Đang tải... (xem toàn văn)
ĐẶT VẤN ĐỀ4Phần 1: Tổng quan về Diệp hạ châu51.Tên gọi52.Bộ phận dùng.53.Dược liệu54.Thành phần hóa học54.1Các nhóm hợp chất hóa học có trong cây Diệp hạ châu54.2Công thức của một số hợp chất64.3Một số hoạt chất có hoạt tính sinh học cao trong cây Diệp hạ châu64.4Các hợp chất đã có nghiên cứu tại nước ngoài75.Tác dụng công dụng85.1Tác dụng dược lý85.2Công dụng95.3Bài thuốc có dược liệu Diệp hạ châu106.Dược liệu dễ nhầm lẫn, giả mạo117.Các chế phẩm Diệp hạ châu trên thị trường12Phần 2 : Tiêu chuẩn dược liệu Diệp hạ châu trong các dược điển.13I.Dược điển Việt Nam IV131.Mô tả cây thuốc – dược liệu131.1Cây thuốc131.2Vi phẫu141.3Bột142.Định tính143.Độ ẩm154.Tỷ lệ vụn nát165.Chất chiết được trong dược liệu17II.Dược điển Ấn Độ II181.Tạp chất182.Tro toàn phần183.Tro không tan trong acid:184.Xác định hàm lượng chất chiết trong dịch chiết cồn195.Xác định hàm lượng chất chiết trong nước19Phần 3: Dự trù dụng cụ thiết bị hóa chất thuốc thử20Phần 4: Kết quả kiểm nghiệm221.Kết quả vi phẫu221.1Vi phẫu thân221.2Vi phẫu gân lá221.3Vi phẫu phiến lá232.Kết quả soi bột:233.Kết quả định tính243.1Phương pháp A243.2Phương pháp B253.3Phương pháp C – Sắc ký lớp mỏng254.Kết quả đo hàm ẩm265.Kết quả tỷ lệ vụn nát266.Kết quả hàm lượng chất chiết trong dược liệu27Phần 5: Bàn luận, kết luận27TÀI LIỆU THAM KHẢO29ĐẶT VẤN ĐỀViệt Nam, Trung Quốc, Thái Lan, Ấn Độ và một số các nước châu Á là các nước có nền y học cổ truyền gắn liền với sử dụng các vị thuốc từ thảo dược, dược liệu để phòng, chữa bệnh và chăm sóc sức khỏe cho con người.Việt Nam là một nước có nguồn thực vật cũng như cây thuốc rất phong phú. Theo dự đoán của các nhà thực vật học, Việt Nam có khoảng 12.000 loại cây, trong đó có khoảng 6.000 loài cây thuốc (con số dự đoán) mà ta đã phát hiện 4.700. Trong số đó khoảng 3.900 loài sử dụng trong dân gian là chính, 800 loài được sử dụng trong nền Y học cổ truyền. khoảng 200300 trong 800 loài đã sử dụng trong công nghiệp dược, một số loài đã được trồng như chè, hồ tiêu, actiso, ba kích, giảo cổ lam, đinh lăng, dây thìa canh… Mặt khác, thị trường Việt Nam về thuốc và dược liệu đang phát triển mạnh. Hơn nữa, hiện nay có xu hướng sử dụng các sản phẩm thiên nhiên từ thảo dược nên các sản phẩm từ thảo dược rất được ưa chuộng. Việt Nam vốn có ưu thế về nguồn thực vật phong phú, kinh nghiệm dân gian và cổ truyền, tuy nhiên theo thống kê của Cục quản lý dược, chỉ có khoảng 30% thuốc từ dược liệu được đăng kí trong nước, hơn 90% nguồn nguyên liệu sản xuất trong nước là nhập khẩu từ Trung Quốc và các nước ngoài. Vì vậy cần chú trọng, phát huy các dược liệu đặc hữu, có tiềm năng của Việt Nam. Song song với đó là cần đưa ra các tiêu chuẩn để quy định chất lượng cho các nguồn dược liệu và kiểm định các nguồn dược liệu.Chó đẻ răng cưa hay Diệp hạ châu là một dược liệu quý có tác dụng chữa nhiều bệnh và được sử dụng rộng rãi trong đời sống. Do đó cần kiểm nghiệm nguồn dược liệu chó đẻ răng cưa là một trong những việc làm cần thiết và thiết thực để xác định dược liệu có đạt chất lượng và tiêu chuẩn trước khi sử dụng, đảm bảo an toàn, hiệu quả. Phần 1: Tổng quan về Diệp hạ châu1.Tên gọi.1,2,3Tên khoa học: Phyllanthus urinaria L, họ Thầu dầu (Euphorbiaceae).Tên khác: chó đẻ răng cưa, cam kiềm, diệp hạ châu, rút đất, khao ham (Tày). Tên nước ngoài: Herbe du chgrin, petit tamarin rouge, surette (Pháp). Theo y sư Tuệ Tĩnh trong “ Đông