BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐH CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TP.HCM KHOA CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM  - BÀI TIỂU LUẬN MÔN: PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỀ TÀI:CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH TÍNH SALMONELLA MỤC LỤC Tháng 11- 2014 LỜI MỞ ĐẦU Trong năm gần đây, vấn đề ngộ độc thực phẩm trở nên cấp thiết, báo cáo cho thấy phần lớn ngộ độc thực phẩm vi sinh vật Đã có cảnh báo, nhiên tình trạng ngộ độc thực phẩm leo thang ngày nghiêm trọng Có nhiều vi sinh vật gây nghộ độc thực phẩm, ví dụ như: Clostridium butolinum, Escherichia Coli, Listeria monocytogenes,… Salmonella loài vi sinh vật gây ngộ độc nguy hiểm Salmonella thuộc họ Enterobactriaceae, gây bệnh thương hàn, nhiễm trùng máu nhiều bệnh nghiêm trọng khác Theo kết nghiên cứu, có khoảng 4% người mang mầm bệnh Tất tiêu vệ sinh thực phẩm điều không cho phép có mặt Salmonella thành phẩm Sự diện chúng kiểm tra gắt gao quan chức Ngày nay, người có hiểu biết sâu rộng vấn đề kiểm soát vệ sinh thực phẩm quan tâm nhiều Với ý nghĩa thực tiễn nêu trên, nhóm chúng em tiến hành nghiên cứu đề tài: “phương pháp định tính Salmonella” nhằm đưa số phương pháp định tính Salmonella để phục vụ cho công tác vệ sinh thực phẩm I I.1 Tình hình nhiễm độc Salmonella Việt Nam Thế giới Trên Thế giới: Tỷ lệ nhiễm Salmonella nước Châu Âu giảm điều đặn từ năm 1990 trở lại đây, năm 2007 có khoảng 152.000 ca nhiễm Salmonella người phát hiện, sai lệch báo cáo lớn, số lượng thực tế lớn gấp 10 lần Ở Mỹ, tình trang ổn định mức 15 ca 100.000 người từ năm 2001 kiểm soát tốt Salmonella thực phẩm từ năm 1990, bao gồm thực phẩm sữa, trứng, sản phẩm tươi sống,…và đặc biệt thịt Một đợt dịch gần Mỹ gây S.typhimurium nhiễm bơ đậu phụng gây ảnh hưởng đến 700 người khắp đất Mỹ Từ tháng 7/2009 tới nay, số ca bị nhiễm Salmonella phát Mỹ tăng lên 184 người thuộc 38 bang khác I.2 Ở Việt Nam: Hiện nay, mạng lưới kiểm nghiệm VSATTP hình thành rộng khắp nước thực tế lực kiểm nghiệm nhiều tiêu an toàn thực phẩm số địa phương hạn chế Trong 330 mẫu hoa có tới 2,7% số mẫu có tỷ lệ tồn dư thuốc bảo vệ thực vật cao táo đỏ, quýt lê Đặc biệt số 1.416 mẫu thịt sản phẩm từ thịt phát 40,9% số mẫu nhiễm khuẩn Salmonella gây bệnh đường tiêu hóa Hơn nữa, khu vực Tp HCM Đồng Nai địa phương có tỷ lệ mẫu thực phẩm nhiễm Salmonella cao nhất, chiếm 84-95% mẫu giám sát II II.1 Đặc điểm Salmonella: Lịch sử phát hiện: Salmonella lấy tên từ nhà khoa học người Mỹ, Danier Elmer Salmon – nhà nghiên cứu bệnh lý động vật Thực chất ông phát mà nhà khoa học Theobald Smith Nhưng D.E.Salmon công bố trước.T.Smith bạn đồng nghiệp D.E.Salmon, làm việc Bureau ò Animal Industry (BAI) vào năm 1884 Salmonella vi khuẩn nguy hiểm Loại vi khuẩn sống ống ruột người động vật giống vi khuẩn có