cũng như ở bêntrong bệnh phẩm đặc lại một cách thuần nhất Để đạt được điều này, người tadùng những khuôn bằng kim loại để trao đổi nhiệt diễn ra nhanh chóng vànước lạnh có đá Đúc bệnh phẩm phải thao tác sao cho nhiệt độ của parafin vàbệnh phẩm không chênh lệch nhiều Nếu parafin hay bệnh phẩm nguội quá sẽtạo ra một viền trắng xung quanh bệnh phẩm, khi bloc nguội hay cắt bệnh phẩmcó thể bật bloc Trên thực tế người ta đổ vào khuôn hay thanh chắn kim loại
10
Trang 11parafin lỏng đã lọc từ trước, nhúng ngay bệnh phẩm vào parafin đang lỏng này.Dùng kẹp hơ nóng để định hướng bệnh phẩm theo ý muốn (rất cần phải lưu ýkhâu này, nếu đặt bệnh phẩm không đúng mặt thì sẽ không chuẩn đoán được).Người ta chọn mặt phẳng cắt là mặt đáy Với các bệnh phẩm quá nhỏ, có thểdùng kính lúp để nhặt và đặt bệnh phẩm hoặc nhuộm bệnh phẩm với Eosin 1%cho dễ nhận.
Như vậy một tiêu bản cắt được coi là đạt yêu cầu nếu:- Mỏng đều.
- Không xước, gấp hoặc rách.
- Còn nguyên khuôn parafin quanh bệnh phẩm.
- Vị trí của mảnh cắt đặt ở 2/3 của lam từ dưới lên (1/3 của lam từ trênxuống để ghi mã số bệnh nhân, phía 2/3 dùng để dán nhãn sau khi nhuộm)lúc này bệnh phẩm nằm ở chính giữa lam kính.
Sau khi cắt có nhiều chất dùng để dán mảnh cắt lên lam kính: albumin,silan, keo casein… trong đó dung dịch albumin 1 - 2% được dùng chophương pháp nhuộm thông thường là phổ biến nhất.
1.3.8 Phương pháp nhuộm Hematoxylin - Eosin (H&E)
1.3.8.1 Thuốc nhuộm:
Trang 12Thuốc nhuộm nhân hematoxylin:
Hematoxylin là một loại thuốc nhuộm tự nhiên, nó được biết đến từ năm1863 Bản thân Hematoxylin không có đặc tính nhuộm mà phải trải qua quátrình oxy hóa mất 2 nguyên tử hydro để trở thành Hematein.
Pha dung dịch Hematoxylin nhanh:
- Cho phần A và phần B vào một bình chứa hơn 1 lít.
- Thêm 1 lít nước cất 2 lần hoặc nước đã được ion hóa Không dùng nướcmáy.
- Lắc hoặc khuấy dung dịch vài phút cho đến khi tan hoàn toàn Để yên ítnhất 1 giờ Kết quả nhuộm tốt nhất sau 12 giờ.
- Lọc trước khi dùng Có kết tủa và váng trên bề mặt là bình thường đối vớithuốc nhuộm này.
- Thời gian nhuộm có thể thay đổi từ 4 - 8 phút.
- Nếu dùng để nhuộm tế bào có thể pha thành 1.5 - 2 lít.
Thuốc nhuộm bào tương: Eosin
Với Eosin bán cùng Hematoxylin được pha như sau:- Một lọ Eosin hòa tan trong 1 lít nước cất 2 lần.- Lắc cho tan hết.
- Lọc trước khi nhuộm.
1.3.8.2 Nguyên tắc:
Đây là phương pháp nhuộm phối hợp thông dụng nhất bằng cách nhuộmkế tiếp một phẩm nhuộm nhân “bazơ” - hematin và một phẩm nhuộm bàotương “acid” - eosin.
12
Trang 13Việc nhuộm nhân được nhuộm “tăng dần”người ta dùng lại khi những cấutrúc của nhân rõ nét nhất Ngược lại việc nhuộm bào tương“giảm dần” bằngcách nhuộm sẫm lên rồi loại phẩm thừa bằng cồn có nồng độ thấp.
1.3.8.3 Phương pháp nhuộm Hematoxylin - Eosin (Hematoxylin Instant).
- Tiêu bản tẩy nến 3 lần Xylen x 2 lần/ phút.
- Chuyển vào cồn 100o, cồn 90o, cồn 80o x 2 phút mỗi bể.- Rửa nước chảy 5 phút.