dược thần thảo tông sư” có tên chó đẻ là vì ở các vùng nông thôn, chó cái sau khi đẻ con xong thường ra vườn tìm cây diệp hạ châu nhai nuốt liên tục 2, 3 ngày, vừa để cầm máu, vừa để bảo toàn sinh mạng, một tạo hóa ban cho loài vật. Còn dân miền Đông Nam bộ và các nhà chế biến nam dược gọi là Diệp hạ châu vì dưới kẽ lá có trái tròn, bóng láng xâu thành chuỗi cho trẻ con chơi trò bán hàng.2.Bộ phận dùng: toàn bộ phần trên mặt đất. 1,2,33.Dược liệu: là toàn bộ phần trêm mặt đất phơi khô hoặc sấy khô.1,2,34.Thành phần hóa học4.1Các nhóm hợp chất hóa học có trong cây Diệp hạ châu.2,5,6,8,9,10Flavonoid: kaempferol, quercetin, rutinTriterpen:stigmasterol – 3 – 0 – β – glucosid , βsitosterol, βsitosterol glucosid, lup20(29)en3βolTanin: acid ellagic, acid 3,3’,4tri0methyl elagic, acid galicPhenol: methylbrevifolin carboxylatAcid hữu cơ: acid succinic, acid ferulic, acid dotriacontanoicCác thành phần khác: noctadecan, acid dehydrochebulic methyl ester . triacontanol, phylanthurinol acton.Lignan: phylanthin, 5 demethoxyniranthin, urinatetralin, dextrobursehernin, urinaligran
TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI BỘ MÔN DƯỢC LIỆU TIỂU LUẬN Chủ đề: KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU DIỆP HẠ CHÂU Nhóm thực hiện: Lường Thị Son MSV: 1201515 Trần Đức Thành MSV: 1201538 Nguyễn Văn Thức MSV: 1201608 Tổ lớp P1k67 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam, Trung Quốc, Thái Lan, Ấn Độ số nước châu Á nước có y học cổ truyền gắn liền với sử dụng vị thuốc từ thảo dược, dược liệu để phòng, chữa bệnh chăm sóc sức khỏe cho người Việt Nam nước có nguồn thực vật thuốc phong phú Theo dự đoán nhà thực vật học, Việt Nam có khoảng 12.000 loại cây, có khoảng 6.000 loài thuốc (con số dự đoán) mà ta phát 4.700 Trong số khoảng 3.900 loài sử dụng dân gian chính, 800 loài sử dụng Y học cổ truyền khoảng 200-300 800 loài sử dụng công nghiệp dược, số loài trồng chè, hồ tiêu, actiso, ba kích, giảo cổ lam, đinh lăng, dây thìa canh… Mặt khác, thị trường Việt Nam thuốc dược liệu phát triển mạnh Hơn nữa, có xu hướng sử dụng sản phẩm thiên nhiên từ thảo dược nên sản phẩm từ thảo dược ưa chuộng Việt Nam vốn có ưu nguồn thực vật phong phú, kinh nghiệm dân gian cổ truyền, nhiên theo thống kê Cục quản lý dược, có khoảng 30% thuốc từ dược liệu đăng kí nước, 90% nguồn nguyên liệu sản xuất nước nhập từ Trung Quốc nước Vì cần trọng, phát huy dược liệu đặc hữu, có tiềm Việt Nam Song song với cần đưa tiêu chuẩn để quy định chất lượng cho nguồn dược liệu kiểm định nguồn dược liệu Chó đẻ cưa hay Diệp hạ châu dược liệu quý có tác dụng chữa nhiều bệnh sử dụng rộng rãi đời sống Do cần kiểm nghiệm nguồn dược liệu chó đẻ cưa việc làm cần thiết thiết thực để xác định dược liệu có đạt chất lượng tiêu chuẩn trước sử dụng, đảm bảo an toàn, hiệu Phần 1: Tổng quan Diệp hạ châu Tên gọi.[1,2,3] Tên khoa học: Phyllanthus urinaria L, họ Thầu dầu (Euphorbiaceae) Tên khác: chó đẻ cưa, cam kiềm, diệp hạ châu, rút đất, khao ham (Tày) Tên nước ngoài: Herbe du chgrin, petit tamarin rouge, surette (Pháp) Theo y sư Tuệ Tĩnh “ Đông dược thần thảo tông sư” có tên chó đẻ vùng nông thôn, chó sau đẻ xong thường vườn tìm diệp hạ châu nhai nuốt liên tục 2, ngày, vừa để cầm máu, vừa để bảo toàn sinh mạng, tạo hóa ban cho loài vật Còn dân miền Đông Nam nhà chế biến nam dược gọi Diệp hạ châu kẽ có trái tròn, bóng láng xâu thành chuỗi cho trẻ chơi trò bán hàng Bộ phận dùng: toàn phần mặt đất [1,2,3] Dược liệu: toàn phần trêm mặt đất phơi khô sấy khô.