nhiều loại khác nhau, loại phổ biến mà nhà khoa học Mỹ tìm thấy nước chủng S.typhimurium S.enteritidis gây bệnh Samonellosis Vi sinh vật gây bệnh đường ruột quan trọng khía cạnh bệnh học, dịch tễ học, vi sinh môi trường, vi sinh an toàn thực phẩm Vi khuẩn phân bố rộng khắp tự nhiên, xâm nhiễm gây bệnh cho người, động vật máu nóng, động vật máu lạnh nước cạn Hình1 Vi khuẩn Samonella ssp II.2 Phân loại: Về phân loại khoa học, Salmonella xếp vào: Giới: Bacteria Ngành: Proteobacteria Lớp: Gamma proteobacteria Bộ: Enterobacteriales Họ: Enterobacteriaceae Chi: Salmonella Loài: Salmonella bongori Salmonella enteric Các loài điển hình: Salmonella typhi: Gây bệnh thương hàn Hình2 Salmonella typhi Salmonella paratyphi: Gây bệnh phó thương hàn Hình Salmonella paratyphy Salmonella cholera_suis: Gây bệnh nhiễm trùng máu Hình 4: Salmonella cholera_suis Salmonella entertidis: Gây rối loạn tiêu hóa Hình 5: Salmonella entertidis Một số bệnh thường gặp động vật Salmonella gây ra: phó thương hàn bò lợn, bệnh sảy thai cừu ngựa, bệnh bạch lỵ gà, bệnh thương hàn chuột, bệnh viêm phổi bò,… Một số chủng Salmonella khác: S thompson, S derby, S newport, S kissangani,… II.3 Đặc điểm hình thái: Salmonella vi sinh vật thuộc hệ vi khuẩn đường ruột Enterobacteriaceae Salmonella vi khuẩn gram âm (khi nhuộm kỹ thuật gram vi khuẩn bắt màu đỏ hồng), hình que, kích thước khoảng 2-3 x 0.5-1 µm, hiếu khí kỵ khí tùy nghi, có tiên mao, di động (trừ S.gallinarum S.pullorum) II.4 Cấu trúc salmonella: Salmonella có loại kháng nguyên, nhũng chất xuất thể tạo kích thích đáp ứng miễn dịch kết hợp đặc hiệu với sản phẩm kích thích gồm: kháng nguyên thân O, kháng nguyên lông H kháng nguyên vỏ K • Kháng nguyên vách tế bào (kháng nguyên thân O): Thành phần vách tế bào có cấu trúc phức tạp gồm lớp Trong lớp peptidoglycan mỏng, cách lớp không gian chu chất tới lớp màng phức hợp lipidpolysaccharide gồm lipoprotein liposaccharide Bao bên lớp peptidoglycan lớp photpholipid A B (quyết định độc tố nội độc tố), sau lớp polysaccharide không mang tính đặc hiệu Kháng nguyên nội độc tố có chất hóa học lypopolysaccharide (LPS) Tính đặc hiệu kháng nguyên O LPS tính miễn dịch khác nhau: kháng nguyên O LPS bao gồm lớp peptidoglycan nên tính sinh miễn dịch mạnh LPS Màng có cấu trúc gần giống tế bào chất phospholipid gặp lớp - lớp polysaccharide dày khoảng 8-10 nm gồm thành phần: Lipid A Polysaccharide lõi Kháng nguyên O Màng có thêm protein: Protein chất: protein vi khuẩn gọi protein xuyên màng với chức cho - phép loại phân tử qua chúng dipeptide, disaccharide, ion vô Protein màng ngoài: chức vận chuyển số phân tử riêng biệt đưa màng - Lipoprotein: đóng vai trò liên kết lớp peptidoglycan bên với lớp màng - • Kháng nguyên vỏ (kháng nguyên K) Bản chất hóa học vỏ vi khuẩn polypeptide polysaccharide Vỏ vi khuẩn gây miễn dịch không mạnh gắn với