- Nhuộm nhân trong dung dịch Hematoxylin nhanh từ 5 - 7 phút.- Rửa nước chảy 5 phút.
- Biệt hóa trong cồn acid (acid HCL 0.5% trong cồn 70o) vài giây.
- Rửa nước chảy ít nhất 5 phút (kiểm tra dưới kính hiển vi xem nhânnhuộm đã được chưa Nếu nhạt quá thì nhuộm thêm, ngược lại nếu sẫmquá thì tẩy tiếp trong cồn acid và rửa nước chảy tiếp 5 phút).
- Làm xanh bằng dung dịch lithi carbonat hoặc natri carbonat bão hòa.- Rửa nước chảy 5 phút.
- Nhuộm bào tương trong Eosin từ 3 - 5 phút.- Rửa qua nước.
- Loại phẩm thừa trong cồn 95o vài giây.
- Tẩy nước bằng cồn tuyệt đối Làm trong bằng Xylen Gắn lamelle bằngBaume Canada.
1.3.8.4 Kết quả:
- Nhân tế bào từ xanh - xanh đen- Bào tương từ hồng đến đỏ.- Hồng cầu màu đỏ.
Trang 15Chơng 2
đối tợng và phơng pháp nghiên cứu
1.1 Đối tượng nghiờn cứu
1.1.1.Mẫu xột nghiệm: tiờu bản nhuộm H - E
Mỗi cơ sở 200 – 500 tiờu bản.
o Khối nến được đỳc trong cassette PVC tiờu chuẩn
o Cắt mảnh độ dày 3m, nhuộm và dỏn lamell để tạo thành tiờubản hoàn thiện.
1.2 Phương phỏp nghiờn cứu
1.2.1.Thiết kế nghiờn cứu: Mụ tả cắt ngang cú phõn tớch kết hợp hồi cứu.
1.2.2.Nơi thực hiện đề tài
Labo Bộ mụn giải phẫu bệnh,
13 Lờ Thỏnh Tụng, Hoàn Kiếm, Hà Nội:
Là nơi phỏt triển cỏc kỹ năng và thành thạo một chuỗi quy trỡnh chuyển, đỳc, cắt, nhuộm từ bệnh phẩm ra những tiờu bản nhuộm HE Labo Giải phẫu bệnh viện Lao Phổi Trung Ương,
463 Hoàng Hoa Thỏm, Ba Đỡnh, Hà Nội.
Trang 16 Labo Giải phẫu bệnh Bệnh viện K2,
Làng Tựu, xã Tam Hiệp,Thanh trì, Hà Nội. Labo Giải phẫu bệnh Bệnh viện 108,
Số 1 Trần Hưng Đạo, Hai Bà Trưng, Hà Nội.
1.2.3.Phương tiện nghiên cứu:
Kính hiển vi quang học
1.2.4.Quy trình nghiên cứu
Làm thuần thục kỹ thuật tại bộ môn. Đến các cơ sở
o Quan sát, ghi chép
o Theo dõi quy trình kỹ thuật vi thể nhuộm H – E do kỹ thuật viêntại cơ sở tiến hành
o Phát hiện các lỗi hay gặp ở các cơ sở
Đối chiếu lỗi với quy trình làm để phát hiện ra lỗi xảy ra ở khâu nào. Đối chiếu tiêu bản có lỗi với tiêu bản cùng lô thực hiện để phát hiện
nguyên nhân gây ra lỗi.
1.2.5.Nhận định kết quả
Các tiêu bản được nhận định trên kính hiển vi quang học ở các độphóng đại khác nhau: X10; X40
Chất lượng tiêu bản được đánh giá theo ba mức độ:
1 Không đạt yêu cầu: không chẩn đoán được hoặc tiêu bản quá xấu docác lỗi như: mảnh cắt quá dày, rách nát hoặc nhăn nhúm, nhuộm quáđậm hoặc quá nhạt màu, nhân tế bào bị chợt, tế bào nát…
2 Đạt yêu cầu: Có thể nhận định được kết quả mặc dù còn có một sốlỗi kỹ thuật như: bị xước, nhăn, bẩn, có phần bị bong… nhưng vẫncòn nguyên vẹn cấu trúc và màu sắc rõ ràng tương phản.