[1,2,3] Thành phần hóa học 4.1 Các nhóm hợp chất hóa học có Diệp hạ châu.[2,5,6,8,9,10] - Flavonoid: kaempferol, quercetin, rutin - Triterpen:stigmasterol – – – β – glucosid , β-sitosterol, β-sitosterol - glucosid, lup-20(29)-en-3β-ol Tanin: acid ellagic, acid 3,3’,4-tri-0-methyl elagic, acid galic Phenol: methylbrevifolin carboxylat Acid hữu cơ: acid succinic, acid ferulic, acid dotriacontanoic Các thành phần khác: n-octadecan, acid dehydrochebulic methyl ester triacontanol, phylanthurinol acton - Lignan: phylanthin, demethoxyniranthin, urinatetralin, dextrobursehernin, urinaligran 4.2 Công thức số hợp chất Acid gallic Acid ellagic Catechin Gallocatechin 4.3 Một số hoạt chất có hoạt tính sinh học cao Diệp hạ châu - Phylanthin Khối lượng phân tử: M = 418,532 đvC Có dạng tinh thể hình kim ngắn, không màu Nhiệt độ nóng chảy: 960C λmax (EtOH) = 230; 280 nm [α]30D = +15.50C - Hypophylathin Khối lượng phân tử: M = 430,491 đvC Kết tinh êt dầu hỏa dạng tinh thể hình kim dài, không màu Nhiệt độ nóng chảy: 1280C [α]30D = + 3,80C - Quercetin Có dạng tinh thể hình kim màu vàng (EtOH loãng) Nhiệt độ nóng chảy: 3140C λmax (EtOH) = 258 nm 4.4 Các hợp chất có nghiên cứu nước Hợp chất tự nhiên Tên hợp chất Alkaloid Securinine, norsecurinine, epibubbialine (Houghton et al, 1996) Flavonoid Catechin, gallocatechin, quercetin, quercitosiden rutin (Morton, 1981 ; Foo, 1993) Hydrolysabletnin Amariin, amariinic, amarulone, corilagin, glucopyranosid… (Foo and Wong, 1992; Foo, 1993; Foo, 1995) Ligan Phyllanthin hypophyllanthin (Morton, 1981; Chevalier, 2000), luw, (2012) Phenolic Acid gallic (Foo, 1993) Polyphenol Acid ellagic, phenazine dẫn xuất phenazine (Foo, 1993) Tác dụng- công dụng [2],[3],[4] 5.1 Tác dụng dược lý - Điều trị viêm gan: Tại Việt Nam, nhiều công trình nghiên cứu tác dụng điều trị viêm gan Diệp hạ châu tiến hành, chẳng hạn: nhóm nghiên cứu Lê Võ Định Tường (Học Viện Quân Y - 1990 - 1996) thành công với chế phẩm Hepamarin từ Phyllanthus amarus; nhóm nghiên cứu Trần Danh Việt, Nguyễn Thượng Dong (Viện Dược Liệu) với bột Phyllanthin (2001) - Tác dụng hệ thống miễn dịch: Vào năm 1992, nhà khoa học Nhật Bản khám phá tác dụng ức chế phát triển HIV-1 cao lỏng Phyllanthus niruri thông qua kìm hãm trình nhân lên virus HIV Năm 1996, Viện nghiên cứu Dược học Bristol Myezs Squibb chiết xuất từ Diệp hạ châu hoạt chất có tác dụng đặt tên “Nuruside” - Tác dụng giải độc: Việt Nam, Ấn Độ, Trung Quốc dùng Diệp hạ châu để trị chứng mụn nhọt, lở loét, đinh râu, rắn cắn, giun Nhân dân Java, Ấn Độ dùng để chữa bệnh lậu Theo kinh nghiệm dân gian Malaysia, Diệp hạ châu dùng để trị chứng viêm da, viêm đường tiết niệu, giang mai, viêm âm đạo, Công trình nghiên cứu Viện Dược Liệu – Việt nam (1987 – 2000) cho thấy dùng liều 10 – 50g/kg, Diệp hạ châu có tác dụng chống viêm cấp chuột thí nghiệm - Tác dụng giảm đau Kenneth Jones nhà nghiên cứu Brazil khám tác dụng giảm đau mạnh bền vững vài loại Phyllanthus, có Diệp hạ châu Tác dụng giảm đau Diệp hạ châu mạnh indomethacin gấp lần mạnh gấp lần so với morphin Tác dụng chứng minh diện acid gallic, ester ethyl hỗn hợp steroid (beta sitosterol stigmasterol) có Diệp hạ châu - Tác dụng lợi tiểu Y học cổ truyền số nước sử dụng Diệp hạ châu làm thuốc lợi tiểu, trị phù thũng Một nghiên cứu trường Đại học Dược Santa