tế bào vi khuẩn vỏ gây miễn dịch Kháng nguyên vỏ dùng để phân loại chủng Salmonella • Kháng ngyên lông ( kháng nguyên H) Được tổng hợp từ acid amin dạng D Do việc xử lý kháng nguyên tế bào không thuận lợi đáp ứng kháng thể không mạnh Khi sợi lông bị kết hợp kháng thể đặc hiệu lông bất động vi khuẩn di chuyển Kháng nguyên lông dùng để phân loại số chủng Salmonella Bảng 1: Phân biệt kháng nguyên O, H, K II.5 Kháng nguyên Tính chịu nhiệt Tác động alcohol 50% O Ổn nhiệt 2h30 1000C K Biến nhiệt 15’06’’ 1000C Nhạy cảm H Biến nhiệt 2h 1000C Nhạy cảm Kháng Formol 50% Bị ngăn trở ngưng kết Kháng Kháng Điều kiện sinh trưởng Salmonella phát triển môi trường nuôi cấy thông thường Trên môi trường thích hợp, vi khuẩn phát triển sau 24 Có thể mọc môi trường có chất ức chế chọn lọc DCA (deoxycholate xitrate agar) XLD (xylose lysine deoxycholate), môi trường XLD chất ức chế nên dung để phân lập Salmonella Khẩn lạc đặc trưng Salmonella môi trường tròn, lồi, suốt, có tâm đen tâm đen lớn bao trùm khuẩn lạc, môi trường xung quanh chuyển sang màu đỏ Salmonella đề kháng với điều kiện bên ngoài, bị phá hủy trình tiệt trùng phương pháp Pasteur, tia xạ đun sôi nấu kỹ Tuy nhiên, Salmonella sống xót thời gian dài thực phẩm khối ướp lạnh Do đó, ta làm tan thực phẩm đông lạnh vi khuẩn dễ phát triển trở lại Chúng phát triển tốt oC – 42oC thích hợp 35oC – 37oC, pH từ – thích hợp pH = 7,2 Ở nhiệt độ 18oC – 40oC vi khuẩn sống đến 15 ngày Khả chịu nhiệt vi khuẩn kém: 50 oC giờ, 70oC 15 phút 100oC phút Chúng bị tiêu diệt phenol 5%, Cloramin 1% clorur thủy ngân 0,2% phút Với nồng độ muối – 19% phát triển vi khuẩn ngừng lại Vi khuẩn không gây mùi vị khó chịu cho thực phẩm, chúng diện loại thực phẩm như: thịt, trứng, sản phẩm từ trứng, thủy hải sản,… - II.6 Tính chất hóa sinh: Salmonella có khả lên men đường glucose manitol, sinh acid Không lên men saccharose lactose, không phân giải urea, khả tách - nhóm amine từ tryptophane Salmonella không sinh indol, không làm lỏng gelatin Hầu hết chủng Salmonella sinh H2S II.7 Các yếu tố độc lực: Vi khuẩn Salmonella tiết hai loại độc tố: ngoại độc tố nội độc tố → Nội độc tố Salmonella mạnh gồm loại: gây xung huyết mụn loét, độc tố ruột gây độc thần kinh, hôn mê, co giật → Ngoại độc tố phát lấy vi khuẩn có tính độc cao cho vào túi colodion đặt vào ổ bụng chuột lang để nuôi, sau ngày lấy lại cấy lại từ – 10 lần, sau đem lọc nước lọc có khả gây bệnh cho động vật thí nghiệm Ngoại độc tố hình thành điều kiện invivo nuôi cấy kỵ khí Ngoại độc tố tác dụng lên thần kinh ruột Sau ủ, kiểm tra đĩa có mặt khuẩn lạc Salmonella điển hình khuẩn lạc không điển hình mà nghi Salmonella Đánh dấu vị trí chúng đáy đĩa  Khuẩn lạc Salmonella điển hình phát triển thạch XLD có tâm màu đen vùng màu đỏ nhạt thay đổi màu chất thị  Trên môi trường HE, khuẩn lac Salmonella điển hình có màu xanh lam, có