16
Trang 173 Tốt: Tiêu bản cắt mỏng đều, không gấp, không rách xước, màu của nhân và bào tương rõ nét, tương phản…
Labo Giải phẫu bệnh của
Trang 183.2 Đánh giá kết quảvà một số hình ảnh minh họa
3.2.1 Labo Xét nghiệm Giải phẫu Bệnh – Bệnh viện Lao phổi Trung Ương:
- Các tiêu bản không đạt: 9/212, chiếm 4,2%; tiêu bản đạt: 146/212,chiếm 68,9%; tiêu bản tốt: 57/212, chiếm 26,9% Đa số các tiêu bản khôngđạt có hiện tượng “Chợt nhân” (chiếm 3,3% tổng số tiêu bản) ngoài ra một sốtiêu bản rách, nhăn nhúm, mất mô.
- Đối chiếu với các mẫu tương tự, cùng lô xét nghiệm cho thấy lý dochính thuộc về lỗi cố định bệnh phẩm: Các phòng khoa đều được nhận hóachất cố định Tuy nhiên, do không chú ý hoặc(và) không để ý đến những ảnhhưởng của việc cố định bệnh phẩm đến chất lượng xét nghiệm giải phẫu bệnhnên để hóa chất quá lâu, bảo quản không tốt làm chất lượng hóa chất cố địnhbị giảm Đối với bệnh phẩm lớn thường không cố định vẫn chuyển đến Laboxét nghiệm Đối với bệnh phẩm sinh thiết, có trường hợp không dùng hóachất cố định mà dùng nước muối sinh lý hoặc nước cất Điều đó đã ảnh hưởngrất nhiều đến cấu trúc mô, tế bào bị nát, nhân bắt màu rất kém.
- Các tiêu bản đạt: 146/212, chiếm 68,9 % Phần lớn cắt tương đốimỏng, nhuộm màu đẹp, sự tương phản giữa nhân và bào tương rõ ràng Tuynhiên tiêu bản vẫn chưa thật đều và đôi chỗ bị xước, nhăn nhúm.
Một số hình ảnh
Hình 3.2.1.Tiêu bản nhuộm H – E X 40; chợt nhân
18
Trang 19Hình 3.2.2.Tiêu bản nhuộm H – E X 40; chợt nhân
Hình 3.2.3.Tiêu bản nhuôm H – E X 40; có nấm trên tiêu bản
Hình 3.2.4.Tiêu bản nhuộm H – E X 40; tiêu bản bị bong
Trang 20Hình 3.2.5.Tiêu bản nhiệm H – E X 40; tiêu bản bị cặn bẩn, đen
3.2.2 Labo Xét nghiệm Giải phẫu Bệnh – Bệnh viện K2
- Tổng số tiêu bản không đạt là: 83/468, chiếm 17,7%; tiêu bản đạt:371/468, chiếm 79,3%; tiêu bản tốt: 14/468, chiếm 3% Đa số các tiêu bảnkhông đạt đều do cắt dầy, không đều, xước rách nhiều, bắt màu đậm, tế bàocó hiện tượng nát nhiều (chiếm 72% tổng số tiêu bản).
- Đối chiếu với các mẫu tương tự, cùng lô xét nghiệm cho thấy lý do chínhthuộc về lỗi tuân thủ các tiêu chuẩn trong xét nghiệm nhuôn tiêu bản H – E:
Thời gian cố định bệnh phẩm không đảm bảo, phần lớn tại cơ sở làbệnh phẩm mổ, kích thước lớn, sau khi mổ xong không cố định ngay mà đểrất lâu sau đó mới pha và cố định dẫn đến bệnh phẩm bị hoại tử, dùng bếpđiện đun Parafin, đun đi đun lại nhiều lần làm parafin trở lên rất cứng dẫn đếnkhi cắt mảnh tế bào sẽ bị nát, thao tác đúc dùng thìa múc parafin, không chú ýáp sát mặt phẳng bệnh phẩm vào khuôn đúc làm bệnh phẩm sâu, lệch trongparafin dẫn đến khi cắt không lấy được mặt phẳng cần thiết, nhiều khi phálàm mất mô, cắt tiết kiệm dao nên nhiều khi dao bị mẻ gây xước mảnh cắt.
- Các tiêu bản đạt yêu cầu: 371/468, chiếm 79,3% Tuy nhiên, nhiềutiêu bản ở một số vùng nhỏ vẫn có hiện tượng xước, rách hoặc mất mô.
20