Cataria (Brazil – 1984) phát alkaloid Diệp hạ châu có tác dụng chống co thắt vân trơn, nhà khoa học nhờ vào điều để giải thích hiệu điều trị sỏi thận, sỏi mật thuốc - Điều trị tiểu đường Tác dụng giảm đường huyết Diệp hạ châu kết luận vào năm 1995, đường huyết giảm cách đáng kể bệnh nhân tiểu đường cho uống thuốc 10 ngày 5.2 Công dụng Chữa đau họng, đinh râu viêm da, lở ngứa, sản hậu huyết, đau bụng, trẻ em tưa lưỡi, chàm má Ngoài dùng để chữa bệnh gan, sốt, rắn rết cắn dùng tươi giã đắp, dịch ép tươi bôi ngoài, liều lượng không hạn chế Lợi tiểu: ép lấy nước cho vào sữa dừa dùng cho trẻ em làm ăn ngon miệng, hạ sốt, sát trùng, trị rối loạn tiêu hóa, phù, bệnh lậu bệnh đường niệu-sinh dục Nước sắc làm mát da đầu Mủ bôi chữa mụn nhọt loét khó lành, trị lị trồi non, vàng da… Làm lưỡi trẻ em kích thích ăn ngon miệng Ở Papua Niu Ghine dùng hạ sốt Ở Brunei thuốc đắp tuwf với sữa trị bệnh đậu mùa Ở Guaham trị lị, quần đảo Solomon dùng chữa đau ngực Peru dùng Diệp hạ châu có tác dụng kích thích tiết nước mật, tăng cường chức gan dùng để điều trị sỏi mật, sỏi thận Họ xé vụn thuốc, đun sôi, cho thêm chút nước tranh, chia lần uống ngày Nó chữa viêm bàng quang, vàng da phù, rối loạn tiêu hóa, đau bụng kinh Người Brazil dùng chữa bệnh viêm gan B túi mật, bệnh lý thận, mụn nhọt, lở loét, ung độc giảm đau, kích thích trung tiện, tẩy giun, lợi tiểu, điều hòa kinh nguyệt phụ nữ Nhiều nước châu Á, người dân dùng Diệp hạ châu chữa viêm gan, vàng da, hen phế quản, lao, kiết lỵ, viêm da, viêm đường tiết niệu, giang mai… 5.3 Bài thuốc có dược liệu Diệp hạ châu - Chữa suy gan nghiện rượu, ứ mật Diệp hạ châu : 10g, Cam thảo đất : 20g Cách dùng : Sắc uống thay nước hàng ngày - Chữa viêm gan virus B Diệp hạ châu đắng: 100g, Nghệ vàng : 5g Cách dùng : Sắc nước lần Lần đầu chén, sắc chén Lần đổ vào chén nước với 50g đường, sắc nửa chén Chia làm lần, uống ngày - Chữa suy gan rượu, sốt rét, nhiễm độc môi trường trường hợp hay mẩn, mụn huyết nhiệt Diệp hạ châu đắng 12g, Cam thảo đất 12g Sắc nước uống hàng ngày thay trà - Chữa sạn mật, sạn thận Diệp hạ châu đắng 24g Sắc uống, sắc làm nước để vừa tận dụng hoạt chất vừa uống thêm nhiều nước Nếu đầy bụng, ăn gia thêm Gừng sống Hậu phác Để ngăn chặn sỏi tái phát, nên dùng diệp hạ châu hình thức hãm uống thay trà, liều khoảng đến 10g ngày - Chữa sốt rét Diệp hạ châu 16g, Thảo 12g, Thương sơn 16g, Hạ khô thảo 12g, Binh lang 8g, đinh lăng 12g Sắc uống - Chữa nhọt độc sưng đau: Cây chó đẻ nắm với muối giã nhỏ, chế nước chín vào, vớt lấy nước cốt uống, bã đắp chỗ đau Dược liệu dễ nhầm lẫn, giả mạo [2] Trên thực tế nước ta có nhiều loại chó đẻ thường gặp loại chó đẻ cưa, chó đẻ tròn, chó đẻ thân xanh nên cần phân biệt chó đẻ cưa với chó đẻ tròn chó đẻ thân xanh Cây chó đẻ tròn (Phylanthus niuri Linn): thảo mọc hàng năm, nhẵn Thân màu hồng nhạt, cành có góc Lá thuôn, tù gốc lẫn đầu kèm hình dùi suốt Cụm hoa nách gồm hoa đực hoa có hoa Hoa đực có cuống ngắn, dài 5-6 hình bầu dục mũi mác, đĩa mật gồm tuyến bé, nhị Hoa có cuống ngắn, dài 5-6 giống hoa đực rộng ít, đĩa mật hình đầu có thùy sâu, vòi nhụy ngắn, rời chẻ đôi đầu, bầu hình cầu nang hình cầu hoa từ tháng 1-10 Cây mọc dại vườn, gặp khắp nơi nước ta Người dân hay dùng làm thuốc thông tiểu, thông sữa Cây chó đẻ thân xanh (Phylanthus amarus Schum Et Thonn): Cây cao 40 80 cm, thân tròn, bóng, màu xanh, phân nhánh đều, nhiều Lá mọc so le xếp thành dãy