tâm đen Chú thích: • Hình Khuẩn lạc Salmonella HE Hình Khuẩn lạc Salmonella XLD Salmonella biến thể âm tính H2S (ví dụ: S Paratyphi A) phát triển thạch XLD có màu hồng có tâm màu hồng sẫm • Salmonella dương tính với lactose phát triển thạch XLD màu vàng, có tâm màu đen Ủ môi trường đặc chọn lọc thứ hai (HE) nhiệt độ thích hợp sau khoảng thời gian thích hợp kiểm tra để phát có mặt với khuẩn lạc, từ đặc trưng chúng mà coi Salmonella giả định d Khẳng định: • Chọn khuẩn lạc để khẳng định: Để khẳng định, lấy từ đĩa Petri môi trường chọn lọc khuẩn lạc xem điển hình nghi ngờ bốn khuẩn lạc khuẩn lạc âm tính Nên lấy năm khuẩn lạc để nhận dạng trường hợp nghiên cứu dịch tễ học Nếu đĩa có năm khuẩn lạc điển hình khuẩn lạc nghi ngờ, lấy tất khuẩn lạc điển hình nghi ngờ để khẳng định Cấy ria khuẩn lạc chọn bề mặt đĩa thạch dinh dưỡng Tryptone Soy Agar (NA/TSA), cho khuẩn lạc phân lập tốt phát triển Ủ đĩa cấy 37 ±1 °C 24±3 h Sử dụng chủng cấy khiết để khẳng định phép thử sinh hoá huyết • Khẳng định sinh hoá: Từ khuẩn lạc chọn cấy ria lên NA/TSA, dùng que cấy cấy vào môi trường sau:  Thử nghiệm TSI/KIA Nguyên tắc: đồng thời xác định khả sử dụng nguồn carbohydrate cụ thể kết hợp với môi trường tăng trưởng bản, có sinh khả sinh H 2S Thành phần môi trường KIA: Thành phần Khối lượng Cao thịt 3,0 g Cao nấm men 3,0 g Pepton Natri clorua (NaCI) 20,0 g 5,0 g Lactose 10,0 g Glucose 1,0 g Sắt (III) xitrat 0,3 g Natri thiosulphat 0,3 g Phenol đỏ Thạch Nước 0,024 g g đến 18 g 1) 000 ml Môi trường1) TSI có thuộc thêm 10g Phụ vàosucrose sức đông thạch Thực hiện: Cấy ria bề mặt nghiêng thạch cấy đâm sâu xuống đáy Ủ 37±1°C 24±3 h Khả sử dụng nguồn carbon: Môi trường KIA chứa loại đường 1% lactose 0.1% glucose Khi cấy chủng vi sinh vật lên môi trường có trường hợp xảy tăng trưởng VSV: sử dụng glucose, sử dụng glucose lactose, không sử dụng hai đường Salmonella lên men đường glucose phần nghiêng môi trường có màu đỏ, phần sâu có màu vàng Thời gian ủ từ 18-24 Khả sinh H2S: đa số dòng Salmonella có khả sinh H2S nên có xuất vệt màu đen môi trường Có thể thấy tượng sinh qua tượng làm vỡ thạch môi trường môi trường bị đẩy lên tạo khoảng không bên đáy ống nghiệm Hình thử nghiệm KIA Ống 1: môi trường KIA VSV Ống 2: xuất màu vàng chứng tỏ VSV lên men lactose tốt (lên men glucose tốt) Ống 3: có sinh khí, chứng tỏ lên men có sinh khí Ống 4: màu đỏ phần thạch nghiêng, màu vàng đáy chứng tỏ VSV lên men glucose Ống 5: màu đen xuất chứng tỏ có trình khử lưu huỳnh sinh H2S  Thử nghiệm urê Nguyên tắc: Sử dụng để phát khả phân cắt ure thành ammoniac hoạt tính enzyme urease từ vi sinh vật kết môi trường bị kiềm hóa NH tạo Thành phần môi trường gồm 950ml môi trường +50 ml dung dịch ure Thành phần môi trường Pepton Glucoza Natri clorua (NaCl) Kali dihydro phosphat (KH2PO4) 1,0g 1,0g 5,0g 2,0g 0,012g Phenol đỏ Thạch 1) g đến 