xít trông kép hình lông chim Phiến hình bầu dục, dài từ - 10 mm, rộng - mm, màu xanh sẫm mặt trên, màu xanh nhạt mặt Hoa đực hoa mọc kẽ lá, màu lục nhạt, cánh hoa Hoa đực có cuống ngắn - mm, đài 5, có tuyến mật, nhị 3, nhị dính Hoa có cuống dài hoa đực Quả nang, nhẵn, hình cầu, đường kính 1,8 - mm, có đài tồn Chứa hạt hình tam giác, đường kính mm, hạt có sọc dọc lưng Các chế phẩm Diệp hạ châu thị trường 10 Định tính A Lấy g dược liệu khô, tán nhỏ, thêm 50 ml ethanol 90% (TT), lắc đun hồi lưu cách thuỷ 30 phút Lọc, cô cách thuỷ - ml Chia đôi dịch lọc vào ống nghiệm để làm phản ứng sau đây: Ống 1: Thêm - giọt acid hydrocloric(TT), thêm vào bột kẽm (TT), xuất màu đỏ Ống 2: Thêm - giọt dung dịch sắt (III) clorid 9% (TT), xuất màu xanh tím B Lấy g bột dược liệu, thêm ml nước, đun sôi, lọc Lấy - ml dịch lọc để nguội, thêm - giọt dung dịch gelatin 2% (TT), xuất vẩn đục C Phương pháp sắc ký lớp mỏng (Phụ lục 5.4) Bản mỏng: Silica gel GF254 Dung môi khai triển: Cloroform - methanol (7 : 3) Dung dịch thử: Lấy g bột dược liệu vào bình nón nút mài, thấm ẩm bột dược liệu dung dịch amoni hydroxyd 10% (TT) 15 phút Lắc lần với cloroform (TT), lần 20 ml Gộp dịch chiết cloroform, lọc, bay cách thuỷ đến ml, dùng làm dung dịch thử Dung dịch đối chiếu: Lấy g Diệp hạ châu (mẫu chuẩn), tiến hành chiết tương tự dung dịch thử Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng 20 µl dung dịch Sau triển khai sắc ký, lấy mỏng ra, để khô nhiệt độ phòng, phun thuốc thử Dragendorff (TT) Sắc ký đồ dung dịch thử phải có vết giá trị R f màu sắc với vết sắc ký đồ dung dịch đối chiếu Độ ẩm 13 Không 12% (Phụ lục 9.6, g, 100 oC, giờ) Cách tiến hành: Dùng dụng cụ sấy thủy tinh rộng miệng đáy có nắp mài làm bì đựng mẫu thử; làm khô bì thời gian 30 phút theo phương pháp điều kiện quy định chuyên luận cân để xác định khối lượng bì Cân vào bì lượng xác mẫu thử khối lượng quy định chuyên luận với sai số ± 10% Nếu dẫn đặc biệt lượng mẫu thử dàn mỏng thành lớp có độ dày không mm Nếu mẫu thử có kích thước lớn phải nghiền nhanh tới kích thước mm trước cân Tiến hành làm khô điều kiện quy định chuyên luận dùng phương pháp sấy nhiệt độ cho phép chênh lệch ± 20C so với nhiệt độ quy định Sau sấy phải làm nguội tới nhiệt độ phòng cân bình hút ẩm có silicagel cân Nếu chuyên luận không quy định thời gian làm khô có nghĩa phải làm khô đến khối lượng không đổi, tức chênh lệch khối lượng sau sấy thêm tủ sấy bình hút ẩm so với lầm sấy trước không 0,5mg Nếu mẫu thử bị chảy nhiệt độ thấp nhiệt độ sấy quy định trước đưa lên nhiệt độ đó, cần trì từ đến nhiệt độ thấp nhiệt độ nóng chảy mẫu thử từ 50C đến 100C Nếu mẫu thử dược liệu, chuyên luận riêng dẫn đặc biệt tiến hành tủ sấy áp suất thường dược liệu phải làm thành mảnh nhỏ đường kính không mm; lượng đem thử từ 2g đến 5g; chiều dày lớp mẫu thử đem sấy mm không 10 mm dược liệu có cấu tạo xốp nhiệt độ thời gian sấy theo yêu cầu chuyên luận riêng Tỷ lệ vụn nát Qua rây có kích thước mắt rây 3,150 mm: Không 8% (Phụ lục 12.12) Cách tiến hành: 14 Cân lượng dược liệu định (p gam) loại tạp chất Rây qua rây có số quy định theo chuyên luận riêng Cân toàn phần lọt qua rây (a gam) Tính tỷ lệ vụn nát (X%) (từ kết trung bình ba lần thực hiện) theo công thức: X% = a × 100 p Ghi chú: Lượng dược liệu lấy để thử (tuỳ theo chất dược liệu) từ 100 - 200 g Đối với dược liệu mỏng manh lắc nhẹ, tránh làm vụn nát thêm Phần bụi bột vụn không phân biệt mắt thường tính vào mục tạp chất Chất chiết dược liệu Không 7,0% tính theo dược liệu khô kiệt Cách tiến hành: Tiến hành theo phương pháp chiết nóng (Phụ lục 12.10), dùng ethanol 96% (TT) làm dung môi Phương pháp chiết nóng: Nếu dẫn đặc biệt chuyên luận riêng, cân xác khoảng 2,000 - 4,000 g bột dược liệu có cỡ bột nửa thô cho vào bình nón 100 250 ml Thêm xác 50,0 100,0 ml nước, đậy kín, cân xác định khối lượng, để yên giờ, sau đun sôi nhẹ hồi lưu giờ, để nguội, lấy bình nón ra, đậy kín, cân để xác định lại khối lượng, dùng nước để bổ sung phần khối lượng bị giảm, lọc qua phễu lọc khô vào bình hứng khô thích hợp Lấy xác 25 ml dịch lọc vào cốc thủy tinh cân bì trước, cô cách thủy đến cắn khô, cắn thu sấy 105 0C giờ, 15 lấy để nguội bình hút ẩm 30 phút, cân nhanh để xác định khối lượng cắn Tính phần trăm lượng chất chiết nước theo dược liệu khô Phương pháp xác định chất chiết ethanol methanol: dùng phương pháp tương tự phương pháp xác định chất chiết nước Tuỳ theo dẫn chuyên luận riêng mà dùng ethanol methanol có nồng độ thích hợp để thay nước làm dung môi chiết Với phương pháp chiết nóng nên đun cách thuỷ dung môi chiết có độ sôi thấp II Dược điển Ấn Độ II Tạp chất Không 2% (Phụ lục 2.2.2) Cách tiến hành: Lấy phần đại diện từ thừng lớn lấy hết khối lượng gói không 100g, trải thành lớp mỏng khay hay đĩa phù hợp Quan sát ánh sáng mặt trời bình thường mắt thường Nếu có nghi ngờ phần tử nào, chuyển vào đĩa petri, quan sát thị kính 10X ánh sáng ban ngày Chú thích; a: khối lượng tạp chất tính gam b: khối lượng mẫu thử tính gam Tro toàn phần Không 16% (Phụ lục 2.2.3) Cách tiến hành: Cân xác khoảng 2-3 g bột dược liệu mịn, đốt cháy chén sứ (hoặc Pt) cân bì nhiệt độ 450 0C không carbon, để 16 nguội cân Nếu tro không carbon thu cách này, lấy hết khối tro hòa tan vào nước nóng, thu cặn giấy lọc Đốt phần bã giấy lọc, bay đến khô đốt nhiệt độ không đổi 450 0C Tính toán tỷ lệ phần trăm so với dược liệu khô không khí Tro không tan acid: Không 7% (Phụ lục 2.2.4) Cách tiến hành: Cho tro toàn phần vào nồi chứa, thêm 25ml HCl loãng Thu phần không tan giấy lọc không tro (Whatman 41) rửa băng nước nóng nước lọc trung tính Chuyển giấy lọc có chứa chất không tan vào nồi nấu kim loại ban đầu, làm khô bàn nóng nung đến khối lượng không đổi Để cắn nguội tủ sấy khô 30 phút cân Tính toán hàm lượng tro không tan acid so với dược liệu khô không khí Xác định hàm lượng chất chiết dịch chiết cồn Không 3% (Phụ lục 2.2.6) Cách tiến hành: Ngâm 5g bột dược liệu thô, làm khô không khí, với 100ml ethanol nồng độ ghi rõ bình ngâm kiệt khoảng 24 giờ, lắc thường xuyên để yên 18 Lọc nhanh, đề phòng mát dung môi, bốc 25 ml dịch lọc đến khô chén đáy phẳng nông cân bì, sấy khô 105 0C, đến khối lượng không đổi cân Tính toán tỷ lệ phần trăm cảu chất dịch chiết ethanol so với dược liệu không khí Xác định hàm lượng chất chiết nước 17 Không 13% (Phụ lục 2.2.7) Cách tiến hành: Tiến hành tương tự xác định hàm lượng chất chiết dịch chiết ethanol sử dụng cloroform-nước thay ethanol Phần 3: Dự trù dụng cụ- thiết bị - hóa chất- thuốc thử STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 Dụng cụ- Hóa chất Diệp hạ châu Kính lúp Thước chia vạch Dao cắt vi phẫu Dao gọt chuôi vàng Máy cắt vi phẫu tay Cà rốt Dao lam Lame - Lam kính Bát sứ Chổi lông Cối - chày sứ Kính hiển vi Nước Javen DD acid acetic DD Cloral hydrat DD xanhmethylen DD đỏ son phèn Bình nón 250 ml + sinh hàn hồi lưu Cốc chạy sắc ký + nắp Bản mỏng Silcagen GF254 Ống mao quản Cốc có mỏ 100 ml Phễu lọc Ống đong 25 ml Pipet ml, 10 ml có chia vạch Quả bóp Số lượng túi 1c 1c 1c 1c 1c củ 1c hộp 2c 1c 1c 50 ml 50 ml 50 ml 50ml 50 ml 2c 2c 2c 2c 1c 1c 2c 1c 18 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 Ống nghiệm Giá đỡ ống nghiệm Bình nón 100 ml có nút mài Bình gạn Bể cách thủy Cân kỹ thuật Bộ đèn tử ngoại Giấy lọc Giấy cân Giấy thấm (để bão hòa dung môi) DD ethanol 90% (TT) DD acid hydrocloric (TT) Bột kẽm DD sắt (III) clorid 9% (TT) DD gelatin 2% (TT) DD amoni hydroxyd 10% (TT) DD cloroform (TT + dung môi chạy sắc ký) DD methanol (dung môi chạy sắc ký) DD thuốc thử dragendroff (TT) Máy đo độ ẩm Rây 3.150 mm Bình hút ẩm DD ethanol 96% Pipet paster 2c 1c 1c 1c 1c 1c 10 c 10 c tờ 50 ml Vđ Vđ Vđ Vđ Vđ 200 ml 10 ml Vđ 1c 1c 1c 100 ml 1c Phần 4: Kết kiểm nghiệm Kết vi phẫu 1.1 Vi phẫu thân biểu bì mô mềm ruột gỗ 19 1.2 Vi phẫu gân Cấu trúc gân phiến vật kính 10: mạch gỗ bắt màu xanh mô mềm biểu bì bắt màu hồng Biểu bì biểu bì mạch gỗ mô mềm Cấu trúc gân soi vật kính 40: mô mềm bắt màu hồn, mô gỗ bắt màu xanh 1.3 Vi phẫu phiến Kết soi bột: Cách tiến hành: Bước 1: chuẩn bị bột để soi Dược liệu cắt nhỏ, sấy nhiệt độ khoảng 60 0C, tán nhỏ, nghiền nát Rây qua rây số 32 (rây mịn) phần lại rây tán xay rây tiếp 20 (có thể sấy lại để xay tán cho dễ, cần) tất dược liệu trở thành bột mịn Bước 2: lên tiêu để soi Sử dụng giọt chất lỏng thích hợp (trong trường hợp Diệp hạ châu dùng nước cất) vào phiến kính, dùng que lấy bột cho vào giọt chất lỏng Dùng góc lamen để khuấy phân tán bột đậy lamen kính lại lấy ngón tay di nhẹ kính dể phân tử bột tách rời phân tán loại bỏ phần nước thừa, bột hừa giấy thấm, lau mặt lăm kính phiến kính đưa lên kính hiển vi để soi Các hình ảnh: đầy đủ thành phần theo dược điển mô tả Mảnh biểu bì Mảnh mô mềm Sợi 21 Mảnh mạch chấm Mảnh mạch xoắn Tinh thể calci oxalat Kết định tính 3.1 Phương pháp A Ống 2: xuất màu xanh tím Ống 1: xuất màu nâu đỏ → Đạt 3.2 Phương pháp B Sau nhỏ gelatin, dung dịch đục so với ban đầu → Đạt TRƯỚC SAU 22 3.3 Phương pháp C – Sắc ký lớp mỏng Sắc khí lắp mỏng sau phun Dragendorff (TT) Lên vết màu vàng, vết diệp hạ châu (không có dược liệu chuẩn đối chiếu) Bản mỏng sắc kí soi đèn UV 254nm có vết màu nâu đen, với vết không rõ ràng có vết cua đặc trưng cho dược liệu Diệp hạ châu Sắc kí lớp mỏng soi bước sóng 360nm có vết sáng liên tục ( tecpen)và có xu hướng to phía cuối mỏng dược chất màu đỏ đoạn chlorophyll Kết đo hàm ẩm Sử dụng máy đo hàm ẩm hồng ngoại 23 → Kết hàm ẩm 10.04% Đạt tiêu chuẩn Kết tỷ lệ vụn nát Lần Khối lượng dược 161.14 liêu đem cân (g) Khối lượng vụn 32.56 nát (g) Lần Lần Trung bình 161.14 161.14 161.14 34.69 34.75 34.00 Tỷ lệ vụn nát: → Không đạt tiêu chuẩn Kết hàm lượng chất chiết dược liệu Khối lượng dược liệu là: 2.0090g Khối lượng cuối (khối lượng cốc cắn dược liệu 25ml dịch chiết) cân là: 42.33g Khối lượng cốc đựng là: 41.05g → Khối lượng cắn 25ml dịch chiết dược liệu ethanol là: 0.28g 24 → Hàm lượng chất chiết dược liệu: → Đạt tiêu chuẩn Bảng tóm tắt kết kiểm nghiệm Tên tiêu Kết Yêu cầu Vi phẫu thân Vi phẫu gân Vi phẫu phiến Kết luận Đạt Đạt Đầy đủ thành phần dược điển yêu cầu Đạt Bột Đạt Định tính A ống 1: nâu đỏ ống 2: xanh tím Định tính B Thêm gelatin, dung Thêm gelatin, dung dịch bị đục dich bị đục Định tính C Hiện vết, chất chuẩn Hàm ẩm Tỷ lệ vụn nát