18 g 1000ml Nước Dung dịch ure Urê Nước vừa đủ 400g 1000ml Thực hiện: Cấy ria bề mặt nghiêng thạch, ủ 37±1 °C 24±3 h kiểm tra thường xuyên Nếu phản ứng dương tính (+), phân giải urê thành amoniac, làm phenol màu đỏ chuyển thành màu hồng sau chuyển thành màu đỏ hồng Phản ứng thường xuất sau 2h đến 4h Ngược lai, phản ứng âm tính (-) môi trường không đổi màu (màu vàng cam) (+) (-) Hình Thử nghiệm ure  Thử nghiệm Lysine decarboxylase (LDC) Nguyên tắc: Sử dụng để phát vi khuẩn sinh enzyme decarboxylase, enzyme tương tác với amino acid có gốc carboxyl (-COOH) cuối, tạo thành amine hay diamine carbon dioxide (CO 2) làm tăng pH môi trường, thay đổi màu chất thị bromocresol purple Thành phần môi trường: Thành phần Khối lượng L-Lyzin monohydroclorua Cao nấm men 5,0g 3,0g Glucoza 1,0g 0,015g Bromocresol đỏ tía Nước 1000ml Thực hiện: Cấy phía bề mặt môi trường lỏng, phủ lớp paraffin hay dầu khoáng lên bề mặt môi trường Ủ 37±1 °C 24±3 h • • Màu đục đỏ tía sau ủ chứng tỏ phản ứng dương tính Màu vàng phản ứng âm tính Hình 10 Thử nghiệm LDC  Thử nghiệm Voges-Proskauer (VP) Nguyên tắc: Xác định khả sinh acetylmethylcarbinol (acetoin) oxi hóa acetoin thành diacetyl trình lên men số vi sinh vật diacetyl kết hợp với guanidine có pepton kết tụ thành diacetyl – guanidine có màu đỏ Thành phần Pepton Glucoza Dinatri hydro phosphat (K2HPO4) Nước Khối lượng 7,0g 5,0g 5,0g 1000ml Thực hiện: Cho vòng đầy khuẩn lạc nghi ngờ vào ống vô trùng có chứa ml môi trường VP Ủ 37 °C ± °C 24 h ± h Sau ủ, thêm hai giọt dung dịch creatin, ba giọt dung dịch etylic 1-naphtol sau thêm hai giọt dung dịch kali hydroxit; lắc sau lần thêm loại thuốc thử Khi xuất màu hồng đến màu đỏ nâu 15 phút chứng tỏ phản ứng dương tính Phản ứng âm tính dịch vi khuẩn không đổi màu Hình 11 Thử nghiệm VP  Thử nghiệm indol Nguyên tắc: Phát khả oxi hóa tryptophan thành dạng indol: Indol, Skatol (methyl indol) indol-acetate Và để phát indol, ta dùng thuốc thử chứa p-DMABA Nhân pyrrol indol chứa –CH2 kết hợp với nhân benzen pDMABA tạo nên phức chất dạng quinone có màu đỏ Thanpâ Thành phần môi trường trypton/tryptophan Trypton Khối lượng 10 g Natri clorua (NaCI) 5g DL-Tryptophan 1g Nước 000 ml Thuốc thử Kovacs 4-Dimetylaminobenzaldehyt 5g Axit clohydric, p = 1,18 g/ml đến 1,19 g/ml 25ml 2-Metylbutan-2-ol 75ml Thực hiện: Cấy khuẩn lạc nghi ngờ vào ống chứa ml môi trường trypton/ tryptophan Ủ 37±1 °C 24±3 h Sau ủ, thêm ml thuốc thử Kovacs Nếu có xuất vòng màu đỏ chứng tỏ phản ứng dương tính Khi xuất vòng màu nâu vàng chứng tỏ phản ứng âm tính Hình 12 Thử nghiệm indol Bảng Giải thích phép thử sinh hoá Chủng Salmonella Phép thử S Typhi S.Paratyphi A S.Paratyphi B S.Paratyphi C Phản ứng %* Sử dụng glucose + 100 + 100 + + + 100 Sinh khí từ glucose -# + 100 + + + 92 Sinh H2S + 97 - 10 + + + 92 Phân giải urê - - - - - Lyzin khử nhóm + cacboxyl 98 - + + + 95 Phản ứng VogesProskauer - - - - - - - - - - Sinh indol Phản ứng %* Phản ứng %** Phản ứng Các chủng khác %** Phản ứng %* * Các tỷ lệ phần trăm cho thấy tất typ huyết Salmonella cho phản ứng đánh dấu + - Các tỷ lệ phần trăm thay đổi tuỳ theo typ huyết typ huyết làm nhiễm độc thực phẩm từ nơi khác ** # Các phần trăm chưa có số liệu, Salmonella Typhi loại yếm khí • Khẳng định huyết typ huyết - Loại trừ chủng tự ngưng kết Cho giọt dung dịch muối sinh lý lên phiến kính thuỷ tinh làm cách cẩn thận Dùng que cấy vòng trộn dung dịch với khuẩn lạc cần thử, để thu huyền phù đục đồng Lắc nhẹ phiến kính từ 30 giây đến 60 giây Quan sát kết tối, tốt dùng kính lúp Thành phần dung dịch muối sinh lý: Natri clorua (NaCI) Nước 8,5 g 1000 ml Chú thích: Cũng trộn khuẩn lạc cần thử giọt nước, sau trộn dung dịch với giọt dung dịch muối Nếu vi khuẩn nhiều có kết dính đơn vị với nhau, chủng xem tự ngưng kết, thử nghiệm tiếp phát kháng nguyên - Kiểm tra kháng nguyên: Nguyên tắc thực hiên: Nhỏ giọt huyết kháng nguyên O, H, K lên lam kính Dùng que cấy vòng trộn dung dịch với khuẩn lạc cần thử, để thu huyền phù đục đồng Lắc nhẹ phiến kính từ 30 giây đến 60 giây Quan sát kết tối, tốt dùng kính lúp • Kiểm tra kháng nguyên O, K Nếu xuất ngưng kết, phản ứng xem dương tính Ngược laị vi khuẩn phân bố huyết thanh, làm cho giọt dung dịch đục xem kết âm tính • Kiểm tra kháng nguyên H Cấy khuẩn lạc khiết khả tự ngưng kết vào thạch dinh dưỡng nửa đặc Ủ môi trường 37±1°C 24 ± h Thành phần thạch dinh dưỡng đặc Cao thịt 3,0 g Pepton 5,0 g Thạch g đến g1) Nước 000 ml Sử dụng chủng cấy để kiểm tra kháng nguyên H, tiến hành theo nguyên tắc thực Nếu xuất ngưng kết phản ứng xem dương tính Ngược laị vi khuẩn phân bố huyết thanh, làm cho giọt dung dịch đục xem kết âm tính 1)1) Phụ thuộc vào sức đông thạch Bảng Giải thích kết phép thử khẳng định Phản ứng sinh hoá Tự ngưng kết Phản ứng huyết Điển hình Không Điển hình Không Điển hình Có Phản ứng không Không/ Có điển hình Phản ứng không Không/ Có điển hình Giải thích Kháng nguyên O, K Các chủng coi H dương tính Salmonella Tất phản ứng âm tính Không thử nghiệm Có thể Salmonella Kháng nguyên O, K H dương tính Tất phản ứng âm tính Không coi Salmonella III.1.4 Kết Căn vào phần giải thích kết quả, rõ có mặt hay mặt Salmonella phần mẫu thử x(g) x(ml) sản phẩm III.2 Phương pháp đại a Phương pháp PCR Phương pháp PCR phương pháp tổng hợp DNA invitro dựa khuôn trình tự DNA đích ban đầu, sau trình tự khuyếch đại nhân lên thành hàng triệu • • • • Một phản ứng PCR thực phải có: DNA mẫu Cặp mồi: mồi xuôi mồi ngược Taq DNA polymerase Các nucleotide tự Phản ứng PCR gồm nhiều chu kì lặp lại nối tiếp Mỗi chu trình trình gồm bước: • Bước 1: hỗn hợp gia nhiệt lên 94 - 95°C mục đích giai đoạn làm cho DNA mạch đôi tách làm mạch đơn • Bước (bắt cặp): giai đoạn nhiệt độ hạ xuống khoảng 55 -65°C Giai đoạn này, primer bắt cặp với trình tự thích hợp • Bước (kéo dài): nhiệt độ giai đoạn nâng lên 72°C, nhiệt độ thích hợp cho hoạt động Taq DNA polymerase qua trình tổng hợp DNA Trong phản ứng PCR, chu trình gồm bước lặp lặp lại nhiều lần, sau chu kì số lượng DNA mẫu tăng lên gấp đôi Sau thực xong phản ứng PCR, đem sản phẩm DNA điện di gel agarose nhuộm với ethydium bromide sau quan sát tia UV b Phương pháp ELISA Phương pháp nguyên tắc miễn dịch dựa kết hợp đặc hiệu kháng thể kháng nguyên Tín hiệu phản ứng kết hợp nhận biết thông qua phát quang Trong phương pháp miễn dịch phương pháp hấp thụ miến dịch sử dụng enzyme (enzyme Link ImmunosoSorbent Assy-ELISA) phương pháp sử dụng phổ biến phương pháp đơn giản cho hiệu cao Nguyên tắc phương pháp ELISA sử dụng kháng thể đơn dòng để bắt kháng nguyên mục tiêu phát nhờ kháng thể thứ hai có gắn với enzyme Sau đó, bổ sung chất đặc hiệu enzyme, enzyme xúc tác phản ứng thủy phân chất để tạo sản phẩm có màu hay phát quang Bằng cách quan sát thay đổi màu, phát diện định lượng kháng nguyên c Phương pháp màng PETRI (Petrifilm) Môi trường dinh dưỡng dạng đông khô, cố định vào màng mỏng gọi petrifilm Khi sử dụng, lớp màng bảo vệ bên nâng lên nhỏ vào ml dung dịch mẫu đậy lại Một đĩa petri nhựa đặt lên màng bảo vệ để tạo khuôn tròn Môi trường dinh dưỡng hỗ trợ cho phát triển vi sinh vật thời gian ủ Có thể điếm trực tiếp khuẩn lạc petrfilm Petrifilm dùng để kiểm tra tổng số vi sinh vật hiếu khí, coliform, feacal coliform, tổng số nấm men, nấm mốc Ưu điểm kỹ thuật petrifilm: o Dễ thao tác, tiết kiệm thời gian ủ bảo quản o Thời gian sử dụng lâu môi trường dạng đông khô không cần xử lý nhiệt môi trường thông thường Có thể sử dụng nước cất vô trùng để làm ướt môi trường đông khô Sau môi trường đông lại, dùng trực tiếp Petrifilm để điếm tạp khuẩn bề mặt KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN: Salmonella loại vi khuẩn nguy hiểm Chúng gây bệnh cho nhiều loại động vật người Loài thường tạp nhiễm thực phẩm nên nguy hiểm theo TCVN ISO Salmonella không phép có mặt thực phẩm KIẾN NGHỊ Các quan tổ chức có thẩm quyền thường xuyên giám sát kiểm tra hoạt động giết mổ, buôn bán sản phẩm thực phẩm Nhà nước tổ chức quốc gia, quốc tế quan tâm vấn đề vệ sinh an toàn thực phẩm nên có biện pháp khống chế trạng ô nhiễm vi khuẩn Salmonella loại thực phẩm Tiếp tục cho viện nghiên cứu mở rộng nghiên cứu tình trạng nhiễm sinh lý Salmonella, giải pháp khắc phục hậu quả, chữa trị bệnh vi khuẩn gây nên Tuyên truyền giáo dục cho cộng đồng mức độ nguy hiểm phòng tránh tác hại từ Salmonella TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] TCVN 4829:2005 [2] Phân tích vi sinh thực phẩm, trường đại học Công nghiệp Thực phẩm TP.HCM, 2014 [3] Trần Linh Phước, phương pháp phân tích vi sinh vật nước, thực phẩm mỹ phẩm, nhà xuất Giáo Dục Việt Nam, 2012