Hàm lượng chất chiết dược liệu ống 1: nâu đỏ ống 2: xanh tím Hiện vết theo tiêu chuẩn Đạt Đạt Không có nhiều ý nghĩa 10,04% 21,1% ≤12% ≤8% Đạt Không đạt 27,87% ≥7% Đạt Phần 5: Bàn luận, kết luận Trong kiểm nghiệm Diệp hạ châu có nhiều khó khăn: - Vi phẫu gân lá, phiến Diệp hạ châu khó cắt Diệp hạ châu nhỏ, dai 25 - Sắc kí lớp mỏng: hàm lượng hoạt chất Diệp hạ châu chiết thấp nên vết sắc kí lớp mỏng mờ, không rõ ràng Theo tiêu chuẩn Diệp hạ châu DĐVN IV tiêu đạt là: - Vi phẫu thân, gân Soi bột Định tính A, B Hàm ẩm Hàm lượng chất chiết dược liệu Theo tiêu chuẩn Diệp hạ châu DĐVN IV tiêu không đạt là: - Tỷ lệ vụn nát: Tỷ lệ vụn nát không đạt, Diệp hạ châu dược liệu nhỏ, cành nhiều nhỏ, nên đóng dược liệu khô vào túi, vận chuyển hay bảo quản bị va đập nhanh bị nát, có nhiều vụn Sau rây, hầu hết cành lọt qua rây.Do khả tỷ lệ vụn nát không đạt cao trường hợp không đạt - Tiêu chuẩn định tính sắc ký lớp mỏng: Trong phương pháp định tính sắc ký lớp mỏng, chất chuẩn để đối chiếu nên phương pháp không mang nhiều ý nghĩa kiểm nghiệm dược liệu Diệp hạ châu Tuy nhiên, phương pháp thấy mỏng xuất vết cua – vết đặc trưng dược liệu Diệp hạ châu, qua phản ánh phần độ xác dược liệu Diệp hạ châu Về bản, đa số (5/6) tiêu Diệp hạ châu theo tiêu chuẩn DDVN IV đạt (tiêu chuẩn định tính sắc ký lớp mỏng chưa có sở) Trong tiêu không đạt tỷ lệ vụn nát không mang nhiều ý nghĩa việc xác định dược liệu có diệp hạ châu hay không Qua đó, thể khẳng định dược liệu Diệp hạ châu → Kết luận: Dược liêu đạt tiêu chuẩn dược điển Việt Nam IV tiêu: tiêu vi phẫu, tiêu soi bột, tiêu định tính: phương pháp A, B, 26 tiêu hàm ẩm, tiêu hàm lượng chất chiết dược liệu; chưa đạt tiêu tỷ lệ vụn nát theo tiêu chuẩn dược điển Việt Nam IV TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt Chuyên luận dược liệu Diệp hạ châu Dược điển Việt Nam IV Đỗ Huy Bích (2006), “Cây thuốc động vật dùng làm thuốc ở Việt Nam I” Nhà xuất Khoa học kĩ thuật Hà Nội Tr 438 - 441 Võ Văn Chi (2003), “Từ điển thực vật thông dụng”, tập 2, trang 1943 Nhà xuất Khoa học kĩ thuật Hà Nội Đỗ Tất Lợi (2009), “Cây thuốc vị thuốc Việt Nam” Nhà xuất Y học Ngô Đức Trọng (2008), “Nghiên cứu hóa học nhận dạng số nhóm chất có chó đẻ cưa Phylanthus urinaria L., Euphobiaceae”, Thái Nguyên Luận văn tốt nghiệp: “Đề tài xây dựng tiêu chuẩn cho dược liệu chó đẻ cưa” Trường đại học y dược Cần Thơ II Tài liêu tiếng Anh Dược điển Ấn Độ Chia Chuan chang, Yu Chi lien, Karin C.S Liu and Shoei-sheng Lee (2003), “Ligans from phylanthus urinaria ” Joao B, Calixto, Adair R.S Santos, Vadlir Cechinel Filho, Rosendo A yunes (1998), “A review ò the plants of the Genus phyllanthus: Their chemistry, pharmacology and therapeutic potiential” 10.Chang CC1, Lien YC, Liu KC, Lee SS Phytochemistry (2003) “Lignans from Phyllanthus urinaria.” 27 ... luận Trong kiểm nghiệm Diệp hạ châu có nhiều khó khăn: - Vi phẫu gân lá, phiến Diệp hạ châu khó cắt Diệp hạ châu nhỏ, dai 25 - Sắc kí lớp mỏng: hàm lượng hoạt chất Diệp hạ châu chiết thấp nên vết... liệu Diệp hạ châu Tuy nhiên, phương pháp thấy mỏng xuất vết cua – vết đặc trưng dược liệu Diệp hạ châu, qua phản ánh phần độ xác dược liệu Diệp hạ châu Về bản, đa số (5/6) tiêu Diệp hạ châu theo... nữ Nhiều nước châu Á, người dân dùng Diệp hạ châu chữa viêm gan, vàng da, hen phế quản, lao, kiết lỵ, viêm da, viêm đường tiết niệu, giang mai… 5.3 Bài thuốc có dược liệu Diệp hạ châu - Chữa suy